一株葡糖桿菌及其應用的製作方法
2023-09-22 20:30:15 1
一株葡糖桿菌及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明提供一種氧化葡糖桿菌（Gluconobacter oxydans）的菌株，其中，該菌株的保藏號為CGMCC NO.8039。另一方面，本發明還提供了一種菌劑，其中，所述菌劑含有如上所述的菌株的活菌體和培養基。另一方面，本發明還提供了如上所述的菌株和/或菌劑在防治果實病蟲害中的用途。再一方面，本發明還提供了一種防治果實病蟲害的方法，其中，該方法包括：將含有如上所述的菌株的活菌體的菌劑與果實接觸。通過上述技術方案，本發明能夠有效地實現對果實病蟲害的防治，並且不會有有害化學物質的殘留。
CGMCC NO8039
20130816
【專利說明】一株葡糖桿菌及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及農業生物【技術領域】，具體地，涉及一種氧化葡糖桿菌（Gluconobacter oxydans)的菌株、含有該菌株的菌劑、該菌株和菌劑的用途以及一種防治果實病蟲害的方 法。
【背景技術】
[0002] 果品貯藏保鮮是農業生產的延續。隨著生活水平的提高，大眾對健康和環境問題 日益重視，對果實品質的要求也越來越高，綠色食品迅速普及。因此，尋找安全有效的技術 對果實進行採後防腐、殺菌，對果實保鮮十分重要。
[0003] 病蟲害是誘發果實腐敗的主要因素，因此防治果實病蟲害對果實的貯藏至為關 鍵。目前用於防治果實病蟲害的方法大多通過化學藥品浸泡法來實現，但是化學藥品浸泡 容易殘留對人體有害的物質，因此存在不夠安全有效的缺陷。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是克服化學藥品浸泡法來防治果實病蟲害時存在的不夠安全有效 的缺陷，提供一種更加安全有效的微生物生物防治果實病蟲害的方法。
[0005] 為了實現上述目的，一方面，本發明提供一種氧化葡糖桿菌（Gluconobacter oxydans)的菌株，其中，該菌株的保藏號為CGMCC NO. 8039。
[0006] 另一方面，本發明還提供了一種菌劑，其中，所述菌劑含有如上所述的菌株的活菌 體和培養基。
[0007] 另一方面，本發明還提供了如上所述的菌株和/或菌劑在防治果實病蟲害中的用 途。
[0008] 再一方面，本發明還提供了一種防治果實病蟲害的方法，其中，該方法包括：將含 有如上所述的菌株的活菌體的菌劑與果實接觸。
[0009] 通過上述技術方案，本發明能夠有效地實現對果實病蟲害的防治，並且不會有有 害化學物質的殘留。
[0010] 本發明的其他特徵和優點將在隨後的【具體實施方式】部分予以詳細說明。
[0011] 生物保藏
[0012] 本發明的菌株，分類命名為氧化葡糖桿菌（Gluconobacter oxydans),是本發明的 發明人從北京葡萄園區果實上分離的，於2013年08月16日保藏於中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心，地址位於北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏號為CGMCC NO. 8039。該菌株的生物學性狀包括：菌體大小為（0. 5-0. 8) X (0. 9-4. 2) μ m，單獨或成對 出現，鮮少鏈狀，不形成內胞，屬於革蘭氏陰性菌；菌落呈白至黃色，有時略呈褐色，為圓形， 凸狀，邊緣完整，直徑約為3_。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0013] 附圖是用來提供對本發明的進一步理解，並且構成說明書的一部分，與下面的具 體實施方式一起用於解釋本發明，但並不構成對本發明的限制。在附圖中：
[0014] 圖1是本發明的氧化葡糖桿菌在PDA培養基上25 °C下72小時後的菌落形態照片。
[0015] 圖2是本發明的氧化葡糖桿菌在Yro培養基上25 °C下72小時後的菌落形態照片。
[0016] 圖3是本發明的氧化葡糖桿菌在PDA培養基上對蘋果灰黴病菌（Botrytis cinerea)的典型的抑制效果圖。
[0017] 圖4是本發明的氧化葡糖桿菌在PDA培養基上對桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)的典型的抑制效果圖。
[0018] 圖5是本發明的氧化葡糖桿菌在PDA培養基上對芽孢桿菌（Bacillus sp.)病菌 的典型的抑制效果圖。
[0019] 圖6是本發明的氧化葡糖桿菌在PDA培養基上對芽孢桿菌（Bacillus sp.)病菌 的典型的抑制效果圖。
[0020] 圖7是本發明的氧化葡糖桿菌在PDA培養基上對黑根黴菌（Rhizopus nigricans) 的典型的抑制效果圖，其中圖7 (A)是不加入本發明的氧化葡糖桿菌的對照，圖7 (B)是加 入本發明的氧化葡糖桿菌的處理。
【具體實施方式】
[0021] 以下結合附圖對本發明的【具體實施方式】進行詳細說明。應當理解的是，此處所描 述的【具體實施方式】僅用於說明和解釋本發明，並不用於限制本發明。
[0022] 在本發明中，在未作相反說明的情況下，使用的液體的數值均為20°C下的數值。本 發明中，Yro培養基、LB培養基和PDA培養基是微生物培養中常規使用的培養基，它們的組 成可以為教科書(例如焦瑞身，微生物工程，化學工業出版社，2003)中的說明。
[0023] 本發明提供了一種氧化葡糖桿菌(Gluconobacter oxydans)的菌株，其中，該菌株 的保藏號為CGMCC NO. 8039。
[0024] 本發明還提供了一種菌劑，其中，所述菌劑含有如上所述的菌株的活菌體和培養 基。
[0025] 其中，如上所述的菌株的活菌體在所述菌劑中的含量沒有特別的要求，只要維持 活菌體的存活狀態即可，例如可以為l〇 5-l〇lclCFU/mL。
[0026] 其中，所述培養基可以為能夠培養氧化葡糖桿菌的各種培養基，例如YH)培養基、 LB培養基和PDA培養基中的至少一種，例如可以為含有10-20g/L的葡萄糖、50-200g/L的 馬鈴薯和10-20g/L的酵母提取物的培養基。
[0027] 本發明還提供了如上所述的菌株和/或菌劑在防治果實病蟲害中的用途。
[0028] 本發明還提供了一種防治果實病蟲害的方法，其中，該方法包括：將含有如上所述 的菌株的活菌體的菌劑與果實接觸。
[0029] 其中，如上所述的菌株的活菌體在所述菌劑中的含量可以為105-101(lCFU/mL。
[0030] 其中，接觸的方式可以為浸泡；浸泡的時間可以為30-60秒。
[0031] 其中，該方法還可以包括，將接觸後的果實置於貯藏條件下，所述貯藏條件可以為 常規的貯藏條件，例如貯藏條件可以包括：溫度為1_5°C，相對溼度為90-95%。
[0032] 其中，所述果實可以包括蘋果、梨、草莓、桃和葡萄中的至少一種；引起果實病蟲害 的真菌可以包括番爺灰黴病菌（Botrytis cinerea)、葡萄灰黴病菌（Botrytis cinerea)、 葡萄霜黴病菌（Plasmopara uiticola(Berk, dt Curtis))、葡萄白粉病菌（Uncinula necator)、梨青黴病菌（Penicillium expansum)、蘋果灰黴病菌（Botrytis cinerea)、 蘋果青黴病菌（Penicillium expansum (Link) Thom)、辣椒炭疽病菌（Gloeosporium piperatum)、番爺枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. Lycopersici Snyder et Hansen)、 桃褐腐病菌（Monilinia fructicola)、桃褐腐病菌（Monilinia laxa)、桃褐腐病菌 (Monilinia fructigena)、搜桃褐腐病菌（Monilinia fructicola)、黑麴黴（Aspergillus niger)、柑橘綠黴病菌（Ρ· digitatum(Fr.) Sail)、柑橘青黴病菌（Penicillium italicum) 和甘藍枯萎病菌（Fusarium oxysporum)中的至少一種；引起果實病蟲害的線蟲包括秀麗隱 杆線蟲（Caenorhabditis elegans)和 / 或南方根結線蟲（Meloidogyne incognita)。
[0033] 以下將結合實施例進一步說明本發明。
[0034] 實施例1
[0035] 配製培養基，成分為20g/L的葡萄糖、50g/L的馬鈴薯和10g/L的酵母提取物。
[0036] 將保藏號為CGMCC NO. 8039的氧化葡糖桿菌接種並培養在上述培養基中，直至菌 體濃度為109CFU/mL，得到菌劑。
[0037] 該菌株的典型的菌落圖照片如圖1和圖2所示。
[0038] 實施例2
[0039] 使用保藏號為CGMCC NO. 8039的氧化葡糖桿菌，對番茄灰黴病菌（Botrytis cinerea)、葡萄灰黴病菌（Botrytis cinerea)、葡萄霜黴病菌（Plasmopara uiticola(Berk.dt Curtis))、葡萄白粉病菌（Uncinula necator)、梨青黴病 菌（Penicillium expansum)、蘋果灰黴病菌（Botrytis cinerea)、蘋果青黴病菌 (Penicillium expansum (Link) Thom)、辣椒炭疽病菌（Gloeosporium piperatum)> # 爺枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. Lycopersici Snyder et Hansen)、桃褐腐病 菌（Monilinia fructicola)、桃褐腐病菌（Monilinia laxa)、桃褐腐病菌（Monilinia fructigena)、搜桃褐腐病菌（Monilinia fructicola)、黑麴黴（Aspergillus niger)、柑橘 綠黴病菌（P. digitatum (Fr.) Sail)、柑橘青黴病菌（Penicillium italicum)和甘藍枯萎病 菌（Fusarium oxysporum),以及秀麗隱杆線蟲（Caenorhabditis elegans)和/或南方根結 線蟲（Meloidogyne incognita)進行抑菌效果的檢測，得到如表1所示的結果。
[0040] 其中，選擇桃米後褐腐病病囷、等果米後灰黴病囷、等果米後青黴病囷等為指不真 菌，採用平板對峙培養法和果實體內人為打孔接種法。
[0041] 平板對峙培養法具體操作如下：保藏號為CGMCC NO. 8039的氧化葡糖桿菌菌株在 PDA培養基上25°C恆溫培養48h。植物病原真菌在PDA平板上25°C恆溫培養3-4天，自菌 落邊緣用直徑〇. 7cm無菌不鏽鋼打孔器打制帶菌瓊脂片；用無菌接種針挑取病原菌菌片， 菌絲面朝下接種於PDA平板中心處，同時在距病原真菌菌片兩側均約3. OOcm處用無菌接種 環劃線保藏號為CGMCC NO. 8039的氧化葡糖桿菌，以僅接病原菌的平板為對照，每個處理三 次重複，25°C恆溫培養5-7天，測量病原真菌邊緣與保藏號為CGMCC NO. 8039的氧化葡糖杆 菌的菌落帶寬中心之間的抑菌帶寬度。
[0042] 果實體內人為打孔接種法具體操作（以防治蘋果採後灰黴病為例進行說明）如下： 保藏號為CGMCC NO. 8039的氧化葡糖桿菌菌株在液體培養基上28°C恆溫培養48h，用蒸 餾水調至菌液濃度為5 X 107CFU/ml，得到抗病菌液。蘋果灰黴病菌B. cinerea在PDA平板上 25°C恆溫培養5-7天，收集灰黴菌孢子，用蒸餾水製成5 X IO4CFUAiI的孢子懸浮液；成熟的 蘋果，先用0. 5%次氯酸鈉消毒之後，用滅過菌的移液器槍頭，沿著蘋果腰部插孔，每個果子 扎孔3個，每個孔為30mmX 30mm。每孔接種30 μ 1抗病菌液，室溫晾乾，然後再接種30 μ 1 的病原菌孢子懸浮液。最後，處理的果子放置於25°C下，5-7天後，測定果實腐爛斑大小。腐 爛斑小於IOmm被視為不發病。根據腐爛病斑的佔總接種孔數的多少，計算發病率，未發病 的病斑數佔總接種孔數的多少，計算病斑抑制率。
[0043] 其中，對蘋果灰黴病菌（Botrytis cinerea)、桃褐腐病菌（Monilinia fructicola)、芽孢桿菌（Bacillus sp.)和黑根黴菌（Rhizopus nigricans)的典型的抑制 效果圖如圖3、4、5、6和7所示。
[0044] 表I. CGMCC NO. 8039的氧化葡糖桿菌對不同病原菌的抑制效果
[0045]
【權利要求】
1. 一種氧化葡糖桿菌（Gluconobacter oxydans)的菌株，其特徵在於，該菌株的保藏號 為 CGMCC NO. 8039。
2. -種菌劑，其特徵在於，所述菌劑含有權利要求1所述的菌株的活菌體和培養基。
3. 根據權利要求2所述的菌劑，其中，權利要求1所述的菌株的活菌體在所述菌劑中的 含量為 105-101QCFU/mL。
4. 根據權利要求2或3所述的菌劑，其中，所述培養基含有10-20g/L的葡萄糖、 50-200g/L的馬鈴薯和10-20g/L的酵母提取物。
5. 權利要求1所述的菌株和/或權利要求2-4中任意一項所述的菌劑在防治果實病蟲 害中的用途。
6. -種防治果實病蟲害的方法，其特徵在於，該方法包括：將含有權利要求1所述的菌 株的活菌體的菌劑與果實接觸。
7. 根據權利要求6所述的方法，其中，所述的菌株的活菌體在所述菌劑中的含量為 105-1010CFU/mL。
8. 根據權利要求6或7所述的方法，其中，接觸的方式為浸泡；浸泡的時間為30-60秒。
9. 根據權利要求6所述的方法，其中，該方法還包括，將接觸後的果實置於貯藏條件 下，所述貯藏條件包括：溫度為1_5°C，相對溼度為90-95%。
10. 根據權利要求6所述的方法，其中，所述果實包括蘋果、梨、草莓、桃和葡萄中的 至少一種；引起果實病蟲害的真菌包括番爺灰黴病菌（Botrytis cinerea)、葡萄灰黴病 菌（Botrytis cinerea)、葡萄霜黴病菌（Plasmopara uiticola(Berk.dt Curtis))、葡 萄白粉病菌（Uncinula necator)、梨青黴病菌（Penicillium expansum)、蘋果灰黴病菌 (Botrytis cinerea)、蘋果青黴病菌（Penicillium expansum (Link) Thom)、辣椒炭疽病 菌（Gloeosporium piperatum)、番爺枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. Lycopersici Snyder et Hansen)、桃褐腐病菌（Monilinia fructicola)、桃褐腐病菌（Monilinia laxa)、桃褐腐病菌（Monilinia fructigena)、搜桃褐腐病菌（Monilinia fructicola)、 黑麴黴（Aspergillus niger)、柑橘綠黴病菌（P. digitatum(Fr.) Sail)、柑橘青黴病菌 (Penicillium italicum)和甘藍枯萎病菌（Fusarium oxysporum)中的至少一種；弓丨起 果實病蟲害的線蟲包括秀麗隱杆線蟲（Caenorhabditis elegans)和/或南方根結線蟲 (Meloidogyne incognita)。
【文檔編號】C12R1/01GK104371943SQ201410038325
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年1月26日 優先權日:2014年1月26日
【發明者】全利紅 申請人:北京綠環國際科技有限公司