三肽的用途的製作方法

2023-10-28 06:31:12 2

專利名稱：三肽的用途的製作方法
三肽的用途本發明涉及某些特定的三肽衍生物用於緊緻(tightening)、緊實(firming)和/ 或保溼(moisturizing)皮膚的用途。此外，本發明涉及刺激成纖維細胞和/或角化細胞對含有D-葡糖胺和/或N-乙醯-D-葡糖胺的葡糖胺聚糖的合成和/或對蛋白聚糖的合成的方法，例如，刺激透明質酸的合成和/或蛋白聚糖Decorin和/或Lumican的合成。皮膚由一組細胞構成，所述細胞一起排列為柔軟耐久的組織形式，並且覆蓋身體全部。皮膚發揮的主要作用是作為抵擋外界因素的保護性屏障，同時又允許內環境和外環境之間進行某些交換。其是受生物的生理條件和環境條件調控的很多代謝過程的位點。皮膚由兩層相鄰的層——表皮和真皮構成，真皮聯結有皮下組織。表皮主要作用是保護身體，其是皮膚的最外層，賦予皮膚不可透過性和耐久性。其大約每四周更新一次。雖然表皮中共存有不同的細胞類型，但角化細胞是主要的細胞類型 (90%)。它們的特徵活性是角蛋白的合成，角蛋白佔到表皮總蛋白的95%。角蛋白是纖維性的、不溶於水的蛋白，其是保護皮膚抵擋有害外界因素(熱、冷、脫水)的表皮角膜層的構成成分表皮通過被稱為真皮-表皮交界(dermo-印idermal junction)或表皮基底膜的區域與真皮相連。該結構提供了真皮至表皮的粘連，並且具有機械支持作用，這部分地負責皮膚強韌性(tonicity)。其由基底角化細胞和真皮成纖維細胞構成。真皮是皮膚的內層，其是纖維-彈性連接組織，包含分布於被稱為細胞外基質的複合介質中的細胞(成纖維細胞)。該基質由膠原、彈性纖維、糖蛋白和蛋白聚糖(PG)構成。葡糖胺聚糖(GAG)的游離形式(即並非與蛋白聯結的形式)也被發現於細胞外基質中。葡糖胺聚糖(GAG)是二糖單元形成的多聚物。在人類皮膚中最頻繁發現的GAG中， 透明質酸是首要的，其以最大的豐度存在。還存在4-硫酸軟骨素和6-硫酸軟骨素、硫酸皮膚素以及少量的肝素和硫酸乙醯肝素O^paran sulfate)。GAG的二糖單元由己糖胺(D-葡糖胺或D-半乳糖胺)與糖醛酸(D-葡糖醛酸或L-艾杜糖醛酸)交替形成，己糖胺常見為硫酸化的。GAG通常與蛋白共價鍵合，以形成蛋白聚糖，例如Lumican或Decorin，它們二者均屬於小的富亮氨酸蛋白聚糖(SLRP)家族。已知的GAG中，僅上文提到的透明質酸不是合成的與中央蛋白鍵合的。蛋白聚糖是複雜的大分子，其由支化的中央蛋白主幹或蛋白網絡構成，其上聯結有大量的已知為葡糖胺聚糖的碳水化合物側鏈。蛋白聚糖的結構例如被描述於『The Journal of investigative dermatology (1982)，79，Suppl· 1，31s-37s'中。公知GAG以及蛋白聚糖通過其與水分子緊密結合併形成凝膠的性質，確保了對真皮和表皮的保溼作用。被良好保溼的皮膚是好的外觀和令人滿意的生理和功能狀態、特別是良好的機械性質的保證。特別地，隨著衰老的進程，成纖維細胞和角化細胞生產的PG和GAG越來越少，它們的合成減弱。這導致了相當大的瓦解形成PG的皮膚骨架上的GAG的沉積異常，其後果是這些PG的水親合力降低，由此使得組織的保溼性和強韌性降低，這還反映為皮膚柔軟度的損失。因此，存在對下述活性試劑的持續需求，所述試劑的作用是保持皮膚中PG(例如 Lumican或Decorin)和GAG(例如透明質酸)的水平，並且所述試劑因此適用於緊緻、緊實和/或保溼皮膚。作為結果，皮膚呈現為提緊的狀態，皮膚強韌性被改善，皮膚松垂被預防或減少，皮膚的柔軟度和彈性被保持或恢復(重構作用)。此外，疤痕癒合被促進，表皮微損傷可被修復，拉伸痕跡(stretch mark)被降低。令人吃驚地，已經發現，某些特定的三肽衍生物能增加人成纖維細胞對透明質酸 (Hyaluronan,也作 Hyaluronic acid)的合成禾口 / 或對蛋白聚糖 Decorin 禾口 / 或 Lumican 的合成，它們因此特別適用於處理如前文所述由於這些GAG和PG的生產不足造成的上文概括的皮膚狀況。這還被闡釋於體內研究中，該研究顯示了局部應用包含此類三肽衍生物的化妝品組合物後皮膚強韌性和皮膚緊實性的改善以及重構作用(即對松垂和雙下巴的作用)。因此，本發明涉及通式(I)的三肽衍生物及其皮膚可耐受的鹽用於緊緻、緊實和/ 或保溼皮膚的用途，R1-A-B-C-R2(I)其中Rl表示棕櫚醯或十四烷基氨基羰基；R2表示OH或NH-十六烷基；A表示精氨醯、賴氨醯、鳥氨醯或2，4_ 二氨基丁醯；B表示纈氨醯、亮氨醯、異亮氨醯或正纈氨醯，以及C表示精氨醯、賴氨醯或2，4- 二氨基丁醯。特別地，根據本發明的三肽衍生物適合用於提緊皮膚、預防或減少皮膚松垂、保持或恢復皮膚的柔軟度和彈性(重構作用)、促進疤痕癒合和修復表皮微損傷和/或降低拉伸痕跡。在另一實施方式中，本發明涉及刺激成纖維細胞和/或角化細胞對含有D-葡糖胺和/或N-乙醯-D-葡糖胺殘基的葡糖胺聚糖的合成和/或對蛋白聚糖的合成的方法，所述方法包括向需要此類處理的個體施用有效量的至少一種對應於上文概括的式(I)的三肽衍生物。特別地，本發明涉及刺激對透明質酸和/或蛋白聚糖Decorin和/或Lumican的合成的方法。所述方法特別適合對遭受上文討論的葡糖胺聚糖合成不足和/或蛋白聚糖合成不足(特別是透明質酸、Decorin和/或Lumican合成不足)的受試者加以處理，以通過改善皮膚的緊緻性和緊實性和/或通過改善皮膚的保溼，來校正所述不足的負面影響。因此，所述方法特別適用於提緊皮膚，適用於對皮膚松垂進行處理或聯合處理，適用於保持或恢復皮膚的柔軟度和彈性，適用於促進疤痕癒合，適用於修復表皮微損傷或者適用於降低拉伸痕跡。此外，本發明涉及至少一種對應於式(I)的三肽衍生物或其皮膚可耐受的鹽(如上文所概括的)用於刺激透明質酸合成的用途，其中，Rl是棕櫚醯或十四基氨基羰基；R2是 OH或NH-十六烷基；A是精氨醯、賴氨醯、鳥氨醯或2，4-二氨基丁醯；B是纈氨醯、亮氨醯、 異亮氨醯或正纈氨醯，並且C是精氨醯、賴氨醯或2，4- 二氨基丁醯。本發明還涉及對皮膚進行治療性處理的下述任何方法，所述方法的目的是刺激葡糖胺聚糖合成，特別是透明質酸合成。本發明還包括對應於式(I)的三肽衍生物的光學異構體，並且還涉及這些衍生物的生理可接受鹽。式(I)化合物和酸一起可形成單價或多價的均質或混合鹽，例如與無機酸(例如鹽酸、氫溴酸、硫酸或磷酸)；或與合適的羧酸(例如脂肪族單羧酸或二羧酸，例如甲酸、乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、丙酸、乙醇酸、琥珀酸、富馬酸、丙二酸、馬來酸、草酸、鄰苯二甲酸、 檸檬酸、乳酸或酒石酸)；或與芳香族羧酸(例如苯甲酸或水楊酸)；或與芳香族-脂肪族羧酸(例如扁桃酸或肉桂酸)；或與雜芳香族羧酸(例如菸鹼酸)；或與脂肪族或芳香族磺酸 (例如甲磺酸或甲苯磺酸)一起。優選的是「皮膚耐受的鹽」。根據本發明，根據式(I)的三肽衍生物可單獨使用或以任何比例作為混合物使用。根據本發明的一種優選的實施方式中，使用的根據式(I)的三肽衍生物是下述這些，其中A和C可以是相同的或不同的，並且它們具有賴氨醯或2，4_ 二氨基丁醯的定義。根據本發明的另一優選的實施方式中，使用的根據式(I)的三肽衍生物是其中R2 代表OH的那些。根據本發明的另一優選的實施方式中，使用的根據式(I)的三肽衍生物是氯化
鹽、乙酸鹽或三氟乙酸鹽，特別是三氟乙酸鹽。根據本發明使用的根據式(I)的三肽衍生物中，優選的是下述這些Palm-Lys-Val-Lys-OHPalm-Orn-Val-Lys-OHPalm-Lys-Leu-Lys-OHPalm-Lys-Ile-Dab-OHPalm-Lvs-Nva-Dab-OHPalm-Lys-Leu-Dab-OHPalm-Lys-Val-Dab-NH-十六烷基十四烷基-NH-C(0) -Dab-Val-Dab-OH十四烷基-NH-C(O)-Lys-Ile-Dab-OH十四烷基-NH-C(O)-Arg-Val-Arg-OH,其中，Palm表示棕櫚醯，Dab表示2，4_ 二氨基丁醯。根據本發明使用的根據式(I)的三肽衍生物中，最優選的是十四烷基-NH-C(0) -Dab-Val-Dab-OH,特別是三氟乙酸鹽形式的。優選地，根據本發明的三肽衍生物中的所有胺基酸都是L-構型的。根據式(I)的三肽衍生物及其組合物是專利文獻中已知的，其被描述於WO 2004/099237 中。根據本發明的三肽衍生物可以用於適於緊緻、緊實和/或保溼皮膚的任何想要的應用形式中，例如用於局部組合物中。但是，根據本發明的三肽衍生物還適於被包埋於納米顆粒(例如脂質體、nanosome、環糊精)中，納米顆粒隨後可被加入想要的應用形式中。優選地，有效量的、具有上文給出的定義和偏好的至少一種三肽衍生物被摻入還包含化妝品可接受的載體的局部組合物中。
此類局部組合物特別適用於緊緻、緊實和/或保溼皮膚，例如，特別用於提緊皮膚，預防或減少皮膚松垂，保持或恢復皮膚的柔軟度和彈性(重構作用)，促進疤痕癒合，以及修復表皮微損傷和/或降低拉伸痕跡。術語「有效量」一般而言表示按局部組合物的重量計至少0. 00001%。優選地，組合物含有基於組合物總重而言0.0001%至10%的量的三肽衍生物，優選地，0. 0001%至的量的三肽衍生物。術語「局部組合物」用於本文中特別表示可局部應用至哺乳動物角質組織(例如人的皮膚或毛髮(包括睫毛、眉毛)或指甲，特別是人的皮膚)的化妝品組合物。術語「化妝品組合物」在本申請中使用時指R0mpp Lexikon Chemie, IOth edition 1997, Georg Thieme Verlag Stuttgart, New York ^feH "Kosmetika" T^J^.
βπ ^ ^^^ L Domsch, 「 Cosmetic Compositions" , Verlag fur chemische Industrie (ed. H. Ziolkowsky), 4th edition, 1992 中公開的化妝品組合物。術語「化妝品可接受的載體」表示傳統用於局部組合物或組合物的所有載體和/ 或賦形劑和/或稀釋劑。優選地，局部組合物是溶劑或脂肪物質中的懸浮液或分散體系的形式，或者，是乳液或微乳液(特別是0/W型或W/0型的)、PIT-乳液、多重乳液(例如0/W/0型或W/0/W型)、 Pickering乳液、水凝膠、醇凝膠、脂質體凝膠、單相或多相溶液或泡分散體系(vesicular dispersion)的形式或還可通過筆、作為膜或作為噴霧應用的其它常用形式。如果局部組合物是乳液或包含乳液，則其還可含有一種或多種陰離子、非離子、陽離子或兩性表面活性劑。優選的局部組合物是皮膚護理組合物以及功能組合物。皮膚護理組合物的例子是特別地，身體油、身體護膚液、身體凝膠、修護霜、皮膚保護軟膏、剃鬚組合物(例如剃鬚泡沫或凝膠)、皮膚粉(例如嬰兒粉)、保溼凝膠、保溼噴霧、活力身體噴霧、緊緻凝膠、面部和/或身體保溼劑、面部和/或身體清潔劑、面膜、抗痤瘡組合物和/或磨皮組合物。功能性組合物的例子是含有活性成分的化妝品或藥物組合物，例如但不限於激素組合物、維生素組合物、植物提取物組合物、抗衰老組合物和/或抗微生物(抗細菌或抗真菌)組合物。根據本發明的局部組合物可以是液體、護膚液、增稠護膚液、凝膠、乳霜、乳液、軟膏、糊膏、粉末、化妝用品或固體管棒狀品的形式，其可任選地被包裝作氣溶膠，並且可以以摩絲(mousse)的形式提供，例如作為氣溶膠摩絲、泡沫或噴霧泡沫、噴霧、棒狀品(stick)、 貼膏(plaster)、清潔劑、肥皂、拭巾(wipe)或凍幹品(例如Pentapharm Dual Vial體系)。根據本發明的組合物優選被配製為水包油或油包水乳液、矽酮(silicone)包水或水包矽酮乳液，或配製為水性漿液或水性凝膠。根據本發明的化妝品組合物具有3-10範圍內的pH，優選4-8範圍內的pH，最優選 pH 4-6範圍內的。根據本發明，局部組合物含有至少一種上文定義的三肽，任選地，組合其它成分， 例如用於下述用途的成分皮膚提亮；預防曬黑；治療色素沉著過多；預防或減少痤瘡、皺紋、細紋(lines)、萎縮和/或炎症；以及局部麻醉；抗微生物劑和/或抗真菌劑；螯合劑和/或多價螯合劑；抗脂肪團和塑身(例如，植烷酸)、緊實、保溼和賦予活力、美黑、鎮定，以及提高彈性的試劑和皮膚屏障和/或UV遮光劑物質。局部化妝品組合物還可含有常用的化妝品佐劑和添加劑，例如防腐劑/抗氧化劑，脂肪類物質/油，水，有機溶劑，矽酮，增稠劑，軟化劑，乳化劑，消泡劑，保溼劑，增加好感的組分(例如香料)，表面活性劑，填料，多價螯合劑，陰離子、陽離子、非離子或兩性聚合物或其混合物，推進劑，酸化或鹼化試劑，染料，顏料 /著色劑，研磨劑，吸收劑，精油，皮膚感覺劑(skin sensates)，收斂劑，消泡劑，色素或納米色素，例如適於通過物理阻隔紫外線照射提供光保護效果的那些，或者通常配製進化妝品組合物的任何其它成分。適用於本發明的局部組合物的、通常用於皮膚護理工業的此類化妝品成分被例如描述於 CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition (1992)中， 但不限於此。常用的化妝品佐劑和添加劑，例如，乳化劑、增稠劑、表面活性成分和成膜劑，可顯示出協同效果，這可由本領域專家以常規試驗或針對化妝品組合物配方的常見考慮來確定。必需的量可由技術人員基於想要的產品容易地確定。可用於本申請的化妝品活性成分在一些情況下可提供不止一種益處，或可通過不止一種作用模式生效。如無另外說明，下文中提到的載體、賦形劑、添加劑、稀釋劑、佐劑和添加劑等特別適用於根據本發明的局部組合物。根據本發明的局部組合物還可含有化妝品活性成分。化妝品活性成分的例子包括但不限於肽和/或寡肽(例如，Matrixyl [五肽衍生物]，SYN _TACKS中含有的肽之一或二者，SYN -COLLdNCI 棕櫚醯三肽_5，甘油)，SYN -AKE (INCI 水、甘油、二肽二氨基丁酸苯甲醯胺二乙酸酯(來自 DSM Nutritional Products Ltd. ,Branch Pentapharm), Ac-Gln-Asp-Val-His-OH 和 / 或 H-Lys-Asp-Val-Cit_NH2*2TFA)，基於蠟的合成肽和棕櫚醯-寡肽，丁基氨基甲酸碘丙酯(iodopropyl butylcarbamate)，甘油，尿素，胍(例如氨基胍)；維生素及其衍生物，例如維生素C(抗壞血酸)，維生素A(例如，類維生素A衍生物，例如視黃醇棕櫚酸酯或視黃醇丙酸酯)，維生素E (例如，生育酚乙酸酯)，維生素R3 (例如煙醯胺)和維生素B5 (例如泛醯醇)，維生素 和維生素B12，生物素，葉酸；抗痤瘡活性物質或藥物(例如，間苯二酚、水楊酸等等)；抗氧化劑(例如植物固醇類，硫辛酸) 』類黃酮(例如異黃酮、植物雌激素)；皮膚鎮定和舒緩試劑，例如蘆薈提取物，尿囊素等等； 適用於增加好感目的的試劑，例如精油，香料，皮膚感覺劑，不透明劑，芳香化合物(例如， 丁香油、甲醇、樟腦、桉樹油和丁子香酚及其衍生物)，剝落性(desquamatory)活性物質， 羥基酸，例如AHA酸，BHA酸，多不飽和脂肪酸，自由基清除劑，法呢醇，抗真菌活性物質， 特別是沒藥醇，烷基二醇，例如1，2-戊二醇，己二醇或1，2-辛二醇，植醇，多元醇，例如植烷三醇，神經醯胺和擬神經醯胺，胺基酸，蛋白水解產物，多不飽和脂肪酸，植物提取物，例如激動素(kinetin)，DNA或RNA及其片段化產物，碳水化合物，共軛脂肪酸，肉毒鹼，肌肽 (carnosine), Biochinonen,六氧番爺烴(phytofluen),八氧番艇工素(phytoen)及它們對應的衍生物，輔酶QlO/泛醌)，抗氧化劑，例如優選地，(-)_表沒食子兒茶素沒食子酸酯 (EGCG)，羥基酪醇，和/或橄欖提取物，乳木果油，藻類提取物，可可脂，蘆薈提取物，透明質酸和彈性蛋白。化妝品活性成分的優選例子是維生素C(抗壞血酸)和/或其衍生物(例如，抗壞血酸磷酸酯，例如來自DSM Nutritional Products Ltd.的May C (抗壞血酸單磷酸鈉))、 維生素A和/或其衍生物(例如，類維生素A衍生物，例如視黃醇棕櫚酸酯或視黃醇丙酸酯)、維生素E和/或其衍生物(例如生育酚乙酸酯)、維生素 、維生素B12、生物素、輔酶 Q10、EGCG、羥基酪醇和/或橄欖提取物、乳木果油、藻類提取物、可可脂、蘆薈提取物、霍霍巴油、松果菊屬植物(echinacea)提取物、彈性蛋白和透明質酸。額外的化妝品活性成分典型地以基於局部組合物總重而言至少0. 001重量％的量被包括進去。通常，使用約0. 001重量％至約30重量％的量的、優選約0. 001重量％至約10重量％的量的額外的化妝品活性試劑。維生素C (抗壞血酸)和/或其衍生物，特別是抗壞血酸磷酸酯，例如May C(抗壞血酸單磷酸鈉)，優選以0. 1-5重量％的量，特別是0. 1-2重量％的量用於根據本發明的局部組合物中。乳木果油(shea butter)優選以0. 5-10重量％的量，特別是0. 5-5重量％的量用於根據本發明的局部組合物中。藻類提取物優選以0. 1-10重量％的量，特別是0.5-1重量％的量用於根據本發明的局部組合物中。蘆薈提取物優選以0. 1-10重量％的量，特別是0.5-1重量％的量用於根據本發明的局部組合物中。彈性蛋白優選以0.01-10重量％的量，特別是0.01-1重量％的量用於根據本發明的局部組合物中。用於本發明中的維生素E衍生物是生育酚乙酸酯。生育酚乙酸酯可以以大約0.05 重量％至大約25重量％的量，特別是0. 05重量％至5重量％的量存在於局部組合物中。另一感興趣的維生素E衍生物是生育酚亞油酸酯。生育酚亞油酸酯可以以大約0. 05重量％ 至大約25重量％的量，特別是0. 05重量％至5重量％的量存在於局部組合物中。請驗證維生素A和/或其衍生物，特別是類維生素A衍生物，例如視黃醇棕櫚酸酯或視黃醇丙酸酯，優選以0.01-5重量％的量，特別是0.01-0. 3重量％的量用於根據本發明的局部組合物中。可可脂優選以0. 5-5重量％的量用於根據本發明的局部組合物中。透明質酸優選與三肽組合用於根據本發明的局部組合物中，因為此類組合能有效保護內層和外層中的皮膚。透明質酸優選以0.1-0. 5重量％的量使用。最優選地，透明質酸作為透明質酸一BT (其例如可從 DSM Nutritional Products Ltd. , Branch Pentapharm 以商品名Hyasol -BT獲得)的溶液被包括進去。如無另外指明，符號「重量％ 」總是基於組合物的總重。當然，本領域技術人員將慎重選擇上文所述的可選的、額外的一種或多種化合物和/或它們的量，使得預計的一種或多種添加不會或不會實質上對根據本發明的組合固有的有利特性造成有害影響。將被應用的局部組合物的量取決於活性成分在產品中的濃度和想要的化妝品效果。典型的「駐留性」("leave-on")組合物，例如，皮膚護理乳液或功能性組合物，例如通常以每cm2皮膚約0. 5至約2mg的量應用。應用的量通常並不關鍵，可通過使用更多的組合物、重複應用組合物和/或應用含有更多活性成分的組合物，來實現想要的效果。
在本文中使用時，「『駐留性』組合物」表示這樣的局部組合物其應用到皮膚上之後，並不被故意去除。優選地，其在皮膚上保留至少大約15分鐘的時間，更優選地，至少大約30分鐘，進一步更優選地，至少大約1小時，最優選地，至少若干小時，例如，多達大約12 小時。在另一實施方式中，本發明還涉及緊緻、緊實和/或保溼皮膚的方法，所述方法包括下述步驟將有效量的、根據本發明的局部組合物(以上文給出的所有定義和偏好)應用至需要此類處理的受試者的皮膚。特別地，本發明涉及處理或聯合處理皮膚松垂、保持或恢復皮膚柔軟度和彈性、促進疤痕癒合以及修復表皮微損傷或降低拉伸痕跡的方法，所述方法包括下述步驟將有效量的局部組合物(以上文給出的所有定義和偏好)應用至需要此類處理的受試者的皮膚。術語處理或聯合處理在用於本發明中時還包括預防性使用局部組合物，以預防皮膚松垂、疤痕癒合或拉伸痕跡。在這些方法中，有效量的局部組合物(以上文給出的所有定義和偏好)指獲得生理學效果所需的量。生理學效果可通過一次單獨的劑量或通過重複劑量實現。施用的劑量當然可根據多種已知因素而變化，例如特定組合物的生理學特徵及其施用模式和途徑；接受者的年齡、健康和體重；症狀的性質和程度；同時進行的處理的種類；處理的頻率；以及想要的結果，並且可由本領域技術人員對施用的劑量加以調整。優選地，局部組合物每天至少兩次應用，例如，早上一次，晚上一次。提供了下述實施例，以進一步闡述本發明的組合物和效果。這些實施例僅作闡述用，其並非旨在以任何方式限制本發明的範圍。實施例1研究三肽衍生物對透明質酸的合成的影響在正常人成纖維細胞(NHF)中測量透明質酸的合成將正常人成纖維細胞(NHF) 接種於96孔細胞培養板(Nimclon)中。培養三天後，將本發明的三肽衍生物加入沒有FCS 的培養基中，對細胞再進行三天的培養。使用來自Echelon (Salt Lake City, Utah)的透明質酸檢驗試劑盒，測量生長培養基中的分泌的透明質酸合成。實施例2研究三肽衍生物對蛋白聚糖「Decorin」的合成的影響在正常人成纖維細胞(NHF)中測量Decorin的合成將正常人成纖維細胞(NHF) 接種於96孔細胞培養板(Nimclon)中。培養三天後，將本發明的三肽衍生物加入沒有FCS 的培養基中，對細胞再進行三天的培養。為測量Decorin的合成，進行酶聯免疫檢驗(EIA)。 簡言之用4%多聚甲醛(paraformaldehyde)固定細胞，用0. 5Triton_X100進行透化處理 (permeabiliz)，接著用5%脫脂奶對非特定的結合位點加以封閉。為針對Decorin進行染色，將細胞與山羊抗Decorin抗體(R&Dsystems) —起孵育，用兔抗山羊HRP綴合(Pierce) 二抗來檢測山羊抗Decorin抗體。加入底物後，在吸光度平板讀數儀(Multiskan Ascent, Thermolabsystems)中於 49&ιπι 測量 Decorin 的合成。實施例3研究三肽衍牛物對蛋白聚糖「Lumican」的合成的影響在正常人成纖維細胞(NHF)中測量Lumican的合成將正常人成纖維細胞(NHF) 接種於96孔細胞培養板(Nimclon)中。培養三天後，將本發明的三肽衍生物加入沒有FCS 的培養基中，對細胞再進行三天的培養。為測量Lumican的合成，進行酶聯免疫檢驗(EIA)。 簡言之用4%多聚甲醛(paraformaldehyde)固定細胞，用0. 5Triton_X100進行透化處理，接著用5%脫脂奶對非特定的結合位點加以封閉。為針對Lumican進行染色，將細胞與山羊抗 Lumican (L-20)抗體(Santa Cruz Biotechnology, sc-27718) —起孵育，用山羊抗小鼠HRP綴合(Pierce) 二抗來檢測山羊抗Lumican(L-20)抗體。加入底物後，在吸光度平板讀數儀(Multiskan Ascent，Thermolabsystems)中於 49&im 測量 Lumican 的合成。相對於由未經式(I)的三肽衍生物處理的細胞構成的對照(被設定為100% )來評估結果。TFA表示三肽衍生物以三氟乙酸鹽的形式存在。n. t.=未測試結果報導於下表中表 權利要求
1.通式(I)的三肽衍生物或其皮膚可耐受的鹽用於緊緻、緊實和/或保溼皮膚的用途，R1-A-B-C-R2(I)其中Rl表示棕櫚醯或十四烷基氨基羰基；R2表示OH或NH-十六烷基；A表示精氨醯、賴氨醯、鳥氨醯或2，4- 二氨基丁醯；B表示纈氨醯、亮氨醯、異亮氨醯或正纈氨醯，以及C表示精氨醯、賴氨醯或2，4- 二氨基丁醯，其中所述三肽衍生物選自 Palm-Lys-Val-Lys-OH、Palm-Orn-Val-Lys-OH, Palm-Lys-Leu-Lys—OH、Palm-Lys-Ile-Dab—OH、Palm-Lys-Nva-Dab-OHPalm-Lys-Leu-D ab-OH、Palm-Lys-Val-Dab-NH-十六燒基、十四燒基-NH-C (0) -Dab-Val-Dab-OH,十四烷基-NH-C (0) -Lys-Ile-Dab-OH、十四燒基-NH-C (0)-Arg-Val-Arg-OH。
2.根據權利要求1的用途，用於提緊皮膚、預防或減少皮膚松垂、保持或恢復皮膚的柔軟度和彈性、促進疤痕癒合、修復表皮微損傷和/或降低拉伸痕跡。
3.根據權利要求1或2的用途，其中A和C可以是相同的或不同的，並且具有賴氨醯或 2，4-二氨基丁醯的定義。
4.根據權利要求1-3中任意一項的用途，其中R2代表0H。
5.根據權利要求1-4中任意一項的用途，其中所述三肽衍生物是三氟乙酸鹽形式的十四烷基-NH-C (0) -Dab-Val-Dab-OH0
6.根據權利要求1-5中任意一項的用途，其中所述三肽衍生物中的所有胺基酸都是 L-構型的。
7.根據權利要求1-6中任意一項的用途，其中有效量的至少一種所述三肽衍生物被包含進還包含化妝品可接受的載體的局部組合物中。
8.根據權利要求7的用途，其中所述局部組合物還包含0.1至0.5重量％的透明質酸。
9.緊緻、緊實和/或保溼皮膚的方法，所述方法包括下述步驟將有效量的下述局部組合物應用至需要此類處理的受試者的皮膚，所述局部組合物包含有效量的權利要求1和 3-6中任意一項定義的三肽衍生物和化妝品可接受的載體。
10.根據權利要求9的方法，所述方法用於處理或聯合處理皮膚松垂、保持或恢復皮膚柔軟度和彈性、促進疤痕癒合、修復表皮微損傷或降低拉伸痕跡。
11.刺激成纖維細胞和/或角化細胞對含有D-葡糖胺和/或N-乙醯-D-葡糖胺殘基的葡糖胺聚糖的合成和/或對蛋白聚糖的合成的方法，所述方法包括向需要此類處理的個體施用有效量的至少一種對應於下式(I)的三肽衍生物或其皮膚可耐受的鹽R1-A-B-C-R2(I)，其中Rl是棕櫚醯或十四烷基氨基羰基；R2是OH或NH-十六烷基；A是精氨醯、賴氨醯、鳥氨醯或2，4-二氨基丁醯；B是纈氨醯、亮氨醯、異亮氨醯或正纈氨醯，以及，C是精氨醯、賴氨醯或2，4-二氨基丁醯。
12.根據權利要求11的方法，所述方法包括刺激對透明質酸的合成和/或對蛋白聚糖 Decorin 禾口 / 或 Lumican 的合成。
全文摘要
本發明涉及三肽衍生物用於緊緻、緊實和/或保溼皮膚的用途。此外，本發明涉及刺激成纖維細胞和/或角化細胞對含有D-葡糖胺和/或N-乙醯-D-葡糖胺的葡糖胺聚糖的合成和/或對蛋白聚糖的合成的方法，例如，刺激透明質酸的合成和/或蛋白聚糖Decorin和/或Lumican的合成。
文檔編號A61K8/64GK102355885SQ201080012521
公開日2012年2月15日 申請日期2010年3月16日 優先權日2009年3月16日
發明者多米尼克·伊菲爾德, 彼得·維克斯特羅姆, 胡戈·齊格勒, 艾克·沐勒, 裡莫·格拉優博, 馬克·海德爾 申請人:帝斯曼智慧財產權資產管理有限公司