一種大白杜鵑組培快速繁殖方法
2023-09-23 00:25:50 1
專利名稱：一種大白杜鵑組培快速繁殖方法
技術領域：
本發明涉及一種野生高山杜鵑種類的大白杜鵑組培快速繁殖方法，屬於花卉培養技術領域。
背景技術：
大白杜鵑是杜鵑花科(Ericaceae)杜鵑花屬(lihododendron L.)常綠木本植物， 是我國特有種，主要分布在四川、雲南、貴州、西藏、湖北、湖南等地，生於海拔1000 3200m 的林下、灌叢中。大白杜鵑花大，花冠漏鬥狀鐘形，白色或帶薔薇色，花梗具綠色或粉紅色斑點，花開之時，有陣陣清香撲面而來，泌人心脾，觀賞價值極高。大白杜鵑還是我國民間常用的中草藥，其性味「苦，涼，有小毒」，具有調和經血、潤肺清喉、益氣寧神等功效。此外，大白杜鵑花瓣還可食用，富含多種胺基酸和維生素，味道精美、營養豐富。目前，對大白杜鵑的利用主要以採集野生資源為主，人為的亂採濫挖，使大白杜鵑生境遭到嚴重破壞，資源受到威脅。目前，現有的大白杜鵑種子繁殖和扦插繁殖技術因受資源和季節的限制，很難大規模育苗，並且現有技術還存在著培養周期較長、成活率較低、產量較低等問題。為了更好的保護、 利用、開發大白杜鵑資源，研究大白杜鵑組培快繁技術具有重要意義。
發明內容
本發明的目的在於，提供一種培養周期縮短、不受季節影響、並且產量較高的大白杜鵑種子胚組培快速繁殖方法，以克服現有技術的不足。本發明的技術方案，本發明的一種大白杜鵑組培快速繁殖方法是採用組織培養技術對種子胚的子葉和胚軸進行愈傷組織誘導繼而形成叢生芽而後分化成完整植株的一種組培快速繁殖方法，其過程包括下列步驟
a、外植體的準備
取大白杜鵑尚未開裂的蒴果，在流水下用刷子刷洗蒴果表面，在超淨工作檯上用75% 乙醇消毒30S，接種用0. 1%升汞溶液消毒lOmin，無菌水衝洗1次，再用10%過氧化氫溶液浸泡3 5min，無菌水衝洗5 6次，最後用消毒濾紙吸乾表面水分，備用；
b、無菌培養系的建立
將蒴果滅好菌後，用剪刀和鑷子剝開蒴果，將種子抖撒在滅好菌的無菌種子萌發培養基上，然後在培養溫度為25(士 1) °C、光照時間為1 · Cf1和光照強度為40 60 mol · m_2 · s—1的培養條件下進行培養； C、叢生芽誘導和增殖培養
當種子全部萌發完畢，子葉全部展開時，將無菌苗分割成子葉和胚軸兩部分分別接種到叢生芽誘導培養基上，其培養條件為培養溫度25 (士 1) °C、光照時間12h · Cf1和光照強度為 40 60 mol · in2 · ；
一個半月後，子葉出現伸長生長，變成2片真葉，子葉基部出現少量黃色愈傷組織； 胚軸邊緣開始隆起膨大，出現少量顆粒狀黃色愈傷組織和綠色愈傷組織；2個月後，愈傷
4組織明顯增大，子葉形成的愈傷組織分化出叢生芽，此時，胚軸形成的愈傷組織隱約可見大量綠色芽點，將叢生芽和胚軸形成的愈傷組織繼續轉接到繼代增殖培養基上進行繼代增殖培養；其培養條件為培養溫度25(士 1) °C、光照時間12h · Cf1和光照強度40 60 mol · m_2 · s—1 ；繼代增殖培養的間隔時間為1 2月，其繁殖係數可達6. 5 ；
d、叢生芽的伸長和壯苗培養
將叢生芽從愈傷組織上切割下來，叢生芽分割成小塊轉接到叢生芽伸長和壯苗培養基上，其培養條件為培養溫度為25(士 1) °C、光照時間1 · Cf1和光照強度40 60 mol · in2 · S-1 ；
在叢生芽伸長和壯苗培養基上，30天後芽苗生長健壯，單株叢生芽可伸長到2釐米左右，芽叢上的小芽苗可增長至1. 0釐米；
e、試管苗生根誘導培養
將高2 3 cm的叢生芽苗切成單株後，接種到生根培養基上，其培養條件為培養溫度 25 (士 1) °C、光照時間 12h · Cf1 和光照強度 40 60 mol · m_2 · s-1 ；
50d後開始生根，生根率為60% 65%，70 d後苗高可達到4 5 cm,根數2 3條，將完整植株移栽到黃沙、珍珠巖、腐殖土混合的基質中進行煉苗培養即成。上述無菌種子萌發培養基為1/4MS培養基、蔗糖30g/L、玉米素0. 5mg/L、萘乙酸
0.01mg/Lo上述叢生芽誘導培養基為1/4MS培養基、蔗糖30g/L、玉米素1. 2 2. Omg/L、萘乙酸 1. Omg/L。上述繼代增殖培養基為1/4MS培養基、蔗糖30g/L、玉米素1. 2 2. Omg/L、萘乙酸
1.0mg/L ο上述叢生芽伸長和壯苗培養基為1/4MS培養基、蔗糖30g/L、苯噻隆0. 5mg/L、赤黴素 1. 0 2. 0mg/LO上述生根培養基為1/4MS培養基、蔗糖25g/L、吲哚丁酸1. 0mg/L、萘乙酸3. 0mg/L、 活性炭0. 8 mg/L。在上述無菌種子萌發培養基、叢生芽誘導培養基、繼代增殖培養基、叢生芽伸長和壯苗培養基以及生根培養基中都分別含瓊脂10g/L和PH5. 2 5. 4。由於採用了上述技術方案，本發明具有培養周期短、分枝生長好、不受季節影響的特點。通常大白杜鵑繁殖係數低，本發明的繁殖係數可達6. 5，極大的提高了大白杜鵑係數， 可短期內獲取大量大白杜鵑小苗。本發明的大白杜鵑種子胚組培快速繁殖方法是發明人經過以下一系列的試驗後所得到的
無菌種子萌發研究
表1 不同激素種類和用量對無菌種子萌發的影響
權利要求
1.一種大白杜鵑組培快速繁殖方法，其特徵在於採用組織培養技術對種子胚的子葉和胚軸進行愈傷組織誘導繼而形成叢生芽而後分化成完整植株的一種組培快速繁殖方法， 其過程包括下列步驟a、外植體的準備取大白杜鵑尚未開裂的蒴果，在流水下用刷子刷洗蒴果表面，在超淨工作檯上用75% 乙醇消毒30S，接種用0. 1%升汞溶液消毒lOmin，無菌水衝洗1次，再用10%過氧化氫溶液浸泡3 5min，無菌水衝洗5 6次，最後用消毒濾紙吸乾表面水分，備用；b、無菌培養系的建立將蒴果滅好菌後，用剪刀和鑷子剝開蒴果，將種子抖撒在滅好菌的無菌種子萌發培養基上，然後在培養溫度為25(士 1) °C、光照時間為1 · Cf1和光照強度為40 60 mol · m_2 · s—1的培養條件下進行培養；C、叢生芽誘導和增殖培養當種子全部萌發完畢，子葉全部展開時，將無菌苗分割成子葉和胚軸兩部分分別接種到叢生芽誘導培養基上，其培養條件為培養溫度25 (士 1) °C、光照時間12h · Cf1和光照強度為 40 60 mol · in2 · ；一個半月後，子葉出現伸長生長，變成2片真葉，子葉基部出現少量黃色愈傷組織； 胚軸邊緣開始隆起膨大，出現少量顆粒狀黃色愈傷組織和綠色愈傷組織；2個月後，愈傷組織明顯增大，子葉形成的愈傷組織分化出叢生芽，此時，胚軸形成的愈傷組織隱約可見大量綠色芽點，將叢生芽和胚軸形成的愈傷組織繼續轉接到繼代增殖培養基上進行繼代增殖培養；其培養條件為培養溫度25(士 1) °C、光照時間12h · Cf1和光照強度40 60 mol · m_2 · s—1 ；繼代增殖培養的間隔時間為1 2月，其繁殖係數可達6. 5 ；d、叢生芽的伸長和壯苗培養將叢生芽從愈傷組織上切割下來，叢生芽分割成小塊轉接到叢生芽伸長和壯苗培養基上，其培養條件為培養溫度為25(士 1) °C、光照時間1 · Cf1和光照強度40 60 mol · in2 · S-1 ；在叢生芽伸長和壯苗培養基上，30天後芽苗生長健壯，單株叢生芽可伸長到2釐米左右，芽叢上的小芽苗可增長至1. O釐米；e、試管苗生根誘導培養將高2 3 cm的叢生芽苗切成單株後，接種到生根培養基上，其培養條件為培養溫度 25 (士 1) °C、光照時間 12h · (Γ1 和光照強度 40 60 mol · m_2 · s-1 ；50d後開始生根，生根率為60% 65%，70 d後苗高可達到4 5 cm,根數2 3條，將完整植株移栽到黃沙、珍珠巖、腐殖土混合的基質中進行煉苗培養即成。
2.根據權利要求1所述的大白杜鵑組培快速繁殖方法，其特徵在於無菌種子萌發培養基為1/4MS培養基、蔗糖30g/L、玉米素0. 5mg/L、萘乙酸0. Olmg/L。
3.根據權利要求1所述的大白杜鵑組培快速繁殖方法，其特徵在於叢生芽誘導培養基為1/4MS培養基、蔗糖30g/L、玉米素1. 2 2. Omg/L、萘乙酸1. Omg/L。
4.根據權利要求1所述的大白杜鵑組培快速繁殖方法，其特徵在於繼代增殖培養基為1/4MS培養基、蔗糖30g/L、玉米素1. 2 2. Omg/L、萘乙酸1. 0mg/L。
5.根據權利要求1所述的大白杜鵑組培快速繁殖方法，其特徵在於叢生芽伸長和壯苗培養基為1/4MS培養基、蔗糖30g/L、苯噻隆0. 5mg/L、赤黴素1. 0 2. Omg/L。
6.根據權利要求1所述的大白杜鵑組培快速繁殖方法，其特徵在於生根培養基為 1/4MS培養基、蔗糖25g/L、吲哚丁酸1. Omg/L、萘乙酸3. Omg/L、活性炭0. 8 mg/L。
7.根據權利要求1所述的大白杜鵑組培快速繁殖方法，其特徵在於在無菌種子萌發培養基、叢生芽誘導培養基、繼代增殖培養基、叢生芽伸長和壯苗培養基以及生根培養基中都分別含瓊脂10g/L和ρΗ5· 2 5. 4。
全文摘要
本發明公開了一種大白杜鵑組培快速繁殖方法，採用組織培養技術對種子胚的子葉和胚軸進行愈傷組織誘導繼而形成叢生芽而後分化成完整植株的一種快速繁殖方法，其過程包括下列步驟a、外植體的準備；b、無菌培養系的建立；c、叢生芽誘導和增殖培養；d、叢生芽的伸長和壯苗培養；e、試管苗生根誘導培養；然後將高2～3cm的叢生芽苗切成單株後，接種到生根培養基上，其培養條件為培養溫度25(±1)℃、光照時間12h·d-1和光照強度40～60 mo1·m-2·s-1；50d後開始生根，生根率為60%～65%，70d後苗高可達到4～5cm，根數2～3條，將完整植株移栽到黃沙、珍珠巖、腐殖土混合的基質中進行煉苗培養即成。本發明具有培養周期縮短、不受季節影響、成活率高和產量較高等優點。
文檔編號A01H4/00GK102342246SQ201010240170
公開日2012年2月8日 申請日期2010年7月30日 優先權日2010年7月30日
發明者劉燕, 巫華美, 陳訓 申請人:貴州省生物研究所