羥基紅花黃色素a在製備治療、預防心腦血管疾病方面的藥物用途的製作方法

2023-09-23 20:33:50 2

專利名稱：羥基紅花黃色素a在製備治療、預防心腦血管疾病方面的藥物用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及羥基紅花黃色素A製備治療、預防心腦血管疾病的藥物用途。
背景技術：
紅花黃色素是從紅花中提取的總提取物，它對心腦血管具有一定的活性，由於總提取物中成分複雜使得藥物製備的標準無法穩定地控制。本發明人經過對紅花總黃色素進一步的分離和研究實驗，發現在紅花總黃色素中對心腦血管起作用的成分是結構明確的已知物質羥基紅花黃色素A，它的結構式為 其中羥基紅花黃色素A是作為染料中間產物出現的。
技術內容本發明提供一種羥基紅花黃色素A(S-A)在製備治療、預防心腦血管疾病方面的新用途。
羥基紅花黃色素A(S-A)是紅花黃色素中的一種成分，經研究發現其含量的不同直接影響著紅花黃色素對心腦血管疾病的治療作用，但有關羥基紅花黃色素A在治療和預防心腦血管疾病方面還未見報導，因此我們通過研究並進行有關實驗證實，羥基紅花黃色素A具有預防和治療性心腦血管疾病的用途。
我們通過試驗研究發現羥基紅花黃色素A具有抗局部腦缺血損傷、增加腦血流量、抗血栓、抑制血小板聚集和延長凝血時間的作用，因此本發明有效劑量的羥基紅花黃色素A能夠用來治療、預防血栓形成、自由基所致和血小板激活因子誘發的心腦血管疾病，特別是治療、預防Ca2+和自由基含量升高的及致線粒體損傷的缺血性腦血管疾病。病人腦缺血後腦細胞的壞死、調亡與大腦中多種因素有關，其中細胞中Ca2+和自由基的增多、線粒體的破壞使細胞趨於調亡。因此減少細胞內Ca2+和自由基的含量、保護線粒體完整性也是治療、預防缺血性腦血管疾病的途徑之一。首先，線粒體(Mit)既是能量代謝的主要場所又是調節細胞內鈣穩態的重要細胞器之一，同時也會產生自由基，Mit攝取Ca2+速度加快，使得腦細胞鈣敏感性降低，將導致腦細胞Ca2+超載，Ca2+超載也促進了自由基的生成自出基對膜結構的損傷又加速了Ca2+內流，而Mit對氧自由基的毒性非常敏感，腦缺血時，低氧分壓及其他原因使Mit產生大量自由基，作用於Mit膜上，使MDA含量升高、膜流動性降低、膜磷脂降解等，導致Mit膜結構與功能的損傷從而加劇了腦細胞的凋亡、加重了腦缺血的發展；其次、Mit膜結構的完整性是產生ATP的前提條件，這顯然對於ATP的生產是不利的，將導致腦能量代謝受抑制，低氧分壓產生乳酸，而ATP的缺乏使乳酸轉化的途徑受阻(如糖異生)，從而使乳酸堆積，毒害腦細胞，造成腦細胞灶狀壞死。因此Mit膜損傷可能是腦細胞由可逆性損傷轉化為不可逆損傷的早期特徵和重要標誌。另外，自由基其性質活潑，可損傷蛋白質、脂質、核酸等，其可直接作用於生物膜上的不飽和脂肪酸損傷生物膜，導致多種疾病的發生。
本發明羥基紅花黃色素A對腦缺血損傷的保護作用不僅僅體現在對凝血系統的作用上而且具有抑制Ca2+過多攝入和氧自由基的增多，降低MDA含量、提高SOD與GSH-Px活性、減少Mit膜磷脂降解、增加膜流動性從而保護MIT膜的完整性，從抗細胞凋亡與細胞死亡兩個方面保護腦細胞進一步達到了預防、治療缺血性腦血管疾病的目的。
本發明進一步還可以治療、預防與垂體後葉素誘發、異丙腎上腺素誘發心肌缺血性心血管疾病。
具體的來說，本發明有效劑量羥基紅花黃色素A可以治療、預防動脈硬化、冠心病、腦血栓、腦缺血、心絞痛、心肌梗塞、靜脈炎、神經性皮炎等疾病。
本發明所述的羥基紅花黃色素A可以合成，也可以從紅花中提取分離獲得，如果從紅花中提取分離，優選採用水提醇沉的提取方法，與離心分離法、大孔吸附樹脂柱層析法和聚醯胺吸附法組合，獲得羥基紅花黃色素A。其中，優選採用下列方法1、將紅花用水冷浸24h煎煮回流提取50-90分鐘，然後過濾，把濾液濃縮至相對密度為1.10-1.25；2、將濃縮液中加入乙醇至含醇量80％，在4C條件下沉澱24小時，過濾除去沉澱，取上清液，揮淨乙醇並濃縮至相對密度為1.15-1.20；3、向濃縮液中加入5-10倍的水，在4℃條件下，沉澱12-24小時，離心除去沉澱；4、將上述離心液經大孔吸附樹脂柱層析，先用去離子水洗脫至Molish反應及茚三酮反應呈陰性，然後繼續用去離子水洗脫4-6個柱體積並收集洗脫液；5、將上述洗脫液經聚醯胺吸附，極性溶劑甲醇或乙醇洗脫，收集洗脫液，60℃條件下減壓濃縮除去甲醇或乙醇，剩餘水溶液冷凍乾燥，得到桔黃色無定形粉末，即為本發明羥基紅花黃色素A。
本發明中羥基紅花黃色素A的製備方法優選為取紅花生藥，加入其重量10-15倍水，煮沸50分鐘，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.25，加乙醇至含醇量為80％，4℃沉澱24小時，過濾，濾液濃縮至相對密度為1.20，加10倍量的水，4℃沉澱24小時，離心，取上清液，用重量為其40％的大孔吸附樹脂吸附，用去離子水洗脫3個柱體積，然後繼續用去離子水洗脫5個柱體積，收集洗脫液，用重量為其10％的聚醯胺吸附，先用去離子水洗至無色，然後用95％乙醇洗脫8個柱體積，收集洗脫液，旋轉蒸發器上濃縮除去乙醇，冷凍乾燥得到羥基紅花黃色素A。
本發明中有效劑量的羥基紅花黃色素A作為有效成分可以與藥學上可接受的不同輔料採用常規的製備工藝製成各種不同的藥物劑型，如注射液、大輸液、注射用無菌凍乾粉針劑、片劑、膠囊或口服液等對患者給藥，如將有效量的羥基紅花黃色素A和支持劑如甘露醇、低分子右旋糖苷等藥用輔料經用注射用水溶解，進行滅菌直接做成注射液或採用常規的凍幹工藝製成凍乾粉；和糊精、澱粉、乳糖、磷酸氫鈣、硬脂酸鎂等敷料，採用常規的壓片法製成片劑或者將上述組分裝入膠囊製成膠囊劑。
具體實施例方式
製備例1取紅花生藥，加入其重量10-15倍水，煮沸50分鐘，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.25，加乙醇至含醇量為80％，4℃沉澱24小時，過濾，濾液濃縮至相對密度為1.20，加10倍量的水，4℃沉澱24小時，離心，取上清液，用重量為其40％的大孔吸附樹脂吸附，用去離子水洗脫3個柱體積，然後繼續用去離子水洗脫5個柱體積，收集洗脫液，用重量為其10％的聚醯胺吸附，先用去離子水洗至無色，然後用95％乙醇洗8個柱體積，收集洗脫液，旋轉蒸發器上濃縮除去乙醇，冷凍乾燥得到羥基紅花黃色素A。
實驗例1、羥基紅花黃色素A對大鼠局部缺血損傷的影響。
1.材料和方法受試樣品；注射用羥基紅花黃色素A，山東省天然藥物工程技術研究中心提供，規格10mg/只，批號20000525，臨用前生理鹽水配製成所需濃度的溶液；尼莫地平注射液(商品名尼立蘇)，山東新華製藥股份有限公司，規格10mg/50mL批號；00060211，批准文號(95)衛藥準字X-121(2)號；血塞通，雲南植物藥業有限公司，1000mg/2ml批號20000407滇衛藥準字(1995)第000138號；賦形劑，甘露醇，青島膠南明月海藻工業有限公司生產(符合藥典標準)，批號9905026。紅四氮唑，美國SIGMA公司產品，臨用前用生理鹽水配成4％溶液。
動物普通級Wistar大鼠，雄性體重350-420g，山東醫科大學實驗動物中心提供，合格證號魯動質字200001003插線法製備局部腦缺血模型栓線選用直徑0.24mm尼龍線，長度5.0cm。大鼠用水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分離左側頸總動脈，於頸內、頸總動脈處用動脈夾夾閉，頸外動脈近心端及遠心端結紮，中間剪斷。將頸外動脈游離端拉至與頸內動脈成一條直線，將尼龍繩由頸外動脈插入顱內，遇輕微阻力時停止，插入深度約為2cm。結紮頸外動脈開口，並打開頸總動脈夾，消毒縫合傷口，造成左側大腦中動脈缺血模型。以上實驗均為在23℃-25℃進行，缺血24小時後觀察大鼠的行為和腦的梗塞面積，以此作為缺血程度的指標。
缺血24小時後的動物評分行為指標1、提鼠尾觀察前肢曲伸情況，如雙前肢對稱伸向地面，計為0分，如手術對側前肢出現腕屈曲計為1分，肘屈曲計為2分，肩內旋計為3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩內旋者，計為4分；2、將動物至於平地面上分別推雙肩相對側移動，檢查阻力。如雙側阻力對等且有力，計為0分，如向手術對側推動時阻力下降，根據下降的程度不同，分為輕、中、重三度，分別計為1、2、3分；3、物雙前肢置一金屬網上，觀察雙前肢的肌張力。雙前肢張力對等且有力者計為0分；同樣根據手術對側肌張力下降程度不同計為1、2、3分；4、動物有不停地向一側轉圈者，計為1分；根據標準評分，滿分為11分，分數越高，表示動物行為障礙越嚴重。
實驗動物分組和用藥動物隨機分為9組，假手術組、生理鹽水組(NS)、注射用羥基紅花黃色素A1.5mg/kg、3.0mg/kg、6.0mg/kg組，注射用羥基紅花黃色素A6.0mg/kg口服組，賦形劑組、尼莫地平0.2mg/kg組，血塞通36.0mg/Kg組，每組10隻。除假手術組和注射用羥基紅花黃色素A6.0mg/kg口服組，各組動物分別於缺血後30min舌下靜脈給予相應藥物(給藥體積1mi/Kg)。注射用紅花黃色素6.0mg/Kg口服組動物於手術前禁食12小時，缺血後30min灌胃給藥(給藥體積1ml/Kg)腦缺血面積測定動物行為評分後處死取腦，去掉嗅球、小腦、低位腦幹、冠狀切成5片。腦片用紅四氮唑(TTC)染色。正常組織染色後呈紅色，梗塞組織呈白色，染色後照相，用中國航空航天大學病理圖象分析軟體求梗塞面積比。數據分析數據用X±S表示，以組間t檢驗進行統計學處理。
2結果2.1羥基紅花黃色素A(S-A)對腦缺血大鼠行為的影響。
結果顯示大腦中動脈栓塞大鼠，給予生理鹽水，表現出明顯的行為障礙。給予不同劑量的羥基紅花黃色素A注射液，動物行為明顯低於NS對照組，且成劑量依賴。統計學分析表明，羥基紅花黃色素A中劑量(3.0mg/kg)組的動物行為評分與血塞通組相比無顯著性差異，羥基紅花黃色素A大劑量(6.0mg/kg)組的動物行為評分低於血塞通組，與尼莫地平組相比無顯著性差異，羥基紅花黃色素A大劑量組口服給藥的動物行為評分低於羥基紅花黃色素A小劑量組(1.5mg/kg)靜脈給藥組，高於羥基紅花黃色素A大、中劑量靜脈給藥組。
表明羥基紅花黃色素A靜脈給藥具有明顯改善腦缺血動物行為障礙的作用，口服給藥作用弱於靜脈給藥(表1)。
表1羥基紅花黃色素A對局部腦缺血大鼠行為的影響劑量 降低率組別 行為評分(mg/kg) ％假手術 - 0 0NS 等容量10.20±0.92 0S-A小劑量1.5 9.30±1.06*##++8.7S-A中劑量3.0 7.20±0.63**##29.4S-A大劑量6.0 5.80±1.4**++43.1S-A灌胃給藥 6.0 8.20±0.63**##+19.7賦形劑 2410.1±0.88 0.9尼莫地平 0.2 4.90±1.45**51.9血塞痛 367.50±0.85**26.5n＝10與生理鹽水相比*P＜0.05，**P＜0.01；與尼莫地平組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與血塞通比較+P＜0.05，++P＜0.012.2羥基紅花黃色素A對腦缺血面積的影響結果顯示，大鼠腦缺血後24小時，腦組織出現明顯的缺血區，其面積達全腦的30％以上，腦缺血30分鐘後給予羥基紅花黃色素A治療，腦缺血區明顯低於NS對照組，且呈劑量依賴性。統計學分析，羥基紅花黃色素A注射液中劑量(3.0mg/kg)組的大鼠腦缺血面積與血塞通相比無顯著性差異，羥基紅花黃色素A注射液大劑量(6.0mg/kg)組的大鼠腦缺血面積與血塞通相比較小，與尼莫地平組相比無顯著性差異，羥基紅花黃色素A灌胃給藥(6.0mg/kg)缺血面積明顯小於羥基紅花黃色素A小劑量(1.5mg/kg)靜脈給藥組，與血塞通組相似，表明羥基紅花黃色素A具有顯著的抗腦缺血作用，靜脈注射給藥作用強於口服給藥。
表2羥基紅花黃色素A對腦缺血面積的影響組別劑量(mg/kg) 缺血比(％)假手術 -- 1.2±0.55NS 等容量 3.19±9.2S-A小劑量 1.5 30.1±12.9##+S-A中劑量 3.0 13.4±6.3**+##S-A大劑量 6.0 4.8±2.9**++S-A灌胃給藥 6.0 19.4±5.1**##賦形劑 24 33.7±8.9##尼莫地平0.2 4.9±2.6**血塞痛 36 19.1±7.7**##n＝10與生理鹽水相比*P＜0.05，**P＜0.01；與尼莫地平組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與血塞通比較+P＜0.05，++P＜0.01結論表明羥基紅花黃色素A可明顯改善腦缺血大鼠的行為障礙，縮小缺血區範圍，對缺血性腦損傷有明顯的保護作用。
實驗例2、羥基紅花黃色素A對麻醉犬腦血管的影響。
1材料與方法受試樣品注射用羥基紅花黃色素A，山東省天然藥物工程技術研究中心提供，規格10mg/支，批號2000525臨用前用生理鹽水配製成所需濃度的溶液；溶劑對照組2％甘露醇，石家莊製藥有限集團公司，批號00033165；陽性對照組血栓通注射液，內蒙古旗卡製藥廠。批號2000091112，批准文號內衛藥準字(1996)第001945號。
動物健康犬36隻，雌雄兼用，體重12-16Kg，由北京市海澱區通利實驗動物養殖廠提供，動物合格證編號京動管犬子(96)第024號儀器TA-4000多道生理記錄儀美國Gould Inc公司產品；MF-27電磁流量計日本光電公司產品。
實驗分組及用藥犬分為6組，空白對照組，溶劑對照組(甘露醇組)，注射用羥基紅花黃色素A3mg/kg、6mg/kg、12mg/kg組，及血栓通注射液25mg/kg組。給藥時，各組藥物均溶於100ml的生理鹽水中，30分鐘靜脈滴注完畢。
腦血流量指標的測定動物稱重後戊巴比妥鈉30mg/Kg麻醉，用右頸總動脈插管法測定動脈血壓。分離左頸總動脈，結紮頸外動脈，將電磁流量計探頭(2mm)插入頸總動脈，垂直於頸總動脈固定，記錄頸內動脈流量以代腦血流量。滴加生理鹽水防止探頭乾燥。安放電極，記錄標準肢體II導聯心電圖。手術後穩定30min記錄各項指標，作為給藥前對照。各組犬分別靜脈滴注低、中、高濃度的注射用羥基紅花黃色素A及血栓通注射液(30分鐘滴完)，滴注5min時開始測定，每隔5min記錄一次，觀察記錄時間為1小時，即記錄給藥後5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min時的頸內動脈血流量、動脈血和心率。按下列公式計算腦血管阻力腦血管阻力(Kpa/ml/min)＝血壓/腦血流量。
數據分析數據用X±S表示，實驗結果進行組內給藥前後作用比較和給藥組與對照組比較，以t檢驗進行統計學處理。
2結果
2.1羥基紅花黃色素A對犬腦血流量的影響結果顯示，甘露醇組各項指標與同時間段空白組比較無顯著差異。注射用羥基紅花黃色素A12mg/Kg、6mg/Kg組給藥後，犬腦血流量明顯增加，與給藥前和甘露醇組比均有顯著意義，(p＜0.05或p＜0.01)，血壓、血管阻力和心率無明顯變化；注射用羥基紅花黃色素A3mg/Kg對腦血流量、血壓、和血管阻力均無明顯作用。血栓通25mg/Kg組10-30分鐘時也可增加腦血流量(表3-6)結果表明注射用羥基紅花黃色素A12mg/Kg、6mg/Kg組靜脈給藥均可明顯增加麻醉犬的腦血流量，但對麻醉犬血壓、血管阻力和心率無明顯影響。
表3、注射用紅花明苷A對犬腦血流量的影響(X±S)

與給藥前相比*P＜0.05，**P＜0.01；與溶劑比較#P＜0.05，##P＜0.01表4紅花明苷A對犬血壓的影響(X±S)

溶劑比較*P＜0.05
表5注射用紅花明苷對犬腦血管阻力的影響(X±S)

溶劑比較*P＜0.05表6、注射用紅花明苷對犬心率的影響(X±S)

溶劑比較*P＜0.05
實驗例3、羥基紅花黃色素A對大鼠體內血栓形成的影響1、材料和方法受式樣品注射用羥基紅花黃色素A，山東省天然藥物工程技術中心提供，規格10mg/支，批號20000525，臨用前用生理鹽水配製成所需濃度的溶液；陽性對照組肝素鈉，規格1g/支，江蘇省常州市光明生物化學研究所產品，批號991008，分子量6000-20000，效價每1mg不少於140單位。
動物普通級WISTAR大鼠，雄性，體重230-250克，山東綠葉製藥股份有限公司動物實驗中心，合格證號魯動質字9803號。
儀器YBZ-Z真空恆溫乾燥箱天津藥典標準儀器廠產品2、注射用羥基紅花黃色素A對大鼠體內血栓形成的影響響實驗方法2.1、對動-靜脈旁路血栓形成的影響將大鼠用水合氯醛(350mg/Kg，I.p.)麻醉，分離右側頸總動脈及左頸外靜脈，在聚乙烯管中放入一跟長5cm已稱重的七號絲線。以含肝素鈉(50U/Ml)的生理鹽水溶液充滿聚乙烯管，聚乙烯管的一端插入左頸外動脈，另一端插入右頸總動脈。打開夾閉的血管的動脈夾，使血液從右總靜脈流入聚乙烯管後返回左頸外靜脈。開放血流15min後迅速取出絲線稱重，減去絲線重量即血栓溼重。
實驗分組及用藥動物隨機分為5組，生理鹽水，羥基紅花黃色素A1.5mg/kg、3.0mg/kg、6.0mg/kg、肝素鈉0.2mg/kg，每組10隻。各組動物分別於術前15min舌下靜脈給予相應的藥物(給藥體積1ml/kg)2.2對大鼠靜脈血栓形成的影響大鼠用水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉後開腔分離下腔靜脈，與左腎靜脈下方用粗絲線結紮下腔靜脈，縫合腹部。24小時後重新開腹，在結紮處下方2cm處夾閉血管，剖開管腔，取出血栓，60度真空乾燥24小時後，稱重。
實驗分組及用藥動物隨機分為5組，生理鹽水，羥基紅花黃色素A1.5mg/kg、3.0mg/kg、6.0mg/kg、肝素鈉0.2mg/kg，每組10隻。各組動物分別於術前6小時舌下靜脈給予相應的藥物(給藥體積1ml/kg)數據分析數據用X±S表示，以組間t檢驗進行統計學處理。
3.結果3.1羥基紅花黃色素A對大鼠動-靜脈旁路血栓形成的影響。
表7羥基紅花黃色素A對大鼠動-靜脈旁路血栓形成的影響組別 劑量 血栓抑制率(mg/Kg)(mg)(％)NS 等容量 31.80±1.97 0S-A小劑量 1.525.63±5.86**## 20.3S-A中劑量 3.017.94±2.39**## 43.6S-A大劑量 6.014.59±1.31**# 54.2肝素鈉 0.212.08±1.99** 62.1n＝10與生理鹽水相比*P＜0.05，**P＜0.01；與肝素鈉組比較#P＜0.05，##P＜0.01結果顯示羥基紅花黃色素A可呈劑量依賴性抑制大鼠動-靜脈旁路血栓形成6.0mg/kg羥基紅花黃色素的作用尤為明顯，抑制率達到了54.2％，當於肝素鈉作用強度的87.3％(表7)3.2羥基紅花黃色素A對大鼠血栓形成的影響結果顯示羥基紅花黃色素A可成劑量依賴性減輕大鼠靜脈血栓的重量，6.0mg/kg羥基紅花黃色素的作用尤為明顯，抑制率達到了64.5％，當於肝素鈉作用強度的86.2％(表8)表8羥基紅花黃色素A對大鼠血栓形成的影響組別 劑量 血栓 抑制率(mg/Kg) (mg) (％)NS 等容量 15.29±2.54 0S-A小劑量 1.5 11.21±1.41**## 26.7S-A中劑量 3.0 8.17±0.77**## 48.3S-A大劑量 6.0 5.43±1.30**#64.5肝素鈉 0.2 3.84±1.30** 74.9n＝10與生理鹽水相比*P＜0.05，**P＜0.01；與肝素鈉組比較#P＜0.05，##P＜0.01實驗例4羥基紅花黃色素A對血小板功能和數目的影響1材料和方法受試樣品注射用羥基紅花黃色素A，山東省天然藥物工程技術中心提供，規格10mg/支，批號20000525，臨用前用生理鹽水配製成所需濃度的溶液；陽性對照組乙醯水楊酸，煙臺第二製藥廠，魯衛藥準字(1995)第111011號批號2000502，規格25mg/片；二磷酸腺苷(ADP)美國SIGMA公司產品，生理鹽水配置，100μl；枸櫞酸鈉天津天河化學試劑廠，分析純，以蒸餾水配製3.8％溶液備用。
動物清潔級Wistar大鼠，雄性，體重230-250g，青島實驗動物中心提供，合格證號魯動質字200002004號。
儀器DL-4000B型低速冷凍離心機上海安亭科學儀器廠；LBY-NJ2血小板計數儀北京普利生公司產品；JT-IR血細胞計數儀美國庫爾特公司產品。
2羥基紅花黃色素A對大鼠血小板聚集的影響大鼠隨機分為5組，即生理鹽水，羥基紅花黃色素A 25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml；乙醯水楊酸30μg/ml、每組10隻。每隻大鼠心臟取血3ml，以3.8％枸櫞酸鈉抗凝。650r/min離心10分鐘，移出上層血漿即富血小板血漿(PRP)0.5ml，餘下部分再以3000r/min離心10分鐘，上層泛請即為富血小板血漿(PPP)。調整PRP的血小板數＜20000萬個/ml，移取0.3ml調整好濃度的血小板至比濁管內，將比濁管放入用PPP調零後的血小板聚集儀中，加入10μl相應的藥物，37度溫育3min後加入10μl的ADP，同時開啟血小板聚集儀進行記錄，記錄時間為6min，列印記錄結果。
3、羥基紅花黃色素A對大鼠給藥前、後血小板數目的影響大鼠隨機分為4組，生理鹽水、羥基紅花黃色素A 1.5mg/kg、3.0mg/kg、6.0mg/kg。水合氯醛麻醉(350mg/kg，i.p.)後，先從尾靜脈取血0.45ml；再於舌下靜脈給藥30min後，尾靜脈採血0.45ml。兩次所取血樣均加入0.05ml 3.8％的枸櫞酸鈉抗凝。全部血樣用血細胞計數儀測定大鼠給藥前、後血小板數目。
數據分析數據用X±S表示，以組間t檢驗進行統計學處理。
4結果4.1羥基紅花黃色素A對大鼠給藥前、後血小板聚集的影響。
結果顯示，不同劑量的注射用羥基紅花黃色素A(S-A)均可抑制由ADP誘導的大鼠血小板聚集，與生理鹽水比較有高度顯著性差異，小、中、大劑量的羥基紅花黃色素A對血小板聚集的抑制率分別為19.5％、36.5％、41.8％，其中大劑量的羥基紅花黃色素A的作用強度達到乙醯水楊酸作用強度的77.5％(表9)表9.注射用羥基紅花黃色素對大鼠血小板聚集的影響(X±S)組別 終濃度 最大聚集率 抑制率(μg/ml) ％ (％)NS 等容量 39.03±6.000S-A小劑量25.0 31.43±2.27**##19.5S-A中劑量50.0 24.79±4.61**##36.5S-A大劑量100.022.72±4.22**# 41.8乙醯水楊酸 30.0 15.26±2.23** 60.9n＝10與生理鹽水相比*P＜0.05，**P＜0.01；與乙醯水楊酸組比較#P＜0.05，##P＜0.014.2對大鼠給藥前後血小板數目的影響。
結果顯示給藥前與給藥後大鼠自身血小板數目無顯著性差異，表明S-A對大鼠血小板數目無明顯影響。(表10)。
表10羥基紅花黃色素A對大鼠給藥前後血小極數目的影響(X±S)組別 劑量 動物數血小板數目(×109/L)(mg/Kg) (n) 給藥前給藥後NS 等容量7 666±152 649±118S-A小劑量 1.5 10632±84 670±82S-A中劑量 3.0 10641±113 626±120S-A大劑量 6.0 8 705±122 705±95結論不同劑量的注射用羥基紅花黃色素A均可抑制ADP誘導的血小板聚集，對血小板數目無明顯影響。
實驗例5、紅花命苷A對小鼠凝血時間的影響。
1、材料和方法受式樣品注射用羥基紅花黃色素A，山東省天然藥物工程技術中心提供，規格10mg/支，批號20000525，臨用前生理鹽水配製成所需濃度的溶液陽性對照組肝素鈉，規格1g/支，江蘇省常州市光明生物化學研究所產品，批號991008，分子量6000-20000，效價每1mg不少於140單位。
動物普通級昆明小鼠，雄性，體重18-22克，山東綠葉製藥股份有限公司動物實驗中心，合格證號魯動質字9803號。
2、羥基紅花黃色素A對小鼠凝血時間的影響昆明種80隻，稱重，標記，按體重隨機分為5組生理鹽水組(NS)羥基紅花黃色素-A 4.5mg/kg、9.0mg/kg、18.0mg/kg，肝素鈉0.6mg/kg。各組動物分別於尾靜脈注射相應的藥物，(給藥體積10mg/kg)。15min後，眼眶取血，用玻片法測定凝血時間；數據分析數據用X±S表示，以組間t檢驗進行統計學處理。
結果顯示，注射用羥基紅花黃色素A可呈劑量依賴性明顯延長小鼠凝血時間，18.0mg/kg注射用羥基紅花黃色素的作用尤為明顯，相當於肝素鈉作用強度的76.0％(表11)。
表11羥基紅花黃色素A對小鼠凝血時間的影響(X±S)組別 劑量(mg/Kg) 凝血時間(秒)NS等容量 54.87±9.52S-A小劑量 4.5 110.25±12.11**##
S-A中劑量 9.0 139.38±26.59**##S-A大劑量 18.0 289.69±50.50**##肝素鈉 0.2 405.56±38.15**n＝10與生理鹽水相比*P＜0.05，**P＜0.01；與肝素鈉組比較#P＜0.05，##P＜0.01結論羥基紅花黃色素A明顯延長小鼠凝血時間且呈劑量依賴性。
實驗例6、羥基紅花黃色素A對大鼠血液流變性的影響1、材料和方法受式樣品注射用羥基紅花黃色素A，山東省天然藥物工程技術中心提供，規格10mg/支，批號20000525，臨用前生理鹽水配製成所需濃度的溶液；陽性對照藥注射用降醯酶，中美合資煙臺北方製藥有限公司產品，規格5U/支，批號991128，臨用前生理鹽水配製成所需濃度的溶液。
動物普通級WISTAR大鼠，雄性，體重350-430克，山東綠葉製藥股份有限公司動物實驗中心，合格證號魯動質字9803號。
儀器LBY-N6A血小板計數儀北京普利生公司產品。
2、大鼠血液流變性指標測定WISTAR大鼠50隻，稱重，標記，按體重隨機分為五組生理鹽水組(NS)羥基紅花黃色素A(S-A)1.5mg/kg、3.0mg/kg、6.0mg/kg，降纖酶0.45U/kg。各組動物水合氯醛(350mg/kg)麻醉，分別於舌下靜脈注射相應藥物(給藥體積1ml/kg)。15min後，心臟採血5ml/只，以0.5％肝素抗凝，用血液流變學測試儀測定全血粘度、血漿粘度等指標。
數據分析數據分析數據X±S表示，以組間t檢驗進行統計學處理。
結果顯示不同劑量的羥基紅花黃色素A均可降低大鼠全血粘度、血漿粘度和紅細胞壓積，6.0mg/kg注射用羥基紅花黃色素A作用尤為明顯，其降低血粘度的作用強度與降纖酶相當(表12)。
表12羥基紅花黃色素A對大鼠血液流變性的影響(X±S)組別 劑量全血粘度(mPa.S) 血漿粘度 紅細胞壓積低切變率 低切變率(mPa.S)NS 等容量 21.71±4.77 9.23±2.13 2.73±0.5357.38±4.68S-A小劑1.5mg/kg13.57±2.50**## 4.73±0.43**## 1.30±0.08** 51.43±3.46**##S-A中劑量 3.0mg/kg13.34±2.19**## 4.92±0.65**## 1.28±0.07** 49.13±4.29**#S-A大劑量 6.0mg/kg11.61±0.90**# 4.51±0.40**# 1.22±0.07** 47.01±2.32**#降纖酶 0.45U/kg9.85±1.78** 4.25±0.49**1.27±0.05** 43.92±3.64**n＝10與生理鹽水相比*P＜0.05，**P＜0.01；與肝素鈉組比較#P＜0.05，##P＜0.01
結論不同劑量的注射用羥基紅花黃色素A均可降低大鼠全血粘度、血漿粘度和紅細胞壓積。實驗例7、羥基紅花黃色素A的抗自由基的活性研究1、藥物與試劑羥基紅花黃色素A由山東天然藥物工程技術研究中心提供；1，1，3，3-四乙氧基丙烷(JEP)，NADH，PMS，NBT，為SIGMA產品；硫代巴比妥酸(TBA)三氯乙酸(TCA)為國產分析純。
動物SD雄性大鼠數隻，200-250克昆明種小鼠20隻，18-22克，雌雄各半，由陝西省中醫藥研究院提供。
2、方法O·2-生成及測定O·2-由NADH-PMS-NBT系統(16mmol/L，PH8.0的Tris-HCL緩衝液，內含NADH 73μmol/L，PMS 15μmol/L，NBT 50μmol/L)產生，空白管不加PMS，對照管不加羥基紅花黃色素A(S-A)。S-A的終濃度為25、50、100、200、400μg/ml總體積為3ml於560nm處比色測定，並計算抑制率。
·OH生成及測定由於·OH可特異的是鹼性桃紅T腿色，據腿色的幅度可衡量·OH的生成量，實驗按文獻進行，反應總體積5ml其中鹼性桃紅T(70μg/ml)1ml，3％H2O21ml，2mmol/LEDTANa-Fe(II)2ml，再加一定量羥基紅花黃色素A(S-A)和0.15mmol/L PH7.4的PBS，混勻，37℃保溫30min，對照組以H2O代替藥品，空白組以H2O代替藥品和EDTANa2-Fe(II)，520nm處比色，並計算抑制率。
3、肝微粒體脂質過氧化物LPO的測定昆明種小鼠20隻，處死，迅速分離肝組織，用冰冷的0.25mol/L的蔗糖溶液製成20％的勻漿，9800g離心20min分鐘沉澱再洗一次，合併上清夜，並於96000g離心40min，沉澱用冰冷的0.15mol/L KCl洗兩次，最後懸浮與0.15mol/L KCl中，LOWRRY法測定蛋白。在0.2mol/L磷酸鉀緩衝液(PH7.4)含微粒體蛋白200-400μg/ml，硫酸亞鐵10μmol/L，VITC 0.1mmol/L及不同濃度的羥基紅花黃色素A(S-A)，37℃振蕩溫浴1h。測定LPO。
結果
SAF-A的體外清除O·2-作用SAF-A能明顯清除NADH-PMS-NBT系統產生的O·2-，560nm處吸收值明顯降低，呈量效關係(表13)表13 Scavenging activities of saf-A for superoxide O·2-，produced by NADH-PMS-NBTsystemConcn/ O·2-generation/ lnhibition rateμg/mlA560％control 0483±0.017250.330±0.013*31.68500.311±0.008*35.61100 0.206±0.010**57.35200 0.116±0.009**75.98400 0.055±0.006***88.61N＝4 X±S，*P＜0.05**P＜0.001 ***P＜0.001 VS controlS-A的體外清除·OH作用S-A對能明顯清除EDTANa2-Fe(II)-H2O2系統產生的·OH，且呈量效關係。
(表14)表14 Scavenging activities of saf-A for by·OH EDTANa2-Fe(II)-H2O2systemConcn/ O·2-generation/lnhibition rateμg/ml A520％basal 0.881±0.016***control0.052±0.00725 0.088±0.013 4.3450 0.122±0.009*8.441000.196±0.012**17.372000.317±0.006**31.974000.603±0.012***69.72N＝4 X±S，*P＜0.05**P＜0.001 ***P＜0.001 VS control3.3 S-A對小鼠肝微粒體脂質過氧化的影響S-A能明顯抑制Fe2++VitC系統產生·OH對小鼠肝微粒體刺激所引起的脂質過氧化反應，LPO含量降低，且呈量效關係(表15)表15 Effect of Saf-A on microsomal lipid peroxidationConch/ LPOformation/ lnhibition rateμg/ml Nmol/g％basal39.32±3.68***control 188.54±12.265176.32±13.39 8.211.0 168.47±11.66*13.472.0 151.49±12.92**24.854.0 113.64±9.24**50.218.0 55.72±7.86***89.01N＝4 X±，*P＜0.05 **P＜0.001 ***P＜0.001 VS control實驗例8、羥基紅花黃色素A對腦缺血所致大鼠腦線粒體損傷的保護作用1、材料與方法藥品、試劑與儀器羥基紅花黃色素A由山東省天然藥物工程技術研究中心提供；鄰苯二甲醛(o-phthalaldekhyde，OPT)為Fluka產品；二苯基己三烯(diphenylhexa-triene，DPH)為Sigma產品。
低溫高速離心機美國Backman公司751；分光光度計上海第三儀器廠；原子吸收分光光度計日本島津公司Z28000型；SOD)、GSH-Px、MDA測定試劑盒南京建成生物科技公司；Ca2+測定試劑盒北京中生生物工程高技術公司。
1、實驗動物分組、模型建立及大腦皮層線粒體(Mit)的製備取40隻Wistar大鼠(♂)隨機分為對照組(iv NS)、模型組(iv NS)、尼莫地平組(iv Nim，0.3mg·Kg-1)、羥基紅花黃色素A(iv S-A，20mg·Kg-1)。每組10隻，結紮雙側頸總動脈造成腦缺血，對照組只作頸總動脈分離手術，各組均於手術前15min iv相應藥物，手術後24h再同劑量給藥一次，60min後處死動物，迅速取大腦，以冰浴的PBS(10mmol·L-1pH7.4，含250mmol·L-1蔗糖，5mmol·L-1EDTA)，衝洗乾淨，小心剝取大腦皮層，精確稱重，並以PBS為介質製備1％勻漿，800rpm低溫離心15min，取上清14000rpm離心15min，沉澱即為Mit。再以PBS洗滌二次，Lowrry法進行蛋白定量(4℃操作，-20℃保存)。
腦Mit膜脂流動性的測定膜脂流動性採用螢光偏振度法測定，取腦Mit懸液1ml(蛋白含量0.5mg·mL-l)，加入2μmol·L-1DPH溶液3ml，25℃溫浴30min，測定螢光偏振度P，激發波長362nm，發射波長432nm.按下式計算P＝(I-GI⊥)/(I+GI⊥)；η＝2P/0.46-P式中I和I⊥分別代表與激發偏振光振動方向平行垂直時的螢光偏振光強度，G為校正因子。膜流動性用螢光偏振度P，微粘度η表示[5]。微粘度越大，膜流動性越小。
腦Mit膜總磷脂(PL)和膽固醇的測定總PL按Chien法測定[6]，CH按文獻[7]測定；腦Mit抗氧化酶及MDA含量的測定，採用試劑盒法測定。
腦Mit Ca2+測定取腦Mit懸液2mL，14000rpm離心15min得沉澱，在沉澱中加入HNO3lmol·L-1，室溫振蕩24h，1500rim離心10min，取上清適當稀釋，原子分光光度計422.7nm測Ca2+(以CaCO3為標準)[8]。
結果1、腦Mit膜流動性的變化結果顯示，腦缺血可導致Mit膜的流動性顯著降低，而羥基紅花黃色素A(S-A)可明顯抑制Mit膜流動性的降低(表16)。
表16羥基紅花黃色素A對腦缺血.大鼠腦Mit膜流動性的影響(X±S，n＝10)組別 螢光偏振度P 微粘度ηPa·s對照組 0.225±0.02 2.09±0.18模型組 0.344±0.02**4.31±0.58**Nim組 0.246±0.03Δ2.74±0.32ΔS-A組 0.253±0.02Δ2.46±0.37Δ**P＜0.01 VS 對照組；ΔP＜0.05 VS 模型組2、腦Mit膜總磷脂(PL)和膽固醇(CH)的變化結果顯示，腦缺血損傷導致Mit膜磷脂層破壞，表現為PL含量降低，CH含量升高，PL/CH數值降低，而S-A對此有明顯的拮抗作用。提示S-A能降低膜磷脂的降解(表17)。表17羥基紅花黃色素A對腦缺血大鼠腦Mit膜總磷脂(PL)和膽固醇(CH)的影響(X±s，n＝10)組別 膜總磷脂 膽固醇膜總磷脂/膽固醇mol·g-1Pro mol·g-1Pro對照組408.73±45.66 62.45±11.352 6.44±1.06模型組287.78±20.81**92.15±10.54**2.633±0.08**Nim組 364.24±25.12Δ73.78±9.64Δ4.86±1.21ΔS-A組 382.36±43.29ΔΔ70.47±11.47Δ5.01±1.33Δ**P＜0.01 VS對照組；ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01 VS 模型組3、腦Mit SOD、GSH-Px活性、MDA含量的變化結果顯示，腦缺血損傷可降低腦Mit SOD、GSH-Px活性，升高MDA含量；而S-A可明顯抑制SOD、GSH-Px活性的降低、MDA含量的升高，說明S-A有抗氧化活性(表18)。表18羥基紅花黃色素A對腦缺血大鼠腦Mit SOD、GSH-Px、MDA的影響(X±s，n＝10)組別 SOD GSH-Px MDAnu·mg1Pro U·mg Pro.min-1nmol·L1mg-1Pro對照組32.36±5.58 19.64±3.72 11.73±1.82模型組15.24±4.46**10.08±1.13**28.56±2.66**
Nim組 26.47±6.38ΔΔ13.26±3.01Δ17.32±2.01ΔS-A組 28.16±8.12ΔΔ15.64±1.86Δ18.29±1.36Δ**P＜0.01 VS 對照組ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01 VS 模型組4、腦Mit Ca2+含量的變化結果顯示，腦缺血可導致Mit Ca2+攝入量增加，而S-A可拮抗Ca2+的攝入，提示S-A可能具Ca2+拮抗劑樣作用(表19)。
表19 羥基紅花黃色素A對腦缺血大鼠腦Mit Ca2+的影響(X±s，n＝10)組別 Ca2+(nmol·g-1Pro)對照組 13.38±1.64模型組 34.16±5.68**Nim組20.39±6.21ΔSaf-A組 24.57±3.34ΔΔ**P＜0.01 VS對照組；ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01 VS 模型組實驗例9、羥基紅花黃色素A對大鼠缺血後腦細胞凋亡的影響1材料與方法羥基紅花黃色素A由山東省天然藥物工程技術研究中心提供(含量為95％)；蛋白酶K由Sigma公司出品；Tunel法試劑盒南京聚力醫學研究所，進口分裝；Wistar雄性大鼠40隻，200～250g，由陝西省中醫藥研究院提供。
實驗方法取40隻Wistar大鼠(♂)隨機分為對照組(iv NS)、模型組(ivNS)、尼莫地平組(iv Nim，0.3mg·Kg-1)、羥基紅花黃色素A(iv S-A，20mg·Kg-1)。每組10隻，結紮雙側頸總動脈造成腦缺血，對照組只作頸總動脈分離手術，各組均於手術前15min iv相應藥物，手術後24h再同劑量給藥一次，60min後處死動物，在固定部位取雙側大腦皮質組織，一側腦皮質組織10％甲醛固定，石蠟包埋，常規切片，每例切片二張，分別進行HE染色鏡檢和Tunel法測凋亡細胞數。另一側皮質勻漿後測DNA片端含量百分率。[3]石蠟切片HE染色腦皮質組織10％甲醛固定，常規石蠟包埋，4μm切片，脫蠟至水後，蘇木素染色5min，雙蒸水洗片1min，鹽酸乙醇分化30s，溫水浸泡5min後置伊紅液2min，乾燥封片，光鏡下觀察。Tunel法測定細胞凋亡[4]按試劑盒提供方法操作。乾燥封片後置顯微鏡下觀察分析被染成藍紫色的凋亡細胞(灶狀分布的陽性細胞是壞死細胞，散在分布的為凋亡細胞)，每張切片計數10個不同高倍視野中凋亡細胞數。
DNA片端百分率測定100g腦皮質組織加入1ml冰冷的的細胞裂解液(含5.0g.L-1Tritox x-100，1.0g.L-1EDTA，40mg.L-1蛋白酶K，5mmol.L-1Tris，pH7.8)製成勻漿液，室溫下20min後離心(20000r.min-1，30min)，將上清液取出後，在沉澱物中加入細胞裂解液重新使沉澱物懸浮(體積與上清液相等)。用二苯胺試劑在959nm處分別測定上清液片端DNA和沉澱物中高相對分子質量DNA的吸光度，計算片端DNA佔高相對分子質量DNA的百分率。
2結果2.1羥基紅花黃色素A(S-A)對腦缺血致腦皮質細胞凋亡的影響HE染色光鏡觀察 大鼠雙側CCA結紮24h，其腦組織常規石蠟切片，HE染色後，胞漿呈淡紅色，核呈藍色，其間有單個散在凋亡細胞，表現為細胞萎縮，核固縮，染色質凝集呈緻密濃染塊狀或顆粒狀。NS組凋亡細胞數明顯多於S-A組。
Tunel法大鼠雙側CCA結紮24h後，腦組織中有凋亡細胞出現，光鏡下表現為陽性細胞為淡紅色胞漿中有被染成蘭紫色的細胞核，而陰性細胞僅見淡紅色的胞漿。陽性細胞為散在分布的凋亡細胞。與NS組比較，S-A組缺血後腦細胞凋亡數有顯著減少(表20)。
表20羥基紅花黃色素A對腦缺血大鼠腦細胞凋亡數的影響(X±s，n＝10)組別細胞凋亡數(10個視野)對照組 2.1±0.5模型組 48.7±16.8*Nim組20.3±12.6ΔΔS-A組23.7±13.4ΔΔ**P＜0.01 VS對照組；ΔΔP＜0.01 VS模型組S-A對腦缺血DNA碎片的影響結果如表16所示，與正常不缺血大鼠組比較，缺血組腦細胞DNA碎片含量百分率有顯著增高，而S-A則能顯著降低DNA碎片的百分率。(表21)表21羥基紅花黃色素A對腦缺血大鼠腦細胞凋亡數的影響(X±s，n＝10)組別 DNA碎片％對照組 3.9±2.5模型組 20.6±6.3**Nim組 10.4±3.6ΔΔS-A組 12.7±5.2ΔΔ**P＜0.01 VS對照組；ΔΔP＜0.01 VS 模型組實驗例10、羥基紅花黃色素-A對犬急性心肌缺血的影響將實驗犬用戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉，氣官插管，連接人工呼吸機，開胸，結紮冠脈15分鐘後記錄各項指標，舌靜脈給藥，給藥180分鐘後取出心臟，切片染色，數位相機照相後以計算機計算梗死面積及梗死百分率。結果顯示羥基紅花黃色素S-A可明顯減少結紮冠狀動脈引起的心臟梗死面積，尤以6mg/kg給藥更為明顯。見表22表22羥基紅花黃色素-A對犬心肌缺血面積的影響(n＝10.X±SD)組別 劑量 梗死區/心臟(％)梗死區/心室(％)生理鹽水 5ml/kg8.53±3.31 13.81±3.97心得安1mg/kg3.04±1.63※※4.60±2.04※羥基紅花黃色素-A 3mg/kg3.89±0.59※7.69±0.53※羥基紅花黃色素-A 6mg/kg2.27±0.62※※4.50±1.11※※與生理鹽水組比較※P＜0.05，※※P＜0.01實驗例11、羥基紅花黃色素(S-A)對垂體後葉素所致離體大鼠心臟心肌缺血的影響取體重200±20g的大鼠80隻(雌雄各半)，隨機分為4組。烏拉坦麻醉後，記錄II導聯與胸前導聯心電圖。舌靜脈注射受試藥物後30分鐘，再舌靜脈注射0.5U垂體後葉素，連續記錄給垂體後葉素前及後5分鐘內的心電圖，出現下列指徵之一者為心肌缺血陽性(1)T波升高1.5mv以上；(2)T波低平(降低原T波高度50％以上)；(3)T波雙向倒置；(4)S-T水平下移0.5mv；(5)心率不齊。結果顯示，與硝酸甘油作用相似，羥基紅花黃色素(S-A)可明顯降低垂體後葉素所致大鼠心肌缺血的陽性率。(見表23)表23羥基紅花黃色素-A對大鼠心肌缺血的影響(n＝20，X±SD)組別 劑量心肌缺血陽性率(％)生理鹽水 5ml/kg 80硝酸甘油 5mg/kg 35※※羥基紅花黃色素-A 3mg/kg 40※羥基紅花黃色素-A 6mg/kg 35※※與生理鹽水組比較即※P＜005，※※P＜0.0權利要求
1.一種羥基紅花黃色素A在製備治療、預防心腦血管疾病方面的藥物用途。
2.按照權利要求1所述用途，其特徵為製備治療、預防與凝血、血栓、血流量有關的心腦血管疾病的藥物用途。
3.按照權利要求2所述用途，其特徵為製備治療、預防血栓形成、自由基所致和血小板激活因子誘發的心腦血管疾病的藥物用途。
4.按照權利要求1-3所述用途，其特徵為製備治療、預防缺血性心血管疾病的藥物用途。
5.按照權利要求4所述用途，其特徵為製備治療、預防與垂體後葉素誘發、異丙腎上腺素誘發的心肌缺血的有關心血管疾病的藥物用途。
6.按照權利要求1-3所述用途，其特徵為製備治療、預防缺血性腦血管疾病的藥物用途。
7.按照權利要求6所述用途，其特徵為製備治療、預防Ca2+和自由基含量升高的及致線粒體損傷的缺血性腦血管疾病的藥物用途。
8.按照權利要求6所述用途，其特徵為製備治療、預防缺血性神經原變性的腦血管疾病的藥物用途。
9.按照上述任一權利要求所述用途，其特徵為製備治療、預防動脈硬化、冠心病、腦血栓、腦缺血、心絞痛、心肌梗塞、靜脈炎、神經性皮炎疾病藥物用途。
10.一種按照權利要求1所述用途的羥基紅花黃色素A的製備方法，其是用下列方法從紅花中製得的1)將紅花用水冷浸24h煎煮回流提取50-90分鐘，過濾，濾液濃縮至相對密度為1.10-1.252)將濃縮液中加入乙醇至含醇量80％，在4℃條件下沉澱24小時，過濾除去沉澱，取上清液，揮淨乙醇並濃縮至相對密度為1.15-1.203)向濃縮液中加入5-10倍的水，在4℃條件下，沉澱12-24小時，離心除去沉澱4)上述離心液經大孔吸附樹脂柱層析，先用去離子水洗脫至Moliah反應及茚三酮反應呈陰性，然後繼續用去離子水洗脫4-6個柱體積並收集洗脫液；5)將上述洗脫液經聚醯胺吸附，極性溶劑甲醇或乙醇洗脫，收集洗脫液，60℃條件下減壓濃縮除去甲醇或乙醇，剩餘水溶液冷凍乾燥，得到桔黃色無定形粉末，即為本發明羥基紅花黃色素A。
11.按照權利要求10所述的方法，其中羥基紅花黃色素A是採用下列方法製得的取紅花生藥，加入其重量10-15倍水，煮沸50分鐘，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.25，加乙醇至含醇量為80％，4℃沉澱24小時，過濾，濾液濃縮至相對密度為1.20，加10倍量的水，4℃沉澱24小時，離心，取上清液，用重量為其40％的大孔吸附樹脂吸附，用去離子水洗脫3個柱體積，然後繼續用去離子水洗脫5個柱體積，收集洗脫液，用重量為其10％的聚醯胺吸附，先用去離子水洗至無色，然後用95％乙醇洗8個柱體積，收集洗脫液，旋轉蒸發器上濃縮除去乙醇，冷凍乾燥得到羥基紅花黃色素A。
12.一種治療、預防心腦血管疾病的方法，其特徵為將權利要求1所述有效劑量的羥基紅花黃色素A和藥學上可接受的不同載體作成注射液、大輸液、凍乾粉、口服劑型對患者給藥。
全文摘要
本發明公開了紅花提取物中羥基紅花黃色素A在製備治療、預防心腦血管疾病方面的藥物新用途。
文檔編號A61P9/10GK1422616SQ0212560
公開日2003年6月11日 申請日期2002年7月24日 優先權日2001年12月6日
發明者傅風華, 李桂生, 馬成俊, 朱海波, 田京偉, 王振華, 張達磊 申請人:長春三真實業有限公司