積雪草苷在抗肺纖維化方面的新應用的製作方法

2023-10-17 06:53:29 3

專利名稱：：積雪草苷在抗肺纖維化方面的新應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及積雪草苷的藥物用途，特別涉及一種積雪草苷在抗肺纖維化方面的新應用、即在製備抗放射性肺纖維化的藥物中的應用。
背景技術：
：肺纖維化是一類臨床上現通常稱為間質性肺病或肺間質性肺病共有的一種最終的嚴重病理特徵。間質性肺病可包括原發於肺的、伴隨系統性風溼病發生的、藥物或放射等治療引起的、伴隨環境或職業發生的、伴隨肺血管發生的、肺泡淤積性疾病和遺傳性疾病等七大類。不同病因引起肺纖維化的具體機理尚不清楚，其具有共同的特性是起先由各種原因所致的炎症損傷正常的肺泡結構，即產生肺泡炎；代之以膠原疤痕組織累積修復該損傷，即產生纖維化而使肺組織逐漸喪失正常呼吸功能，產生呼吸困難、缺氧等臨床症狀，最終至呼吸衰竭。目前認為，肺泡炎可能自限或經治療而好轉或痊癒，但組織纖維化卻無法逆轉，甚至繼續發展。故而延緩或阻止纖維化的發展，是治療肺纖維化的重點。然而，由於肺纖維化是個複雜的病理過程，不同病因所致的肺纖維化的發病機理也可能有差異，從而治療也可能存在不同。目前臨床上使用糖皮質激素、免疫抑制劑等對一些病因引起的肺間質性疾病治療有一定的效果，但主要針對急性肺泡炎期，而對於慢性期、特別是纖維增生期則療效不明顯，且這些藥物副作用大，不宜長時期用藥。而對於藥物或放射線治療引起的肺纖維化，現通常認為應及時停止相應治療，如發展至纖維化則難以逆轉。另一方面，近年來，由於肺癌、食道癌等胸部腫瘤發病率較高，諸如鈷60(Co6Q)、電子束等放射治療是這些腫瘤疾病的重要治療手段。然而，放射線可以引起放射性肺炎，乃至肺纖維化。因此大大制約了肺癌、食道癌等的放射治療劑量及療程，影響了抗腫瘤效果；而一旦出現放射性肺纖維化，則目前尚無明確療效的藥物治療，反而使腫瘤病人產生新的疾病，甚至成為其死因。積雪草苷(Asiaticoside)，又稱亞細亞皂苷、積雪苷、積雪草甙等，其是從中草藥積雪草[Centellaasiatica(L.)Urb.]中提取的一種皂苷類化合物，分子式為C48H78019。本申請人公開號為CN1439376A的專利申請中公開了積雪草苷在製備抗藥物(博萊黴素)性肺纖維化藥物中的應用，顯示在肺纖維化大鼠前4周有一定療效。但未揭示其具體抗纖維化機理。因此，尚需進一步試驗證明其是否也適用於放射性肺纖維化的治療。
發明內容本發明要解決的技術問題即是上述課題，提供一種積雪草苷在抗肺纖維化方面的新應用、即在製備抗放射性肺纖維化的藥物中的應用。本發明所說的積雪草苷(Asiaticoside)，其提取方法可參見現有技術，如上述本申請人的專利申請文件，也可商業購得。本發明採用積雪草苷粉口服(ig)3個月對鈷60輻照所致肺纖維化的大鼠進行治療試驗，結果顯示經積雪草苷粉治療後，肺重量指數比有所下降，積雪草苷粉36mg/kg組與模型組比較有明顯減輕;積雪草苷粉4、12、36mg/kg三種劑量均能明顯降低上述大鼠肺纖維化時肺組織羥脯氨酸的含量，與糖皮質激素陽性藥(地塞米松)組結果相似，但各劑量組之間無明顯差異。另外，目前研究發現在組織纖維化過程中，有許多細胞因子參與其中，如轉化生長因子-e(TGF-e)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、成纖維細胞生長因子(FGF)、內皮素-l(ET-l)，白介素(IL)族等。其中TGF-P為重要的促纖維化因子，其可以促進纖維細胞合成細胞外基質(ECM)成分顯著增加，如膠原、層粘蛋白(LN)、透明質酸(HA)等。因此，本發明還觀察進行上述積雪草苷治療後，對大鼠肺纖維化時血清ECM成份及細胞因子的影響。其中，對於血清ECM成份，試驗結果顯示積雪草苷粉高劑量組36mg/kg，能明顯降低鈷60照射致動物肺纖維化時血清中III型膠原含量，與地塞米松組相似；也能降低血清中IV型膠原、LN含量，其中，中、低劑量組統計不明顯但與地塞米松組相似，而高劑量組與模型組比較有明顯降低，統計學上有意義；而積雪草苷粉高、中、低劑量組與模型組比較HA含量有明顯降低，與地塞米松組相似，但各劑量組之間無差異。而對於細胞因子，試驗結果顯示積雪草苷粉高劑量組能明顯降低TNF-a、TGF-P含量，與模型組比較有顯著差異，且與地塞米松組相似；而經積雪草苷粉用藥後，血中ET-1含量下降，且趨勢與地塞米松相似，但無顯著性差異。上述試驗結果均提示積雪草苷對大鼠放射性肺纖維化有一定的防治作用。更有說服力的是肺組織CT造影及組織病理分析結果顯示用藥組大鼠肺組織內的炎症和纖維化病變均與模型組有差異，表現在病變過程和範圍減輕。綜上所述，積雪草苷具有抗放射性肺纖維化的作用，可以用於製備抗放射性肺纖維化的藥物。具體實施方式實施例1積雪草苷的製備(根據上述專利文獻CN1439376A中實施例1的方法)將積雪草總苷500g加水溶解，過濾，沉澱乾燥，加丙酮回流，過濾，殘渣揮去丙酮，加乙酸乙酯、水混合液回流，過濾，殘渣7(TC乾燥，粉碎即得積雪草苷粉。上述積雪草總苷為常規市售產品。試驗實施例1積雪草苷粉對鈷60照射誘導大鼠肺纖維化的治療作用1、實驗方法鈷60致大鼠肺纖維化模型的建立SD大鼠，3X速可眠麻醉大鼠0.1mg/100g，固定於特製木架上，將特製有孔鉛磚的孔對準大鼠右側肺中下葉，並用鉛磚遮擋不需照射部位。放入鈷60照射區，照射劑量為15GY，照射五分鐘後取出。待大鼠清醒後隨機分組，每組10隻，次日起每天給藥igX3個月，即積雪草苷粉4、12、36mg/kg(低、中、高劑量用藥組)，地塞米松0.6mg/kg(陽性對照組)，及模型對照組和空白對照組。模型對照組給予生理鹽水(NS)。給藥結束後用3%速可眠麻醉，作CT造影。造影結束後立即將大鼠處死，取全血分離血清測定血清中細胞因子含量及ECM含量，取出每隻大鼠肺臟(右肺)稱重，分別對各組大鼠進行肺重量比、羥脯氨酸含量測定，其餘部分用3%福馬林固定做病理切片，觀察肺臟病理變化。2、結果2.1積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時肺部重量指數的影響(表1)肺重量指數(％)，即肺組織重量比=(肺重量/體重)X100%表1:積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時給藥3個月肺部重量比(？士SD)的影響tableseeoriginaldocumentpage6P<0.05與模型組比較AP<0.05與正常組比較結果表明，經鈷60照射後大鼠肺形成肺纖維化，使肺組織重量比(％)比正常對照組大。但經積雪草苷粉治療後，肺重量指數比有所下降，積雪草苷粉36mg/kg組與模型組比較有明顯減輕(P0.05)，模型組與正常組比較有顯著差異(P<0.05)。2.2.積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時組織羥脯氨酸含量的影響(表2)表2:積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時給藥3個月大鼠肺組織羥脯氨酸含量(3f士SD)的影響組別劑量(mg/kg)N羥脯氨酸含量(mg/g)開始/結束x±SD正常組生理鹽水10/828.56士3.93'模型組生理鹽水10/840.88±9.77A地塞米松0.610/436.42±2.74'積雪草苷粉410/834.18±6.24*積雪草苷粉1232.78土4.37'■積雪草苷粉3631.38土4.75'10/8'與模型組比較PO.05"與正常組比較PO.05結果表明，與模型組比較，積雪草苷粉三種劑量均能明顯降低鈷60照射致大鼠肺纖維化時肺組織羥脯氨酸的含量(PO.05),與陽性藥(地塞米松)組結果相似，但各劑量組之間無明顯差異；模型組與正常組比較有顯著差異(P<0.05)。2.3積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時血清ECM成份的影響(表3-表6)表3:積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時各組III型膠原含量的影響tableseeoriginaldocumentpage8*與模型組比較P0.05A與正常組比較P0.05結果表明，積雪草苷粉高劑量組36mg/kg，能明顯降低鈷60照射致動物肺纖維化時血清中III型膠原含量與地塞米松組相似(P<0.05)。低、中劑量組能降低血清中III型膠原含量，但統計不明顯。模型組與正常組比較有顯著差異(P<0.05)。表4:積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時各組IV型膠原含量的影響tableseeoriginaldocumentpage8*與模型組比較P<0.05A與正常組比較P<0.05結果表明，造模後血清中IV型膠原含量增高，用藥後能降低模型組大鼠血清中IV型膠原含量。但中、低劑量組統計不明顯但與地塞米松組相似。高劑量組與模型組比較有明顯降低(P<0.05)。模型組與正常組比較有顯著差異(P<0.05)。表5:積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時各組LN含量的影響tableseeoriginaldocumentpage9*與模型組比較P<0.05A與正常組比較P<0.05結果表明，造模後模型組的LN含量有顯著升高。積雪草苷粉高劑量組與模型組比較有明顯降低(P<0.05)。積雪草苷粉中、低劑量組雖有降低，但無明顯差異，但與地塞米松組相似。模型組與正常組比較有顯著差異(P<0.05)。表6:積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時各組HA含量的影響tableseeoriginaldocumentpage9'與模型組比較PO.05A與正常組比較P0.05結果表明，積雪草苷粉高、中、低劑量組與模型組比較HA含量有明顯降低，與地塞米松組相似。但各劑量組之間無差異。模型組與正常組比較有顯著差異(P<0.05)。2.4積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時某些細胞因子的影響(表7-表9)表7:積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時各自，-a含量的影響組別劑量Nx±SD(mg/kg)開始/結束(ng/ml)正常組生理鹽水聰4.93士1.0r模型組生理鹽水腦6.84±1.99A地塞米松0.610/44.46±0.76*積雪草苷粉4薩5.66±1.04積雪草苷粉1210/86.03±0.64積雪草苷粉3610/85.00±0.51*承與模型組比較P0.05▲與正常組比較P0.05結果表明，積雪草苷粉高劑量組能明顯降低TNF-a含量，與模型組比較有顯著差異，且與地塞米松組相似。積雪草苷粉中、低劑量組TNF-a含量降低不明顯。模型組與正常組比較有顯著差異(P<0.05)。表8:積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時各組TGF-卩含量的影響組別劑量(mg/kg)Nx±SD開始/結束(ng/ml)正常組生理鹽水■0.057土0.011'模型組生理鹽水10/80.082±0.012A地塞米松0.610/40.060±0.010*積雪草苷粉410/80.070±0.011積雪草苷粉1210/80.073±0.010積雪草苷粉3610/80.068±0.007**與模型組比較PO.05"與正常組比較PO.05結果表明，積雪草苷粉高劑量組及地塞米松組均能降低TGF-P含量與模型組比較有顯著性差異。但中、低劑量組不明顯。模型組與正常組比較有顯著差異(P<0.05)。表9:積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時各組ET-1含量的影響組別劑量(mg/kg)Nx±SD開始/結束(ng/ml)正常組生理鹽水10/8212.93±40.62模型組生理鹽水10/8253.59±54.70地塞米松0.6鵬236.74±37.09積雪草苷粉410/8239.50±69.57積雪草苷粉12謂226.71±57.95積雪草苷粉36畫214.91±48.76結果表明，造模後大鼠ET-1含量增高，經積雪草苷粉用藥後，血中ET-1含量下降，且趨勢與地塞米松相似。但無顯著性差異。2.5積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時肺組織CT造影的結果(表IO)表10:積雪草苷粉給藥後3個月各組CT造影結果正常對照組兩肺未見明顯活動性病變。tableseeoriginaldocumentpage112.6積雪草苷粉對鈷60照射致大鼠肺纖維化時組織病理分析正常對照組8隻動物未見肺淤血或水腫，肺組織亦無炎細胞浸潤及纖維化。肺纖維化模型組:8隻動物的肺組織各切片散在局灶性中度肺泡膈增厚，其中見有以淋巴細胞為主炎細胞浸潤；並見纖維母細胞或成纖維細胞增生，部份成纖維細胞伸入肺泡內，並見肺泡內脫落變性肺泡上皮細胞及炎細胞。未見肺泡透明膜形成。切片內均見不同程度肺不張或代償性肺氣腫。呼吸性細支氣管壁見纖維化。伴有輕度小血管壁透明變性，偶見毛細血管微血管血栓形成。積雪草苷粉藥物組每組各8隻。未見肺淤血或肺水腫，肺泡膈輕度炎細胞浸潤或有成纖維細胞增生，未見成纖維細胞伸入肺泡腔內亦未見有肺泡透明膜形成。未見呼吸性支氣管纖維化；亦未見瀰漫性間質纖維化。但見輕度小血管透明變性，偶見毛細血管血栓形成。各切片均見輕度肺部張或代償性肺氣腫。陽性對照組4隻動物肺組織切片病理變化與藥物組相同。3、結論3.1本試驗經鈷60照射所形成的放射性肺纖維化模型是成立的。3.2根據本試驗各項指標結果證明，大鼠肺組織內的炎症和纖維化病變均與模型組有差異，表現在病變過程和範圍減輕。3.3積雪草苷粉各劑量組的病理形態變化與地塞米松效果相似，但積雪草苷粉各劑量組之間無明顯組間差異。根據以上結果可以得出以下結論積雪草苷粉對放射性肺纖維化有一定的防治作用。權利要求1、積雪草苷在製備抗放射性肺纖維化的藥物中的應用。全文摘要本發明公開了積雪草苷在製備抗放射性肺纖維化的藥物中的新應用。文檔編號A61K31/7028GK101164545SQ20061011723公開日2008年4月23日申請日期2006年10月18日優先權日2006年10月18日發明者英劉,劉全海,劉珉宇,沈龍海,王小晨,燕秦,璘肖申請人:上海醫藥工業研究院