氫溴酸檳榔鹼作為抗心律失常藥物的應用的製作方法

2023-10-28 04:47:22 3

專利名稱：氫溴酸檳榔鹼作為抗心律失常藥物的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種心血管類藥物的製備，特別是在抗心律失常藥物方面的研究和應用。
背景技術：
最新資料表明，心血管疾病在世界範圍內已成為威脅人類生命安全的頭號殺手，在所有疾病引起的死亡人群中，因心血管疾病造成死亡的人數位居榜首，約佔總死亡人數的30％以上。
目前，抗心律失常藥物發展迅速，每年都有新藥上市。然而，現在臨床上應用的藥物以及臨床試用品雖然療效確定，並各有特色，但多存在誘發新的心律失常等不良反應，特別是由於一些藥物的逆頻率依賴性引起不良反應，甚至導致尖端扭轉性室速，直接危及患者的生命安全。氫溴酸檳榔鹼(Arecoline hydrobronide，簡稱Are)其化學名稱N-甲基-1，2，5，6四氫煙酸甲基酯氧溴酸鹽(N-methyl-1，2，5，6，-trihydro-1-meghyinicotinatehydro bromide)，是從棕櫚科植物檳榔的種子中提取的一種胺類生物鹼，其成品為白色結晶體，熔點170.5～171.5℃，分子量155，味微苦，易溶於水，英國、阿根廷等8個國家藥典已錄氫溴酸檳榔鹼用於口服驅蟲，我國尚未正式作為人用藥物。

發明內容
本發明目的是提供氫溴酸檳榔鹼在製備抗心律失常藥物中的新用途，它的療效好、毒副作用小。
本發明的技術解決方案是，氫溴酸檳榔鹼作為抗心律失常藥物的應用。將氫溴酸檳榔鹼作為抗心律失常藥物的有效成份，特別是作為III類抗心律失常藥物的有效成份。
氫溴酸檳榔鹼可以單獨成藥，如氫溴酸檳榔鹼(含量為5、10mg/支)粉針劑可溶於生理鹽水中用於靜脈注射或靜脈滴注、也可以製成片劑(5、10mg/片)、膠囊劑(5、10mg/囊)和口服液(5、10mg/10ml)。
氫溴酸檳榔鹼作為製備III類抗心律失常藥物的應用。
氫溴酸檳榔鹼也可以與其他抗心律失常藥物如β受體抑制劑(心得胺、卡維地洛、倍他樂克等)及I類(奎尼丁、氟卡尼等)或IV類(維拉帕米等)抗心律失常藥物聯合使用。
申請人的實驗證明，氫溴酸檳榔鹼(Are)用於抗心律失常藥物，具有抗烏頭鹼、哇巴因、氯仿-腎上腺素、氯化鈣以及缺血再灌注等誘發的多種實驗性心律失常。其主要機制為直接阻滯心肌細胞膜上的瞬時外向鉀電流(Ito)和延遲整流鉀電流(Iks、Ikr)等離子通道電流，從而延長心肌細胞的動作電位時程，與III類抗心律失常藥物相似。同時其還具有阻滯細胞膜上鈉電流(INa)和L-型鈣電流(ICa，L)的作用，因此，氫溴酸檳榔鹼兼有I類IV類抗心律失常藥物的作用特點。該藥在延長動作電位時程的方面效應表現出獨特的優點，其一是藥物延長動作電位時程效應是頻率依賴性的，這就避免了經典的III類抗心律失常藥物因逆頻率依賴性引起的不良反應，即在心率很快時，作用較弱，而當心率較慢時，又由於作用增加導致長QT間期症候群，甚至引起致命的尖端扭轉性室速；其二是由於氫溴酸檳榔鹼阻滯心肌細胞Iks和Ito，可以減少心肌跨室壁復極離散度(TDR)，使心肌電生理的異質性降低，這就減少了經典藥物因增加跨室壁復極離散度而導致的壁內折返；三是由於氫溴酸檳榔鹼阻滯心肌細胞的INa和ICa，L，將減少早後除極(EAD)、遲後除極(DAD)及觸發活動。氫溴酸檳榔鹼的這種多通道、多環節抑制心律失常的特徵恰好符合近年來理想抗心律失常藥物的模式。
氫溴酸檳榔鹼屬於植物源性的抗心律失常藥物，其療效確切，毒副作用小。
具體實施例方式
1.氫溴酸檳榔鹼(Are)應用於心律失常模型的實施例1)Are應用於哇巴因誘發豚鼠心律失常健康豚鼠250～350g，3％的戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉後，置於恆溫手術臺上，觀察病記錄正常心電圖，分離頸外靜脈，結紮遠心端，近心端插入連接恆速推進器的導管。恆速給予哇巴因(Ouabine，Oua，3％)。以SER-1型二線示波器LMS-2B型二道生理記錄儀，分別觀察腹腔注射Are 0.5、1.0、10.0mg/kg、0.5％硫酸奎尼丁(Qui)5mg/kg和等量的生理鹽水後誘發動物室早(VE)、室速(VT)、室顫(VF)的耐受量，見表1。可見應用Are後誘發動物發生心律失常耐受量明顯提高，在1.0mg/kg時與對照比已有顯著性差異，其效應與陽性對照藥奎尼丁相近。
表1 Are對哇巴因誘導豚鼠心律失常的作用(x±s)藥物 劑量 n 哇巴因用量(μg/kg)mg/kg VE VT VFN.S1 10 157±52 196±37 253±29Are1 10 223±56*252±53*328±39***P＜0.05，**P＜0.01 Are組與生理鹽水組相比。
2)Are應用於烏頭鹼誘發大鼠心律失常SD大白鼠220～280g，3％的戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉後，置於恆溫手術臺上，觀察病記錄正常心電圖，分離頸外靜脈，結紮遠心端，近心端插入連接恆速推進器的導管。恆速給予烏頭鹼(Aconitine，Aco，1％)。以SER-1型二線示波器LMS-2B型二道生理記錄儀，分別觀察腹腔注射Are 0.5、1.0、10.0mg/kg、維拉帕米(Ver)0.2mg/kg和生理鹽水後誘發動物室早(VE)、室速(VT)、室顫(VF)的耐受量，見表2。可見應用0.5mg/kg Are後誘發動物發生心律失常耐受量明顯提高，在1.0mg/kg時與對照比已有顯著性差異，其效應與陽性對照藥維拉帕米相近。
表1 Are對烏頭鹼誘導大鼠心律失常的作用(x±s)藥物 劑量 n 烏頭鹼用量(μg/kg)mg/kgVE VT VFN.S 1 10 14.4±6.1 21.2±8.035.2±9.4Are 1 10 23.4±8.2*29.9±8.9*47.4±7.1**P＜0.05，Are組與生理鹽水組相比。
3)Are應用於氯化鈣誘發大鼠心律失常SD大白鼠220～280g，雌雄不拘。給予3％的戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉後，置於恆溫手術臺上，觀察病記錄正常心電圖，分離頸外靜脈，結紮遠心端，近心端插入連接恆速推進器的導管。以備給藥。恆速給予氯化鈣(CaCl2，5％)以SER-1型二線示波器LMS-2B型二道生理記錄儀，分別觀察腹腔注射Are 1.0、10.0mg/kg、維拉帕米(Ver)0.2mg/kg和生理鹽水1ml/kg後誘發動物室顫(VF)和死亡數量，結果顯示，對照組室顫發生率為80％，應用1.0mg/kg的Are組室顫發生率為20％(P＜0.01)，應用10.0mg/kg的Are組室顫發生率為10％，而維拉帕米治療組室顫發生率也為20％，三組大鼠發生室顫後均死亡。
4)Are應用於氯仿-腎上腺誘發家兔鼠心律失常健康家兔，體重1.5-2.0kg。於實驗前禁食12小時，3％戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉。記錄電極連接於BL-410生物信號採集與處理系統後都置於計算機接口，經A/D轉換輸入計算機，調節而板上的時間參數為0.1，濾波為50Hz。記錄應用氯仿-腎上素後對照組及應用Are1.0、10.0mg/kg和普萘洛爾(Pro)0.25mg/kg後家兔心律失常持續的時間。結果顯示，對照組(80％)心律失常持續時間為6.2±0.2min，應用10.0mg/kgAre後家兔(30％)心律失常持續3.2±0.4min.而應用10.0mg/kg Are後無1例出現心律失常。應用普萘洛爾(Pro)0.25mg/kg後家兔心律失常持續4.3±0.2min。
5)Are應用於氯仿-腎上腺誘發家兔鼠心律失常健康家兔，3％戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉，呼吸機機械通氣，正中開胸，剪開心包縫製心包吊床充分暴露心臟左前側壁，結紮左冠狀動脈前降支，記錄電極連接於BL-410生物信號採集與處理系統後輸入計算機。記錄缺血5min和復灌後對照組及應用Are 1.0、10.0mg/kg和哌唑嗪(Pra)0.8mg/kg後心肌體表心電圖。對照組有9隻家兔發生室顫(VF)(佔90％)，持續時間為7.4±0.5min，應用10.0mg/kg後僅2隻兔出現室早(VE)、室速(VT)(佔20％)，其中1隻出現室顫(VF)，持續時間為2.1±0.3min。而應用10.0mg/kg Are後無1例出現心律失常。應用哌唑秦(Pra)0.8mg/kg後也無1例出現心律失常。
致顫實驗，採用刺激器輸刺激心臟，刺激器信號經記錄電極傳至心肌，致顫刺激參數脈寬2ms，周期30ms，脈衝數20個，電壓由1.0V起始，設電壓增量為0.5～1.0V，直到室顫出現，將引起室顫的最小電壓值作為室顫閾值(VFT)。應用Are 0.5、1.0、10.0mg/kg後VFT分別從對照的7.6±1.0V增至9.4±1.5V、12.9±1.3和15.7±1.1V(n＝10，P＜0.01)。而應用奎尼丁(Qui)5mg/kg後室顫閾值(VFT)為16.6±0.8V。
2.Are應用於動物心肌電生理的實施例1)Are對家兔缺血後的單相動作電位的影響健康家兔，體重1.5～2.0kg。3％戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉。呼吸機機械通氣，正中開胸，剪開心包縫製心包吊床充分暴露心臟左前側壁。結紮左冠狀動脈前降支，MAP電極連接於BL-410生物信號採集與處理系統計算機。搗毀竇房結直到出現緩慢結性心律，用電生理刺激儀以起搏周長1500ms從右室起搏心臟，穩定20分鐘後分別記錄缺血5、10、15、20、30min時對照組及應用Are 1.0mg/kg後心肌的MAP和體表心電圖變化。缺血時，體表心電圖上ST段及T波均升高；MAP形態發生變化，2相平臺逐漸消失，至缺血30min時MAP呈三角形；MAPD即迅速縮短，應用Are後上述改變均得到抑制，MAPD與對照組相比明顯延長，表3。
表3 Are對家兔心肌急性缺血時MAPD變化的作用(ms，x±s)缺血前缺血30min AreMAPD20133.17±38.52 73.25±7.99 113.36±28.92**MAPD50166.00±36.32 120.69±13.85146.25±31.32**MAPD90208.67±44.37 147.33±21.65190.32±24.34****P＜0.01，Are組與缺血組相比。
且Are在0.1、0.5、1.0mg/kg的範圍內呈現出濃度依賴性延長動作電位時程。EC50為0.76±0.14mg/kg。
2)Are對腎上腺素誘發豚鼠乳頭狀肌自律性的影響健康豚鼠250～350g，3％的戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉後，摘出心臟，於95％O2+5％CO2混合氣體飽和的臺氏液中分離右心室乳頭肌，將標本置於1ml的恆溫水浴槽中固定，用37±0.5℃臺氐液循環灌流標本。加入腎上腺素，觀察3min，看是否出現自動節律，若無出現自動節律，則於3min末施加閾上電壓刺激(頻率1.0Hz，波寬3ms)無論靜上狀態或目刺激時以腎上腺素誘發的自律性收縮，且持續時間超過10s者為陽性。
腎上腺素誘發豚鼠乳頭狀肌自律性的閾濃度為1.09～7.2×10-6mol/L，應用Are3×10-5mol/L後可使腎上腺素誘發豚鼠乳頭狀肌自律性的閾濃度提高到6.76×10-5mol/L。當應用Arel×10-5mol/L後腎上腺素濃度達到1.34×10-3mol/L仍未出現自律性。
3)Are對家兔心肌細胞動作電位的影響按文獻方法分離家兔心室肌細胞和記錄動作電位。30μmol/L檳榔鹼可以明顯延長動作電位時程(APD)，在1.0Hz時，使APD90從對照的249±16ms增加到317±122ms(n＝9，P＜0.01)。
在頻率為0.25、0.5、1.0、2.0、4.0Hz刺激下，Are使APD延長，並且隨著頻率的加快，其延長作用更加明顯，在0.25Hz時，使APD延長16.5％，在4.0Hz時，使APD延長63％。
4)Are對家兔心肌細胞動作電位異質性的影響按文獻方法分離家兔心內膜下(Endo)、中層(M)和心外膜下(Epi)心肌細胞，並且記錄三層心肌細胞的動作電位。30μmol/L檳榔鹼對三層細胞的APD均有延長作用，其中對Endo、Epi心肌細胞的APD延長較M細胞更明顯。在0.25Hz時，三層心肌的APD90分別為Endo377±23ms、M41734ms和Epi 359±22ms，跨室壁復極離散度(TDR)為58±6ms；應用30μmol/L檳榔鹼後三層心肌的APD90分別為Endo436±31ms、M469±17ms和Epi432±12ms，TDR為37±5ms。
5)Are對豚鼠鈣通道電流的影響分離豚鼠心室肌細胞和記錄鈣電流(ICa，L)。結果當加入Are 10μmol/L後，可見對鈣電流有明顯阻滯作用，其幅值從14.5±0.3pA/pF降至11.8±0.2pA/pF(P＜0.01，n＝5)不改變I-V曲線形狀。加入3～100μmol/L Are，可見隨著濃度升高Are阻滯通道電流的作用增強。IC50為33.73μmlo/L。
6)Are對豚鼠鈉通道電流的影響分離豚鼠心室肌細胞，全細胞膜片鉗方法記錄鈉通道電流(INa)。當加入30μmol/L Are後，可見鈉電流有顯著性地阻滯作用。從151.1±6.0pA/pF降至102.9±8.0pA/pF(P＜0.01，n＝5)。加入3～100μmol/L Are呈濃度依賴性阻滯鈉通道電流，IC50為26.13μmlo/L。
7)Are對豚鼠心室肌細胞IKs、IKr的影響保持電位-50mV，施予-20～+50mV，7s的去極化脈衝，記錄IKs，復極至-30mV記錄IKs，tail。30μmol/L檳榔鹼使+50mV時的IKs，tail從5.0±0.7pA/pF下降至3.2±1.0pA/pF。
保持電位-50mV，施予0mV，225ms的去極化脈衝，記錄IKr，脈衝復極至-40mV時，記錄IKr，tail。結果顯示30μmol/L Are對其有阻滯作用，使IKr，tail從1.0±0.4pA/F降至0.7±0.2pA/pF。
8)Are對家兔心室肌細胞Ito的影響保持電位-80mV，施予-40mV，20ms的預刺激失活鈉通道，緊接著眼給予-40～+50mV，300ms的脈衝，記錄Ito。5μmol/L Are對其有阻滯作用，使+40mV時的Ito從16.0±3.2pA/pF降至7.1±2.4pA/pF。
權利要求
1.氫溴酸檳榔鹼作為製備抗心律失常藥物的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於，氫溴酸檳榔鹼製備成口服劑片劑含量為5、10mg/片，膠囊含量為5、10mg/囊、口服液含量為5、10mg/10ml。
3.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於，氫溴酸檳榔鹼製備成生理鹽水靜脈注射液或靜脈滴注液。
4.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於，氫溴酸檳榔鹼作為製備抗心律失常藥物的有效成份。
5.氫溴酸檳榔鹼作為製備III類抗心律失常藥物的應用。
6.氫溴酸檳榔鹼作為製備I類或IV類抗心律失常藥物的應用。
全文摘要
氫溴酸檳榔鹼(areoline hydrobronide，Are)是棕櫚科植物檳榔種子中提取的生物鹼的氫溴酸鹽。本發明將其作為抗心律失常藥物的應用，特別是作為III類抗心律失常藥物的有效成份。研究結果顯示，Are具有抗烏頭鹼、哇巴因、氯仿－腎上腺素、氯化鈣以及缺血再灌注等誘發的多種實驗性心律失常效果。其主要的機制為直接阻滯心肌細胞膜上的鈣、鈉、鉀離子電流，從而以濃度依賴性、頻率依賴性延長動作電位時程。因此Are兼有部分I和IV類抗心律失常藥物特性的III類抗心律失常藥物的用途。這一應用由於具備多通道和多環節影響心肌細胞電的生理特徵，將有更少的不良反應，尤其是誘發新的心律失常作用的可能性較低。因此，氫溴酸檳榔在作為抗心律失常藥物有非常廣闊的應用前景。
文檔編號A61P9/00GK1398588SQ0213896
公開日2003年2月26日 申請日期2002年8月26日 優先權日2002年8月26日
發明者夏國瑾, 李泱, 傅麗英, 吳世玉, 姚偉星 申請人:夏國瑾