桑黃培養基質優化及短段木栽培方法
2023-09-22 08:58:00 1
桑黃培養基質優化及短段木栽培方法
【專利摘要】本發明涉及一種菌類植物栽培，即桑黃培養基質優化及短段木栽培方法。桑黃母種培養基：葡萄糖20g，大豆蛋白腖2g，瓊脂18g，磷酸二氫鉀0.46g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂0.5g，水1000ml。桑黃短段木栽培方法，步驟如下：（1）採用子實體組織分離法分離桑黃菌母種。（2）桑黃原種培養。（3）桑黃栽培種培養。（4）短段木栽培材料的製備。選用柞木段做成菌棒，柞木段人工栽培桑黃生產資料的成本低廉，產量高，質量好，有效成分含量高，可獲豐厚的經濟回報。
【專利說明】桑黃培養基質優化及短段木栽培方法
[0001]【技術領域】
本發明涉及一種菌類植物栽培，即桑黃培養基質優化及短段木栽培方法。
【背景技術】
[0002]在現有技術中，桑黃是一種珍稀的大型藥用真菌，其藥用價值早在唐朝的《藥性論》就有記載。《本草綱目》記載，桑黃可治癖飲積聚、腹痛金瘡；《中藥大辭典》敘述其可治療內科多種疾病。其子實體入藥，味微苦，能利五臟、宣腸氣、止血、排毒、和胃止瀉。現代醫學研究表明，桑黃除了具有傳統中醫理論上的藥理作用以外，還具有抗癌、抗腫瘤、抗衰老、抗疲勞、抗氧化、抗纖維化、骨髓造血功能損傷的保護、免疫調節、保肝和抗肝硬化等功效。桑黃為多年生木腐菌，由於受生理生態的特殊性和複雜性以及外部環境條件的制約，在自然界中形成的子實體稀少，再加上近年來，桑黃的用量日益加大，特別是國外對我國野生資源掠奪式的收購，野生資源越來越少。因此需要通過多種途徑獲得其活性物質，如進行人工木段栽培，液體和固體發酵等。人工木段栽培剛剛起步，尚未有關於人工木段栽培桑黃的具體報導，人工栽培的成品桑黃子實體國內還沒有採收先例。
【發明內容】
[0003]本發明的目的是針對上述不足而提供一種改善培養基，實現人工栽培桑黃可行的桑黃培養基質優化及短段木栽培方法。
[0004]本發明的技術解決方案是:一種桑黃母種培養基，由以下重量的原料製成:葡萄糖20g，大豆蛋白腖2g，瓊脂18g，磷酸二氫鉀0.46g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂0.5g，水1000ml。
[0005]—種桑黃原種培養基，由以下重量的原料製成:昨木屑77%,麥麩10%,玉米粉10%,葡萄糖2%，石膏1%。
[0006]—種桑黃栽培種培養基，由以下重量的原料製成:昨木屑50%,棉籽殼39%,麥麩10%,石骨 1%。
[0007]—種桑黃短段木栽培方法，其特徵在於步驟如下:
(1)採用子實體組織分離法分離桑黃菌母種:對採自長白山區野生桑黃子實體進行表面消毒處理，鉤取一小塊桑黃子實體放於斜面母種培養基上；置於27°C -30°C恆溫箱內培養，待子實體組織塊周圍長出乳黃色菌絲，在菌落邊緣挑取先端菌絲體移植到新的試管移植母種培養基斜面上，27°C -30°C恆溫培養，IOd菌絲即可長滿試管，如此反覆移植2-3次，所得菌株作為母種；所述的母種培養基是:葡萄糖20g，大豆蛋白腖2g，瓊脂18g，磷酸二氫鉀0.46g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂0.5g，水1000ml。
[0008](2)桑黃原種培養:原種培養基為柞木屑77%，麥麩10%，玉米粉10%，葡萄糖2%，石膏1% ; 28 °C恆溫室中暗室培養。
[0009](3)桑黃栽培種培養:栽培種培養基為昨木屑50%,棉籽殼39%,麥麩10%,石膏1% ；28 °C恆溫室中暗室培養。[0010](4)短段木栽培材料的製備:
選柞木做成菌棒，高壓滅菌後備用。所述的菌棒選柞木樹種作為段木栽培材料，稍頭直徑4-8cm，截成18-20 cm長的短木段，劈成兩半，拼成約15 cm的段木梱，裝入低壓聚乙烯菌袋中，木段兩頭填充一層木屑麥麩皮營養料，木屑、麩皮比例為3: 1，加水拌勻，紮好袋口，同時將段木袋扎兩道，使段木與塑膠袋貼合的較為緊密，高壓滅菌後備用。
[0011](5)菌棒接種與發菌期培養:
按無菌操作，選用菌絲生長旺盛的桑黃栽培菌種，採用兩頭接種法，接種量在20%，以菌種封蓋料面為度。
[0012]發菌培養期間培養溫度為28°C，遮光培養，每天通風I次，培養時間35-40d。
[0013](6)子實體生長發育期培養:
當菌棒內菌絲顏色有淺黃變為深黃時，在菌棒兩側側切開口，開口性狀月牙形，長2cm，月牙形寬度小於lcm，每個菌袋可以在菌袋兩側分別開兩個口。
[0014]菌木埋土栽培:先在大棚地面作栽培床，棚上覆蓋塑料薄膜，遮陽網或草簾遮蔭，劃口立木埋土栽培,先按深6 cm,株行距10 cm X 10 cm挖坑,再將菌袋一端距袋底6 cm處環切，脫掉袋底，立木放於坑中，培上沙土，然後再用刀片將菌袋環劃兩刀，割透塑料膜為度，只劃出兩道出菇口或縫。栽培床按6m寬的大棚可作三個菌床，中間菌床寬2m，兩邊菌床各1.2m，床間留60 cm作用道，棚兩邊各留20 cm排水溝。
[0015]子實體發育期管理:當菌棒內菌絲顏色由淺黃色進入原基分化期，此時採用晝夜溫差的方法，即白天培養溫度28°C，夜間溫度降為20°C，連續處理3d;空氣相對溼度控制在85%-95%之間；給予散射光照射。
[0016]子實體發育階段，生長溫度25°C，空氣相對溼度保持在85%_95%之間，每天通風2次，每次30min ;散射光照射。
[0017]子實體採收:桑黃子實體應2-3年採收一次，採大留小。
[0018]本發明的優點是:1、本發明從桑黃母種培養基選擇、原種培養基選擇、栽培種培養基的選擇三方面著手，確定了桑黃培養基合理參數，以期獲得優良桑黃菌種，為成功培養桑黃菌子實體提供前提保障。2、選用柞木段做成菌棒，採用埋土栽培，確定合理栽培條件，如發菌培養期間培養溫度為28°C，遮光培養，每天通風I次，培養時間35-40d ;進入原基分化期時，此時採用晝夜溫差的方法，即白天培養溫度28°C，夜間溫度降為20°C，連續處理3d ；空氣相對溼度控制在85%-95%之間；給予散射光照射；子實體發育階段，生長溫度25°C，空氣相對溼度保持在85%-95%之間，每天通風2次，每次30min ;散射光照射，保證了桑黃人工栽培方法可行，並工業化生產。3、柞木段人工栽培桑黃生產資料的成本低廉，產量高，質量好，有效成分含量高；可獲豐厚的經濟回報。4、本研究以挽救和開發桑黃菌這一珍貴藥用真菌資源，彌補野生桑黃菌因自然資源有限和過度採摘所導致的物種資源瀕臨枯竭、科學實驗和研究難以開發和市場開發利用受限的實際問題，具有重大的經濟效益、社會效益和生態效益。
[0019]下面將結合實施例對本發明的實施方式作進一步詳細描述。
【具體實施方式】
[0020]實驗例I桑黃菌絲培養條件的研究 I材料與方法
1.1桑黃菌株(火木層孔菌Phellinus igniarius),採自長白山系的老齡山脈森林中的柞木(蒙古櫟)上。
[0021]1.2供試培養基
基礎培養基:葡萄糖20g，大豆蛋白腖2g，瓊脂18g，磷酸二氫鉀0.46g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂0.5g，水1000ml。
[0022]1.3實驗方法
1.3.1菌種分離及純化培養
採用子實體組織分離法分離桑黃菌母種。在嚴格無菌操作條件下對採自長白山區野生桑黃子實體進行表面消毒處理，用75%酒精反覆塗擦子實體表面後置於無菌平板培養皿中，再將培養皿放入超淨工作檯內備用。用火焰灼燒滅菌的解剖刀從桑黃子實體基部縱向切開，然後再用解剖刀從剖面中心在欲分離部位刻劃數個『井』字，用火焰灼燒滅菌的接種鉤鉤取一小塊桑黃子實體(綠豆大小)放於斜面基礎培養基上。置於28°C恆溫箱內培養。2天後菌絲開始萌發，待子實體組織塊周圍長出乳黃色菌絲，在菌落邊緣挑取先端菌絲體移植到新的試管基礎培養基斜面上，28°C恆溫培養，IOd菌絲即可長滿試管，如此反覆移植2-3次，所得菌株作為母種，菌絲長滿試管後置4°C冰箱內保藏備用。
[0023]1.3.2接種培養及觀測方法
將滅菌的試管基礎培養基倒入直徑9cm的無菌平板培養皿中，每個培養皿加入基礎培養基15ml ;待培養基凝固後,在培養皿中接一直徑5mm的菌塊,每一處理接種3個培養皿(即三次重複)。每隔3天測量一次菌落直徑，計算菌絲生長速度，並觀察菌落變化及長勢。
[0024]1.3.3數據統計方法
原始數據的處理、相關性分析及圖表，用Excel軟體處理，方差分析用SPSS12.0軟體處理，應用Duncan單因素方差分析比較各處理之間的差異顯著性(P < 0.05)。
[0025]1.3.4不同碳源對桑黃菌絲生長的影響
分別用麥芽糖、蔗糖、乳糖、甘露醇代替基礎培養基中的葡萄糖，28°C，黑暗條件下培養，觀測不同碳源對桑黃菌絲生長的影響。
[0026]1.3.5不同氮源對桑黃菌絲生長的影響
分別用牛肉膏、酵母膏、硫酸銨、氯化銨代替基礎培養基中的大豆蛋白腖，28°C，黑暗條件下培養，觀測不同氮源對桑黃菌絲生長的影響。
[0027]1.3.6不同溫度對桑黃菌絲生長的影響
使用基礎培養基，分別在18°C、21°C、24°C、27 V、30°C、33°C，黑暗條件下培養，觀測不同溫度對桑黃菌絲生長的影響。
[0028]1.3.7不同pH對桑黃菌絲生長的影響
使用基礎培養基， 調pH值分別在5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5，28°C，黑暗條件下培養，觀測不同PH值對桑黃菌絲生長的影響。
[0029]2結果與分析
2.1不同碳源對桑黃菌絲生長的影響(結果見表1-1)
表1-1不同碳源對桑黃菌絲生長的影響(x±S.D η = 3)
【權利要求】
1.一種桑黃母種培養基，其特徵在於由以下重量的原料製成:葡萄糖20g，大豆蛋白腖2g，瓊脂18g，磷酸二氫鉀0.46g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂0.5g，水1000ml。
2.—種桑黃原種培養基，其特徵在於由以下重量的原料製成:昨木屑77%,麥麩10%,玉米粉10%,葡萄糖2%,石膏1%。
3.一種桑黃栽培種培養基，其特徵在於由以下重量的原料製成:昨木屑50%,棉籽殼39%，麥麩10%，石膏1%。
4.一種桑黃短段木栽培方法，其特徵在於步驟如下: (1)採用子實體組織分離法分離桑黃菌母種:對採自長白山區野生桑黃子實體進行表面消毒處理，鉤取一小塊桑黃子實體放於斜面母種培養基上；置於27V -30°C恆溫箱內培養，待子實體組織塊周圍長出乳黃色菌絲，在菌落邊緣挑取先端菌絲體移植到新的試管移植母種培養基斜面上，27°C -30°C恆溫培養，IOd菌絲即可長滿試管，如此反覆移植2-3次，所得菌株作為母種；所述的母種培養基是:葡萄糖20g，大豆蛋白腖2g，瓊脂18g，磷酸二氫鉀0.46g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂0.5g，水1000ml ； (2)桑黃原種培養:原種培養基為柞木屑77%，麥麩10%，玉米粉10%，葡萄糖2%，石膏1% ; 28 °C恆溫室中暗室培養； (3)桑黃栽培種培養:栽培種培養基為柞木屑50%，棉籽殼39%，麥麩10%，石膏1%；28°C恆溫室中暗室培養； (4)短段木栽培材料的製備: 選柞木做成菌棒，高壓滅菌後備用； (5)菌棒接種與發菌期培養: 按無菌操作，選用菌絲生長旺盛的桑黃栽培菌種，採用兩頭接種法，接種量在20%，以菌種封蓋料面為度； 發菌培養期間培養溫度為28°C，遮光培養，每天通風I次，培養時間35-40d ； (6)子實體生長發育期培養: 當菌棒內菌絲顏色有淺黃變為深黃時，在菌棒兩側側切開口，每個菌袋可以在菌袋兩側分別開兩個口； 菌木埋土栽培:先在大棚地面作栽培床，棚上覆蓋塑料薄膜，遮陽網或草簾遮蔭，劃口立木埋土栽培； 子實體發育期管理:當菌棒內菌絲顏色由淺黃色進入原基分化期，此時採用晝夜溫差的方法，即白天培養溫度28°C，夜間溫度降為20°C，連續處理3d ;空氣相對溼度控制在85%-95%之間；給予散射光照射； 子實體發育階段，生長溫度25°C，空氣相對溼度保持在85%-95%之間，每天通風2次，每次30min ;散射光照射； 子實體採收:桑黃子實體應2-3年採收一次，採大留小。
5.按照權利要求 4所述的桑黃短段木栽培方法，其特徵在於所述的菌棒選柞木樹種作為段木栽培材料，稍頭直徑4-8cm，截成18-20 cm長的短木段，劈成兩半，拼成約15 cm的段木梱，裝入低壓聚乙烯菌袋中，木段兩頭填充一層木屑麥麩皮營養料，木屑、麩皮比例為3:1，加水拌勻，紮好袋口，同時將段木袋扎兩道，使段木與塑膠袋貼合的較為緊密，高壓滅囷後備用。
6.按照權利要求4所述的桑黃短段木栽培方法，其特徵在於栽培床按6m寬的大棚可作三個菌床，中間菌床寬2m，兩邊菌床各1.2m，床間留60 cm作用道，棚兩邊各留20 cm排水溝。
7.按照權利要求4所述的桑黃短段木栽培方法，其特徵在於劃口立木埋土栽培是指先按深6 cm,株行距10 cm X 10 cm挖坑,再將菌袋一端距袋底6 cm處環切,脫掉袋底,立木放於坑中，培上沙土，然後再用刀片將菌袋環劃兩刀，割透塑料膜為度，只劃出兩道出菇口或縫。
【文檔編號】A01G1/04GK103804054SQ201410056197
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年2月20日 優先權日:2014年2月20日
【發明者】李喜範, 李春娥, 楊坤, 楊靜 申請人:通化長白山藥谷集團有限公司