竹提取物及其製備方法和應用的製作方法
2023-10-09 18:25:39 1
專利名稱：竹提取物及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種植物提取物及其製備方法和應用，具體地說，本發明涉及竹提取物及其製備方法和應用。
背景技術：
竹葉為禾科植物淡竹Phyllostachys nigra(L-Odd.)Munro var henonis(Mitf)Stapfex Rendle的葉。主要分布在長江流域，西南地區竹資源極為豐富。竹葉在中醫藥中的應用始載於「名醫別錄」，明代李時珍「本草綱目」卷三十七，「竹」有詳細描述，在「食療本草」、「本草求真」、「本草正義」等歷代醫著中均有記載。主要功效上清心火，下利小便，除煩熱，治熱病神昏；歸心、肺、胃經。民間常用竹心(初出的卷狀嫩葉)煎水治心煩、發熱、消渴等。竹葉在近代中藥方劑中使用頻率很低，僅竹心間或被用做「藥引子」。竹被採伐後，竹葉(包括著葉的竹枝及頂端細小部份)都棄之不用，在竹林密集地區，竹葉如同地毯一樣覆蓋在地面上，漫山遍野都是。隨著科學技術的進步，人們對竹資源的綜合開發已引起重視，有關竹葉的基礎研究逐漸增多。我們用核技術與生物技術相結合，研究了竹提取物對髒、腑器官細胞鈣通道的影響及機理，發現竹提取物具有新的藥用價值和保健功能。
細胞內Ca2+對人體多種生理、生物過程起著重要的調節作用，細胞內正常Ca2+濃度穩定性的破壞是細胞受害的早期和關鍵條件。衰老細胞中一般都有大量的鈣和色素沉積；衰老性記憶障礙與腦細胞突觸內Ca2+嚴重超載有關；機體發生炎症或缺O2均伴有所在部位細胞Ca2+濃度升高。細胞內鈣離子失衡被認為是各種原因引起的細胞損傷的「共同通路」。因而探索新藥物用以排除細胞內多餘鈣，能使細胞重新恢復正常功能，對衰老、癌症等多種疾病的防治有意義。
近代病理研究證明，Ca2+大量進入心血管細胞與冠心病的發病機理密切相關，1969年德國學者Fleckestein提出用藥物阻滯細胞膜鈣通道，減少鈣內流，使冠心病的治療獲得長足進步。這類藥物被稱為鈣通道阻滯劑(Calcium Channel Blocker簡稱CCB)，目前CCB藥物在心、腦血管疾病臨床上已廣泛使用，但目前都是化學合成的，缺乏高活性的天然CCB藥物。
發明內容
本發明提供一種竹提取物，它是由以下方法製備的a.取竹枝或竹葉，乾燥，粉碎或切制，每50g加PH＞8的鹼水或鹼醇100ml～800ml浸泡0.5-24小時；40-100℃加熱0.5-24h，過濾；b.殘渣可重複步驟a 1-2次；c.合併濾液，濃縮、乾燥即可。
還提供上述竹提取物的製備方法，包括a.取竹枝或竹葉，乾燥，粉碎或切制，每50g加PH＞8的鹼水或鹼醇100ml～800ml浸泡0.5-24小時；40-100℃加熱0.5-24h，過濾；b.殘渣可重複步驟a 1-2次；c.合併濾液，濃縮、乾燥即可。
其中，步驟a中的鹼水或鹼醇是氫氧化鈣、碳酸氫氨、氫氧化鈉、氨水中一種或多種的水溶液或醇溶液。其中，鹼醇的含醇量是10％～70％，鹼醇中的醇優選的是乙醇或甲醇。
本發明所述的竹提取物可用於製備鈣通道調節藥物。具體的說是在製備鈣通道阻滯劑藥物中的應用，優選的是在製備預防和治療心腦血管疾病的藥物中的應用，最優選的是在製備治療冠心病、心率失常、腦血管痙攣、腦梗塞、運動病的藥物中的應用。
具體實施例方式竹提取物的製備製備例1鹼提法採下竹葉或竹枝，自來水清洗二遍，烘乾，粉碎，稱500g加8000ml飽和石灰水浸泡1小時，加熱1h(80～100℃)，趁熱過濾，殘渣加5000ml飽和石灰水再加熱提取1h，濾過，濃縮，粉碎，密封於樣品瓶中備用。得到鹼提物樣品一80g。
製備例2鹼提法採下竹葉或竹枝，自來水清洗二遍，烘乾，粉碎，稱500g加8000ml PH為13的氫氧化鈉乙醇(乙醇濃度為50％)溶液浸泡1小時，加熱1h(80～100℃)，趁熱過濾，殘渣加5000ml氫氧化鈉乙醇溶液再加熱提取1h，濾過，濃縮，粉碎，密封於樣品瓶中備用。得到鹼提物樣品二80g。
製備例3醇提法採下竹葉或竹枝，自來水清洗二遍，烘乾，粉碎，稱500g加8000ml 50％乙醇溶液浸泡1小時，加熱1h(80～100℃)，趁熱過濾，殘渣加5000ml 50％乙醇溶液再加熱提取1h，濾過，濃縮，粉碎，密封於樣品瓶中備用。得到醇提物樣品一75g。
製備例4醇提法採下竹葉或竹枝，自來水清洗二遍，烘乾，粉碎，稱500g加8000ml 30％甲醇溶液，浸泡1小時，加熱1h(80～100℃)，趁熱過濾，殘渣加5000ml 30％甲醇溶液再加熱提取1h，濾過，濃縮，粉碎，密封於樣品瓶中備用。得到醇提物樣品二77g。
用上述樣品進行藥理試驗實驗方法45Ca跨膜測量方法材料Wistar大鼠，體重200+20g，雌雄兼用。45CaCl2溶液為英國AmerSham公司產品，放射性比活度1570MBq/gCa，其它藥品為市售分析純。
實驗用液PSS液(m mol/L)NaCl 137、CaCl21.5、MgCl21.0、KCl 3.0、HEPES20、C6H12O6·H2O10、pH＝7.4；高鉀PSS液(m mol/L)KCl 100，NaCl 40其餘同PSS液，pH＝7.4；EGTA液(m mol/L)EGTA 10不含CaCl2，其餘同PSS；甲苯閃爍液PPO 5.0g、POPOP 0.4g、乙二醇乙醚300ml、萘60g，用甲苯定容至1000ml。
45Ca跨膜內流測量步驟按文獻Williams GT.Cell，1991，651097及張廷傑心血管病學進展，1995，16(1)43的方法並加以改進。擊暈大鼠取出胸主動脈、心、肝、肺、腎……等，置於PSS溶液中輕輕去除結締組織，切成小塊，置於PSS液中37℃保溫1h，移入含45CaPSS溶液平衡10min。動脈條或繼續留在此溶液中，或移入去甲腎上腺素(NE)溶液中或移入含45Ca高鉀液處理10min。以上步驟都是在37℃和通O2條件下進行。再將組織取出，置於0-2℃無鈣EGTA溶液洗滌1h，然後用濾紙吸乾動脈環稱重後分別放入測量瓶中加入20％HClO425μL和30％ H2O250μL，於80℃水浴中消化20min，冷卻後加入甲苯閃爍液4ml黑暗放置3h後，在液閃儀中測量放射性活度dpm。Ca2+內流量由以下公式計算 測量數據以x±S.D表不，並進行檢驗。
45Ca跨膜外溢測量方法取大鼠組織細胞→37℃PSS液孵育→含45Ca通過PDC鈣通道大量進入細胞→4℃EGTA洗去細胞外45Ca→37℃PSS中使45Ca外溢→定時測PSS中45Ca的cpm即為外溢速率→測細胞內剩餘45Ca→45Ca內流量減殘存量即得外溢量。
在外溢過程中選用PSS液、PSS+腎上腺素、PSS高鉀，即分別表示靜流鈣通道(Leak)、受體鈣通道(ROC)和電壓依賴鈣通道(PDC)的外溢。
實驗結果製備工藝不同，藥理作用有差異竹葉或竹枝的乙醇提取物和鹼法提取物，對大鼠主動脈電壓依賴鈣通道(PDC)45Ca內流的影響見表I、表II。
表I 竹葉醇提物對PDC45Ca內流的影響(n＝8)類別 濃度(mg/ml) 醇提樣品一醇提樣品二對照 0 193.18±10.48193.18±10.48醇提物0.02 185.22±24.34188.92±9.14對照 0.10 187.92±5.67 158.52±8.01醇提物0.50 182.86±6.47 143.56±11.41表II 竹葉鹼提物對PDC45Ca內流的影響(n＝8)類別 濃度(mg/ml) 鹼提樣品一 鹼提樣品二對照 0 185.87±17.13185.87±17.13鹼提物0.02 147.37±15.72160.37±16.06對照 0.10 157.37±14.24154.76±13.36鹼提物0.50 128.91±15.92106.20±9.76
比較表I、表II的結果看出，醇提物中樣品一與對照無差異，樣品二45Ca內流作用比樣品一好。在鹼提物中二者都是顯示了良好的效果。比較鹼提物和醇提物作用的效果，鹼提物阻滯PDC鈣通道，減少45Ca內流的作用優於醇提物。在0.02mg/ml濃度下就出現阻滯作用，而且有濃度梯度效應。
竹提取物、銀杏葉黃酮、Verapamil對鈣通道具有相似的作用規律竹、銀杏葉、Verapamil等對大鼠心、肝、肺、腎PDC鈣通道的作用特性見表III。
表III 竹提取物對臟腑器官PDC鈣通道的影響(n＝8)
從上表可看出，竹提取物對大鼠主動脈心、肝、肺、腎都有調控作用。當濃度為0.5mg/ml時，對動脈、心、肺作用效果與銀杏葉、維拉帕米有相同的規律，因維拉帕米是化學藥，純度較高，藥效作用在很低濃度下就很明顯。
竹提取物對臟腑器官45Ca外溢的影響見表IV表IV 竹葉提取物對45Ca外溢的影響(n＝87)
從表4看出，竹葉、竹技、銀杏葉、鹼提物在0.4mg/ml濃度下能促使心、肝、肺、腎、動脈細胞內的Ca2+向外溢，以減少細胞內Ca2+超載對細胞造成的傷害。其中對動脈、心臟作用規律比較一致，對肺、肝、腎不很明顯。
從上述實驗可以看出，竹提取物既可促進細胞內多餘的Ca2+外溢，又可阻止細胞外Ca2+的內流，它對多種器官細胞膜鈣通道調節作用，有益於維持細胞內鈣離子濃度的穩定性，因而對心腦血管疾病有治療和保健的功能，藥效作用和銀杏葉有可比性，除能夠作為製備CCB(鈣通道阻滯劑)藥物的原料外，還能對維持細胞內正常Ca2+濃度起調節作用。細胞內正常Ca2+濃度穩定性的破壞是細胞受害的早期和關鍵條件。衰老細胞中一般都有大量的鈣和色素沉積；衰老性記憶障礙與腦細胞突觸內Ca2+嚴重超載有關；機體發生炎症或缺O2均伴有所在部位細胞Ca2+濃度升高。細胞內鈣離子失衡被認為是各種原因引起的細胞損傷的「共同通路」。因而本發明的提取物為排除細胞內多餘鈣，使細胞重新恢復正常功能，為防治衰老、癌症等多種疾病提供了新途徑。
下面通過實施例對本發明作進一步說明，但並非對本發明的限制。
實施例一竹提取物的製備採下竹葉或竹枝，自來水清洗二遍，烘乾，粉碎，稱500g加8000ml飽和石灰水(pH14)浸泡1小時，加熱1h(80～100℃)，趁熱過濾，殘渣加5000ml飽和石灰水再加熱提取1h，濾過，濃縮，粉碎，密封於樣品瓶中備用。得到提取物80g。
實施例二竹提取物的製備將竹葉或竹枝用鍘刀切成1-3cm小段，曬乾或以鮮品直接提取，按固液比1∶16加10％的碳酸氫鈉(含1％硼砂)，浸泡2h沒，加熱煮沸1h，趁熱過濾，殘渣按1∶8加碳酸氫鈉(含1％硼砂)，再煮沸1小時，過濾，兩次濾液合併，濃縮，烘乾，粉碎，裝瓶備用。得到提取物為原料(幹品)的18％。
用前面的藥理實驗方法，測定其對阻滯細胞外Ca2+內流和促進細胞內Ca2+外溢的影響，結果一致。
實施例三竹提取物的製備採下竹葉或竹枝，自來水清洗二遍，烘乾，切碎，稱500g加8000ml含氫氧化鈉的乙醇溶液(pH10含醇30％，)浸泡半小時，加熱1h(80～100℃)，趁熱過濾，殘渣加5000ml上述鹼醇液再加熱提取1h，濾過，濃縮，粉碎，密封於樣品瓶中備用。得到提取物74g。
用前面的藥理實驗方法，測定其對阻滯細胞外Ca2+內流和促進細胞內Ca2+外溢的影響，結果一致。
實施例四取實施例一或二或三的方法製備的竹提取物100g，加入澱粉、糊精各10g，混勻，制粒，乾燥，整粒，裝入袋泡劑專用袋中，為袋泡茶。
實施例五取實施例一或二或三的方法製備的竹提取物100g，加入澱粉、糊精各10g，混勻，制粒，乾燥，整粒，裝入硬膠囊中，為膠囊劑。
實施例六取實施例一或二或三的方法製備的竹提取物100g，加入澱粉、糊精各10g，混勻，制粒，乾燥，整粒，加入硬酯酸鎂2g，壓片，為普通片劑。
實施例七取實施例一或二或三的方法製備的竹提取物100g，加入微精纖維素40g、交聯PVP40g、乳糖10g，混勻，制粒，乾燥，整粒，加入硬酯酸鎂2g，壓片，為分散片。
實施例八取實施例一或二或三的方法製備的竹提取物100g，加入澱粉、糊精各10g或不加，泛制微丸，乾燥，包緩釋衣，為緩釋丸劑。此丸裝入膠囊，為緩釋膠囊劑。
實施例九取實施例一或二或三的方法製備的竹提取物100g，加入羥丙甲基纖維素20g、乙基纖維素40g等，混勻，制粒，為緩釋顆粒劑。此顆粒裝入膠囊，為緩釋膠囊。此顆粒壓片，為緩釋片劑。
實施例十取實施例一或二或三的方法製備的竹提取物100g，加入山楂浸膏30g或山楂微粉50g、蛋白糖0.3g，溶於或混懸於水溶液中，為保健飲料。
權利要求
1.一種竹提取物，其特徵是它由以下方法製備a.取竹枝或竹葉，乾燥，粉碎或切制，每50g加PH＞8的鹼水或鹼醇100ml～800ml浸泡0.5-24小時；40-100℃加熱0.5-24h，過濾；b.殘渣可重複步驟a 1-2次；c.合併濾液，濃縮、乾燥即可。
2.權利要求1所述的竹提取物的製備方法，其特徵是包括a.取竹枝或竹葉，乾燥，粉碎或切制，每50g加PH＞8的鹼水或鹼醇100ml～800ml浸泡0.5-24小時；40-100℃加熱0.5-24h，過濾；b.殘渣可重複步驟a 1-2次；c.合併濾液，濃縮、乾燥即可。
3.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵是步驟a中的鹼水或鹼醇是氫氧化鈣、碳酸氫氨、氫氧化鈉、氨水中一種或多種的水溶液或醇溶液。
4.根據權利要求2或3所述的製備方法，其特徵是步驟a中的鹼醇的含醇量是10％～70％，
5.根據權利要求2、3或4所述的製備方法，其特徵是鹼醇中的醇是乙醇或甲醇。
6.權利要求1所述的竹提取物在製備鈣通道調節藥物中的應用。
7.權利要求6所述的竹提取物在製備鈣通道阻滯劑藥物中的應用。
8.根據權利要求6或7所述的竹提取物在製備藥物中的應用，所述的藥物是預防和治療心腦血管疾病的藥物。
9.根據權利要求8的應用，所述的心腦血管疾病是冠心病、心率失常、腦血管痙攣、腦梗塞、運動病。
全文摘要
本發明公開了一種竹提取物及其製備方法和應用，它由以下方法製備a.取竹枝或竹葉，乾燥，粉碎或切制，每50g加pH＞8的鹼水或鹼醇100ml～800ml浸泡0.5－24小時；40－100℃加熱0.5－24h，過濾；b.殘渣可重複步驟a1－2次；c.合併濾液，濃縮、乾燥即可。該竹提取物可用於製備純天然的鈣通道調節藥物。
文檔編號A61P35/00GK1517118SQ0311715
公開日2004年8月4日 申請日期2003年1月14日 優先權日2003年1月14日
發明者莫尚武, 謝秀瓊, 劉寧, 楊遠友, 羅海燕 申請人:莫尚武, 謝秀瓊, 劉寧, 楊遠友, 羅海燕