C型肝炎病毒抗體化學發光法診斷試劑盒及其製備方法

2023-10-17 01:40:54

/>2.權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於，辣根過氧化物酶(HRP)標記抗人IgG抗體的製備方法可以是過碘酸鈉法也可以通過其它方法製備。3.權利要求1，2所述的試劑盒,其特徵在於包被板是不透光的白色微孔板。4.權利要求1-3所述的試劑盒，其特徵在於，該試劑盒包括HCV抗原包被板(48或96孔)、酶標記物1瓶、化學發光底物液1-2瓶、20倍濃縮洗滌液1瓶、陰性對照和陽性對照各1瓶、樣品稀釋液1瓶以及其它輔助試劑。5.權利要求4所述的試劑盒，其特徵在於，其中的洗滌液是含有Tween20的磷酸鹽緩衝液的洗滌液。6.權利要求4所述的試劑盒，其特徵在於，其中的陰性對照是混合的正常人血清。7.權利要求4所述的試劑盒，其特徵在於，其中的陽性對照是用新生牛血清稀釋的HCV抗體陽性人血清。8.根據權利要求1所述的C型肝炎病毒抗體診斷試劑盒(化學發光法)的製備方法，其包括(1)HCV抗原包被發光板的製備將包被用HCV重組抗原加至碳酸鹽緩衝液中混勻，加至發光板孔內，每孔100uL,4'C溫育過夜，用含有Twenn20的磷酸鹽緩衝液洗滌發光板3遍後，再加入含有BSA的磷酸鹽緩衝液，室溫靜置2小時後，棄去孔內液體，徹底乾燥發光板，r鋁鉑袋真空包裝，放2-8℃保存。(2)辣根過氧化物酶標記抗人IgG抗體的製備用改良的過碘酸鈉法將羊抗人IgG抗體和辣根過氧化物酶聯結在一起。(3)化學發光底物液的製備A液在雙蒸水中加入Tris和濃HCl配成0.1MpH8.5的Tris-HCl緩衝液。在此緩衝液中加入Luminol、Tween20以及苯並熒蒽(結構如下圖所示)，混合均勻。B液在雙蒸水中加入檸檬酸三鈉和檸檬酸，配製成0.1MpH4.6的檸檬酸緩衝液，在此溶液中加入30%過氧化氫溶液。使用前將A液與B液按1:1比例混合後使用。complexformulaseeoriginaldocumentpage3(4)其它組分的製備樣品稀釋液為含有指示劑的磷酸鹽緩衝液，洗滌液為含有Tween20的磷酸鹽緩衝液，陰性對照為混合的正常人血清，陽性對照為新生牛血清稀釋的HCV抗體陽性人血清。9.一種應用權利要求l-7所述的試劑盒進行檢測C型肝炎病毒抗體的方法，其特徵在於其檢測方法為(1)自2-8'C冰箱中取出試劑盒，室溫平衡15分鐘。(2)取出包被板條，插入板架上。(3)每次實驗設陰性對照3孔，陽性對照2孔，每孔分別加入陰性對照或陽性對照100ul，樣品孔中每孔加入樣品稀釋液100μ1，再加入樣品lOul,振蕩混勻後貼上封板膜，置37℃溫育30分鐘。(4)甩去反應液，每孔加滿稀釋後的洗滌液，洗板5次，最後在乾淨的吸水紙上扣幹。(5)除空白孔外，每孔加入酶標記物100ul，貼上封板膜，置37t:溫育3分鐘。(6)甩去反應液，每孔加滿稀釋後的洗滌液，洗板5次，最後在乾淨的吸水紙上扣幹。(7)使用前將化學發光底物液A和B以1:1混合，各孔均加入50lU的化學發光底物混合3液，混合均勻，置室溫避光反應5分鐘。(8)在發光測量儀上依序測量各孔的發光強度(RLU)。(9)根據待測樣本的RLU值與臨界值的比值S/CO值判斷。若S/CO值》1，則為陽性反應，說明樣本中含有HCV抗體；若S/CO值〈1，則為陰性反應，說明樣本中不含有HCV抗體。全文摘要本發明涉及一種化學發光法檢測C型肝炎病毒抗體診斷試劑盒及其製備方法、檢測方法。將包被用HCV重組抗原加入到緩衝液中，混勻，移至發光微孔板內，4℃溫育18小時，洗滌發光板後，加入封閉液，溫育後棄去液體，充分乾燥發光板，完成預包被發光板的製備；將標記用抗人IgG與辣根過氧化物酶用改良過碘酸鈉法結合，完成酶標記物的製備；用魯米諾、Tween20及發光增強劑製備化學發光底物液A，用雙氧水製備化學發光底物液B，試劑盒中還包含有樣品稀釋液，濃縮洗滌液，陰性對照為正常人血清，陽性對照為含HCV抗體陽性混合血清的人血清。本發明的試劑盒比ELISA具有更高的檢測靈敏度，安全可靠，操作簡便，成本低廉，並不需要昂貴的全自動化學發光測量儀。文檔編號G01N33/53GK101196518SQ20061016216公開日2008年6月11日申請日期2006年12月7日優先權日2006年12月7日發明者應希堂,胡國茂,詹先發申請人:北京科美東雅生物技術有限公司