水楊酸甲酯三糖苷、水楊酸酯糖苷類化合物、製備方法

2023-06-11 09:38:31

專利名稱：水楊酸甲酯三糖苷、水楊酸酯糖苷類化合物、製備方法
技術領域：
本發明涉及水楊酸酯糖苷類化合物，以及製備該化合物的方法。
背景技術：
滇白珠Gaultheria yunnanensis Rehd．為杜鵑花科，白珠樹屬植物雲南白珠樹的根或枝葉，為白族、侗族、傈傈族、苗族、納西族、水族、瑤族、壯族、布依族等9個民族習用藥，始載於明初的《滇南本草》(1459年)，《中國民族藥志》和《中藥大辭典》均有記載。其質量標準收錄於《貴州中藥材質量標準》(1988版)。滇白珠具有清熱解毒、活血化淤、祛風除溼、順氣平喘的功能。民間主要用於治療風溼性關節炎，此外還可以用於眩暈、閉經、風寒感冒、咳嗽、哮喘等疾病的治療。我國對滇白珠的研究始於50年代，目前的研究涉及化學、藥理、毒性以及產品的開發等方面。
解熱鎮痛抗炎藥(antipyretic-analgesic and anti-inflammatory drugs)是一類具有解熱、鎮痛，而且大多數還有抗炎、抗風溼作用的藥物。它們在化學結構上雖屬不同類別，但都可抑制體內前列腺素(prostaglandin，PG)的生物合成，目前認為這是它們共同作用的基礎。由於其特殊的抗炎作用，故本類藥物又稱為非甾體抗炎藥(non-steroidal anti-inflammatory drugs，NSAID)。乙醯水楊酸是這類藥物的代表，因此有人將這類藥物稱為乙醯水楊酸類藥物。水楊酸類(salicylates)藥物包括乙醯水楊酸(acetylsalicylic acid)和水楊酸鈉(sodiumsalicylate)。短期服用副作用少；長期大量服用抗風溼則有不良反應。胃腸道反應最為常見。口服可直接刺激胃黏膜，引起上腹不適、噁心、嘔吐。血濃度高則刺激延腦催吐化學感應區(CTZ)，也可致噁心及嘔吐。較大劑量口服(抗風溼治療)可引起胃潰瘍及不易察覺的胃出血(無痛性出血)；原有潰瘍病者，症狀加重。
關於水楊酸酯糖苷，現有技術中資料庫Chemical Dictionaries (NaturalProducts inc．Berdy Bioactive Nat．Prod．And DEREP database)已經報導過的有水楊酸甲酯2-O-β-D-葡萄吡喃糖苷[C14H18O8，M＝314]，水楊酸甲酯2-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基(1-6)-β-D-葡萄吡喃糖苷[C19H26O12，M＝446]，水楊酸甲酯2-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1-6)-β-D-葡萄吡喃糖苷[C20H28O12，M＝460]，水楊酸甲酯2-O-β-D-木吡喃糖基(1-6)-β-D-葡萄吡喃糖苷[C19H26O12，M＝446]。沒有關於此類化合物用途的現有技術。

發明內容
本申請人在研究滇白珠Gaultheria yunnanensis Rehd時，提取得到一種新化合物--水楊酸甲酯三糖苷。
其結構式為 系統命名為苯甲酸甲酯-2-O-β-D-木吡喃糖基(1-2)[O-β-D-木吡喃糖基(1-6)]-O-β-D-葡萄吡喃糖苷。
該化合物從植物滇白珠Gaultheria yunnanensis Rehd中提取方法是(1)滇白珠用水、甲醇或乙醇加熱或回流提取，得到提取液；(2)將提取液過濾，濾液濃縮，離心或再過濾，取上清液；(3)將上清液加入到大孔吸附樹脂柱上，先用水洗脫至Molish反應為陰性，然後用梯度的乙醇洗脫。收集不同濃度的乙醇洗脫液，濃縮至幹，得到滇白珠枝葉的不同極性部分提取物；(4)含有水楊酸酯糖苷類化合物的部分，用乙醇溶解，拌入矽膠，乾燥後用矽膠色譜柱分離，用氯仿甲醇水進行幹柱層析後切割；(5)經薄層層析檢查，合併含有水楊酸甲酯三糖苷化合物的相同部分，再進行矽膠柱色譜柱純化即製得化合物水楊酸甲酯三糖苷。
對提取物進行結構分析證實為水楊酸甲酯三糖苷。
上述提取步驟(2)中，優選在50-65℃減壓濃縮至濃度為0.5g生藥/ml。
在上面的製備方法中，第4步所得到的是水楊酸酯糖苷類化合物有效部位，包括二糖苷和三糖苷。
可用同樣的方法分離獲得水楊酸酯二糖苷。
因此，本發明提供了一種藥物，含有式(II)結構的化合物。
其中Rt＝甲基、乙基、丙基、丁基、糖基R2＝一糖、二糖、三糖。
其中的糖可以是葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖。
除有效成分如式(II)所示的化合物外，可以添加藥學上可用的輔料，製成片劑、膠囊、顆粒劑或注射劑。
本申請人研究發現水楊酸甲酯糖苷可以作為藥物有效成分。實驗證明，從上述植物中提取的化合物水楊酸甲酯糖苷具有解熱、鎮痛、抗炎及抗血小板凝集作用。
優選水楊酸甲酯二糖苷。這主要是考慮到植物滇白珠Gaultheriayunnanensis Rehd中水楊酸甲酯二糖苷的含量較高，容易分離純化。
本發明是通過研究分析水楊酸甲酯二糖苷的結構特點，並研究了其在體外及在小鼠和大鼠體內的藥物動力學特點，證實水楊酸酯糖苷類在體內可以緩慢代謝產生水楊酸，從而發揮抗凝作用。同樣，水楊酸酯一糖苷、三糖苷也具有二糖苷同樣的藥物學上的作用。
藥代動力學實驗數據說明水楊酸酯糖苷類化合物在體內代謝產生水楊酸，並且代謝的速度慢。
如實施例5中所示，本發明藥物在3小時後，還具有與乙醯水楊酸相似的鎮痛和抗血小板凝聚的效果。
本發明所提供的藥物的有益之處在於水楊酸酯糖苷類化合物能在體內代謝產生水楊酸，具有解熱、鎮痛、抗炎及抗凝作用，且其在體內代謝產生水楊酸的速率較慢，可以長時間地發揮抗凝作用，該類化合物性質穩定，呈中性，對胃腸道的刺激性小，適用於慢性病患者長期使用，因此可用於製備水楊酸類鎮痛和抗血小板凝集藥物。


圖1水楊酸甲酯二糖苷的鎮痛作用；圖2水楊酸甲酯二糖苷抗ADP誘導的血小板聚集作用。
具體實施例製備實施例1首次從滇白珠提取分離水楊酸酯糖苷。
滇白珠枝葉9公斤，用95％乙醇回流提取3次，然後過濾，濾液濃縮至小體積，再過濾，濾液拌入1公斤大孔吸附樹脂(魯抗860021型樹脂)。乾燥後加入到已處理好的1公斤同樣大孔樹脂柱上，先用水洗脫至Molish反應為陰性，然後換30％乙醇洗脫35升。收集30％乙醇洗脫液濃縮至幹的粉末314克。
取其中100克粉末溶解拌入400克矽膠(140～180目)，乾燥後加到用同樣矽膠2850克幹法裝的層析柱上，用氯仿-甲醇-水(7∶3∶1下層)溶劑系統展開至溶劑流出，然後抽乾溶劑，等分切割成5段，各段分別用95％乙醇洗脫至無色，蒸乾溶劑。其中第三部分約有33克，第一部分約12克。
取第一部分10克拌入50克矽膠(200-300目)乾燥後加入到600克同樣矽膠幹法裝柱的層析柱上，用氯仿—甲醇—水(8∶2∶0.2)洗脫，分份收集，薄層層析檢查，合併相同部分。其中16至24份有相同斑點，合併濃縮的粉末3.5克。將粉末再進行矽膠柱層析，用同樣的溶劑系統洗脫，10至20份為相同斑點合併濃縮的白色粉末500毫克。鑑定為新化合物水楊酸甲酯三糖苷(簡稱MSTG)。
該化合物為白色無定形粉末，易溶解於水、甲醇、乙醇、二甲基亞碸、吡啶等溶劑。其光譜數據為
UVλmax(MeOH)nm(logε)208(1.362)，231(0.637)，288(0.232)。
IRνmax(KBr)cm-13401，2897，1712，1603，1585，1491，1456，1309，1244，1165，1078，1043，895，843，758。
HRFAB-MS(m/z)(％)601.177338[M+Na]+，(計算值為601.174455，分子式為C24H34O16Na，)。
Pos.FAB-MS(m/z)579[M+H]+。
EI-MS of acetate(m/z)763[glc+2xyl]+，259[xyl]+。
1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm7.63(1H，dd，J＝1.8，7.8Hz，H-6)，7.49(1H，dt，J＝1.8，7.8Hz，H-4)，7.23(1H，d，J＝7.8Hz，H-3)，7.04(1H，t，J＝7.8Hz，H-5)，5.10(1H，d，J＝6.9Hz，glc H-1)，4.42(1H，d，J＝7.5Hz，xyl H-1)，4.13(1H，d，J＝7.2Hz，xyl H-1)，3.78(3H，s，OCH3)。
13C-NMR(DMSO-d6，75MHz)δppm166.2(C-7)，155.5(C-2)，133.6(C-4)，130.7(C-6)，121.2(C-1)，120.2(C-5)，115.0(C-3)，104.6(x-1)，103.8(CH，x′-1)，97.9(CH，g-1)，82.0(CH，g-2)，76.2(CH，x-3)，75.5x3(CH，x′-3，g-3，g-5)，74.5(CH，x-2)，73.3(CH，x′-2)，69.4(CH，g-4)，69.3(CH，x-4)，68.8(CH，x′-4)，67.7(CH2，g-6)，65.7(CH2，x-5)，65.4(CH2，x′-5)，51.9(CH3)。
HMQC和HMBC結果如下表所示。
MSTG的核磁其振波譜數據(DMSO-d6，δppm)


取第三部分2克加95％乙醇加熱溶解後、冷卻、放置析出結晶，過濾得到900毫克淺棕色結晶。將結晶用95％乙醇重結晶，得到白色結晶400毫克。鑑定為水楊酸甲酯二糖苷(簡稱MSDG)。
該化合物為白色針狀結晶，易溶解於水、甲醇、乙醇、二甲基亞碸、吡啶等溶劑。其光譜數據為Pos.FAB-MS(m/z)485[M+K]+，469[M+Na]+，447[M+H]+。
1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δppm7.61(1H，dd，J＝2.0，7.8Hz，H-6)，7.51(1H，dt，J＝2.0，7.8Hz，H-4)，7.33(1H，d，J＝7.8Hz，H-3)，7.06(1H，t，J＝7.8Hz，H-5)，4.83(1H，d，J＝7.2Hz，glc H-1)，4.17(1H，d，J＝7.5Hz，xyl H-1)，3.78(3H，s，OCH3)。
13C-NMR(DMSO-d6，75MHz)δppm166.2(C-7)，155.8(C-2)，133.5(C-4)，130.1(C-6)，121.4(C-1)，120.9(C-5)，116.4(C-3)，103.8(CH，x-1)，100.7(CH，g-1)，76.4(CH，g-3)，76.3(CH，x-3)，76.0(CH，g-5)，73.3(CH，x-2)，73.2(CH，g-2)，69.5x2(CH，g-4，x-4)，68.1(CH，g-6)，65.6(CH2，x-5)，52.0(CH3)。
製備實施例2用藥材重量10倍的水將滇白珠(重量數9kg)回流提取3次，每次1小時。然後將提取液過濾，濾液在50-65℃減壓濃縮至濃度為0.5g生藥/ml，再過濾或離心，取上清液。將上清液加入到處理好的大孔吸附樹脂柱上，先用水洗脫至Molish反應為陰性，然後用30％乙醇洗脫。收集30％乙醇洗脫液，減壓濃縮至幹，得到滇白珠枝葉的提取物362g。
製備實施例3首先用藥材重量8倍的50％乙醇將滇白珠枝葉(重量數9kg)回流提取3次，每次1小時。然後將提取液過濾，濾液在50-65℃減壓濃縮至濃度為0.5g生藥/ml，再過濾或離心，取上清液。將上清液加入到處理好的大孔吸附樹脂柱上，先用水洗脫至Molish反應為陰性，然後用30％乙醇洗脫。收集30％乙醇洗脫液，減壓濃縮至幹，得到滇白珠枝葉的提取物358g。
製備實施例4取上述滇白珠提取物用乙醇溶解，拌入矽膠，乾燥後用矽膠色譜柱分離。將柱子切割成5段，將各段矽膠取出，揮幹溶劑，分別用乙醇洗脫至薄層檢查無硫酸顯色斑點，減壓回收溶劑。取第1部分再用矽膠柱色譜分離，洗脫溶劑為氯仿∶甲醇∶水(8∶2∶0.2)，按等份收集，用薄層層析檢查，氯仿∶甲醇∶水(8∶2∶0.2)展開，合併相同部分。再進行一次矽膠柱色譜分離，即製得化合物MSTG(I)。
藥效實施例5(1)鎮痛作用研究取小鼠30隻，隨機分為3組，即control組、乙醯水楊酸(ASA)組及本發明藥物(水楊酸甲酯二糖苷MSDG)組，ASA組及MSDG組分別灌胃給10mg/ml ASA溶液0.2ml/10g和20mg/ml MSDG溶液0.2ml/10g，control組給等量蒸餾水。control組、ASA組及MSDG組分別於灌胃給藥後0.5h、0.5h及3h後腹腔注射0.6％醋酸溶液0.1ml/10g，ip醋酸後立即觀察15min扭體次數，以腹部內凹，軀幹與後腿伸張，臀部高起作為產生扭體反應的標準。ASA組及MSDG組小鼠扭體反應次數顯著低於空白對照組，說明MSG有較明顯的鎮痛作用，見圖1。
(2)抗血小板作用研究動物隨機分為空白組(蒸餾水)，ASA組(40mg/kg)，MSDG組(100mg/kg)。每天從20∶30至第二天8∶30禁食12小時，8∶30開始給藥，各組動物分別按1ml/100g分別灌胃給蒸餾水、4mg/mlASA、10mg/ml MSDG，每天一次，給藥三天。在第三天給藥後(ASA組1小時，MSDG組5小時)，將大鼠用戊巴比妥鈉麻醉(40mg/kg)，頸總動脈插管取血，以3.8％枸櫞酸鈉抗凝(1∶9)，血液置矽化管離心管中，1000rpm離心10分鐘，吸出上清，即為富血小板血漿(PRP)；剩餘血漿再以3000rpm離心10分鐘，上清液即為貧血小板血漿(PPP)。用血小板聚集儀檢測血小板聚集率，誘導劑分別為ADP，終濃度5μM。計算聚集率，組間採用t檢驗檢測聚集率差異，研究結果見圖2。
權利要求
1.一種化合物具有式(I)的結構
2.權利要求1所述的化合物的製備方法，包含如下步驟(1)滇白珠用水、甲醇或乙醇加熱或回流提取，得到提取液；(2)將提取液過濾，濾液濃縮，再過濾或離心，取上清液；(3)將上清液加入到大孔吸附樹脂柱上，先用水洗脫至Molish反應為陰性，然後用梯度的乙醇洗脫。收集不同濃度的乙醇洗脫液，濃縮至幹，得到滇白珠枝葉的不同極性部分提取物；(4)經薄層層析檢查將含有水楊酸酯糖苷類化合物的部分，用乙醇溶解，拌入矽膠，乾燥後用矽膠色譜柱分離，用氯仿∶甲醇∶水進行幹柱層析後切割；(5)經薄層層析檢查，合併含有水楊酸甲酯三糖苷化合物的部分，再進行矽膠柱色譜柱純化即製得化合物水楊酸甲酯三糖苷。
3.根據權利要求2所述的化合物製備方法，其特徵在於步驟(2)中濾液在50-65℃減壓濃縮至濃度為0.5g生藥/ml。
4.一種藥物，含有式(II)結構的化合物或和藥學上可用的輔料。 式(II)其中R1＝甲基、乙基、丙基、丁基、糖基R2＝一糖、二糖、三糖；其中的糖可以是葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖。
5.根據權利要求4所述的藥物，其特徵在於R1是甲基。
6.根據權利要求4所述的藥物，其特徵在於R2是二糖。
7.一種藥物，含有按如下方法提取的有效成分(1)滇白珠用水、甲醇或乙醇加熱或回流提取，得到提取液；(2)提取液過濾，濾液濃縮，再過濾或離心，取上清液；(3)將上清液加入到大孔吸附樹脂柱上，先用水洗脫至Molish反應為陰性，然後用梯度的乙醇洗脫。收集不同濃度的乙醇洗脫液，濃縮至幹，得到有效部位提取物。
全文摘要
本發明涉及水楊酸酯糖苷類化合物，以及製備該化合物的方法。本發明公開了一種新化合物——水楊酸甲酯三糖苷(I)及其製備方法。本發明還提供了一種含有水楊酸酯糖苷的藥物，該藥物具有解熱、鎮痛、抗炎及抗血小板凝集作用。
文檔編號A61K31/7028GK1727354SQ20041004662
公開日2006年2月1日 申請日期2004年7月30日 優先權日2004年7月30日
發明者丁怡, 杜冠華, 李建北, 張斌 申請人:丁怡