穿破石配方顆粒的質量檢測方法
2023-10-11 22:44:34
專利名稱：穿破石配方顆粒的質量檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測方法，具體的說，是穿破石配方顆粒的質量檢測方法，屬於化學檢測領域。
背景技術：
穿破石配方顆粒是桑科植物小柘樹的根經加工製成的顆粒，味淡，性涼，具有祛風利溼，活血通經之功效，主要用於治療風溼關節疼痛，黃疸，淋濁，蠱脹，閉經，勞傷咳血，跌打損傷，疔瘡癰腫等。與傳統的中藥煎劑相比，其具有免煎易服，易儲存，攜帶方便等優點。《中國藥典》2010年版一部並未收載穿破石藥材品種，而中藥配方顆粒經過一系列工序的加工後已不具藥材的外形特徵，性狀鑑別亦明顯不適用於中藥配方顆粒。薄層色譜法操作簡單，方便，適用於中藥材及各種中藥製劑的定性鑑別，高效液相色譜法則適用於各種製劑的含量測定。穿破石配方顆粒中含黃酮類化合物，其中有槲皮素和山奈素，本發明旨在建立一種穿破石配方顆粒的薄層色譜鑑別方法及同時測定槲皮素與山奈素含量的高效液相色譜 方法，該方法可用於穿破石配方顆粒的質量控制，對保證產品質量的穩定性及臨床用藥的有效性與安全性具有重要意義。
發明內容
本發明的目的在於提供一種穿破石配方顆粒的質量檢測方法，先採用薄層色譜鑑別成分，再採用高效液相色譜測定含量，該方法準確，靈敏度高，精密度、穩定性好。本發明的技術方案是這樣的一種穿破石配方顆粒的質量檢測方法，依次包括下述步驟1)薄層色譜鑑別成分；2)高效液相色譜測定含量；其中，步驟I)所述的薄層色譜鑑別取本品粉末0. 5g,加乙醚30ml,加熱回流25 35分鐘；濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取穿破石對照藥材5g,加水50ml,煮沸30分鐘,濾過,濾液加乙醚30ml振搖提取，同法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2 u 1，分別點於同一矽膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的藍色、綠色螢光斑點；步驟2)所述的高效液相含量測定首先製備對照品溶液，分別精密稱取槲皮素對照品、山奈素對照品適量，加甲醇製成每I ml含槲皮素16y g、山奈素38y g的混合溶液，即得；再製備供試品溶液，取本品粉末約0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定方法分別精密吸取對照品溶液3 yl，供試品溶液10 yl，注入液相色譜儀，以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以甲醇-0. 4%磷酸為流動相，DAD檢測器檢測，檢測波長367nm,柱溫30°C,流速lml/min ;測定。
上述的一種穿破石配方顆粒的質量檢測方法，其中，步驟I)所述的甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸的質量比為14 : 4 : I : 2。上述的一種穿破石配方顆粒的質量檢測方法，其中，步驟2)所述的甲醇與0. 4%磷酸的質量比為53 47。與現有技術相比，本發明的優點在於該方法簡單、準確，靈敏度高，精密度、穩定性好，採用HPLC法同時測定穿破石配方顆粒中槲皮素和山奈素的含量，峰形好，分離度高，可作為穿破石配方顆粒的質量控制和考察工藝穩定性的有效技術手段，對提高產品質量具有重要意義。
圖I是本發明的穿破石配方顆粒薄層色譜圖； 圖2是本發明的穿破石配方顆粒高效液相色譜圖。其中對照藥材試驗薄層色譜圖Al ;供試品第一次試驗薄層色譜圖B2 ;供試品第二次試驗薄層色譜圖C3 ;供試品第三次試驗薄層色譜圖D4 ;供試品第四次試驗薄層色譜圖E5 ;點樣點11 ;綠色點22 ;藍色點31 ;對照品HPLC色譜圖A ;供試品HPLC色譜圖B ;槲皮素峰I ;山奈素峰2。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
，對本發明做進一步的詳細說明，但不構成對本發明的任何限制，任何人在本發明的權利要求範圍內所做出的非實質性改變，仍在本發明的權利要求保護範圍內。本發明的所提供的穿破石配方顆粒的質量檢測，依次包括下述步驟1)薄層色譜鑑別成分；2)高效液相色譜測定含量；薄層鑑別方法本品粉末0. 5g，加乙醚30ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取穿破石對照藥材5g，加水50ml，煮沸30分鐘，濾過，濾液加乙醚30ml振搖提取，同法製成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2 yl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(14:4:1:2)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視，參閱圖1，在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的藍色、綠色螢光斑點，其中，對照藥材檢測結果是對照藥材試驗薄層色譜圖Al ;供試品第一次試驗薄層色譜圖B2 ;供試品第二次試驗薄層色譜圖C3 ;供試品第三次試驗薄層色譜圖D4 ;供試品第四次試驗薄層色譜圖E5 ;點樣點11 ;綠色點22 ;藍色點31。含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VID)測定。參閱圖2，其中，A對照品HPLC色譜圖；B供試品HPLC色譜圖；槲皮素峰I ;山奈素峰2 I、儀器與試藥(I)儀器Agilent 1100高效液相色譜儀，DAD檢測器，四元梯度泵，G2170AA數據
處理系統。(2)試藥甲醇為色譜純試劑(一級)，水為雙蒸水，其它試劑均為分析純。槲皮素對照品(批號100081-200406)、山奈素對照品(批號110861-200808)購於中國藥品生物製品檢定所。2、實驗條件色譜條件色譜柱AgilentZorbax Eclipse C18 (4. 6mmX 250mm, 5 U m)柱；流動相甲醇-0. 4%磷酸(53 Al);檢測波長367nm ;柱溫:30°C，流速:lml/min。3、方法學考察(I)線性範圍的考察分別精密吸取混合對照品溶液(每I ml含槲皮素16. 06ii g、山奈素38. 74ii g)iia、2ia、3ia、4ia、5ia，注入液相色譜儀進行色譜測定，按上述色譜條件測定峰面積，並以峰面積(Y)對進樣量(X)進行線性回歸，得標準曲線。槲皮素Y=3926. 00975X+1. 3622482, r=0. 99998 ； 山奈素 Y=3944. 48166X+1. 6999878, r=0. 99998 ；表明槲皮素在16. 06 80. 30ng、山奈素在38. 74 193. 70ng範圍內呈線性關係，結果見表1-2。表I槲皮素對照品測定結果
進樣量(ng)~16. 06~~32. 12~~48. 18~~64. 24~~80. 30
峰面積64. 30 127. 37 190.43 254.48 316.00表2山奈素對照品測定結果
進樣量(ng) ~38. 74~~TL 48~~116.22 ~154.96 ~193. 70 峰面積153.79 307.29 461. 58 612.98 764.99(2)精密度試驗精密吸取對照品溶液3 yl，重複進樣6次，測得峰面積積分值RSD均〈2%，結果見表3。表3精密度試驗結果
試驗次數槲皮素峰面積積分值山奈素峰面積積分值~
~I190.32465.12
~2192.41468.13
3193. 11460.60
~189. 50460.80
5193.43469.90
6195.62475. 50
權利要求
1.一種穿破石配方顆粒的質量檢測方法，其特徵在於，依次包括下述步驟1)薄層色譜鑑別成分；2)高效液相色譜測定含量； 其中，步驟I)所述的薄層色譜鑑別成分取本品粉末0. 5g，加乙醚30ml，加熱回流25 35分鐘；濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取穿破石對照藥材5g,加水50ml,煮沸30分鐘,濾過,濾液加乙醚30ml振搖提取，同法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2 u 1，分別點於同一矽膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的藍色、綠色螢光斑點； 步驟2)所述的高效液相含量測定，首先製備對照品溶液，分別精密稱取槲皮素對照品、山奈素對照品適量，加甲醇製成每Iml含槲皮素16 y g、山奈素38 y g的混合溶液，即得；再製備供試品溶液取本品粉末約0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得； 測定方法分別精密吸取對照品溶液3 ill、供試品溶液10 iil，注入液相色譜儀，以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以甲醇-0.4%磷酸為流動相，DAD檢測器檢測，檢測波長367nm,柱溫30°C,流速lml/min ;測定。
2.根據權利要求I所述的穿破石配方顆粒的質量檢測方法，其特徵在於，步驟I)所述的甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸的質量比為14:4:1 :2。
3.根據權利要求I所述的穿破石配方顆粒的質量檢測方法，其特徵在於，步驟2)所述的甲醇與0. 4%磷酸的質量比為53 -Al.
全文摘要
本發明公開一種穿破石配方顆粒的質量檢測方法，旨在提供一種測量結果準確，靈敏度高，精密度、穩定性好的質量檢測方法；其技術要點是該方法依次包括下述步驟1)薄層色譜鑑別成分；2)高效液相色譜測定含量；其中，步驟1)所述的薄層色譜鑑別成分分別製備供試品溶液和對照藥材溶液，分別點於同一矽膠G薄層板上，置紫外光燈下檢視；步驟2)所述的高效液相含量測定，分別製備對照品溶液和供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液3μl、供試品溶液10μl，注入液相色譜儀檢測；屬於化學檢測技術領域。
文檔編號G01N30/90GK102707006SQ20121017518
公開日2012年10月3日 申請日期2012年5月30日 優先權日2012年5月30日
發明者劉法錦, 孫冬梅, 畢曉黎, 塗瑤生, 程學仁 申請人:劉法錦, 孫冬梅, 畢曉黎, 塗瑤生, 程學仁