一種提高肝素鈉收率的方法
2023-10-09 21:48:09 1
一種提高肝素鈉收率的方法
【專利摘要】本發明為一種提高肝素鈉收率的方法，公開了一種製備高純度高收率肝素鈉的提取工藝，這種提取工藝屬於化學領域。主要包括用丙酮萃取，乙醇提純等解決了目前肝素鈉生產過程中混有多硫酸軟骨素的問題。節約了成本，提高了肝素鈉的純度，工藝簡單，易操作，適合工業化生產。
【專利說明】一種提高肝素鈉收率的方法
【技術領域】
[0001]本法說明涉及一種提取提純製備原料藥的方法，屬於化學領域，具體是一種製備高純度高收率精品肝素鈉。
【背景技術】
[0002]肝素鈉是由豬或牛的腸黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的鈉鹽，屬粘多糖類物質，在動物體內多以肝素鈉-蛋白質複合物的形式存在。醫學上，肝素鈉在體內外均有抗凝血作用，可延長凝血時間、凝血酶原時間和凝血酶時間。臨床上具有抗凝血、降血脂、保護內皮細胞、抗血小板積聚和釋放、促纖溶、抑制動脈平滑肌細胞增殖、降低血液粘度和抗炎等作用。
[0003]我國是世界上最大的肝素鈉原料藥生產國，製備原料藥肝素鈉的方法主要有兩種:生物酶法，化學裂解法。生物酶法主要以酶降解產生肝素鈉，方法溫和，但是成本很高，不適合批生產:另一種化學裂解法，產量多，但是過程中會影響肝素鈉的活性，不適應藥用。本工藝吸取了以上兩種工藝的優點，多種萃取、提取和離子交換方法，方法溫和，提取量相對較大，純度較高，而且能夠最大限度的去除肝素鈉的雜質，比如多硫酸軟骨素。
【發明內容】
[0004]本發明的目的為了改進現有技術的不足，而提供一種製備高純度高收率肝素鈉的工藝；該發明提供了一種簡便的高純度肝素鈉製備技術，製得的肝素鈉效價均高於180U/mg，高於中國藥典要求的170U/mg，且依據中國藥典肝素鈉檢測標準檢測合格。
[0005]本發明的技術方案為:一種製備高純度肝素鈉的工藝，其步驟如下:`[0006]1、將粗品肝素鈉溶入飲用水中，攪拌5-10小時，將其全部溶解；
[0007]2、將步驟I中溶解液，用鹽酸溶液調PH至7.0-8.0，然後升溫至50_55°C之間時加入胃蛋白酶，再加入胰酶，保溫2-4小時；
[0008]3、將步驟2中酶解液在30~40分鐘內升溫至85_90°C，靜止10_30分鐘，攪拌，然後等降溫至50-55°C時，用氫氧化鈉溶液調PH至10.0-12.0，靜止20-30小時，分層，虹吸上清，過濾，留上清液待沉澱，下層沉澱放離心機離心，離心後留上層離心液；
[0009]4、待步驟3中上清液和離心液溫度降至20_30°C，加入氯化鈉，攪拌溶解，用鹽酸調PH至10.0-12.0，邊攪邊加濃度為75-80%乙醇溶液，沉澱10-12小時；
[0010]5、取步驟4中下層沉澱物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調PH至10.0-12.0，然後加入雙氧水氧化10-12小時；
[0011]6、將步驟5中溶液加入氯化鈉，攪拌溶解後，用鹽酸溶液將溶液調PH至6.0-7.0，加入乙醇溶液，沉澱10-12小時；
[0012]7、取步驟6中下層沉澱物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液調PH至10.0-12.0,然後加入體積3-5%雙氧水，氧化10-12小時；
[0013]8、將步驟7中溶液加入氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95~97%的乙醇溶液，沉澱10-12小時；
[0014]9、取步驟8中下層沉澱物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液調PH至10.0-12.0,然後加入雙氧水，氧化10-12小時；
[0015]10、將步驟9中溶液加入氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至6.0-7.0，然後冷凍至-10°C —5°C，邊攪邊加丙酮，在-5°c -0°C中保溫24-30小時，棄去上清液，多硫酸軟骨素被丙酮帶走，用純化水將沉澱物溶解，加入氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至6.0-7.0，邊攪邊加乙醇，沉澱10-12小時；
[0016]11、將步驟10中沉澱物用純化水溶解後，用微米濾膜板框機微濾，用乙醇沉澱，再加入氯化鈉溶液，靜止沉澱10-12小時，取沉澱物，用乙醇溶解，靜置24-30小時；棄去上層液，將不鏽鋼砂芯棒放在產品中，用真空泵通抽乾；
[0017]12、將步驟11中產品放在真空乾燥箱中，烘乾70-80小時，得產品。
[0018]有益效果:
[0019]1、本發明結合升溫氧化結合多種物理提取方法並純化得到效價高於180U/mg，收率高於80%的高純度肝素鈉。
[0020]2、通過升溫補加雙氧水可以有效的控制肝素鈉氧化失活，並且實現了氧化與脫色同步進行。
[0021]3、依據肝素鈉及其結構類似物的極性差異，在氯化鈉溶液中用丙酮萃取，在用乙醇沉澱洗脫，最後得到肝素鈉產品。工藝採用的丙酮萃取法，使得多硫酸軟骨素雜質被萃取，而肝素鈉產品留在了低鹽溶液中，用乙醇沉澱，極大地提高了收率，最終得到的肝素鈉產品達到中國藥典標準，並且經`測不含多硫酸軟骨素成分。
【具體實施方式】
[0022]實施例1
[0023](I)將50g粗品肝素鈉溶入飲用水中，攪拌5小時，將其全部溶解；
[0024](2)用鹽酸溶液調PH至7.0，然後升溫至50°C之間時加入5g/億單位胃蛋白酶，再加入IOg/億單位胰酶，保溫2小時；
[0025](3)將酶解液在30分鐘內升溫至85°C，靜止10分鐘，攪拌，然後等降溫至50時，用2mol氫氧化鈉溶液調PH至10.0，靜止20小時，分層，虹吸上清，過濾，留上清液待沉澱，下層沉澱放離心機離心，離心後留上層離心液；
[0026](4)待上清液和離心液溫度降至20°C，加入25g/L氯化鈉，攪拌溶解，用鹽酸調PH至10.0，邊攪邊加濃度為75%乙醇溶液，沉澱10小時；
[0027](5)取下層沉澱物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液將溶液調PH至10.0，然後加入3%雙氧水氧化10小時；
[0028](6)將溶液加入20g/L氯化鈉，攪拌溶解後，用鹽酸溶液將溶液調PH至6.0,加入乙醇溶液，沉澱10小時；
[0029](7)取下層沉澱物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液調PH至10.0，然後加入體積3%雙氧水，氧化10小時；
[0030](8)將溶液加入20g/L氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至10.0，邊攪邊加濃度為95%的乙醇溶液，沉澱10小時；[0031](9)取下層沉澱物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液調PH至10.0，然後加入3%雙氧水，氧化10小時；
[0032](10)將溶液加入20g/L氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至6.0，然後冷凍至-10°C，邊攪邊加丙酮，在_5°C中保溫24小時，棄去上清液，用純化水將沉澱物溶解，加入氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至6.0，邊攪邊加乙醇，沉澱10小時；
[0033](11)將沉澱物用純化水溶解後，用微米濾膜板框機微濾，用乙醇沉澱，再加入20g/L氯化鈉溶液，靜止沉澱10小時，取沉澱物，用乙醇溶解，靜置24小時；
[0034](12)棄去上層液，將不鏽鋼砂芯棒放在產品中，用真空泵通抽乾；將產品放在真空乾燥箱中，烘乾70，得產品經檢測其效價為183U/mg，回收率為80.1 %硫酸軟骨素為
0.09mg/mL硫酸皮膚素為0.01mg/mL,各項指標均均符合中國藥典要求。
[0035]實施例2
[0036](I)將粗品肝素鈉溶入飲用水中，攪拌5-10小時，將其全部溶解；
[0037](2)將溶解液用鹽酸溶液調PH至6.5，然後升溫至52之間時加入7g/億單位胃蛋白酶，再加入15g/億單位胰酶，保溫3小時；
[0038](3)將酶解液在35分鐘內升溫至87 V，靜止20分鐘，攪拌，然後等降溫至52°C時，用4mol氫氧化鈉溶液調PH至11.0，靜止25小時，分層，虹吸上清，過濾，留上清液待沉澱，下層沉澱放離心機離心，離心後留上層離心液；
[0039](4)待上清液和離心液溫度降至25°C，加入25g/L25g/L氯化鈉，攪拌溶解，用鹽酸調PH至11.0，邊攪邊加濃度為`77%乙醇溶液，沉澱10-12小時；取下層沉澱物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調PH至10.0-12.0，然後加入4%雙氧水氧化10-12小時；
[0040](5)將溶液加入25g/L氯化鈉，攪拌溶解後，用鹽酸溶液將溶液調PH至6.5，加入乙醇溶液，沉澱11小時；
[0041](6)取下層沉澱物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液調PH至11.0，然後加入體積4%雙氧水，氧化11小時；
[0042](7)將溶液加入25g/L氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至11.0，邊攪邊加濃度為96%的乙醇溶液，沉澱11小時；
[0043](8)取下層沉澱物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液調PH至10.0-12.0,然後加入4%雙氧水，氧化11小時；
[0044](9)將溶液加入25g/L氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至6.5，然後冷凍至_7，邊攪邊加丙酮，在-3中保溫24-30小時，棄去上清液，用純化水將沉澱物溶解，加入氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至6.5，邊攪邊加乙醇，沉澱11小時；
[0045](10)將沉澱物用純化水溶解後，用微米濾膜板框機微濾，用乙醇沉澱，再加入25g/L氯化鈉溶液，靜止沉澱10-12小時，取沉澱物，用乙醇溶解，靜置27小時；
[0046](11)棄去上層液，將不鏽鋼砂芯棒放在產品中，用真空泵通抽乾；
[0047](12)將產品放在真空乾燥箱中，烘乾75小時，得產品。經檢測，得產品其效價為209U/mg,回收率為89%硫酸軟骨素為0.0001mg/mL硫酸皮膚素為0.0005mg/mL,各項指標均均符合中國藥典要求。
[0048]實施例3
[0049](I)將粗品肝素鈉溶入飲用水中，攪拌10小時，將其全部溶解；[0050](2)用鹽酸溶液調PH至8.0，然後升溫至50-55°C之間時加入IOg/億單位胃蛋白酶，再加入20g/億單位胰酶，保溫4小時；
[0051 ] (3)將酶解液在40分鐘內升溫至90°C，靜止30分鐘，攪拌，然後等降溫至55°C時，用6mol氫氧化鈉溶液調PH至12.0，靜止30小時，分層，虹吸上清，過濾，留上清液待沉澱，下層沉澱放離心機離心，離心後留上層離心液；
[0052](4)待上清液和離心液溫度降至30°C，加入30g/L氯化鈉，攪拌溶解，用鹽酸調PH至12.0，邊攪邊加濃度為80%乙醇溶液，沉澱12小時；
[0053](5)取下層沉澱物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液將溶液調PH至12.0,然後加入5%雙氧水氧化12小時；
[0054](6)將溶液加入30g/L氯化鈉，攪拌溶解後，用鹽酸溶液將溶液調PH至7.0,加入乙醇溶液，沉澱10-12小時；
[0055](7)取下層沉澱物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液調PH至12.0，然後加入體積5%雙氧水，氧化12小時；
[0056](8)將溶液加入30g/L氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至12.0，邊攪邊加濃度為97%的乙醇溶液，沉澱12小時；
[0057](9)取下層沉澱物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液調PH至12.0，然後加入5%雙氧水，氧化12小時；
[0058](10)將溶液加入30g/L氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至7.0，然後冷凍至_5°C，邊攪邊加丙酮，在0°c中保溫30小時，棄去上清液，多硫酸軟骨素被丙酮帶走，用純化水將沉澱物溶解，加入氯化鈉，用鹽酸溶液`調PH至7.0，邊攪邊加乙醇，沉澱12小時；
[0059](11)將沉澱物用純化水溶解後，用微米濾膜板框機微濾，用乙醇沉澱，再加入30g/L氯化鈉溶液，靜止沉澱12小時，取沉澱物，用乙醇溶解，靜置30小時；
[0060](12)棄去上層液，將不鏽鋼砂芯棒放在產品中，用真空泵通抽乾；產品放在真空乾燥箱中，烘乾80小時，得產品。經檢測，得產品其效價為189U/mg，回收率為89%硫酸軟骨素為0.002mg/mL硫酸皮膚素為0.003mg/mL,各項指標均均符合中國藥典要求。
【權利要求】
1.一種製備高純度肝素鈉的工藝，其步驟如下: (1)將粗品肝素鈉溶入飲用水中，攪拌5-10小時，將其全部溶解； (2)將步驟(1)中溶解液，用鹽酸溶液調PH至7.0-8.0，然後升溫至50-55°C之間時加入胃蛋白酶，再加入胰酶，保溫2-4小時； (3)將步驟(2)中酶解液在30~40分鐘內升溫至85-90°C，靜止10-30分鐘，攪拌，然後等降溫至50-55°C時，用氫氧化鈉溶液調PH至10.0-12.0，靜止20-30小時，分層，虹吸上清，過濾，留上清液待沉澱，下層沉澱放離心機離心，離心後留上層離心液； (4)待步驟(3)中上清液和離心液溫度降至20-30°C，加入氯化鈉，攪拌溶解，用鹽酸調PH至10.0-12.0，邊攪邊加乙醇溶液，沉澱10-12小時； (5)取步驟⑷中下層沉澱物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調PH至10.0-12.0，然後加入雙氧水氧化10-12小時； (6)將步驟(5)中溶液加入氯化鈉，攪拌溶解後，用鹽酸溶液將溶液調PH至6.0-7.0,加入乙醇溶液，沉澱10-12小時； (7)取步驟(6)中下層沉澱物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液調PH至10.0-12.0，然後加入體積3-5%雙氧水，氧化10-12小時； (8)將步驟(7)中溶液加入氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95~97%的乙醇溶液，沉澱10-12小時； (9)取步驟(8)中下層沉澱物用純化水溶解,用氫氧化鈉溶液調PH至10.0-12.0，然後加入雙氧水，氧化10-12小時； (10)將步驟(9)中溶液加入氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至6.0-7.0，然後冷凍至-10°C —5°C，邊攪邊加丙酮，在_5°C -0°C中保溫24-30小時，棄去上清液，多硫酸軟骨素被丙酮帶走，用純化水將沉澱物溶解，加入氯化鈉，用鹽酸溶液調PH至6.0-7.0，邊攪邊加乙醇，沉澱10-12小時； (11)將步驟(10)中沉澱物用純化水溶解後，用微米濾膜板框機微濾，用乙醇沉澱，再加入氯化鈉溶液，靜止沉澱10-12小時，取沉澱物，用乙醇溶解，靜置24-30小時；棄去上層液，將不鏽鋼砂芯棒放在產品中，用真空泵通抽乾； (12)將步驟(11)中產品放在真空乾燥箱中，烘乾70-80小時，得產品。
2.根據權利要求1所述的工藝，其特徵在於:步驟(1)中的胃蛋白酶濃度為5-10g/億單位，胰酶的濃度為10-20g/億單位。
3.根據權利要求1所述的工藝，其特徵在於:步驟(2)中氫氧化鈉的濃度為2-6mol/L0
4.根據權利要求1所述的工藝，其特徵在於:步驟(3)、步驟(6)、步驟(8)、步驟(10)和步驟(11)中氯化鈉的濃度為20-30g/L。
5.根據權利要求1所述的工藝，其特徵在於:步驟(4)中乙醇溶液的濃度為75%~80%。
6.根據權利要求1所述的工藝，其特徵在於:步驟(5)和步驟(9)中的雙氧水的體積分數為3-5%。
7.根據權利要求1所述的工藝，其特徵在於:步驟(10)中丙酮的濃度為40-45%。
【文檔編號】C08B37/10GK103804524SQ201310625724
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2013年11月24日 優先權日:2013年11月24日
【發明者】劉乃山, 周曉娜, 遲培升, 夏襯來 申請人:青島九龍生物醫藥有限公司