畜禽用複合益生菌飼料添加劑及預混料、濃縮料和配合料的製作方法

2023-10-05 14:30:19 2

專利名稱：畜禽用複合益生菌飼料添加劑及預混料、濃縮料和配合料的製作方法
技術領域：
本發明屬於畜禽飼料領域，尤其是一種畜禽用複合益生菌飼料添加劑及其製備方法，以及含有其的預混料、濃縮料和配合料。
背景技術：
動物腸道中存在著由許多微生物組成的複雜多樣的微生態區系，該區系對宿主的生長和健康意義重大。對畜禽來說，腸道中微生態菌群的組成及變化直接影響著畜禽的健康和生理功能，畜禽腸道內的微生物在畜禽生長發育過程中逐漸產生，逐漸形成適合畜禽的微生物菌群，並逐漸達到最適宜的微生態平衡狀態，其中益生菌佔絕對優勢。益生菌一詞來源於拉丁文，意思為有利於生命，是一類與宿主互利共生、有利於宿主健康的腸道細菌。益生菌在畜禽腸道內數量多，佔據主要地位，起到主要的生理作用，畜禽腸道益生菌一旦遭到破壞或數量減少，就會引起疾病，使豬出現腹瀉、脫水、體重下降、生產性能降低等症狀。 畜禽腸道益生菌對畜禽的健康和生命活動具有十分重要的作用，益生菌有很多的種類及特殊的生理功能。根據農業部頒布的飼料添加品種目錄(2008)，選擇酵母菌提供大量的菌體蛋白，豐富的B族維生素等營養物質，提高畜禽免疫及生產性能；芽孢桿菌調節腸道菌群平衡；腸球菌可以在畜禽腸道內定植，降低腸道PH等作用。

發明內容
為了解決上述問題，本發明提供一種畜禽用複合益生菌飼料添加劑。本發明提供的複合益生菌飼料添加劑含有複合益生菌粉和輔料，所述複合益生菌為產I元假絲酵母(Candida util is)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis)、枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)、幾腸球菌(Enterococcus faecalis)和屎腸球菌(Enterococcus faecium)。其中，產朊假絲酵母菌粉、釀酒酵母菌粉、地衣芽孢桿菌菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、糞腸球菌菌粉和屎腸球菌菌粉的重量比為I. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1.O-L 5 o其中，所述產朊假絲酵母的活菌數為1.0\109 1.0\10110 ~8，所述釀酒酵母的活菌數為I. OX IO9 1.0X10nCFU/g，所述產朊假絲酵母的活菌數為I. OX IO9 1.0X10nCFU/g，所述枯草芽孢桿菌的活菌數為I. OX IO9 1.0X10nCFU/g，所述糞腸球菌的活菌數為I. OXlO9 1.0X10nCFU/g，所述屎腸球菌的活菌數為1.0X109 I. 0X10nCFU/g。其中，所述輔料選自玉米澱粉、葡萄糖、麥芽糊精中的一種或多種。本發明還提供所述的飼料添加劑的製備方法，其包括如下步驟I)分別製備產朊假絲酵母、釀酒酵母、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、糞腸球菌和屎腸球菌的菌泥，再將各自的菌泥與相應的凍幹保護劑混勻後冷凍乾燥製備成各自的菌粉；2)將產朊假絲酵母凍幹菌粉、釀酒酵母凍幹菌粉、地衣芽孢桿菌凍幹菌粉、枯草芽孢桿菌凍幹菌粉、糞腸球菌凍幹菌粉和屎腸球菌凍幹菌粉的按重量比I. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1.0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5混勻後，再與輔料進行混合。本發明提供的所述的飼料添加劑的製備方法，還可包括製備各自菌粉後將菌粉進行稀釋，所用的稀釋載體為重量百分比75-100%的玉米粉和0-25%的紅糖。其中，產朊假絲酵母和釀酒酵母的凍幹保護劑為8-10%的甘油、生理鹽水和10-20%菌泥重量的脫脂奶粉；地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、糞腸球菌和屎腸球菌的凍幹保護劑為5. 0-6. 5%蔗糖、I. 0-1. 2%穀氨酸鈉和I. 0-1. 2%抗壞血酸水溶液、50-70%菌泥重 量的脫脂奶粉。本複合益生菌飼料添加劑可以添加到預混料、濃縮料、配合料，用於畜禽預混料、濃縮料、配合料的製備。本發明飼料添加劑可以提高畜禽生長性能，促進採食，維持其腸道微生物區系平衡，減少排洩物味道。本發明所用的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為申請人從傳統發酵豆豉中分離得到，其生物學特徵如下菌落表面粗糙，不透明，汙白色，菌落圓形，邊緣呈鋸齒狀，革蘭氏陽性菌；芽孢形態為橢圓到柱狀，位於菌體中央或稍偏，芽孢形成後菌體不膨大。本發明的枯草芽孢桿菌顯著區別於現有的枯草芽孢桿菌，可以耐受pH2.0，l%胃蛋白酶的人工胃液，可以耐受0. 3%的人工膽鹽，可以耐受80°C的制粒溫度，可以抑制致病性大腸桿菌K88，K99和金黃色葡萄球菌，具有較強的產纖維素酶的能力，可以降解纖維素。本發明的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)已於2011年3月2日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCCJia :北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCC No. 4628。本發明的釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)具有良好的耐胃酸、耐膽鹽、耐高溫、耐受常用抗生素等抗逆性能和產酸、產酶、抑制病原菌等益生功能，為申請人從健康動物腸道或糞便中分離、選育得到，經中國農業微生物菌種保藏管理中心鑑定，並於2008年3月3日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCCJia :北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏號為CGMCC No. 2388。本發明的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)為申請人從牛腸道中分離、經定向初篩和復篩得到。其營養細胞杆狀，其芽孢為橢圓或長筒形，為中生或次端生，孢囊稍膨大。孤立或呈短鏈，杆端半圓形。在12 16h內能形成菌落，菌落為圓形，或不規則，邊緣毛髮狀，菌落白色，不透明，無褶皺。革蘭氏陽性。申請人對此株地衣芽孢桿菌進行了耐酸性、耐膽鹽、耐高溫性、發酵特性和抑菌活性等實驗，此株地衣芽孢桿菌具有對逆環境耐受性強、粘附性強、生長快、生物量大、抑菌活性好等特點。本發明的地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)申請人已於2011年7月26日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCCJia :北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCC No. 5094。本發明的糞腸球菌(Enterococcus faecalis)為申請人從豬大腸中分離得到,其生物學特徵如下菌落圓整，表面光滑，不透明，乳白色，邊緣光滑，革蘭氏陽性菌；單個菌體為球狀或橢圓狀。本發明的糞腸球菌經過人工胃液、膽汁液及耐熱性的篩選；又經過產酶能力篩選和抑菌能力篩選，可以耐受pH2. O，1%胃蛋白酶的人工胃液，可以耐受0. 3%的人工膽汁液，可以耐受85°C的制粒溫度，也可以抑制致病性大腸桿菌K88，K99和金黃色葡萄球菌，具有較強的產酸和抑制豆柏、棉柏、玉米秸杆中黴菌的能力。本發明的糞腸球菌(Enterococcus faecalis)申請人已於2011年7月26日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，地址同上，保藏編號為CGMCC No. 5092。
具體實施例方式以下實施例用於說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。實施例I釀酒酵母和產朊假絲酵母菌粉製備釀酒酵母CGMCC 2388 ;產朊假絲酵母購自中國食品發酵工業研究院。共用的種子培養基1. 0%酵母浸粉，2. 0%蛋白腖，2. 0%葡萄糖。培養條件28°C，180rpm,24h0產朊假絲酵母培養基1. 0%酵母浸粉，4. 0%葡萄糖，I. 0%蛋白腖，0. 2%磷酸二氫鉀，0. 03%硫酸鎂。釀酒酵母培養基1. 5%酪蛋白腖，2. 5%酵母浸粉，3. 0%葡萄糖，0. 24%磷酸二氫鉀，
I.6%磷酸氫二鉀。 培養條件28°C，150rpm,72h0所得發酵液用高速冷凍離心機離心，離心條件6000rpm，4°C，lOmin。離心後棄上清液，得菌泥。將10%甘油和0. 85%生理鹽水按體積比I: I混合，稀釋攪拌菌泥混勻，再加A 10%進口脫脂奶粉混勻。先置於-80°C超低溫冰箱冷凍，再置於真空冷凍乾燥機乾燥24h，取出粉碎，過60目篩。實施例2地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌菌粉製備地衣芽孢桿菌CGMCC 5094 ;枯草芽孢桿菌CGMCC 4628。共用種子培養基0. 5%牛肉膏，I. 0%蛋白腖，0. 5%氯化鈉。培養條件37°C，180rpm，24h。地衣芽孢桿菌培養基3. 0%紅糖，I. 0%玉米粉，3. 0%豆餅粉，0. 25%尿素，0. 15%磷
酸二氫鈉。枯草芽孢桿菌培養基2. 0%葡萄糖，4. 0%大豆蛋白腖，0. 16%硫酸鎂，0. 3%磷酸氫二鉀，0. 3%磷酸二氫鉀。培養條件3rc，180rpm,24h0所得發酵液用高速冷凍離心機離心，離心條件5000rpm，4°C，lOmin。離心後棄上清液，得菌泥。用5. 0%蔗糖，I. 0%穀氨酸鈉，I. 0%抗壞血酸的水溶液攪拌菌泥混勻，再加入50%進口脫脂奶粉。先置於-80°C超低溫冰箱冷凍，再置於真空冷凍乾燥機乾燥24h，取出粉碎，過60目篩。實施例3屎腸球菌和糞腸球菌菌粉製備屎腸球菌購自中國食品發酵工業研究院；糞腸球菌CGMCC5092。共用種子培養基為商品MRS肉湯(乳酸菌專用培養基)。培養條件37°C，IOOrpm,12h。屎腸球菌和糞腸球菌培養基3. 5%蛋白腖，6. 0%牛肉粉，0. 50%檸檬酸二銨，3. 5%蔗糖，I. 0%酵母浸粉，0. 4%磷酸氫二鉀，0. 1%乙酸鈉，0. 02%硫酸鎂，0. 005%硫酸錳，0. 05%
吐溫80。培養條件37°C，50rpm，12h。所得發酵液用高速冷凍離心機離心，離心條件5000rpm，4°C，lOmin。離心後棄上清液，得菌泥。用5. 0%蔗糖，I. 0%穀氨酸鈉，I. 0%抗壞血酸的水溶液攪拌菌泥混勻，再加入50%進口脫脂奶粉。先置於-80°C超低溫冰箱冷凍，再置於真空冷凍乾燥機乾燥24-30h，取出粉碎，過60目篩。實施例4菌粉活菌數測定取凍幹後的菌粉各0. 5g，在無菌條件下放入裝有4. 5ml無菌水的試管，震蕩，混勻，取0. 5ml菌液再放入裝有4. 5ml無菌水的試管，震蕩，混勻，以此類推，將菌液稀釋至10_8後，取10_8、10_7、10_6濃度菌液各200 ill塗平皿，每個濃度塗兩個平皿，培養、計數。酵母菌使用商業麥芽汁瓊脂平皿，腸球菌使用商業MRS瓊脂平皿，芽孢桿菌使用商業營養瓊脂平皿。活菌計數酵母菌約I. O X 1010CFU/g ;芽孢桿菌約2. O X 10nCFU/g ;腸球菌約3. 0X10nCFU/g。實施例5複合益生菌飼料添加劑的製備產朊假絲酵母和釀酒酵母純菌粉按I: I比例混合，用玉米粉(過40目篩)，紅糖(食品級)按重量百分比75% :25%稀釋，使最終活菌數達到酵母菌I. OX 109CFU/g。地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌純菌粉按I: I比例混合，用玉米粉(過40目篩)稀釋，使最終活菌數達到2. OX 109CFU/g。屎腸球菌和糞腸球菌純菌粉按1:1比例混合，用玉米粉(過40目篩)稀釋，使最終活菌數達到3.0X109CFU/g。稀釋菌粉按酵母菌芽孢桿菌腸球菌1.0:1.5:1.0進行混合後再與玉米澱粉配合製備飼料添加劑。複合菌粉與玉米澱粉的重量比為1:1。試驗例I試驗動物選擇28日齡斷奶仔豬(大X長)，根據窩源、體重、性別隨機分為5個處理，每個處理6個重複，每個重複6-8頭豬，公母比例均衡。表I試驗設計
_添加刻_濃度仔豬頭數
空白 - -43
處理2 實施例5 0.1%43處理3 實施例5 0.2%43處理4 實施例5 0.3%43、對照組I 勝肥速得 0.2% 43對照組2_益菌多_02%_43_注勝肥速得韓國生產的一種微生物產品，直接取自動物腸道的微生物，主要含有嗜酸乳酸菌I X 10nCFU/g;枯草芽孢桿菌I X 10nCFU/g ;糞鏈球菌I X 10nCFU/g ;酵母菌lX10nCFU/g。試驗規程試驗從仔豬斷奶時即28日齡左右時開始，一共進行35天，63日齡時結束。試驗組日糧在基礎日糧(表2 )的基礎上添加規定比例的微生物製劑。表2基礎日糧配方
權利要求
1.一種畜禽用複合益生菌飼料添加劑，其含有複合益生菌粉和輔料，所述複合益生菌為產I元假絲酵母(Candida util is)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis)、枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)、幾腸球菌(Enterococcus faecalis)和屎腸球菌(Enterococcus faecium)。
2.如權利要求I所述的飼料添加劑，其特徵在於，產朊假絲酵母菌粉、釀酒酵母菌粉、地衣芽孢桿菌菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、 糞腸球菌菌粉和屎腸球菌菌粉的重量比為I. 0-1. 5:I. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5。
3.如權利要求I或2所述的飼料添加劑，其特徵在於，所述產朊假絲酵母的活菌數為I. OX IO7 1.0X10nCFU/g，所述釀酒酵母的活菌數為I. OX IO7 1.0X10nCFU/g，所述產朊假絲酵母的活菌數為I. OX IO7 1.0X1012CFU/g，所述枯草芽孢桿菌的活菌數為I.0 X IO7 I. 0 X 1012CFU/g,所述糞腸球菌的活菌數為I. 0 X IO7 I. 0 X 1012CFU/g,所述屎腸球菌的活菌數為I. 0 X IO7 I. 0 X 1012CFU/g。
4.如權利要求I或2所述的飼料添加劑，其特徵在於，所述輔料選自玉米澱粉、葡萄糖、麥芽糊精中的一種或多種。
5.權利要求I 4任一項所述的飼料添加劑的製備方法，其包括如下步驟 1)分別製備產朊假絲酵母、釀酒酵母、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、糞腸球菌和屎腸球菌的菌泥，再將各自的菌泥與相應的凍幹保護劑混勻後冷凍乾燥製備成各自的菌粉； 2)將產朊假絲酵母菌粉、釀酒酵母菌粉、地衣芽孢桿菌菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、糞腸球菌菌粉和屎腸球菌菌粉的按重量比I. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1.5混勻後，再與輔料進行混合。
6.如權利要求5所述的製備方法，其特徵在於，還包括製備各自菌粉後將菌粉進行稀釋，所用的稀釋載體為重量百分比75-100%的玉米粉和0-25%的紅糖。
7.如權利要求5或6所述的製備方法，其特徵在於，產朊假絲酵母和釀酒酵母的凍幹保護劑為8-10%的甘油、生理鹽水和10-20%菌泥重量的脫脂奶粉；地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、糞腸球菌和屎腸球菌的凍幹保護劑為5. 0-6. 5%蔗糖、I. 0-1. 2%穀氨酸鈉和I. 0-1. 2%抗壞血酸水溶液、50-70%菌泥重量的脫脂奶粉。
8.含有權利要求I 4任一項所述的飼料添加劑的預混料。
9.含有權利要求I 4任一項所述的飼料添加劑的濃縮料。
10.含有權利要求I 4任一項所述的飼料添加劑的配合料。
全文摘要
本發明公開了一種畜禽用複合益生菌飼料添加劑，其含有複合益生菌粉和輔料，所述複合益生菌為產朊假絲酵母、釀酒酵母、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、糞腸球菌和屎腸球菌。本發明飼料添加劑可以提高畜禽生長性能，促進採食，維持其腸道微生物區系平衡，減少排洩物味道。
文檔編號A23K1/16GK102742728SQ20121020361
公開日2012年10月24日 申請日期2012年6月15日 優先權日2012年6月15日
發明者孫曉雯, 宋維平, 張軍, 彭子欣, 李曉清, 汪攀, 貟桂玲, 閆軼潔, 韓科廳 申請人:北京大北農科技集團股份有限公司, 哈爾濱大北農牧業科技有限公司, 漳州大北農農牧科技有限公司