一種北蟲草的培育方法與流程
2023-09-22 16:39:10
本發明涉及生物培育領域，具體涉及一種北蟲草的培育方法。
背景技術：
北蟲草，又稱北冬蟲夏草。在分類學上屬子囊菌亞門、核菌綱、麥角菌目、蟲草屬。是昆蟲的蛹感染蟲草菌後形成的蟲與菌的複合體。北蟲草主要分布在我國東北三省部分地區的沃土中。其營養與天然野生冬蟲夏草有相似的醫療和保健功效，是一味名貴的藥用真菌。
北蟲草的生長基本條件主要是營養、空氣、溫度、水份、溼度、光線、ph值等七大因素，現科學研究人員已經對其進行了深入研究，並獲得了較好的成果，可以說實現了北蟲草生長條件的掌控。而如何根據北蟲草的生長條件人工培育出北蟲草是現有技術中研究的課題。
技術實現要素：
為解決上述課題，本發明提供一種北蟲草的培育方法，其包括下述步驟：
（1）北蟲草母種培育；
在100重量份水中，混合20%馬鈴薯浸出液、2%瓊脂、2%葡萄糖、2%蛋白腖、2%磷酸二氫鉀、2%硫酸鎂消毒滅菌後製得母種培養基；將北蟲草母種菌種移植在該母種培養基上，23℃下培育15天後，改為22℃繼續培育8-10天；
（2）北蟲草原種培育；
將玉米粉1%、葡萄糖2%、蛋白腖1%、酵母粉0.5%、磷酸二氫鉀0.1%、水95.35%、硫酸鎂0.5%混合均勻後高壓滅菌、ph值調至6.5製備原種培養基；
在無菌條件下，在原種培養基上接種米粒大小的母種菌塊，24-26℃發菌培養5-6天；
（3）北蟲草栽培；
以大米或小米與水的重量比為1:1.7-1.8混合後高壓滅菌製得培養基，將步驟（2）中培育後的菌塊移植在該培養基中；
在溫度18-22℃、溼度65-70%的條件下發菌，23天後，每天散射光照不少於8小時，晚上日光照照射16小時，室內溫度20-22℃、夜裡降低3-5℃、空氣溼度控制在70%，每天通氣2-3次，每次通氣20-40分鐘；
出座後溫度控制在18-20℃，繼續培育七天後，溫度控制在20-22℃，光線散射光充足、溼度提到85%，待北蟲草平面突起形成小米粒原基時，補充新鮮空氣；待子座長出1公分長後，溼度提高到90%，15-20天後採收。
此外，在原種培養基中加入2%的營養液。
研究人等經過多年的艱辛努力，他們根據野生蟲草生長基本條件原理，堅持實踐，反覆試驗，獲得了上述培育技術，採用馬令薯浸出液、葡萄糖、蛋白腖、米等培養基配方，進行母種培養基；液體原種培養基；栽培種培養基等製作；並進行嚴格消毒滅菌，冷卻，無雜菌接種，一系列精細管理流程技術措施後，一年內基地種植了一百多萬瓶北蟲草，長勢良好，預計產幹品可達3000餘公斤。產品已送往省醫學科學院質量檢測，各種藥物營養成份含量指數達到野生蟲草基本相同。其中蟲草多糖、蟲草酸、蟲草素的含量高於野生蟲草50-100%。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明的技術方案進行詳述，但本發明並不限定於此。
實施例
北蟲草母種製法及培養
（一）一級母種培養基配製方法
洗淨玻璃試管，稱好各種原材料，先把馬令薯洗淨削皮去芽眼，然後切片，放在鋁鍋燒煮。按水的比例加20%切片後的馬令薯，煮開後保溫20分鐘，再用6層紗布過濾，捏緊渣汁，去渣，再補足水份原等量。再把按各2%剪碎的瓊脂，葡萄糖，蛋白腖，磷酸二氫鉀、硫酸鎂等微量元素按比例原料倒入鍋內，文火溶解後再過濾。此時就可分裝玻璃試管。每支試管裝量1/5。擦淨管口，塞好棉塞，再放在滅菌鍋消毒。
當消毒鍋固緊蓋後立即加熱升溫至0.5公斤/公分2後。即放淨冷氣降壓至0後，重新升溫至1.2公斤/公分2，文火保溫40分鐘，然後開蓋冷卻至常溫，乘熱進行三分之二斜面面積。隔2天後，觀察玻璃管的冷凝水回落在底面，觀察平面仍很平坦和無雜菌叢生就可等待接種。
（二）一級母種的接種方法
如果確定母種轉管後接種的母種。先消毒接種室，再消毒母種試管和其它器具。其方法是將所用的母種試管、接種工具全部放在超淨工作檯上，關好門窗，再將消毒氣化劑點燃汽化，迅速關好門窗，同時把紫外線燈打開，待氣化40min就可準備接種。
接種的方法是先把母種外表、器皿具在點燃的酒精燈上消毒10秒鐘時間，再把母種試管口對準酒精燈火焰，並把棉塞輕輕拉出。再用接種鏟把菌種劃成數段，然後用接種刀按數段的接種段片再劃成米粒大少的菌種移植在新的試管斜面中間培養基上。最後把原來的棉塞在酒精燈上消毒3秒鐘後迅速塞回試管口，這樣就完成一支母種試管接種的工作任務，以後就按此方法順序類推接種。
（三）北蟲草母種發菌管理方法
當北蟲草母種移植在培養基上後，立即將接好的菌移送在23℃左右的溫室裡恆溫培養。經過5-7天的適宜溫度發菌，所接入的菌種開始萌發菌絲。並向斜面周邊延伸生長。此時就檢查所接入的菌種周圍有否雜菌生長，一旦發現雜菌立即揀出去掉。到了12-15天後，蟲草母種的菌絲在適宜的溫度已經長到斜面試管2/3面積時，這時候室溫降至22℃左右，目的是使菌絲緩慢生長，起到復壯的作用。到了20天以後，整個菌絲布滿斜面，等3-5天後就可接北蟲草原種了。
四、北蟲草原種培養技術方法
當北蟲草母種培養成功後，就可以培養北蟲草原種，具體培養方法是：
（一）培養基配方：
①玉米粉1%；②葡萄糖2%；③蛋白腖1%；④酵母粉0.5%；⑤磷酸二氫鉀0.1%，水95.35%；⑥硫酸鎂0.5%；⑦ph值調至6.5左右。
（二）培養方法
①製作原種培養基：將這些原料溶於水後裝在500毫升玻璃瓶中，每個玻璃瓶裝量150毫升，然後用8層紗布做成蓋蓋住瓶口紮緊，立即放在高壓滅菌鍋內進行消毒，待壓力表上升至0.5公斤/公分2壓力時，即放淨冷氣的指針降至0後，再關掉放氣閥門，待溫度表指針逐漸上升至1.2公斤/公分2後就開始保溫45分鐘後，慢慢下降指針至0，然後開蓋冷卻至常溫，再移入接種箱等待接種。
②原種接種方法：先把已消毒好的北蟲草液體原種培養基移放在超淨工作檯上。並把北蟲草母種和接種勾，酒精燈，消毒棉等接種物也放在超淨工作檯上，工作服一起消毒。此時就開始在接種室開氣化消毒劑，立即關閉所有門、窗、密閉消毒同時打開紫外線燈。待40min後，將煙霧放淨，關閉紫外線燈，接種人員就可進行接種。接種的方法是，穿好工作服，打開超淨工作檯風機，點燃酒精燈，左手拿著母種試管對準火焰口，右手拿著鐵勾在酒精燈火焰消毒3-5秒種後立即伸進母種試管內把菌種分成5-7段，再用左手迅速將紗布瓶蓋打開，右手即把一段菌塊勾入瓶內速將瓶蓋按原樣蓋緊。第二瓶接種的方法隨第一瓶一樣同。
當北蟲草原種接好後，就迅速移入26℃恆溫培養室裡發菌培養。經過適宜的溫度6天的發菌培養，栽培者要檢查北蟲草菌液的顏色為深棕色，瓶口聞有很濃的北蟲草氣味，就能辨別出菌種的優劣質量。如有發菌瓶內濃度低、氣味臭，並有五顏六色的菌液，就是有雜菌汙染的菌液，不用。通氧培養。
五、北蟲草栽培方法
北蟲草栽培室內栽培，搭架子，散射光線很需要，床架要牢固，通風條件要好，有水電方便使用噴水加溼，調節光線，操作靈活，水泥地、沙地都可，門窗要大一點，並裝有防蠅紗窗等設施。
1、北蟲草栽培容器是廣口罐頭瓶或專用器皿，封蓋可用封口膜，用皮套套緊。
2、栽培種植北蟲草培養基配方和消毒。①大米或小麥30克，選擇無黴變高質量的，水量1:1.7～1.8比量。也可在水中加些營養液。封口膜封平，立即移放在高壓殺菌鍋內消毒。滅菌也可以用常壓滅菌鍋。
3、當消毒培養基移放進高壓滅菌鍋內消毒時，壓力表指針上升到0.5公斤/公分2時，立即打開放氣閥，讓壓力表指針慢慢降至0時，說明放淨冷氣，然後關閉閥門，待鍋內溫度升至1.2公斤/公分2後，恆定保溫1小時，再慢慢退溫至0指針，（節省時間也可慢慢打開放氣閥放氣降壓）並開蓋冷卻至常溫等待接種。
待溫度降至30℃以下就可接種。其方法是將接種槍等器具，菌種，滅過菌的培養基放入接種室內，用以上的方法進行氣化消毒，按無雜菌要求進行接種。稀釋後的菌種每瓶500ml可接種200瓶，移入培養室發菌培養。
菌瓶未搬進以前，先用殺菌劑將培養室徹底消毒，然後把已接好菌種的北蟲草排放在牢固的架子上。在發菌階段的前4-5天室溫度控制在16-20℃之間，以後調整至18-22℃之間，溼度控制在65-70%之間。每天進行對流通氣50-80min，可根據培養室內的實際情況調整。經過7-15天的培養，北蟲草菌絲長滿全瓶。再經過4-5天散射光的培養，使菌絲營養生長成熟，，同時挑淨雜菌，繼續做好清潔衛生防蠅工作。
在催蕾出子座過程中主要做好四方面工作。①每天散射光照不少於8小時，晚上還用日光照照射16小時；②室內溫度20-22℃，夜裡適當降低3-5℃。③室內空氣溼度控制在70%左右。④每天通氣2-3次，每次通氣20-40分鐘，待菌絲由白色轉為桔黃色後並陸續紐結成園丘狀隆起原基，分秘黃色水珠，就進行做好長北蟲草子座準備工作。
①出子座管理的溫度，出子座前6-7天，室溫控制在18-20℃，以後室溫適當提高2℃，但不能超過25℃。②光線散射光要充足，但不能直射光照。③溼度提到85%。待北蟲草平面突起形成小米粒原基時，要適當通氣補充新鮮空氣，但不揭瓶蓋，可在瓶蓋上刺孔5-8個（20號的針頭），以利瓶內氣體交換。待子座長出1公分長後。將室內溼度提高到90%左右。空間牆壁噴水以提高溼度。當北蟲草子座長至1-2cm時，可補一次營養液，按照通風換氣相結合的辦法進行管理15-20天後即可採收。