以胺基酸為連接子的多聚穀氨酸-藥物偶合物的製作方法

2023-06-19 10:08:21 2

專利名稱：：以胺基酸為連接子的多聚穀氨酸-藥物偶合物的製作方法
技術領域：
：本發明涉及以胺基酸為連接子的多聚穀氨酸_藥物偶合物及其非毒性藥學上可接受的鹽，其中的藥物為吉西他濱(gemcitabine)、紫杉醇(paclitaxel)或多烯紫杉醇(docetaxel)。
背景技術：
：吉西他濱、紫杉醇及多烯紫杉醇是目前臨床最常用的抗腫瘤藥物，其化學結構如下所示吉西他濱紫杉醇多西紫杉醉吉西他濱為胞嘧啶核苷衍生物，是抗代謝類的抗腫瘤藥物。臨床研究結果表明，吉西他濱對多種腫瘤有效。對於胰腺癌，吉西他濱能夠改善臨床症狀、提高生活質量和延長生存期，成為治療胰腺癌的一線藥物；吉西他濱與順鉑聯合用藥，是非小細胞肺癌治療的首選方案之一；在歐洲，吉西他濱還被批准用於進展期乳腺癌治療；此外，吉西他濱還被用於膀胱癌、卵巢癌、淋巴瘤、消化道癌等腫瘤的治療。但是，吉西他濱生物半衰期短，體內易代謝為無活性代謝物。紫杉醇類藥物是具有微管蛋白抑制活性的抗腫瘤藥物。紫杉醇及其衍生物多烯紫杉醇能促使微管蛋白聚集成微管，並結合到微管上抑制微管的解聚，從而使細胞有絲分裂中止。紫杉醇和多烯紫杉醇對卵巢癌、乳腺癌、非小細胞性肺癌、頭頸部惡性腫瘤等有顯著的療效，並且能夠與其它抗腫瘤藥物如順鉑聯合用藥以提高療效，成為應用最廣泛的抗肺瘤藥物。但是紫杉醇和多烯紫杉醇的水溶解度很差。儘管吉西他濱、紫杉醇及多烯紫杉醇在臨床得到廣泛應用，但是作為細胞毒類的抗腫瘤藥物，這些藥物均具有骨髓抑制及胃腸道反應等副作用，不良反應大。將抗腫瘤藥物與多聚穀氨酸、聚乙二醇等大分子載體偶合，利用腫瘤血管組織對大分子偶合物的高滲透性，將藥物選擇性投放於腫瘤組織，能夠提高抗腫瘤藥物的靶向性，降低毒副作用；而且利用偶合物的緩釋作用，延長藥物的體內半衰期，可以提高療效。藥物與大分子偶合物的偶聯鍵是影響偶合物療效的重要因素。理想的偶聯鍵必須在血液中保持穩定，而在靶組織中能夠充分釋放活性藥物。中國專利CN1217662A及美國專利US6262107、US6515017、US6730699、US6884817公開了水溶性的紫杉醇或多烯紫杉醇與多聚穀氨酸(poly-(L)-glutamicacid，PLGA)的偶合物。在以上乂^開的專利中，紫杉醇或多烯紫杉醇在縮合劑二環基碳二亞胺的作用下直接與多聚谷氛酸分子中的羧基形成酯鍵偶聯。從化學結構可以看出，吉西他濱、紫杉醇及多烯紫杉醇分子中含有多個羥基，因此，將藥物分子中的羥基在碳二亞胺作用下直接與多聚穀氨酸分子中的羧基偶聯，將形成不同位置羥基與羧基連接的混合物。由於化學性質或立體位阻的不同，吉西他濱、紫杉醇及多烯紫杉醇分子中不同羥基與多聚穀氨酸的偶聯鍵具有不同的化學穩定性，因此具有不同的生物活性；根據上述專利技術不能分離得到單一的多聚穀氨酸與藥物分子中特定羥基連接的的偶合物。
發明內容本發明的目的是提供吉西他濱、紫杉醇或多烯紫杉醇通過胺基酸與多聚-(L)-穀氨酸連接形成的偶合物，在這些偶合物中，多聚-(L)-穀氨酸通過胺基酸與藥物分子中特定的羥基連接。通過選擇適當的胺基酸連接子可以實現游離藥物的控制釋放。優選地，在藥物通過胺基酸與多聚-(L)-穀氨酸連接形成的偶合物中，胺基酸分子中的ot位羧基與吉西他濱分子中5，-位羥基或紫杉醇(多烯紫杉醇)分子中2，-位羥基成酯鍵，胺基酸分子中ot位氨基與多聚-(L)-穀氨酸分子中的羧基成醯胺鍵。優選地，用於連接藥物與多聚-(L)-穀氨酸的胺基酸為甘氨酸、(L)-丙氨酸、(L)-亮氨酸、(L)-異亮氨酸、(L)-纈氨酸、(L)-脯氨酸、(L)-苯丙氨酸、(L)-甲硫氨酸或(L)-穀氨醯胺。優選地，多聚-(L)-穀氨酸的分子量為25000-50000，其N端為游離氨基或烷醯化氨基。優選地，偶合物中吉西他濱的含量在5-30%(重量比)範圍內，偶合物中紫杉醇或多烯紫杉醇的含量在10-40%(重量比)範圍內。本發明還提供吉西他濱、紫杉醇或多烯紫杉醇通過胺基酸與多聚-(L)-穀氨酸連接形成的偶合物的非毒性藥學上可接受的鹽，如無機金屬離子的鈉鹽、鉀鹽或有機胺的鹽。本發明還提供含有吉西他濱、紫杉醇或多烯紫杉醇通過胺基酸與多聚-(L)-穀氨酸連接形成的偶合物及其非毒性藥學上可接受的鹽作為活性成分的藥物組合物。本發明最後還提供吉西他濱、紫杉醇或多烯紫杉醇與多聚-(L)-穀氨酸的偶合物及其非毒性藥學上可接受的鹽，以及包含式該偶合物或其非毒性藥學上可接受的鹽作為活性成分的藥物組合物及作為抗腫瘤藥物的用途。具體實施例方式本發明中吉西他濱、紫杉醇或多烯紫杉醇通過胺基酸與多聚-(L)-穀氨酸連接形成的偶合物的合成可以分為藥物胺基酸衍生物的合成及藥物胺基酸衍生物與多聚-(L)-穀氨酸的偶聯兩個部分。吉西他濱的胺基酸衍生物可以按照如下合成路線製備N—節氧羰基胺基酸在二環己基碳二亞胺作用下與吉西他濱縮合，將反應產物以矽膠柱層析分離得到5，-0-(N-節氧羰基氨基醯)-吉西他濱，催化氬化脫保護得到5，-O-(氨基醯)-吉西他濱。R,為氫、甲基、異丙基、異丁基、2-曱基丙基或苯曱基等胺基酸側鏈。類似地，N-千氧羰基胺基酸在二環己基碳二亞胺作用下與紫杉醇或多烯紫杉醇縮合，將反應產物以矽膠柱層析分離得到2，-0-(N-苄氧羰基氨基醯)-紫杉醇或2，-0-(N-苄氧羰基氨基醯)-多烯紫杉醇，催化氫化脫保護得到2，-0-(氨基醯)-紫杉醇或2，-0-(氨基醯)-多烯紫杉醇Ri為氫、甲基、異丙基、異丁基、2-甲基丙基或苯甲基等胺基酸側鏈。R2=苯基，R3=乙醯基時為紫杉醇，R2-特丁氧基，R3=H時為多烯紫杉醇。吉西他濱、紫杉醇或多烯紫杉醇的胺基酸衍生物分子中的氨基可以在二環己基碳二亞胺作用下直接與多聚-(L)-穀氨酸分子中的羧基縮合，形成醯胺鍵DCC,、PLGA-COOH+R-NH2-PLGA—(-CONH-R)nR-C~COO\NH2，N或R7NH0尺2人H吉西他濱、紫杉醇或多烯紫杉醇的胺基酸衍生物也可以通過活潑酯法與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸偶聯DCCDMAPformulaseeoriginaldocumentpage9多聚-(L)-穀氨酸先與乙酸酐反應，製得N-乙醯化的多聚-(L)-穀氨酸，N-乙醯化的多聚-(L)-穀氨酸分子中的羧基在二環己基碳二亞胺作用下與N-羥基琥珀醯亞胺成活潑酯，最後與吉西他濱、紫杉醇或多烯紫杉醇的胺基酸衍生物分子中的氨基成醯胺鍵。下面的實施例可以對本發明進行進一步的描述，然而，這些實施例不應作為對本發明的範圍的限制。實施例1[多聚-(L)-穀氨酸]-[5，-O-(甘氨醯)-吉西他濱]偶合物(I)的製備1.15，-0-(甘氨醯)-吉西他濱的合成將O.4克(2隨ol)N-千氧羰基-甘氨酸和0.02克4-二甲基氨基吡啶溶解在2ml乾燥的二曱基曱醯胺中，冷卻至5°C，加入0.6克(2mmol)吉西他濱。攪拌下，加入O.42克(2mmol)二環己基碳二亞胺，於5'C攪拌反應5小時。過濾除去白色沉澱。將濾液減壓濃縮，然後以矽膠柱層析分離，用乙酸乙酯石油醚曱醇(5:5:0.1)洗脫，收集所需組分，減壓蒸乾，得5，-0-(N-千氧羰基甘氨醯)-吉西他濱0.34克。將0.34克5，-0-(N-苄氧羰基甘氨醯)-吉西他濱溶於5毫升二氧六環中，加入O.1克5%的鈀炭，在l個大氣壓的氫氣下攪拌4小時後，濾去催化劑。將濾液減壓濃縮，然後以矽膠柱層析分離，用乙酸乙酯石油醚甲醇(8:2:0.5)洗脫，收集所需組分，減壓蒸乾，得5，-O-(甘氨醯)-吉西他濱0.23克。核磁共振氫譜5(ppm，DMF-d7):8.02(d，1H);6.32(d,1H);6.15(d，1H);4.48(m，1H);4.19(m，lH);3.96(m，2H);3.88(m，2H)。1.2[多聚-(L)-穀氨酸]-[5，-O-(甘氨醯)-吉西他濱]偶合物(L)的合成將2克多聚-(L)-穀氨酸鈉(分子量範圍25000-50000，Sigma公司產品)用水溶解，用鹽酸調節pH至酸性，用雙蒸水透析，冰凍乾燥得到多聚-(L)-穀氨酸1.5克。取多聚-(U-穀氨酸100毫克溶於2毫升乾燥的二甲基甲醯胺，加入32毫克(0.1mmol)5，-0-(甘氨醯)-吉西他濱，20.6毫克(0.1mmol)二環己基碳二亞胺，室溫攪拌反應6小時。過濾，將濾液減壓蒸千，將殘留物用碳酸氬鈉溶液溶解，用雙蒸水透析，冰凍乾燥得到Ii119毫克。取L20毫克用氬氧化鈉溶液水解後，用HPLC法測定游離吉西他濱的含量為3.8亳克，計算偶合物L中吉西他濱的含量為19%(重量比)。實施例2[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[5，-O-(甘氨醯)-吉西他濱]偶合物(12)的製備將2克多聚-(L)-穀氨酸鈉用水溶解，加入0.5毫升乙酸酐，室溫攪拌2小時，然後將反應液用鹽酸調節pH至酸性，用雙蒸水透析，冰凍乾燥得到N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸L4克。取N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸100毫克溶於2毫升乾燥的二曱基甲醯胺，加入14毫克(0.1mmol)N-幾基琥珀醯亞胺，20.6毫克(O.1mmol)二環己基碳二亞胺，室溫攪拌反應6小時。過濾，在濾液中加入32毫克(O.lmmol)5，-0-(甘氨醯)-吉西他濱，攪拌反應過夜，然後將反應液減壓蒸乾，將殘留物用碳酸氫鈉溶液溶解，用雙蒸水透析，水凍乾燥得到12106毫克。取1220毫克用氫氧化鈉溶液水解後，用HPLC法測定游離吉西他濱的含量為3.5毫克，計算偶合物12中吉西他濱的含量為17.5°/。(重量比)。實施例3[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(甘氨醯)-紫杉醇]偶合物(13)的製備3.12，-O-(甘氨醯)-紫杉醇的合成將0.2克(1mmol)N-千氧羰基-甘氨酸和0.01克4-二甲基氨基吡啶溶解在2ml乾燥的二甲基甲醯胺中，冷卻至5°C，加入0.85克(1mmol)紫杉醇。攪拌下，加入O.n克(1mmol)二環己基碳二亞胺，於5'C攪拌反應5小時。過濾除去白色沉澱，將濾液減壓濃縮，然後以矽膠柱層析分離，用乙酸乙酯石油醚甲醇(5:5:0.1)洗脫，收集所需組分，減壓蒸乾，得2，-0-(N-千氧羰基甘氨醯)-紫杉醇0.79克。將O.79克2，-0-(N-苄氧羰基甘氨醯)-紫杉醇溶於5毫升二氧六環中，加入O.1克5°/。的鈀炭，在1個大氣壓的氫氣下攪拌4小時後，濾去催化劑。將濾液減壓濃縮，然後以矽膠柱層析分離，用乙酸乙酯石油醚甲醇(8:2:0.5)洗脫，收集所需組分，減壓蒸乾得2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇0.62克。核磁共振氫傳S(ppm，DMS0-d6):9.26(d，lH);8.41(brs，2H);8.02-7.20(m，15H);6.32(s，1H);5.83(t，1H);5.59(t，1H);5.45(d，1H);5.41(d，lH);4.92(dd，lH);4.90(brs，1H);4.63(s,lH);4.ll(dd，lH);3.95—4.06(m，3H);3.57(d,1H);2.34(m，1H);2.24(s，3H);2.10(s，3H);1.86(s，3H);1.80(dd，1H);1.64(t，1H);1.52(s，3H);1.06(s，3H);1.02(s，3H)。3.2[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(甘氨醯)-紫杉醇]偶合物(13)的合成取多聚-(L)-穀氨酸lOO毫克溶於2毫升千燥的二甲基甲醯胺，加入46毫克(0.05腿o1)2，-O-(甘氨醯)-紫杉醇，11毫克(0.05mmol)二環己基碳二亞胺，室溫攪拌反應6小時。過濾，將濾液減壓蒸乾，將殘留物用碳酸氫鈉溶液溶解，用二氯甲烷提取3次，將水層用雙蒸水透析，水凍乾燥得到13126毫克。取1320毫克用氫氧化鈉溶液水解後，用二氯曱烷提取3次，合併提取液，依次用1M鹽酸、1M碳酸氫鈉及飽和氯化鈉溶液洗，將有機層乾燥後，減壓蒸乾，得游離的紫杉醇5.9毫克，計算偶合物13中紫杉醇的含量為29.5°/。(重量比)。實施例4[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(甘氨醯)-紫杉醇]偶合物(L)的製備取N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸100毫克溶於2毫升乾燥的二甲基甲醯胺，加入7毫克(0.05mmol)N-羥基琥珀醯亞胺，11毫克(0.05mmol)二環己基碳二亞胺，室溫攪拌反應6小時。過濾，在濾液中加入46毫克(0.05mmol)2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇，攪拌反應過夜，然後將反應液減壓蒸乾，將殘留物用碳酸氫鈉溶液溶解，用二氯甲烷提取3次，將水層用雙蒸水透析，水凍乾燥得到14117毫克。取1420毫克用氯氧化鈉溶液水解後，用二氯甲烷提取3次，合併提取液，依次用1M鹽酸、1M碳酸氫鈉及飽和氯化鈉溶液洗，將有機層乾燥後，減壓蒸乾，得游離的紫杉醇5.4毫克，計算偶合物14中紫杉醇的含量為27%(重量比)。實施例5[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-0-(甘氨醯)-多晞紫杉醇]偶合物(15)的製備5.12，-O-(甘氨醯)-多烯紫杉醇的合成將0.2克(1mmol)N-千氧羰基-甘氨酸和0,01克4-二甲基氨基吡啶溶解在2ml乾燥的二甲基甲醯胺中，冷卻至5'C，加入0.81克(1mmol)多烯紫杉醇。攪拌下，加入O.n克(1mmol)二環己基碳二亞胺，於5。C攪拌反應5小時。過濾除去白色沉澱，將濾液減壓濃縮，然後以矽膠柱層析分離，用乙酸乙酯石油醚曱醇(5:5:0.1)洗脫，收集所需組分，減壓蒸乾，得2，-0-(N-苄氧羰基甘氨醯)-多烯紫杉醇0.68克。將O.68克2，-O-(N-苄氧羰基甘氨醯)-多烯紫杉醇溶於5毫升二氧六環中，加入0.1克5%的鈀炭，在l個大氣壓的氫氣下攪拌4小時後，濾去催化劑。將濾液減壓濃縮，然後以矽膠柱層析分離，用乙酸乙酯石油醚甲醇(8:2:0.5)洗脫，收集所需組分，減壓蒸乾，得2，-0-(甘氨醯)-多烯紫杉醇0.42克。核磁共振氫譜5(ppm,DMSO-(U:9.25(d，lH);8.48(brs，2H);8.05—7.32(m,10H);6.38s，1H);5.80t，1H);5.57t，1H);5.42(d，1H);5.36(d，1H);4.94(dd，lH);4.82(brs，1H);"l(s，lH);4.14(dd，lH);3.95-4.06(m，3H);3.57(d，1H);2.34(m，1H);2.24(s，3H);1.86(s，3H);1.80(dd，1H);1.64(t，1H);L52(s，3H);1.40(s,9H);1.06(s,3H);1.02(s，3H)。5.2[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(甘氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物(15)的合成取多聚-(L)-穀氨酸100毫克溶於2毫升乾燥的二曱基甲醯胺，加入43毫克(0.05mino1)2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇，11毫克(0.05mmol)二環己基碳二亞胺，室溫攪拌反應6小時。過濾，將濾液減壓蒸乾，將殘留物用碳酸氫鈉溶液溶解，用二氯甲烷提取3次，將水層用雙蒸水透析，冰凍乾燥得到15126毫克。取1520毫克用氫氧化鈉溶液水解後，用二氯甲烷提取3次，合併提取液，依次用1M鹽酸、1M碳酸氫鈉及飽和氯化鈉溶液洗，將有機層乾燥後，減壓蒸乾，得游離的多烯紫杉醇5,6毫克，計算偶合物15中多烯紫杉醇的含量為28%(重量比)。實施例6[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-0-(甘氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物(16)的製備參考實施例4的方法，用2，-0-(甘氨醯)-多烯紫杉醇代替2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇，與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸的活潑酯反應，製得16,測定偶合物16中多烯紫杉醇的含量為21%(重量比)。實施例7[多聚-(L)-穀氨酸]-[5，-O-(L-丙氨醯)-吉西他濱]偶合物(17)的製備參考實施例l.l的方法，用N-節氧羰基-(L)-丙氨酸代替N-苄氧羰基-甘氨酸，與吉西他濱反應得到5，-0-(N-苄氧羰基-L-丙氨醯)-吉西他濱，催化氫化後製得5，-0-(L-丙氨醯)-吉西他濱。核磁共振氫語5(ppm，DMF-d7):7.94(d，1H);6.28(d，1H);6.13(d，1H);4.45(m，1H);4.16(m，lH);3.88(m，2H);3.54(q，lH);1.26(d，3H)。參考實施例1.2的方法，用5，-O-(L-丙氨醯)-吉西他濱代替5，-O-(甘氨醯)-吉西他濱，在二環己基碳二亞胺作用下與多聚-(L)-穀氨酸縮合，製得17，測定偶合物17中吉西他濱的含量為16.5%(重量比)。實施例8[N-乙醯基多聚-a)-穀氨酸]-[5，-O-(L-丙氨醯)-吉西他濱]偶合物(18)的製備參考實施例2的方法，用5，-0-(L-丙氨醯)-吉西他濱代替5，-0-(甘氨醯)-吉西他濱，與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸的活潑酯反應，製得18，測定偶合物18中吉西他濱的含量為15°/。(重量比)。實施例9[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(L-丙氨醯)-紫杉醇]偶合物(I,)的製備9.12，-0-(L-丙氨醯)-紫杉醇的合成參考實施例3.1的方法，用N-節氧羰基-(L)-丙氨酸代替N-苄氧羰基-甘氨酸，與紫杉醇縮合製得2，-0-(N-節氧羰基-L-丙氨醯)-紫杉醇，催化氫化脫保護得到2，-O-(L-丙氨醯)-紫杉醇。核磁共振氫譜5(ppm，DMSO-d6):9.20(d，1H);8.02-7.22(m，15H);6.31(s,1H);5.86(t,1H);5.61(t,1H);5.45(d,1H);5.38(d，lH);4.92(dd,1H);4.90(brs，1H);4.64(s，lH);4.10(dd，lH);4.05(d，1H);4.02(d,1H);3.59U，1H);3.54U,1H);2.35(ra，1H);2.26(s，3H);2.12(s，3H);1.86(s，3H);1.64(t，1H);1.52(s，3H);1.24(d，3H);1.06(s，3H);1.02(s，3H)。9.2[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(丙氨醯)-紫杉醇]偶合物(19)的合成參考實施例3.2的方法，用2，-O-(L-丙氨醯)-紫杉醇代替2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇，在二環己基碳二亞胺作用下，與多聚_(L)-穀氨酸縮合，製得16,測得偶合物16中紫杉醇的含量為25.5%(重量比)。實施例10[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(L-丙氨醯)-紫杉醇]偶合物(L。)的製備參考實施例4的方法，用2，-O-(L-丙氨醯)-紫杉醇代替2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇，與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸的活潑酯反應，製得L。，測定偶合物中紫杉醇的含量為23.6M重量比)。實施例11[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(L-丙氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物(In)的製備11.12，-O-(L-丙氨醯)-多烯紫杉醇的合成參考實施例5.1的方法，用N-千氧羰基-(L)-丙氨酸代替N-千氧羰基-甘氨酸，與多烯紫杉醇縮合製得2'-O-(N-苄氧羰基-L-丙氨醯)-多烯紫杉醇，催化氫化脫保護得到2，-O-(L-丙氨醯)-多烯紫杉醇。核磁共振氫譜5(ppm,DMSO-d6):9.25U，1H);8.48(brs，2H);8.05-7.32(m，10H);6.38s，1H);5.80t，1H);5.57t，1H);5.42(d，1H);5.36(d，1H);4.94(dd，1H);4.82(brs，lH);4.61(s，lH);4.14(dd，lH);4.01(d，1H);4.04(d，lH);3.57(d，1H);3.55(q，lH);2.34(m，1H);2.24(s,3H);1.86(s，3H);1.80(dd，1H);1.64(t，1H);1.52(s，3H);1.40(s，9H);1.22(d，3H);1.06(s，3H);1.02(s，3H)。11.2[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(丙氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物(Iu)的合成參考實施例3.2的方法，用2，-O-(L-丙氨醯)-多烯紫杉醇代替2，-O-(甘氨醯)-紫杉醇，在二環己基碳二亞胺作用下，與多聚-(L)-穀氨酸縮合，製得In，測得偶合物Iu中多烯紫杉醇的含量為23.4%(重量比)。實施例12[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(L-丙氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物(Iu)的製備參考實施例4的方法，用2，-0-(L-丙氨醯)-多烯紫杉醇代替2，-O-(甘氨醯)-紫杉醇，與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸的活潑酯反應，製得112，測定偶合物中紫杉醇的含量為23.1%(重量比)。實施例13[多聚-(L)-穀氨酸]-[5，-0-(L-異亮氨醯)-吉西他濱]偶合物(Iu)的製備參考實施例l.l的方法，用N-千氧羰基-(L)-異亮氨酸代替N-節氧羰基-甘氨酸，與吉西他濱反應得到5，-O-(N-苄氧羰基-L-異亮氨醯)-吉西他濱，催化氫化後製得5，-0-(L-異亮氨醯)-吉西他濱。核磁共振氫譜S(ppm，DMF-d7):7.94U，1H);6.28(d1H);6.13(d，1H);4.45(m，1H);4.16(m，lH);3.88(m,2H);3.54U，1H);1.35(m，1H);1.03(m，2H);0.82(d，3H);0.64(t，3H)。參考實施例1.2的方法，用5，-O-(L-異亮氨醯)-吉西他濱代替5，-O-(甘氨醯)-吉西他濱，在二環己基碳二亞胺作用下與多聚-(L)-穀氨酸縮合，製得113，測定偶合物1中吉西他濱的含量為14.2%(重量比)。實施例14[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[5，-O-(L-異亮氨醯)-吉西他濱]偶合物(114)的製備參考實施例2的方法，用5，-O-(L-異亮氨醯)-吉西他濱代替5，-O-(甘氨醯)-吉西他濱，與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸的活潑酯反應，製得18，測定偶合物114中吉西他濱的含量為13.4%(重量比)。實施例15[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(L-異亮氨醯)-紫杉醇]偶合物(115)的製備15.12，-O-(L-異亮氨醯)-紫杉醇的合成參考實施例3.1的方法，用N-苄氧羰基-(L)-異亮氨酸代替N-苄氧羰基-甘氨酸，與紫杉醇縮合製得2，-O-(N-苄氧羰基-L-異亮氨醯)-紫杉醇，催化氫化脫保護得到2，-0-(L-異亮氨醯)-紫杉醇。核磁共振氫i瞽S(ppm,DMS0-d6):9.23(d，1H);8.02-7.22(m，15H);6.31(s，1H);5.86(t，1H);5.61(t，1H);5.45(d，1H);5.37(d，1H);4.92(dd，lH);4.90(brs，1H);4.64(s，1H);4.12(dd，1H);4.05(d，1H);4.02(d，1H);3.64(m，1H);3.59(d，1H);2.35(m，1H);2.26(s，3H);2.12(s，3H);1.86(s，3H);1.64(t，1H);1.52(s,3H);1.35(m，1H);1.06(s，3H);1.03(m，2H);1.02(s，3H);0.82(d，3H);0.64(t，3H)。15.2[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(異亮氨醯)-紫杉醇]偶合物(115)的合成參考實施例3.2的方法，用2，-O-(L-異亮氨醯)-紫杉醇代替2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇，在二環己基碳二亞胺作用下，與多聚-(L)-穀氨酸縮合，製得115，測得偶合物115中紫杉醇的含量為21.3%(重量比)。實施例16[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-0-(L-異亮氨醯)-紫杉醇]偶合物(116)的製備參考實施例4的方法，用2，-0-(L-異亮氨醯)-紫杉醇代替2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇，與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸的活潑酯反應，製得116,測定偶合物中紫杉醇的含量為20.8%(重量比)。實施例17[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-0-(L-異亮氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物(117)的製備17.12，-0-(L-異亮氨醯)-多烯紫杉醇的合成參考實施例5.1的方法，用N-千氧羰基-(L)-異亮氨酸代替N-節氧羰基-甘氨酸，與多烯紫杉醇縮合製得2'-O-(N-苄氧羰基-L-異亮氨醯)-多烯紫杉醇，催化氫化脫保護得到2，-O-(L-異亮氨醯)-多烯紫杉醇。核磁共振氫譜S(ppm，DMS0-d6):9.25U，1H);8.48(brs，2H);8.05-7.32(m，10H);6.38s，1H);5.80t，1H);5.57t，1H);5.42(d，1H);5.36(d，1H);4.94(dd，lH);4.82(brs，1H);4.61(s，lH);4.14(dd，lH);4.Ol(d，lH);4.04U，1H);3.64(m，1H);3.57(d，1H);2.34(m，1H);2.24(s,3H);1.86(s,3H);1.80(dd，1H);1.64(t，1H);1.52(s，3H);1.40(s，9H);1.35(m，1H);1.06(s，3H);1.03(m，2H);1.02(s，3H);0.82(d，3H);0.64(t，3H)。17.2[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(異亮氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物Un)的合成參考實施例3.2的方法，用2，-0-(L-異亮氨醯)-多烯紫杉醇代替2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇，在二環己基碳二亞胺作用下，與多聚-(L)-穀氨酸縮合，製得117，測得偶合物In中多烯紫杉醇的含量為22.1%(重量比)。實施例18[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(L-異亮氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物(118)的製備參考實施例4的方法，用2，-O-(L-異亮氨醯)-多烯紫杉醇代替2，-0-(甘氦醯)-紫杉醇，與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸的活潑酯反應，製得118，測定偶合物中紫杉醇的含量為21.5%(重量比)。實施例19[多聚-(L)-穀氨酸]-[5，-O-(L-纈氨醯)-吉西他濱]偶合物(I")的製備參考實施例l.l的方法，用N-千氧羰基-(L)-纈氨酸代替N-千氧羰基-甘氨酸，與吉西他濱反應得到5'-O-(N-千氧羰基-L-纈氨醯)-吉西他濱，催化氬化後製得5，-O-(L-纈氨醯)-吉西他濱。核磁共振氫謙S(ppm，DMF-d7):7.94(d，1H);6.28(d，1H);6.13(d,1H);4.45(m，1H);4.16(m，lH);3.69(m，1H);3.88(m，2H);2.25(m，1H);0.91(m，6H)。參考實施例1.2的方法，用5，-0-(L-纈氨醯)-吉西他濱代替5，-O-(甘氨醯)-吉西他濱，在二環己基碳二亞胺作用下與多聚-(L)-穀氨酸縮合，製得119，測定偶合物119中吉西他濱的含量為16.2%(重量比)。實施例20[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[5，-O-(L-纈氨醯)-吉西他濱]偶合物(L。)的製備參考實施例2的方法，用5，-O-(L-纈氨醯)-吉西他濱代替5，-0-(甘氨醯)-吉西他濱，與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸的活潑酯反應，製得12。，測定偶合物12。中吉西他濱的含量為15%(重量比)。實施例"[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-0-(L-纈氨醯)-紫杉醇]偶合物(121)的製備21.11，-O-(L-纈氨醯)-紫杉醇的合成參考實施例3.l的方法，用N-爺氧羰基-(L)-纈氨酸代替N-苄氧羰基-甘氨酸，與紫杉醇縮合製得2，-O-(N-千氧羰基-L-纈氨醯)-紫杉醇，催化氫化脫保護得到2，-O-(L-纈氨醯)-紫杉醇。核磁共振氫譜S(ppm，DMS0-d6):9.23(d，1H);8.02-7.22(m，15H);6.31(s，1H);5.86(t，1H);5.61(t，1H);5.45(d，1H);5.40(d，lH);4.92(dd，1H);4.90(brs，1H);4.64(s,1H);4.10(dd，1H);4.05(d，1H);4.02(d，1H);3.69(m，1H);3.59(d，1H);2.35(m，1H);2.26(s，3H);2.21(m，1H);2.12(s，3H);1.86(s，3H);1.64(t，lH);1.52(s，3H);1.06(s，3H);1.02(s，3H);0.91(m，6H)。21.2[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(纈氨醯)-紫杉醇]偶合物(121)的合成參考實施例3.2的方法，用2，-0-(L-纈氨醯)-紫杉醇代替2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇，在二環己基碳二亞胺作用下，與多聚-(L)-穀氨酸縮合，製得In，測得偶合物In中紫杉醇的含量為25.5%(重量比)。實施例22[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(L-纈氨醯)-紫杉醇]偶合物(122)的製備參考實施例4的方法，用2，-0-(L-纈氨醯)-紫杉醇代替2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇，與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸的活潑酯反應，製得I"，測定偶合物中紫杉醇的含量為23.6%(重量比)。實施例23[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(L-纈氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物(123)的製備23.12，-O-(L-纈氨醯)-多烯紫杉醇的合成參考實施例5.1的方法，用N-節氧羰基-(L)-纈氨酸代替N-節氧羰基-甘氨酸，與多烯紫杉醇縮合製得2'-O-(N-節氧羰基-L-纈氨醯)-多烯紫杉醇，催化氫化脫保護得到2，-O-(L-纈氨醯)-多烯紫杉醇。核磁共振氫譜5(ppm，DMSO-(U:9.25(d，lH);8.48(brs，2H);8.05-7.32(m,10H);6.38s，1H);5.80t，1H);5.57t，1H);5.42(d，1H);5.36(d，1H);4.94(dd，1H);4.82(brs，lH);4.61(s，lH);4.14(dd,1H);4.01(d，1H);4.04U，1H);3.69(m，1H);3.57(d，1H);2.34(m，1H);2.25(m，1H);2.24(s，3H);1.86(s，3H);1.80(dd，1H);1.64(t，1H);1.52(s，3H);1.40(s，9H);1.06(s，3H);1.02(s，3H);0.91(m，6H)。23.2[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(纈氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物(I")的合成參考實施例3.2的方法，用2，-O-(L-纈氨醯)-多烯紫杉醇代替2，-O-(甘氨醯)-紫杉醇，在二環己基碳二亞胺作用下，與多聚-(L)-穀氨酸縮合，製得1,測得偶合物123中多烯紫杉醇的含量為23.4%(重量比)。實施例24[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(L-纈氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物(I")的製備參考實施例4的方法，用2，-0-(L-纈氨醯)-多烯紫杉醇代替2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇，與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸的活潑酯反應，製得I",測定偶合物中紫杉醇的含量為23.1%(重量比)。實施例25[多聚-(L)-穀氨酸]-[5，-O-(L-苯丙氨醯)-吉西他濱]偶合物(125)的製備參考實施例l.l的方法，用N-節氧羰基-(L)-苯丙氨酸代替N-苄氧羰基-甘氨酸，與吉西他濱反應得到5，-O-(N-千氧羰基-L-苯丙氨醯)-吉西他濱，催化氫化後製得5，-0-(L-苯丙氨醯)-吉西他濱。核磁共振氫i瞽S(ppm，DMF-d7):7.94(d，lH);7.23(m，5H);6.28(d，1H);6.13(d，1H);4.52(m，lH);4.45(m,1H);4.16(m，lH);3.88(m，2H);3.15(dd，lH);3.01(dd，1H)。參考實施例1.2的方法，用5，-O-(L-苯丙氨醯)-吉西他濱代替5，-O-(甘氨醯)-吉西他濱，在二環己基碳二亞胺作用下與多聚-(L)-穀氨酸縮合，製得125,測定偶合物125中吉西他濱的含量為17.2%(重量比)。實施例26[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[5，-0-(L-苯丙氨醯)-吉西他濱]偶合物(126)的製備參考實施例2的方法，用5，-0-(L-苯丙氨醯)-吉西他濱代替5，-O-(甘氨醯)-吉西他濱，與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸的活潑酯反應，製得126，測定偶合物126中吉西他濱的含量為16.5%(重量比)。實施例27[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-0-(L-苯丙氨醯)-紫杉醇]偶合物(I")的製備27.12，-O-(L-苯丙氨醯)-紫杉醇的合成參考實施例3.1的方法，用N-千氧羰基-(L)-苯丙氨酸代替N-苄氧羰基-甘氨酸，與紫杉醇縮合製得2'-O-(N-苄氧羰基-L-苯丙氨醯)-紫杉醇，催化氫化脫保護得到2，-0-(L-苯丙氨醯)-紫杉醇。核磁共振氫譜5(ppm，DMS0-d6):9.23(d，1H);8.02-7.22(m，20H);6.31(s，1H);5.86(t，1H);5.61(t，1H);5.45(d,1H);5.40(d，1H);4.92(dd，1H);4.90(brs，1H);4.64(s，1H);4.52(m，1H);4.10(dd，1H);4.05(d，lH);4.02(d，lH);3.59(d，1H);3.15(dd，lH);3.01(dd，lH);2.35(m，1H);2.26(s，3H);2.12(s,3H);1.86(s，3H);1.64(t，lH);1.52(s，3H);1.06(s，3H);1.02(s，3H)。27.2[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(苯丙氨醯)-紫杉醇]偶合物(127)的合成參考實施例3.2的方法，用2，-O-(L-苯丙氨醯)-紫杉醇代替2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇，在二環己基碳二亞胺作用下，與多聚-(L)-穀氨酸縮合，製得127，測得偶合物127中紫杉醇的含量為26.6%(重量比)。實施例28[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(L-苯丙氨醯)-紫杉醇]偶合物(I2J的製備參考實施例4的方法，用2，-0-(L-苯丙氨醯)-紫杉醇代替2，-0-(甘氨醯)-紫杉醇，與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸的活潑酯反應，製得128，測定偶合物中紫杉醇的含量為24.5%(重量比)。實施例29[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-0-(L-苯丙氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物(129)的製備29.12，-O-(L-苯丙氨醯)-多烯紫杉醇的合成參考實施例5.1的方法，用N-苄氧羰基-(L)-苯丙氨酸代替N-節氧羰基-甘氨酸，與多烯紫杉醇縮合製得2，-0-(N-苄氧羰基-L-苯丙氨醯)-多烯紫杉醇，催化氫化脫保護得到2，-0-(L-苯丙氨醯)-多烯紫杉醇。核磁共振氫譜S(ppm，DMSO-d6):9.25(d，lH);8.48(brs，2H);8.05-7,32(m，15H);6.38s，1H);5.80t，1H);5.57t，1H);5.42(d，1H);5.36(d，1H);4.94(dd，lH);4.82(brs,1H);4.61(s，lH);4.52(m，1H);4.14(dd，1H);4.01(d，1H);4.04(d，1H);3.57(d，1H);3.15(dd，lH);3.Ol(dd，lH);2.34(m，1H);2.24(s，3H);1.86(s，3H);1.80(dd，1H);1.64(t，1H);1.52(s，3H);1.40(s,9H);1.06(s，3H);1.02(s，3H)。29.2[多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-O-(苯丙氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物(I")的合成參考實施例3.2的方法，用2，-O-(L-苯丙氨醯)-多烯紫杉醇代替2，-O-(甘氨醯)-紫杉醇，在二環己基碳二亞胺作用下，與多聚-(L)-穀氨酸縮合，製得129，測得偶合物129中多烯紫杉醇的含量為24.0%(重量比)。實施例30[N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸]-[2，-0-(L-苯丙氨醯)-多烯紫杉醇]偶合物(13。)的製備參考實施例4的方法，用2，-O-(L-苯丙氨醯)-多烯紫杉醇代替2，-O-(甘氨醯)-紫杉醇，與N-乙醯基多聚-(L)-穀氨酸的活潑酯反應，製得I3。，測定偶合物中紫杉醇的含量為23.8%(重量比)。實施例31小鼠體內抗人肝癌移植瘤的活性評價取Balb/c-nu/nu棵鼠(5-7周齡，16-20克)，隨機分組，皮下接種0.1毫升含106個人肝癌細胞(HepG2)的細胞懸液，至瘤體積達到50立方毫米。靜脈注射一定劑量的偶合物及游離藥物，於該藥後20天，處死動物，測定體重及腫瘤重量，按下式計算腫瘤抑制率肺瘤抑制率OO=[(對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對照組平均瘤重]X100%實驗結果見表l。表1目標化合物對人肝癌移植瘤的抑制作用tableseeoriginaldocumentpage24給藥劑量折算成游離藥物量。實施例32小鼠體內抗人乳腺癌移植瘤的活性評價取Balb/c-nu/nu棵鼠(5-7周齡，16-20克)，隨機分組，皮下接種0.1毫升含106個人乳腺癌細胞(Bacp-37)的細胞懸液，至瘤體積達到50立方毫米。靜脈注射一定劑量的偶合物及游離藥物，於該藥後20天，處死動物，測定體重及腫瘤重量，計算腫瘤抑制率，結果見表2。表2目標化合物對人乳腺癌移植瘤的抑制作用tableseeoriginaldocumentpage25由表1、表2可知，與游離藥物相比，目標化合物對實體瘤的抑制作用相當或更好；而對體重的影響低於游離藥物，表明目標化合物的毒副作用較輕。權利要求1.抗腫瘤藥物吉西他濱、紫杉醇或多西紫杉醇通過胺基酸與多聚-(L)-穀氨酸連接形成的偶合物及其非毒性藥學上可接受的鹽。2.根據權利要求1的吉西他濱通過胺基酸與多聚-(L)-穀氨酸連接的偶合物及其非毒性藥學上可接受的鹽，其中，胺基酸分子中的oc位羧基與吉西他濱分子中5，-位羥基成酯鍵，胺基酸分子中ct位氨基與多聚-(L)-穀氨酸分子中的羧基成醯胺鍵；偶合物中吉西他濱的含量在5-30%(重量比)範圍內。3.根據權利要求1的紫杉醇或多西紫杉醇通過胺基酸與多聚-(L)-穀氨酸連接的偶合物及其非毒性藥學上可接受的鹽。其中，胺基酸分子中的a位羧基與紫杉醇或多西紫杉醇分子中2，-位羥基成酯鍵，胺基酸分子中a位氨基與多聚-(L)-穀氨酸分子中的羧基成醯胺鍵；偶合物中紫杉醇或多西紫杉醇的含量在10-40%(重量比)範圍內。4.根據權利要求l、2或3的吉西他濱、紫杉醇或多西紫杉醇通過胺基酸與多聚-(L)-穀氨酸連接形成的偶合物及其非毒性藥學上可接受的鹽，其中多聚-(L)-穀氨酸的分子量為25000-50000。5.根據權利要求l、2、3或4的吉西他濱、紫杉醇或多西紫杉醇通過胺基酸與多聚-(L)-穀氨酸連接形成的偶合物及其非毒性藥學上可接受的鹽，其中多聚-(L)-穀氨酸分子的N端為游離氨基或烷醯化氨基。6.根據權利要求l、2、3、4或5的吉西他濱、紫杉醇或多西紫杉醇通過胺基酸與多聚-(L)-穀氨酸連接形成的偶合物及其非毒性藥學上可接受的鹽，其中的胺基酸為甘氨酸、(L)-丙氨酸、(L)-亮氨酸、(L)-異亮氨酸、(L)-纈氨酸、(L)-脯氨酸、(L)-苯丙氨酸、(L)-甲硫氨酸或(L)-穀氨醯胺。7.根據權利要求l、2、3、4、5或6的吉西他濱、紫杉醇或多西紫杉醇通過胺基酸與多聚-(L)-穀氨酸連接形成的偶合物及其非毒性藥學上可接受的鹽作為活性成分的藥物組合物。8.根據權利要求l、2、3、4、5或6的吉西他濱、紫杉醇或多西紫杉醇通過胺基酸與多聚-(L)-穀氨酸連接形成的偶合物及其非毒性藥學上可接受的鹽在製備用於作為抗腫瘤藥物中的用途。全文摘要本發明的目的是提供以胺基酸為連接子的多聚穀氨酸-藥物偶合物及其非毒性藥學上可接受的鹽。其中的藥物為吉西他濱、紫杉醇或多烯紫杉醇。胺基酸分子中的α位羧基通過酯鍵與吉西他濱分子中5』-位羥基或紫杉醇(多烯紫杉醇)分子中2』-位羥基連接，α位氨基通過醯胺鍵與多聚-(L)-穀氨酸分子中的羧基連接。偶合物中吉西他濱的含量在5-30％(重量比)範圍內，紫杉醇或多烯紫杉醇的含量在10-40％(重量比)範圍內。文檔編號A61K47/48GK101209350SQ200610171580公開日2008年7月2日申請日期2006年12月30日優先權日2006年12月30日發明者仲伯華,張建新,陳蘭福申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥物研究所