一種b因子測定試劑盒及其製備方法
2023-10-10 14:17:29 2
一種b因子測定試劑盒及其製備方法
【專利摘要】本發明涉及一種醫療器材的【技術領域】，具體地說，涉及一種用於測定B因子含量的B因子測定試劑盒及其製備方法，包括試劑R和參考校準品，所述試劑R包括下述原料：5~300mmol/l磷酸鹽緩衝液、0.5~16mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、0.1~5g/l結合有抗人B因子抗體多克隆抗體的聚苯乙烯膠乳顆粒、濃度為1%的牛血清白蛋白、濃度為0.1%的脫脂奶粉、濃度為0.9%的疊氮化鈉和純化水；所述參考校準品包括下述原料：5-200mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩衝液、160-180mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、2~5mmol/l廣譜殺菌劑、重組人B因子純品和純化水。試劑為單一試劑，節約試劑位，內含的抗體效價高，親和力好，特異性強，穩定性好，批間差小，有效期長，試劑在2-8℃密閉避光可穩定貯存18個月，且靈敏度高，檢測精度高。
【專利說明】一種B因子測定試劑盒及其製備方法
[0001]【技術領域】:
本發明涉及一種醫療器材的【技術領域】，具體地說，涉及一種用於測定B因子含量的B因子測定試劑盒及其製備方法。
[0002]【背景技術】:
B因子是一種P1球蛋白，主要是由肝臟合成，是參與補體旁路活化的重要成分，參與機體防禦，在組織和細胞損傷和炎症過程中均起重要作用。B因子以及其它補體成分的代謝率很高，正常人血漿內的補體每天約有1/2更新。合成率與血漿中補體水平明顯相關，血漿補體值反映了合成和分解之間的平衡。在炎症時合成率增加，使補體值增高，而當某些疾病補體利用增加時，可使補體降低至正常範圍以下。臨床表明患腎小球腎炎、系統性紅斑狼瘡、慢性肝炎、肝硬化、蕁麻疹、風溼性心臟病，由於AP的激活，使B因子消耗，血清B因子含量低於正常人。而患妊娠高血壓綜合症、惡性腫瘤、甲狀腺功能亢進症等的患者B因子水平高於正常水平。反覆呼吸道感染急性階段，其含量也明顯升高。因此，人體血漿中B因子的測定對於了解旁路系統功能、腎小球腎炎的變化及分類、肝病、惡性腫瘤等皆有較大的價值，不僅如此，還可廣泛用於各種病原微生物，如病毒、細菌、真菌、支原體、立克次氏體、衣原體、螺旋體等及其抗體的檢測和疾病診斷，本發明介紹了一種靈敏度高，方便快捷易操作，效價高，親和力好的B因子測定試劑盒及其製備方法。
[0003]
【發明內容】
:
本發明要解決的技術問題是，提供一種靈敏度高，檢測精度高，應用範圍廣的B因子測定試劑盒及其製備方法。
[0004]為解決上述技術問題，本發明採用這樣一種B因子測定試劑盒:包括試劑R和參考校準品，所述試劑R包括下述原料:5~300mmOl/l磷酸鹽緩衝液、0.5^16mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、0.1~5δ/1結合有抗人B因子抗體多克隆抗體的聚苯乙烯膠乳顆粒、濃度為1%的牛血清白蛋白、濃度為0.1%的脫脂奶粉、濃度為0.9%的疊氮化鈉和純化水；所述參考校準品包括下述原料:5-200mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩衝液、160-180mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、2飛mmol/1廣譜殺菌劑、重組人B因子純品和純化水。
[0005]本發明與現有技術中的B因子測定試劑盒相比，具有以下優點:試劑為單一試劑，節約試劑位，內含的抗體效價高，親和力好，特異性強，穩定性好，批間差小，有效期長，試劑在2-8°C密閉避光可穩定貯存18個月，且靈敏度高，檢測精度高。
[0006]作為優選，所述結合有抗人B因子抗體多克隆抗體的納米微球直徑為50_150nm，成本較低，較為常見。
[0007]為解決上述技術問題，本發明採用這樣一種B因子測定試劑盒的製備方法:它包括以下步驟:1)、試劑R的製備，在5~300mmol/l磷酸鹽緩衝液中依次加入質量比為10:2^10:4的聚苯乙烯膠乳顆粒和B因子抗體，混合均勻，並在室溫下振蕩I小時，形成第一膠乳，此間配製好封閉液，在第一乳膠中加入封閉液封閉I小時，然後離心去上清，形成半成品試劑R，配製好第二膠乳，用第二膠乳稀釋半成品試劑R至濃度為0.25%，形成成品試劑R ;2)、參考校準品的製備，根據需要的濃度將5-200mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩衝液、160-180mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、2飛mmol/1廣譜殺菌劑、重組人B因子純品和純化水混合均勻即可形成成品參考校準品。
[0008]本發明與現有技術中的B因子測定試劑盒的使用方法相比，具有以下優點:樣本中的B因子和試劑中特異性的抗人B因子抗體多克隆抗體結合，形成抗原抗體複合物而產生濁度，其濁度高低與樣本中B因子含量成正比，通過測定特定波長的吸光度值，參照標準曲線即可計算出樣本中B因子的含量。操作簡單，適用於手工和自動化生化儀。採用多濃度校準品，定值可靠，使用方便，測定結果更可靠。對肝病患者檢測B因子比檢測C_4比C_3更優越，精度度好，批內CV ( 10.0%，批間CV ( 10.0%。
[0009]作為設置，所述封閉液包括下述原料:5?300mmol/l磷酸鹽緩衝液和1%的牛血清
白蛋白。
[0010]作為進一步設置，所述第二乳膠包括下述原料:5-300mmol/l磷酸鹽緩衝液、0.5"l6mmol/l乙二胺四乙酸二鈉濃度為0.1%的脫脂奶粉、濃度為0.9%的疊氮化鈉和純化水。
[0011]作為優選，所述抗人B因子抗體多克隆抗體包括羊抗抗人B因子抗體多克隆抗體或兔抗抗人B因子抗體多克隆抗體或鼠抗抗人B因子抗體多克隆抗體，成本較低，較為常見。
[0012]【專利附圖】
【附圖說明】:
圖1是本發明的一種B因子測定試劑盒的實施例一的樣本曲線圖；
圖2是本發明的一種B因子測定試劑盒的實施例二的樣本曲線圖；
圖3是本發明的一種B因子測定試劑盒的實施例三的樣本曲線圖；
【具體實施方式】:
下面結合具體實施例對本發明作進一步說明。
[0013]本發明的一種B因子測定試劑盒，包括試劑R和參考校準品，所述試劑R包括下述原料:5?300mmol/l磷酸鹽緩衝液、0.5?16mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、0.l?5g/l結合有抗人B因子抗體多克隆抗體的聚苯乙烯膠乳顆粒、濃度為1%的牛血清白蛋白、濃度為0.1%的脫脂奶粉、濃度為0.9%的置氣化納和純化水；
所述參考校準品包括下述原料:5-200mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩衝液、160-180mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、2飛mmol/1廣譜殺菌劑、重組人B因子純品和純化水。
[0014]所述結合有抗人B因子抗體多克隆抗體的納米微球直徑為50_150nm。
[0015]本發明的一種B因子測定試劑盒的製備方法，它包括以下步驟:1)、試劑R的製備，在5?300mmol/l磷酸鹽緩衝液中依次加入質量比為10:2?10:4的聚苯乙烯膠乳顆粒和B因子抗體，混合均勻，並在室溫下振蕩I小時，形成第一膠乳，此間配製好封閉液，在第一乳膠中加入封閉液封閉I小時，然後離心去上清，形成半成品試劑R，配製好第二膠乳，用第二膠乳稀釋半成品試劑R至濃度為0.25%，形成成品試劑R ;2)、參考校準品的製備，根據需要的濃度將5-200mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩衝液、160-180mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、2飛mmol/1廣譜殺菌劑、重組人B因子純品和純化水混合均勻即可形成成品參考校準品。
[0016]參考校準品實際為一種用來與樣本比較，進行結果計算的B因子溶液，包括5-200mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩衝液、160-180mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、2?5mmol/l廣譜殺菌劑以及根據濃度要求確定的一定量的重組人B因子純品，其餘為純化水；將重組人B因子純品加入上述溶液中，獲得所需濃度的B因子參考校準品(該B因子參考校準品為添加重組人B因子純品的人血清或其它類似血清基質的液體)。B因子參考校準品的濃度可以是高濃度單點參考校準品，在使用時用生理鹽水稀釋成多個不同濃度的參考校準品；也可以直接製備成多個不同濃度的參考校準品。這裡沒有特別的限制，只要製得的B因子參考校準品能夠與樣本比較，能夠測定樣本中B因子的含量即可。
[0017]實施例一:
在lOOmmol/1磷酸鹽緩衝液中依次加入質量比為10:2的聚苯乙烯膠乳顆粒和B因子抗體，混合均勻，並在室溫下振蕩I小時，形成第一膠乳，此間配製好封閉液(所述封閉液包括下述原料:100mmol/l磷酸鹽緩衝液和1%的牛血清白蛋白)，在第一乳膠中加入封閉液封閉I小時，然後離心去上清，形成半成品試劑R，配製好第二膠乳(所述第二乳膠包括下述原料:100mmol/l磷酸鹽緩衝液、16mmol/l乙二胺四乙酸二鈉濃度為0.1%的脫脂奶粉、濃度為
0.9%的疊氮化鈉和純化水)，用第二膠乳稀釋半成品試劑R至濃度為0.25%，形成成品試劑R ;根據需要的濃度將lOOmmol/1三羥甲基氨基甲烷緩衝液、160mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、5mmol/l廣譜殺菌劑、重組人B因子純品和純化水混合均勻即可形成成品參考校準品。
[0018]採用本實施例對樣本進行測定，所得B因子的測定值與對照試劑盒(ELISA法)測定值進行比較(參見圖1，並進行回歸分析)；獲得相關性r2=0.9999 ;顯示出本實施例與對照試劑盒(ELISA法)具有良好的相關性。
[0019]實施例二:
在300mmol/l磷酸鹽緩衝液中依次加入質量比為10:4的聚苯乙烯膠乳顆粒和B因子抗體，混合均勻，並在室溫下振蕩I小時，形成第一膠乳，此間配製好封閉液(所述封閉液包括下述原料:300mmol/l磷酸鹽緩衝液和1%的牛血清白蛋白)，在第一乳膠中加入封閉液封閉I小時，然後離心去上清，形成半成品試劑R，配製好第二膠乳(所述第二乳膠包括下述原料:300mmol/l磷酸鹽緩衝液、lOmmol/1乙二胺四乙酸二鈉濃度為0.1%的脫脂奶粉、濃度為
0.9%的疊氮化鈉和純化水)，用第二膠乳稀釋半成品試劑R至濃度為0.25%，形成成品試劑R ;根據需要的濃度將200mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩衝液、180mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、2mmol/l廣譜殺菌劑、重組人B因子純品和純化水混合均勻即可形成成品參考校準品。
[0020]採用本實施例對樣本進行測定，所得B因子的測定值與對照試劑盒(ELISA法)測定值進行比較(參見圖2，並進行回歸分析)；獲得相關性r2=0.9994;顯示出本實施例與對照試劑盒(ELISA法)具有良好的相關性。
[0021]實施例三:
在200mmol/l磷酸鹽緩衝液中依次加入質量比為10:3的聚苯乙烯膠乳顆粒和B因子抗體，混合均勻，並在室溫下振蕩I小時，形成第一膠乳，此間配製好封閉液(所述封閉液包括下述原料:200mmol/l磷酸鹽緩衝液和1%的牛血清白蛋白)，在第一乳膠中加入封閉液封閉I小時，然後離心去上清，形成半成品試劑R，配製好第二膠乳(所述第二乳膠包括下述原料:200mmol/l磷酸鹽緩衝液、12mmol/l乙二胺四乙酸二鈉濃度為0.1%的脫脂奶粉、濃度為
0.9%的疊氮化鈉和純化水)，用第二膠乳稀釋半成品試劑R至濃度為0.25%，形成成品試劑R ;根據需要的濃度將150mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩衝液、170mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、4mmol/l廣譜殺菌劑、重組人B因子純品和純化水混合均勻即可形成成品參考校準品。
[0022]採用本實施例對樣本進行測定，所得B因子的測定值與對照試劑盒(ELISA法)測定值進行比較(參見圖3，並進行回歸分析)；獲得相關性r2=0.9997;顯示出本實施例與對照試劑盒(ELISA法)具有良好的相關性。
[0023]用對照試劑盒測出標本的值作為預期濃度值，本發明的試劑盒測定的值作為測定濃度值，共測定若干標本，用這若干標本的2組測定數據做散點圖，即本發明涉及的三個附圖。
[0024]本發明的測定條件及步驟:
【權利要求】
1.一種B因子測定試劑盒，包括試劑R和參考校準品，其特徵在於，所述試劑R包括下述原料:5~300mmol/l磷酸鹽緩衝液、0.5^16mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、0.1^5g/l結合有抗人B因子抗體多克隆抗體的聚苯乙烯膠乳顆粒、濃度為1%的牛血清白蛋白、濃度為0.1%的脫脂奶粉、濃度為0.9%的疊氮化鈉和純化水； 所述參考校準品包括下述原料:5-200mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩衝液、160-180mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、2飛mmol/1廣譜殺菌劑、重組人B因子純品和純化水。
2.根據權利要求1所述的一種B因子測定試劑盒，其特徵在於，所述試劑R包括下述原料:8(T250mmOl/l磷酸鹽緩衝液、5~lOmmol/1乙二胺四乙酸二鈉、2~5g/l結合有抗人B因子抗體多克隆抗體的聚苯乙烯膠乳顆粒、濃度為1%的牛血清白蛋白、濃度為0.1%的脫脂奶粉、濃度為0.9%的疊氮化鈉和純化水；所述參考校準品包括下述原料:30-150mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩衝液、165-170mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、3~4mmol/l廣譜殺菌劑、重組人B因子純品和純化水。
3.根據權利要求1所述的一種B因子測定試劑盒，其特徵在於，所述結合有抗人B因子抗體多克隆抗體的納米微球直徑為50-150nm。
4.一種B因子測定試劑盒的製備方法，其特徵在於，它包括以下步驟:1)、試劑R的製備，在5~300mmol/l磷酸鹽緩衝液中依次加入質量比為10:2~10:4的聚苯乙烯膠乳顆粒和抗人B因子抗體多克隆抗體，混合均勻，並在室溫下振蕩I小時，形成第一膠乳，此間配製好封閉液，在第一乳膠中加入封閉液封閉I小時，然後離心去上清，形成半成品試劑R，配製好第二膠乳，用第二膠乳稀釋半成品試劑R至濃度為0.25%，形成成品試劑R ;2)、參考校準品的製備，根據需要的濃度將5-200mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩衝液、160-180mmol/l乙二胺四乙酸二鈉、2飛mmol/1 廣譜殺菌劑、重組人B因子純品和純化水混合均勻即可形成成品參考校準品。
5.根據權利要求4所述的一種B因子測定試劑盒的製備方法，其特徵在於，所述封閉液包括下述原料:5~300mmol/l磷酸鹽緩衝液和1%的牛血清白蛋白。
6.根據權利要求4所述的一種B因子測定試劑盒的製備方法，其特徵在於，所述第二乳膠包括下述原料:5-300mmol/l磷酸鹽緩衝液、0.5^16mmol/l乙二胺四乙酸二鈉濃度為0.1%的脫脂奶粉、濃度為0.9%的疊氮化鈉和純化水。
7.根據權利要求4所述的一種B因子測定試劑盒的製備方法，其特徵在於，所述抗人B因子抗體多克隆抗體包括羊抗抗人B因子抗體多克隆抗體或兔抗抗人B因子抗體多克隆抗體或鼠抗抗人B因子抗體多克隆抗體。
【文檔編號】G01N33/68GK103743912SQ201310747985
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年12月31日 優先權日:2013年12月31日
【發明者】黃益峰 申請人:浙江愛康生物科技有限公司