心腦血管治療藥物及其製備方法和用途的製作方法

2023-10-09 03:48:59

專利名稱：心腦血管治療藥物及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，具體地說是提供心腦血管治療藥物一燈盞花乙素衍生物及其製備方法和用途。
背景技術：
燈盞花乙素存在於中藥燈盞花中，從藥理上看，燈盞花乙素可改善微循環，增加腦血流量，提高血腦屏障通透性；改善血液流變學，降低全血粘度，抗血小板聚集作用顯著，促纖溶活性，降低血纖維蛋白原，防栓溶栓；防治神經細胞內鈣超載和胞外興奮性胺基酸堆積，抑制蛋白激酶C位移激活或過度激活，減輕腦水腫，延緩缺血性腦細胞死亡，增加營養性心肌血流量，改善心肌微循環，並有一定的降血脂作用。目前臨床上用於治療腦血栓、腦出血及其後遺症；冠心病、心絞痛、心律失常；高粘血症；頑固性頸周症候群、椎基底動脈供血不足及其他缺血及伴有微循環障礙的疾病，在心腦血管疾病的治療中具有重要的應用價值。目前，公開的文獻僅報導了燈盞花乙素(C21H18O12. CAS No. :27740-01-8, 分子量462. 37)，到目前為止，國內外尚沒有公開的文獻報導燈盞花乙素結晶水合物 C21H18O12 · nH20，η = 1. 7 2. 2]及其製備方法和用途。

發明內容
本發明所涉及的是燈盞花乙素衍生物及其製備方法和用途，進一步說，是涉及燈盞花乙素結晶水合物K1H18O12 · ηΗ20，η = 1. 7 2. 2，η可以是1. 75、1. 8、2、2. 1、2. 2或其之間的數字]及其製備方法和用途。本發明獲得的含有結晶水的燈盞花乙素，令人驚奇的是，含結晶水的燈盞花乙素引溼性遠低於不含有結晶水的燈盞花乙素，含有結晶水的燈盞花乙素水合物比不含結晶水的更能穩定的存在，便於儲存和運輸，並在室溫下具有良好的水溶性，易於製成水溶性的製劑。此外，無水物的潮解使得在處理時要隔絕空氣防止粘連等，而水合物具有良好的滑動性，從而改善製劑的可操作性。令人驚奇的是，特徵性的，本發明的水合物的熱分析(TG-DTA)圖譜的失重平臺下具有對應的吸熱峰，熱分析圖譜顯示出燈盞花乙素的結晶水合物，如其1.75、2.0水合物寸。本發明的燈盞花乙素水合物，為黃色或淡黃色粉末，能穩定存儲。參考中國藥典要求進行引溼性試驗取燈盞花乙素無水物和本發明的水合物約lg，置於乾燥恆重的表面皿中，精密稱重，25°c、相對溼度為75%，分別於試驗Oh和4 取樣，計算其引溼增重的百分率，結果顯示，無水物引溼性比本發明的水合物都高得多，本發明的燈盞花乙素的結晶水合物能更好地穩定存儲，在RH75%、4(TC避光的條件下，將燈盞花乙素的結晶水合物和燈盞花乙素的無水物樣品分別密閉與西林瓶中進行加速穩定性試驗，色譜條件色譜柱=Kromasil C18 ^KtoimX 4. 6讓，5 μ m)，流動相甲醇-0. 磷酸(40 60)，檢測波長335nm，流速Iml/ min，測定有關物質增加的幅度。結果見表1 2。
表1.引溼試驗結果取樣時間(48小時)與0小時相比，增重％
燈盞花乙素2水合物燈盞花乙素1. 75水合物燈盞花乙素無水物0. 32% 0. 67% 6. 89%
表2.加速穩定性試驗結果取樣時間㈩月)與0月相比，有關物質的倍數
燈盞花乙素2水合物燈盞花乙素L 75水合物燈盞花乙素無水物0. 35 0.38 1.61說明本發明的燈盞花乙素結晶水合物具有更好的存儲穩定性。燈盞花乙素結晶水合物的製備包括如下方法方法A在反應容器中，將燈盞花全草用2 20倍量(體積比)的水、或C1-C6的低分子醇、C2-C6的低分子腈、C3-C8的低級酮、C2-C8的低分子酯等中的一種或幾種為溶劑進行提取(包括冷提、加熱提取、或超聲提取、或微波提取或回流提取等)一次至數次(1 6 次)，合併提取液，過濾、將濾液濃縮，濃縮物加水稀釋，用鹼調節pH為6. 5 9之間(所用的鹼包括碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉、精氨酸、賴氨酸、C1-C12的低分子胺等普通化學上定義的藥學上可接受的路易斯鹼或其鹼性溶液)，過濾，過矽膠層析柱、 或大孔吸附樹脂、或聚醯胺柱層析或葡萄糖凝膠樹脂，用水或C1-C6的低分子醇、C3-C8的低級酮、C2-C6的低分子腈等中的一種或幾種進行洗脫，濾液用酸調節pH為1 5(所用的酸包括鹽酸、硫酸、磷酸、碳酸、磷酸二氫鈉、乳酸、C1-C8的低分子酸等化學上定義的路易斯酸或其酸性溶液)，攪拌、放置、使沉澱充分析出，將所得沉澱過濾，用水與C1-C6的低分子醇、C2-C8的低分子酯、C3-C8的低級酮、C2-C6的低分子腈、C2-C6的低級醚、C1-C6的低級滷代烴、C1-C8的低分子酸等中的一種或幾種為結晶溶劑，進行重結晶一次或數次，過濾，水洗或C3-C8的低級酮、C2-C6的低分子腈的一種或幾種洗，將所得的固體乾燥，得燈盞花乙素結晶水合物；或者方法B在反應容器中，將燈盞花全草用2 20倍量(體積比)的水、鹼性溶液或C1-C6的低分子醇等中的一種或幾種為溶劑進行提取(包括冷提、加熱提取、滲鹿或超聲提取、或微波提取或回流提取等)一次至數次(1 6次)，過濾，合併濾液，將濾液濃縮，濃縮物加水稀釋，用鹼調節pH為6. 5 9之間(所用的鹼包括碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、磷酸氫二鈉、 磷酸鈉、碳酸鉀、枸櫞酸鈉、精氨酸、賴氨酸、C1-C12的低分子胺等普通化學上定義的藥學上可接受的路易斯鹼或其鹼性溶液等)，過濾，濾液過矽膠層析柱及大孔吸附樹脂、或聚醯胺柱層析或葡萄糖凝膠樹脂，用水或C1-C6的低分子醇、C3-C8的低級酮、C2-C6的低分子腈等中的一種或幾種進行洗脫，濾液用酸調節PH為1 5 (所用的酸包括鹽酸、硫酸、磷酸、碳酸、磷酸二氫鈉、乳酸、C1-C8的低分子酸等化學上定義的路易斯酸或其酸性溶液)，放置， 使沉澱充分析出，將所得沉澱過濾，用水或C1-C6的低分子醇、C2-C8的低分子酯、C3-C8的低級酮、C2-C6的低分子腈、C2-C6的低級醚、C1-C6的低級滷代烴、C1-C8的低分子酸等中的一種或幾種為結晶溶劑，進行重結晶一次或數次，過濾，水洗，將所得的固體乾燥，得燈盞花乙素結晶水合物；本發明所涉及的提取過程中按照常規可使用提取溶劑充分浸泡燈盞花葯材粉後再實施其它製備程序。本發明在製備過程中的過濾的方式可以是用濾布、漏鬥、垂熔玻璃濾器、砂芯濾棒、板框式壓濾機、微孔濾膜、陶瓷膜或超濾等的一種或幾種過濾方式進行一次或幾次過濾(1 6次).在製備燈盞花乙素結晶水合物所涉及的採用超濾除去雜質的方法或過程中，超濾器可選用平板式、卷式、管式、中空纖維式或圓盒式等，優選卷式和中空纖維式超濾器，採用截留相對分子質量4000 60000的超濾膜除去雜質，優選相對分子質量 6000 30000的超濾膜，更優選相對分子質量6000 20000的超濾膜。本發明的燈盞花乙素結晶水合物兩種製備方法的製備過程中，「提取液用鹼調節 pH為6. 8 9之間(所用的鹼包括碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉、碳酸鉀、枸櫞酸鈉、C1-C12的低分子胺等普通化學上定義的藥學上可接受的路易斯鹼或其鹼性溶液)，過濾，濾液過矽膠層析柱及大孔吸附樹脂、或聚醯胺柱層析或葡萄糖凝膠樹脂，用水或C1-C6的低分子醇、C3-C8的低級酮、C2-C8的低分子酯、C2-C6的低分子腈的一種或幾種進行洗脫，濾液用酸調節PH為1 5 (所用的酸包括鹽酸、硫酸、磷酸、碳酸、磷酸二氫鈉、 乳酸、C1-C8的低分子酸等化學上定義的路易斯酸或其酸性溶液)，放置，使沉澱充分析出」 的過程，該過程在製備過程中可將酸沉澱後得到的沉澱再以水稀釋後重複上述過程，進行 1 3次，以實現純化目的，之後再進行重結晶過程。本發明涉及的大孔吸附樹脂可包括如下型號的大孔吸附樹脂D-101型、DA-201 型、MD-05271 型、GDX-105 型、CAD-40 型、XAD-4 型、SIP 系列、D-型、X-5 型、AB-8 型、LD-605 型、LD-601 型、DM-130 型、R-A 型、CHA-101 型、WLD 型(混合型)、H-107 型、NKA-9 型等。本發明中的水合物的製備方法A和方法B的不同步驟，包括在提取和精製過程的方法還可以交叉使用，用於製備本發明的化合物。本發明中的低分子醇的碳原子數定義為C1_C6(即1-6個碳原子的醇)，如甲醇、 乙醇、異丙醇等；低分子醚的碳原子數定義為C2-C8(即2-8個碳原子的醚)，如乙醚、異丙醚、丁醚、四氫呋喃等；低分子滷代烴的碳原子數定義為Cl-C6(即1-6個碳原子的滷代烴)，包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿等；低分子酯的碳原子數定義為C2-C8(即2-8個碳原子的酯)，包括醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯等；低分子直鏈或支鏈烷烴或環烷烴的碳原子數定義為C5-C10，包括戊烷、正己烷、環己烷、石油醚等；低分子芳香烴的碳原子數定義為C6-C12 (即6-12個碳原子的芳香烴)，包括苯，甲苯等；C1-C8的低分子酸的碳原子數定義為1-8個碳原子的有機酸，包括甲酸、乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、馬來酸、酒石酸等；C3-C8 的低分子酮定義為3-8個碳原子的酮，包括丙酮，丁酮、異己酮等；C2-C6的低分子腈(即 2-6個碳原子的腈)，包括乙腈、丙腈等；C1-C12的低分子胺定義為1-12個碳原子的有機胺，包括二甲胺、二乙胺、三乙胺、環己胺、二環己胺、叔丁胺、N-甲基嗎啉、吡啶、甲基吡啶、 手性或消旋的鹼性胺基酸，如L-精氨酸、DL-賴氨酸等；關於任何一類描述為「低分子」化合物的碳原子數量的標記方法只要在本申請的文本中出現一次，其它任何未進行標記的描述為「低分子」的同類化合物的碳原子數與本文中已經標明的數量是一致的。燈盞花乙素水合物的結晶或重結晶溶劑，優選水、甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、丙酮、丁酮、異己酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸、二氯甲烷、氯仿、乙醚、異丙醚、四氫呋喃、石油醚、苯中的一種或幾種。本發明的產物的乾燥方式可以為在不同溫度(如20-100°C )、乾燥時間(1小時到數日)、或附有其它乾燥劑(包括矽膠，五氧化二磷、無水氯化鈣、無水硫酸鈉等)的環境條件下、或使用常壓或減壓的方式對最後的產物進行乾燥。其乾燥溫度優選在30 70°C。本發明的燈盞花乙素可具有不同的晶型，例如，從不同溶劑體系為結晶或重結晶體系而製備出來的燈盞花乙素1. 75、2水合物的X-射線粉末衍射圖譜可以有所不同。本發明中的結晶水合物或者實施例中的結晶水合物的溶液在同一 HPLC條件下的其主峰色譜保留時間具有一致性。本發明的燈盞花乙素水合物用途本發明的燈盞花乙素水合物用於製備注射用凍乾粉針製劑、粉針製劑、大輸液製劑、小水針注射劑，固體製劑等。本發明的燈盞花乙素水合物用於製備固體製劑的片劑(包括普通片、控緩釋片和膠囊、口含片、分散片、口崩片等)、膠囊(包括普通膠囊、控緩釋膠囊等)、顆粒劑，混懸劑、 滴丸劑等，其中可含有藥學上可接受的填充劑，如澱粉、變性澱粉、乳糖、微晶纖維素、環糊精、山梨醇、甘露醇、木糖醇、磷酸鈣、磷酸氫鈣、胺基酸、聚乙二醇4000-20000、泊洛沙姆、明膠、硬脂酸、硬脂酸鈉等；藥學上可接受的崩解劑，如澱粉、變性澱粉、微晶纖維素、羧甲基澱粉鈉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素、表面活性劑、；藥學上可接受的潤溼劑和粘合劑，如膠化澱粉、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸及其鹽；藥學上可接受的潤滑劑和助流劑，如硬脂酸、硬脂酸鎂、聚乙二醇4000-8000、滑石粉、微粉矽膠、十二烷基硫酸鎂等；藥學上可接受的甜味劑和香精，如蔗糖、阿斯巴甜、甜蜜素、糖精鈉、三氯蔗糖、食用香精等；藥學上可接受的助懸穩定劑，如黃原膠、瓜爾膠、明膠、 阿拉伯膠、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、西黃蓍膠、海藻酸鈉等；其它藥學上可接受的穩定劑，如環糊精等。本發明的結晶水合物不同於無水物的潮解使得在處理時要隔絕空氣防止粘連等， 而結晶水合物具有良好的滑動性，從而改善製劑的可操作性；並使製備的固體製劑具有良好的溶出性能，使得其容易被吸收進入血液循環，改善生物利用度，並有利於快速發揮其作用。燈盞花乙素水合物針劑，其製備方法為凍乾粉針製劑的製備方法為取燈盞花乙素水合物，可以加藥學上可接受的助溶劑、凍幹支持劑或輔形劑、穩定劑、注射用水，攪拌使溶解，若需要，可用藥學上可接受的酸鹼調節ρΗ為4. 5 7. 5，加活性碳0. 005 1 % (W/V)攪拌15 45min,過濾，補水，無菌過濾，按5 400mg/瓶(以主藥計)分裝，冷凍乾燥，壓塞，得成品。燈盞花乙素水合物小容量注射液及其製備工藝燈盞花乙素水合物加注射用水和藥學上可接受的附加劑，例如藥學上可接受的助溶劑、PH調節劑、藥學上可接受的抗氧劑、惰性氣體，過濾、除菌製成滅菌小容量注射液，其PH值在4. 5 7. 5之間。藥學上可接受的凍幹支持劑或輔形劑可以含有乳糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、右旋糖酐、胺基酸或其鹽(包括甘氨酸、牛磺酸、精氨酸等)、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、去氧膽酸鈉等的一種或幾種。其藥學上可接受的PH調節劑可以是藥學上可接受的無機酸或有機酸、無機鹼或有機鹼，也可以是廣義的路易斯酸或鹼，可以含有一種或者幾種，可以是鹽酸、磷酸、丙酸、醋酸及醋酸鹽、如醋酸鈉等，乳酸以及乳酸藥用鹽、枸櫞酸藥用鹽、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸鹽、酒石酸及其藥用鹽、硼砂、硼酸、丁二酸、己酸、己二酸、 反丁烯二酸、順丁烯二酸、三羥基氨基甲烷、二乙醇胺、乙醇胺、異丙醇胺、二異丙醇胺、2-氨基-2-(羥甲基)1，3_丙二醇胺、1，2_己二胺、N-甲基葡萄胺、二異丙胺以及它們的鹽，多羥基羧酸及藥用鹽，如葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、乳糖酸、蘋果酸、蘇糖酸、葡庚糖酸、胺基酸及胺基酸鹽等中的一種或者幾種。其藥學上可接受的抗氧劑和穩定劑可以是亞硫酸、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、焦亞硫酸鹽、連二亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽，有機硫化合物硫脲、穀胱甘肽、二巰基丙醇、巰基乙酸及鹽、硫代乳酸及鹽、硫代二丙酸及鹽、苯酚類化合物，如沒食子酸及鹽、咖啡酸、咖啡酸鹽、阿魏酸、阿魏酸鹽、二叔丁基對苯酚、2，5-二羥基苯甲酸、2，5-二羥基苯甲酸鹽、苯酚或其衍生物、水楊酸或其鹽；胺基酸以及其鹽；抗壞血酸及抗壞血酸鹽、異抗壞血酸及異抗壞血酸鹽、煙醯胺、酒石酸、硝酸鹽、磷酸鹽、醋酸藥用鹽、檸檬酸鹽、EDTA及EDTA鹽、如EDTA 二鈉、 EDTA四鈉、N- 二(2-羥乙基)甘氨酸、α -環糊精、β -環糊精、γ -環糊精、葡糖基-環糊精 (G1-CYD)、麥芽糖基-β -環糊精、羥丙基β -環糊精、2-羥丙基β -環糊精Q-HP-β -CYD)、 3-羥丙基 β -環糊精(3-ΗΡ- β -CYD)、磺丁醚-β -環糊精(SBE- β -CD)，如(SBE7- β -CD)、 SBE4-β -⑶等中的一種或者幾種。其藥學上可接受的助溶劑可以是碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉、 磷酸氫二鉀、乳酸鈉、枸櫞酸鈉、N-甲基葡萄胺、N-乙基葡萄胺、煙醯胺、乙二胺、二乙胺、乙醇胺(包括二乙醇胺、三乙醇胺等)、三羥基氨基甲烷、L或D或DL型胺基酸(包括L或D或 DL型精氨酸、賴氨酸、瓜氨酸、組氨酸等)等藥學上可接受的有機胺、吐溫20-80、泊洛沙姆 (包括泊洛沙姆124，188，237，338,407等)、聚乙二醇200-2000、乙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇、葡糖基-環糊精(G1-CYD)、麥芽糖基-β-環糊精、羥丙基β-環糊精、2-羥丙基β-環糊精 Q-HP-β -CYD)、3_羥丙基 β -環糊精(3-ΗΡ-β -CYD)、磺丁醚-β -環糊精(SBE-β -CD)， 如(SBE7-β -⑶)、SBE4-β -⑶等、以及水等中的-種或者幾種。凍幹支持劑或輔形劑可以是葡萄糖、果糖、木糖醇、山梨醇、甘露醇、轉化糖、麥芽糖、右旋糖酐、N-甲基葡萄胺、N-乙基葡萄胺、煙醯胺、乙二胺、二乙胺、乙醇胺(包括二乙醇胺、三乙醇胺等)、磷酸氫二鈉、磷酸鈉、磷酸氫二鉀、乳酸鈉、、枸櫞酸鈉、L或D或DL型胺基酸(包括L或D或DL型精氨酸、賴氨酸、瓜氨酸、組氨酸等)、吐溫20-80、泊洛沙姆 (包括泊洛沙姆124，188，237，338，407等)、聚乙二醇200-2000、乙醇、乙二醇、丙三醇、葡糖基-環糊精(G1-CYD)、麥芽糖基-β-環糊精、羥丙基β-環糊精、2-羥丙基β-環糊精 (2-ΗΡ- β -CYD)、3-羥丙基 β -環糊精(3-ΗΡ- β -CYD)、磺丁醚-β -環糊精(SBE- β -CD)，如 (SBE7-β -⑶)、SBE4-β -⑶等、以及水等中的一種或者幾種。其藥學上可接受的等滲調節劑可以是葡萄糖、果糖、木糖醇、山梨醇、甘露醇、轉化糖、麥芽糖、右旋糖酐、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉等中的一種或幾種。去熱源和除菌方式可以是加入配液量0.005 3%的活性炭去熱源，微孔濾膜除菌和熱壓滅菌，也可以採用超濾除菌、去熱源。超濾方法中，超濾器可選用平板式、卷式、管式、中空纖維式或圓盒式等，優選卷式和中空纖維式超濾器，採用截留相對分子質量為5萬至30萬的濾膜除去大部分發熱性物質和細菌後，再採用截留相對分子質量4000 30000 的超濾膜除去剩餘熱源，優選相對分子質量6000 30000的超濾膜。
本發明的燈盞花乙素結晶水合物，適用於製備人和哺乳動物的冠心病、心絞痛、心肌梗死、心律失常、缺血性腦疾病、腦血栓、腦栓塞、腦出血及其後遺症、血管性痴呆；末梢循環障礙疾病如各種動脈閉塞症、脈管炎、糖尿病引起的微循環障礙、頑固性頸周症候群、椎基底動脈供血不足及其他缺血及伴有微循環障礙的疾病、高粘血症等疾病的治療或預防的藥物中的應用。用量用法一般情況下，於成人，肌內注射5-200mg/次，一日1_3次。靜脈注射 5-400mg/次，以25%葡萄糖注射液稀釋。靜脈滴注5-400mg，以5%葡萄糖注射液或0. 9% 氯化鈉注射液250 500ml稀釋，一日1-2次。兒童減半量以上使用。經胃腸道給藥用量用法10 70kg體重的人或動物，一般情況下10 400mg/天，分1_3次給藥；兒童減半量以上使用。


圖1為燈盞花乙素1. 75水合物的熱分析圖譜，圖2為燈盞花乙素2水合物的熱分析圖譜，測試條件Setaram公司ktsys 16，樣品量5mg左右，升溫速度10K/min，N2流速 50ml/min，溫度一般為室溫 400°C左右。
具體實施例方式實施例1燈盞花乙素1. 75結晶水合物的製備在提取罐中，將40目左右的燈盞花全草乾粉2kg用甲醇200ml、乙醇12L、水2L為混合溶劑回流提取3次，經濾布粗濾，合併提取液，再以0. 45-1 μ m微孔濾膜過濾，再採用截留相對分子質量10000 30000的超濾膜過濾，將濾液濃縮致幾近無醇，再用碳酸氫鈉溶液調節稀釋液的pH為7. 2左右，過濾，濾液過DlOl型大孔吸附樹脂、水洗，收集洗脫液，過濾，濾液用稀磷酸調節pH = 2 3，靜置，待沉澱充分析出，濾過，沉澱用水洗致近中性、再用乙醇、氯仿洗，抽濾，所得固體用甲醇ani、 丙酮150ml、氯仿5ml、水IOml的溶劑進行重結晶2次，過濾，水洗，固體45°C左右真空乾燥 24 小時，得黃色粉末 1. lg，熔點193°C變灰(ELECTROTHERMAL MELTING POINT APPARATUS, 未校正)；紫外取其5yg/ml的甲醇溶液，照分光光度法測定，發現在波長與335nm 處有最大吸收；HPLC 主色譜峰與市售燈盞花乙素注射液主峰保留時間相同；ESI-MS :m/z 461 ；紅外光譜:vKBrmax 01^3380(寬)、2920、1721、1661、1608、1557、1498、1467、1362、1249、 1215、1184、1084、1043,923,846,740,619,卡氏法測定水分為6. 61%,熱分析平臺失重約 6. 37%,這與樣品含有1. 75個結晶水的結果(理論值6. 39% )在誤差範圍內(見附圖1)， 元素分析理論值C 51.07%,H4. 39% ；實測值C 51. 19%, H4. 46%0實施例2燈盞花乙素2水合物的製備在提取罐中，將40目左右的燈盞花全草乾粉4kg用乙醇32L、水4L為混合溶劑回流提3次，過濾，合併提取液，將濾液濃縮致幾近無醇，加水稀釋，再用碳酸鈉溶液調節稀釋液的pH為7. 5左右，以0. 2-1 μ m陶瓷膜過濾，濾液用DlOl大孔樹脂吸附、水洗，收集洗脫液，過濾，濾液用醋酸調節pH = 2 3，靜置，待沉澱充分析出，濾過，沉澱用水洗致近中性、再用乙醇、氯仿洗，抽濾，所得固體加水稀釋，攪拌下加碳酸鈉溶液使其溶解，並調節稀釋液的pH為7. 5左右，採用截留相對分子質量8000 20000的超濾膜(聚碸中空纖維膜組件，纖維孔徑約0.011 μ m，內徑約為1.1mm)過濾，濾液用醋酸調節PH = 2 3，靜置，待沉澱充分析出，濾過，沉澱用水洗致近中性、再用乙醇、 氯仿洗，抽濾，所得固體用甲醇anl、乙醚10ml、丙酮300ml、正丁醇5ml、水30ml的溶劑進行重結晶2次，過濾，水洗，固體45°C左右真空乾燥6小時，得黃色粉末2. 87g ；熔點192°C 變灰(未校正)，紫外光譜取其5 μ g/ml的甲醇溶液，照分光光度法測定，發現在波長 284nm與335nm處有最大吸收，在310nm有最小吸收；紅外光譜/^.01^3513,3376 (寬)、 2920、1721、1661、1608、1574、1498、1467、1442、1361、1249、1225、1183、1150、1083、1043、 902，845、740、619、589，ESI-MS :m/z :461 ；卡氏法測定水分為7. 74%，熱分析平臺失重約 7.沈％，這與樣品含有2個結晶水的結果(理論值7. 23%)在誤差範圍內(見附圖2)，元素分析理論值C 50. 61%,H4. 45% ；實測值C 50. 76%, H4. 57% 實施例3燈盞花乙素2水合物的製備在提取罐中，將40目左右的燈盞花全草乾粉2kg用80%乙醇3L充分潤溼後，用乙醇16L、水3L為混合溶劑超聲提取3次，合併提取液，經濾布粗濾，再以0. 45 μ m微孔濾膜過濾，採用截留相對分子質量10000 30000的超濾膜(聚碸中空纖維膜組件，纖維孔徑約0.011 μ m，內徑約為1.1mm)過濾，將濾液減壓濃縮致幾近無醇，加水稀釋，再用碳酸鈉溶液調節稀釋液的pH為7. 5左右，過濾，DlOl大孔樹脂吸附、水洗，收集洗脫液，過濾，濾液用醋酸調節PH = 2 3，靜置，待沉澱充分析出，濾過，沉澱用水洗致近中性、再用乙醇、氯仿洗，抽濾，所得固體加水稀釋，攪拌下加磷酸鈉溶液使其溶解，並調節稀釋液的pH為7. 5左右，採用截留相對分子質量8000 20000的超濾膜過濾，濾液用醋酸調節PH = 2 3，靜置，待沉澱充分析出，濾過，沉澱用水洗致近中性、 再用乙醇、氯仿洗，抽濾，所得固體用甲醇1ml、異丙醇5ml、丙酮120ml、乙酸5ml、水IOml 為溶劑進行重結晶2次，過濾，水洗，固體50°C左右真空乾燥4小時，得黃色粉末1. 21g ；熔點189°C變灰(未校正)，紫外光譜10 μ g/ml的甲醇溶液，波長與335nm處有最大吸收，在310nm有最小吸收；HPLC 主色譜峰與市售燈盞花乙素注射液主峰保留時間相同； 紅外光譜:vKBrmaxcm_13513,3376(寬)、2920、1721、1661、1608、1574、1498、1467、1442、1361、 1249、1225、1183、1150、1083、1043、902，845、740、619、589，ESI-MS :m/z :461 ；卡氏法測定水分為7. 68%，熱分析TG-DSC 平臺失重約7. 06%，這與樣品含有2個結晶水的結果(理論值7. 23%)在誤差範圍內；元素分析理論值C50. 61%，H4. 45% ；實測值C 50. 55%, H4. 61%。實施例4燈盞花乙素1. 75水合物的製備在提取罐中，將40目左右的燈盞花全草乾粉3kg用60%乙醇4L充分潤溼後，用飽和碳酸氫鈉溶液180ml、乙醇ISLjK 4L為混合溶劑超聲提取3次，合併提取液，經濾布粗濾，再以0. 45 μ m陶瓷膜過濾，採用截留相對分子質量10000 30000的超濾膜過濾，再用碳酸鈉溶液或醋酸調節稀釋液的pH為7. 5左右， 濾液過矽膠層析柱，水洗，所得液體再過DlOl大孔吸附樹脂、水洗，收集洗脫液，過濾，濾液用醋酸調節pH = 2 3，靜置，待沉澱充分析出，濾過，沉澱用水洗致近中性、再用乙醇、氯仿洗，抽濾，所得固體加水稀釋，攪拌下加碳酸鈉溶液使其溶解，並調節稀釋液的pH為7. 5 左右，採用截留相對分子質量8000 20000的超濾膜(聚碸中空纖維膜組件，纖維孔徑約 0. 011 μ m，內徑約為1. Imm)過濾，濾液用醋酸調節pH = 2 3，靜置，待沉澱充分析出，濾過，沉澱用水洗致近中性、再用乙醇、異己酮洗，抽濾，所得固體用甲醇1ml、異丙醇5ml、丙酮160ml、乙酸乙酯5ml、乙腈:3ml、水IOml為溶劑進行結晶，過濾，水洗，固體50°C左右真空乾燥4小時，得黃色粉末1.56g;熔點194°C變灰(未校正)，紫外光譜10yg/ml的甲醇溶液，波長與335nm處有最大吸收，在310nm有最小吸收；HPLC 主色譜峰與市售燈盞花乙素注射液主峰保留時間相同；ESI-MS :m/z 461 ；卡氏法測定水分為6. 79%，熱分析 TG-DSC 平臺失重約6. 32%，這與樣品含有1. 75個結晶水的結果(理論值6. 39% )在誤差範圍內；元素分析理論值C 51.07%,H4. 39% ；實測值C 50. 95%，H4. 51 %。取少量樣品 140°C、五氧化二磷存在下乾燥池得其無水物。實施例5取燈盞花乙素二水合物5g (按無水物計)、碳酸鈉0. 6g、加甘露醇5g、磷酸二氫鈉0. 2g、抗壞血酸鈉0. 2g、EDTA 二鈉0. 02g，加20_5(TC注射用水250ml左右，攪拌使溶，用磷酸和磷酸氫二鈉溶液調節pH為5. 5 7. 1，加活性碳0. 01 0. 5% (W/V)攪拌 15-30min，過濾，補註射用水至300ml，用0. 22微米微孔濾膜過濾或者採用截留相對分子質量6000 20000的超濾膜過濾，按25、50mg/瓶或IOOmg/瓶(按燈盞花乙素無水物計)分裝，真空冷凍乾燥，壓塞，得凍幹品。實施例6取燈盞花乙素水合物5g、碳酸氫鈉lg、加甘露醇30g、抗壞血酸鈉lg、 EDTA 二鈉0. 02g，加20-50°C注射用水850ml左右，攪拌使溶，用檸檬酸和檸檬酸鈉溶液調節PH為7. 0左右，加活性碳0. 3% (W/V)攪拌20min，過濾，補註射用水至1000ml，加活性碳 0. 01 0. 5% (W/V)攪拌15-30min，過濾，用0. 22微米微孔濾膜過濾，按5、10、20或50mg/ 瓶(按燈盞花乙素無水物計)分裝，真空冷凍乾燥，壓塞，得凍幹品。實施例7取燈盞花乙素水合物5g (按無水物計)，L-精氨酸1. 8g，加山梨醇15g， 磷酸二氫鈉0. 5g，酒石酸鈉0. 2g、鹽酸半胱氨酸0. lg、EDTA 二鈉0. 02g，加30-50°C注射用水400ml左右，攪拌使溶，用酒石酸和酒石酸鈉溶液調節pH為5. 6 6. 5，加活性碳0. 5% (W/V)攪拌30min，過濾，補註射用水至500ml，用0. 22微米微孔濾膜過濾或者採用截留相對分子質量6000 20000的超濾膜過濾，按20、50mg/瓶或IOOmg/瓶(按無水物計)分裝， 真空冷凍乾燥，壓塞，得凍幹品。實施例8取燈盞花乙素二水合物5g (按無水物計)，賴氨酸1. 47g，加甘露醇10g， 磷酸二氫鈉0. 5g,鹽酸半胱氨酸鈉0. lg、EDTA 二鈉0. 05g,加30-50°C注射用水420ml左右， 攪拌使溶，用檸檬酸和檸檬酸鈉溶液調節PH為5.6 6.2，加溶液量0.5% (W/V)活性碳攪拌30min，過濾，補註射用水至500ml，用0. 22微米微孔濾膜過濾或者採用截留相對分子質量6000 20000的超濾膜過濾，按5、10、20、50mg/瓶或IOOmg/瓶(按燈盞花乙素無水物計)分裝，真空冷凍乾燥，壓塞，得凍幹品。實施例9燈盞花乙素水合物注射液的製備燈盞花乙素水合物(按幹品計)10g，磷酸氫二鈉4g，檸檬酸鈉2g，亞硫酸氫鈉lg、丙二醇10ml、EDTA 二鈉0. lg，避強光下加注射用水、通氮氣、攪拌使溶解，檸檬酸和檸檬酸鈉溶液調節pH為5. 6 6. 3，加活性碳0. 1% (W/ V)攪拌15 45min，過濾，補水至2000ml左右，用0. 22微米微孔濾膜過濾或者採用截留相對分子質量6000 20000的超濾膜過濾，溶液通氮氣飽和，按主藥10、20、25、40mg、50mg或 IOOmg/支分裝，滅菌得成品。實施例10燈盞花乙素水合物注射液的製備燈盞花乙素水合物(按幹品計)5g，吐溫-80 20ml，鹽酸半胱氨酸lg、丙二醇20ml、EDTA 二鈉0. lg，避強光下加注射用水、通氮氣、攪拌使溶解，檸檬酸和檸檬酸鈉溶液調節PH為5. 6 6. 3，加活性碳0.1% (W/V)攪拌 45min，過濾，補水至2000ml左右，用0. 22微米微孔濾膜過濾或者採用截留相對分子質量 6000 20000的超濾膜過濾，溶液通氮氣飽和，按主藥2. 5,5UOmg/支分裝，滅菌得成品。
實施例11燈盞花乙素水合物注射液的製備燈盞花乙素水合物(按幹品計)10g， 精氨酸4g，檸檬酸鈉2g，鹽酸半胱氨酸lg、丙二醇20ml、EDTA 二鈉0. 2g，避強光下加注射用水、通氮氣、攪拌使溶解，檸檬酸和檸檬酸鈉溶液調節pH為5. 6 6. 3，加活性碳0. 1% (W/ V)攪拌35min，過濾，補水至5000ml左右，用0. 22微米微孔濾膜過濾，溶液通氮氣飽和，按主藥10、20、25、40mg或50mg/支分裝，滅菌得成品。實施例12燈盞花乙素水合物注射液的製備稱取葡萄糖250g加入注射用水中，攪拌使溶解完全，加入配液量0. 5%的活性炭，加熱10-30分鐘左右，經砂濾棒過濾脫炭；將燈盞花乙素二水合物(按幹品計)5g與上述濾液混合均勻，加磷酸二氫鈉3g，酒石酸鈉lg、 丙三醇20ml、磺丁醚- β -環糊精lg，EDTA 二鈉0. 05g，溶解完全後，加注射用水至5000ml， 用1-3M鹽酸或乳酸或檸檬酸以及檸檬酸鈉溶液調節pH值在4. 5-6. 0的範圍內，加配液量 0. 05 %的活性炭，加熱攪拌10-30分鐘左右，過濾脫炭，再經0. 22um微孔濾膜過濾一到兩次，溶液通高純氮氣飽和，檢驗澄明度等後溶液按主藥25、50mg或IOOmg支灌封，滅菌，包裝即得。實施例13燈盞花乙素水合物氯化鈉輸液的製備將燈盞花乙素水合物(按無水物計)25g、氯化鈉425g、枸櫞酸鈉5g、EDTA 二鈉lg，加入注射用水中，溶液通高純氮氣飽和，攪拌使溶解完全，用枸櫞酸溶液和枸櫞酸鈉溶液調節PH值在5. 0-6. 5的範圍內，加注射用水至50L，加配液量0. 05%的活性炭，攪拌10-30分鐘左右，過濾脫炭，再經0. 22um的膜精濾或者採用截留相對分子質量6000 20000的超濾膜過濾，經半成品化驗，待其含量、pH值和澄明度合格後，在高純氮氣下，灌裝於50ml、IOOml或250ml瓶或塑膠袋中，滅菌，包裝即得。實施例14燈盞花乙素水合物氯化鈉輸液的製備將燈盞花乙素水合物(按無水物計)20g、氯化鈉425g、酒石酸鈉5g、EDTA 二鈉0. 5g，加入注射用水中，溶液通高純氮氣飽和， 攪拌使溶解完全，用酒石酸溶液和酒石酸鈉溶液調節PH值在5. 0-6. 5的範圍內，加注射用水至50L，加配液量0. 05%的活性炭，攪拌10-30分鐘左右，過濾脫炭，再經0. 22um的微孔膜精濾2次，經半成品化驗，待其含量、pH值和澄明度合格後，在高純氮氣下，灌裝於50ml、 IOOml或250ml瓶或塑膠袋中，滅菌，包裝即得。實施例15燈盞花乙素水合物片(50mg/片)處方燈盞花乙素2水合物50g微晶纖維素135g乳糖IOg羧甲基澱粉鈉5gβ -環糊精5g5% PVP30(50%的乙醇水溶液)適量硬脂酸鎂2g將燈盞花乙素水合物、微晶纖維素、乳糖、β-環糊精、羧甲基澱粉鈉過100目蹄， 用5% PVP30的50%的乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過18-24目篩制粒，乾燥，過14-20 目篩整粒後，加硬脂酸鎂混勻，壓片。實施例16燈盞花乙素水合物膠囊(50mg/粒)處方燈盞花乙素2水合物 50g
微晶纖維素乳糖
65g IOg 5g 5g 羧甲基澱粉鈉β-環糊精5% PVP30(
5 % PVP30 (50 %的乙醇水溶液)適量 硬脂酸鎂將燈盞花乙素水合物、微晶纖維素、乳糖、β-環糊精、羧甲基澱粉鈉過100目蹄， 用5% PVP30的50%的乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過18-24目篩制粒，乾燥，過14-20 目篩整粒後，加硬脂酸鎂混勻，灌裝膠囊。實施例17燈盞花乙素水合物分散片(50mg/片)處方燈盞花乙素水合物 50g微晶纖維素135g乳糖IOg聚乙二醇60003g低取代羥丙基纖維素IOg羧甲基澱粉鈉5gβ -環糊精5g阿司帕坦Ig5 % PVP30 (50 %的乙醇水溶液)適量硬脂酸鎂2g將燈盞花乙素水合物、微晶纖維素、乳糖、聚乙二醇6000、低取代羥丙基纖維素、 β -環糊精、羧甲基澱粉鈉、阿司帕坦過100目篩，用5 % PVP30的50 %的乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過18-24目篩制粒，乾燥，過14-20目篩整粒後，加已過100目篩的硬脂酸鎂混勻，壓片。實施例18燈盞花乙素水合物膠囊(50mg/粒)處方燈盞花乙素1. 75水合物50g微晶纖維素65g玉米澱粉IOg低取代羥丙基纖維素5gβ -環糊精5g5 % PVP30 (50 %的乙醇水溶液)適量微粉矽膠2g將燈盞花乙素水合物、微晶纖維素、玉米澱粉、β -環糊精、低取代羥丙基纖維素過 100目篩，用5% PVP30的50%的乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過18-24目篩制粒，乾燥，過14-20目篩整粒後，加微粉矽膠混合，灌裝膠囊。實施例19燈盞花乙素1. 75水合物片(50mg/片)處方燈盞花乙素1. 75水合物50g甘露醇120g乳糖25g
羧甲基澱粉鈉5gβ-環糊精5g5% PVP30(50%的乙醇水溶液)適量硬脂酸鎂2g將燈盞花乙素水合物、甘露醇、乳糖、β -環糊精、羧甲基澱粉鈉過100目篩，用5% PVP30的50%的乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過18-24目篩制粒，乾燥，過14-20目篩整粒後，加硬脂酸鎂混勻，壓片。實施例20燈盞花乙素水合物顆粒(IOOmg/包)處方燈盞花乙素水合物IOOg(以無水物計)甘露醇185g乳糖710g甲基纖維素3g黃原膠5g固體食用香精Ig5%羥丙基甲基纖維素適量將燈盞花乙素水合物、甘露醇、乳糖、甲基纖維素、黃原膠、食用香精過100目蹄， 用5%的羥丙基甲基纖維素的50%乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過18-24目篩制粒， 60°C以下乾燥，過14-20目篩整粒後，分包裝。實施例21燈盞花乙素水合物混懸劑05mg/包)處方燈盞花乙素水合物25g(以無水物計)甘露醇165g乳糖780g黃原膠8g固體食用香精Ig5%羥丙基甲基纖維素適量將燈盞花乙素水合物、甘露醇、乳糖、食用香精過100目蹄，用5%的羥丙基甲基纖維素的50%乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過18-24目篩制粒，60°C以下乾燥，過14-20 目篩整粒後，將已過100目篩的黃原膠與上述顆粒混勻，分包裝。實施例22燈盞花乙素水合物滴丸劑處方燈盞花乙素2水合物25g(以無水物計)聚乙二醇6000325g聚乙二醇400030g硬脂酸20g將聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、硬脂酸加熱使之融化，將過100目篩的燈盞花乙素水合物加入其中，攪拌使混勻，保溫下滴入植物油或二甲基矽油中，待冷卻成丸，收集滴丸，乾燥即得。實施例23藥理學試驗如下Wistar雄性大鼠48隻，體重250 300g，隨機分為4組假手術組、缺血再灌組和燈盞花乙素1. 75水合物組、燈盞花乙素2水合物組，每組12隻。本發明藥物組；採用燈盞花乙素水合物的生理鹽水腹腔給藥，劑量為75mg/kg，每天兩次，連續7天，最後一次給藥 60min後實施腦缺血手術；假手術組和缺血再灌組分別給以等容積的生理鹽水。大鼠用10%水合氯醛(3.5ml/kg)腹腔注射麻醉，仰臥位固定，參照文獻用Zea Longa線拴改良法造模[上海交通大學學報(醫學版)2007，27 (10) :1218-1222]；假手術組栓線只插入10mm，其餘步驟同模型組，動物甦醒後出現手術側Homer徵和對側體運動障礙即為模型製備成功。造模成功後本發明藥物組一天給藥2次，劑量同前，假手術組和缺血再灌組分別給以等容積的生理鹽水。造模後池抽出線，再灌注M小時後處死大鼠，迅速取腦稱重。低溫下用生理鹽水製成10%腦組織勻漿液，低溫離心，3000r/min離心lOmin，棄沉澱，取上清液，按市售測試超氧歧化酶SOD、丙二醛MDA、一氧化氮NO、一氧化氮合酶NOS相應試劑盒的說明書分別測定SOD、MDA、NO、NOS含量或活性，結果見表3。表3.本發明藥物對大鼠腦缺血再灌注腦組織中NO、N0S, MDA、SOD的影響
NO_ol/L)NOS(U/ml)MDA(nmoVml)SOD(U/ml)假手術組17±4.2616+4.64147±0. 53218+24. 07缺血再灌組26 土 6. 9226 土 6. 072，&1土0.66134 土 19.25燈盞花乙素20+6, 3220土 5. 52. 07 土0. 78181 ±23 . 611- 75水合物組燈盞花乙素2水21 + 7.5419±5. 742. 02 ±0. 71179 ±19. 36合物組結果表明，與假手術組相比，缺血再灌模型組大鼠腦組織中SOD活性明顯降低， MDA、NO含量及NOS活性明顯增加(P<0.01)；與缺血再灌模型組相比，本發明藥物大鼠腦組織中SOD活性明顯升高，NOS活性降低，MDA、NO含量明顯減少(P < 0. 01)。隨著對缺血性腦損傷的病理機制認識不斷加深，人們發現氧自由基、興奮性胺基酸、一氧化氮(N0)、單胺類遞質、Ca2+超載等多種因素參與了損傷過程。在缺血性腦損傷中， 缺血過程中可產生大量的氧自由基。SOD是細胞內主要的對抗氧自由基的酶促防禦系統，它通過歧化方式清除超氧陰離子自由基，保護生物體免受自由基的攻擊。目前已肯定SOD可顯著減輕腦缺血引起的損傷，不僅給予外源性SOD有抗腦缺血損傷的作用，而且利用轉基因動物敲除或轉入SOD基因後均可分別拮抗或促進腦缺血的損傷。可見SOD值的高低直接反映機體清除氧自由基的能力。各種不同的氧自由基攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸，引發脂質過氧化作用，形成一系列的脂質自由基及其降解產物MDA。MDA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發生脂質過氧化反應的代謝產物，其含量的變化可間接地反映組織中氧自由基含量變化。研究表明，NO是具有生物活性信使小分子，可自由穿過細胞膜，作用於胞內的靶分子。在生物體內，NO生成後很快被氧化滅活，以硝酸根和亞硝酸根的形式存在於細胞的內外液中。低濃度的NO能使血管擴張，抑制血小板集聚與粘附，使穀氨酸調控的離子通道下調，防止細胞內鈣超載，因而對細胞有保護作用；但在高濃度下，NO可與超氧陰離子反應生成超氧亞硝酸根離子，超氧亞硝酸根離子可以降解為0H—和NO2—自由基，使細胞膜發生脂質過氧化作用，在細胞的膜水平造成強烈的神經毒性，甚至導致神經元死亡等。
研究表明，NO在腦缺血性損傷和心肌缺血損傷的發病中起重要作用，缺血後數分鐘NO含量明顯增高，之後緩慢下降，於再灌注期NO再次升高。其機制可能為腦缺血後神經元受損，細胞膜去極化過程增強，突觸前穀氨酸等興奮性胺基酸生成大量增加，使胞外穀氨酸濃度升高，激活N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)受體，NMDA受體激活後使突觸後Ca2+ 內流增加，激活一氧化氮合酶N0S，促進NO的生成；其二，腦缺血後，ATP大量消耗，導致能量代謝障礙及cAMP依賴的蛋白激酶活性下降，由於NOS脫磷酸化使得NOS的活性增強，從而促進NO的生成。一氧化氮合酶是一氧化氮合成的限速酶NOS。在腦缺血早期，NOS介導生成的NO通過擴張血管改善缺血區的血液供應，具有短時保護性作用，但隨著NO的大量產生，在缺血區NOS因介導神經毒性效應並很快佔優，使腦缺血損傷加劇；到晚期，腦缺血腦組織損傷、 炎症反應刺激巨噬細胞、神經小膠質細胞、神經元等可大量產生誘導型N0S，誘導型NOS可緩慢而持久大量地產生N0，過量的NO產生和釋放，加重神經元損害。因此，降低誘導型NOS 的產生可明顯減少NO的釋放，從而降低NO的細胞毒性作用，起到保護腦細胞的作用。本實驗的研究結果表明，大鼠腦缺血再灌注損傷後，腦組織中NO和NOS含量顯著增加，說明NO和NOS參與了腦缺血再灌注損傷的發病機制，給予本發明藥物治療後，NO和 NOS含量明顯下降。表明本發明藥物通過對NOS活性和NO含量進行調節，從而發揮對腦缺血再灌注損傷或腦梗塞的保護作用。腦缺血及再灌注損傷可導致腦細胞膜脂質過氧化反應，產生過多的氧自由基，損傷腦細胞膜。腦缺血時由於組織氧和能量代謝的物質供應不足，ATP生成減少，離子泵失效， Na+-K+-ATP酶活性降低，使大量Na+內流、K+外流，Cl_和H2O被動進入細胞內，引起神經細胞急性滲透性腫脹死亡。Na+內流和K+外流導致細胞膜電位下降產生去極化，電壓依賴性Ca2+ 通道開放，Ca2+大量內流；同時由於K+、蛋白激酶C及遞質的釋放等作用，受體依賴性Ca2+通道開放，Ca2+大量內流。細胞內鈣超載可導致氧自由基產生增加、花生四烯酸代謝增強、興奮性胺基酸遞質釋放增加等，興奮性胺基酸又可引起細胞內Ca2+超載造成神經細胞凋亡， 其中氧自由基增加是缺血再灌注損傷的一個重要因素。此外，腦缺血所致的自由基增加引起的神經元損傷、鈣離子內流增加、腦缺血所致的一氧化氮、誘導型NOS等增加也是血管性痴呆的一個重要因素，本發明藥物對腦缺血的抗氧化作用、抗自由基作用、減少缺血所致的一氧化氮的產生，為治療血管性痴呆提供了依據。因此，本發明藥物可顯著減少缺血區腦組織的過氧化脂質MDA，NO含量，提高大鼠腦組織中SOD含量，增加清除自由基的能力，降低NOS活性，可減輕自由基反應對腦組織的損害。由此可見，本發明藥物抑制自由基的生成等多種途徑，保護細胞膜性結構，有助於降低腦血管通透性以及改善血液流變學指標.改善腦部微循環，對抗腦缺血再灌注後氧自由基對腦組織的損害作用而發揮其對腦的保護作用。可用於治療或預防缺血性腦病、腦梗塞、 腦血栓及其後遺症、血管性痴呆、改善腦部微循環的作用，並可用於製備治療和預防相應疾病的藥物。可以理解，從本專業角度，很多細節的變化是可能的，這並不因此限制本發明範圍和精神，本發明並不限於上述實施例。
權利要求
1.一種心腦血管治療藥物，其特徵在於心腦血管治療藥物為燈盞花乙素衍生物，即燈盞花乙素水合物，其分子式為C21H18O12 · ηΗ20，η = 1. 7 2. 2之間的數字。
2.根據權利要求1所述的心腦血管治療藥物，其特徵在於燈盞花乙素水合物為燈盞花乙素2水合物。
3.根據權利要求1所述的心腦血管治療藥物，其特徵在於燈盞花乙素水合物為燈盞花乙素1.75水合物。
4.一種根據權利要求1所述的心腦血管治療藥物製備方法，其特徵在於其步驟如下方法A在反應容器中，將燈盞花全草用體積比為2 20倍量的水、或C1-C6的低分子醇、C2-C6的低分子腈、C3-C8的低級酮、C2-C8的低分子酯等中的一種或幾種為溶劑進行提取一次至數次，過濾、合併提取液，將濾液濃縮，濃縮物加水稀釋，用鹼調節ρΗ為6. 5 9之間，過濾，過矽膠層析柱、或大孔吸附樹脂、或聚醯胺柱層析或葡萄糖凝膠樹脂，用水或 C1-C6的低分子醇、C3-C8的低級酮、C2-C6的低分子腈的一種或幾種進行洗脫，濾液用酸調節PH為1 5，攪拌、放置、使沉澱充分析出，將所得沉澱過濾，用水與C1-C6的低分子醇、 C2-C8的低分子酯、C3-C8的低級酮、C2-C6的低分子腈、C2-C6的低級醚、C1-C6的低級滷代烴或C1-C8的低分子酸等中的一種或幾種為結晶溶劑，進行重結晶一次或數次，過濾，水洗或C1-C6的低分子醇、或C3-C8的低級酮、C2-C6的低分子腈等中的一種或幾種洗，將所得的固體乾燥，得燈盞花乙素結晶水合物；或者方法B在反應容器中，將燈盞花全草用體積比為2 20倍量的水、鹼性溶液或C1-C6的低分子醇等中的一種或幾種為溶劑進行提取一次至數次，過濾，合併濾液，將濾液濃縮，濃縮物加水稀釋，用酸或鹼調節ρΗ為6. 5 9之間，過濾，濾液過矽膠層析柱及大孔吸附樹脂、或聚醯胺柱層析或葡萄糖凝膠樹脂，用水或C1-C6的低分子醇、C3-C8的低級酮、C2-C6的低分子腈等中的一種或幾種進行洗脫，濾液用酸調節PH為1 5，放置，使沉澱充分析出，將所得沉澱過濾，用水或C1-C6的低分子醇、C2-C8的低分子酯、C3-C8的低級酮、C2-C6的低分子腈、C2-C6的低級醚、C1-C6的低級滷代烴、或C1-C8的低分子酸等中的一種或幾種為結晶溶劑，進行重結晶一次或數次，過濾，水洗，將所得的固體乾燥，得燈盞花乙素結晶水合物。
5.一種根據權利要求1所述的心腦血管治療藥物用途，其特徵在於用於製備注射用凍乾粉針製劑、或者無菌分裝粉針製劑、或者大輸液製劑、或者小水針注射劑及固體製劑， 固體製劑包括片劑、膠囊、顆粒劑、混懸劑、滴丸。
6.一種根據權利要求1所述的心腦血管治療藥物用途，其特徵在於適用於製備人和哺乳動物的冠心病、心絞痛、心肌梗死，心律失常、缺血性腦疾病、腦血栓、腦出血及其後遺症、血管性痴呆、末梢循環障礙疾病，包括各種動脈閉塞症、脈管炎、糖尿病引起的微循環障礙、高血壓、高脂血症、高粘血症；頑固性頸周症候群、椎基底動脈供血不足及其他缺血及伴有微循環障礙的疾病疾病的治療或預防的藥物中的應用。
7.根據權利要求4所述的心腦血管治療藥物的製備方法，其特徵在於本權利要求中的製備過程中的過濾的方式包括用濾布、漏鬥、垂熔玻璃濾器、砂芯濾棒、板框式壓濾機、微孔濾膜、陶瓷膜或超濾等的一種或幾種過濾方式進行一次或幾次過濾。
8.根據權利要求4所述的心腦血管治療藥物的製備方法，其特徵在於本權利要求中的兩種方法的製備過程中，「提取液用鹼調節pH為6. 8 9之間，過濾，濾液過矽膠層析柱及大孔吸附樹脂、或聚醯胺柱層析或葡萄糖凝膠樹脂，用水或C1-C6的低分子醇、C3-C8的低級酮、C2-C8的低分子酯、C2-C6的低分子腈的一種或幾種進行洗脫，濾液用酸調節pH為 1 5，放置，使沉澱充分析出」的過程，該過程在製備過程中可將酸沉澱後得到的沉澱再水稀釋後重複上述過程，進行1 3次，以實現純化目的，之後再進行重結晶過程。
9.根據權利要求4所述的心腦血管治療藥物的製備方法，其特徵在於所述重結晶溶劑選自水，以及下列溶劑甲醇、乙醇、異丙醇，丙酮、丁酮、異己酮、乙腈、四氫呋喃、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸、二氯甲烷、氯仿、乙醚、石油醚、苯中的一種或幾種。
全文摘要
本發明涉及對人和哺乳動物的冠心病、心絞痛、心肌梗死，心律失常、缺血性腦疾病、腦血栓、腦出血及其後遺症、血管性痴呆、末梢循環障礙疾病，包括各種動脈閉塞症、脈管炎、糖尿病引起的微循環障礙、高血壓、高脂血症、高粘血症；頑固性頸周症候群、椎基底動脈供血不足及其他缺血及伴有微循環障礙的疾病疾病的治療或預防的藥物——燈盞花乙素衍生物物及其製備和用途，該衍生物具有較好的存儲穩定性，適用於製備對製備心腦血管疾病的治療或預肪的藥物中的應用。
文檔編號A61P9/12GK102379887SQ20101027739
公開日2012年3月21日 申請日期2010年9月2日 優先權日2010年9月2日
發明者劉力 申請人:胡梨芳