一種抗人IL-13Rα2單克隆抗體的重鏈和輕鏈的可變區的製作方法

2023-09-21 01:44:35

專利名稱：：一種抗人IL-13Rα2單克隆抗體的重鏈和輕鏈的可變區的製作方法
技術領域：
：本發明屬於生物醫學
技術領域：
，涉及一種單克隆抗體，特別涉及一種抗人IL-13Ra2單克隆抗體(FMMU-IL-13Ra2-7)的重鏈和輕鏈可變區，包括其胺基酸序列及其核苷酸序列。
背景技術：
：惡性腫瘤是危害人類健康的重大疾病，針對其的治療手段目前仍處於研究和探索階段。繼傳統的手術治療、放療、化療和免疫治療之後，以結合基因工程和蛋白質工程技術為代表的靶向抗體藥物治療正成為治療腫瘤的新興研究領域，受到基礎醫學和臨床醫學研究領域科研工作者的廣泛關注。人IL-13Roc2是特異性高表達於人神經膠質瘤、頭頸部腫瘤、卵巢癌和腎癌等惡性腫瘤細胞表面的腫瘤特異性標誌物，在惡性腫瘤的靶向治療中發揮重要作用。人IL-13Rot2作為人神經膠質瘤、頭頸部腫瘤、卵巢癌和腎癌等惡性腫瘤細胞的治療靶點早在1988年已引起美國FDA的注意，該組織先後製備了針對人IL-13Ra2治療靶點的藥物IL-13-PE38和針對人IL-13Ra2的單鏈抗體ScFv-PE融合分子。儘管IL-13-PE38已在神經膠質瘤、頭頸部腫瘤、卵巢癌和腎癌等惡性腫瘤細胞的治療中取得了療效並已被美國FDA批准進入臨床I/II期治療，但由於在治療腫瘤過程中，IL-13-PE38不僅與腫瘤細胞表面特異性表達的人IL-13Roc2結合，它還可以與表達於正常組織細胞表面的IL-13Ral結合，損傷正常組織和細胞。由於缺乏嚴格的靶向性，限制了IL-13-PE38的進一步應用。為解決針對人IL-13Rot2的特異性耙向問題，美國FDA應用噬菌體展示庫技術獲得針對人IL-13Rot2的單鏈抗體，進而構建IL-13Ra2(ScFv)-PE38真核表達載體並表達獲得了人源化的IL-13Ra2(ScFv)-PE38抗體製劑，但後續研究發現該分子與人IL-13Roc2親和力較低，需要大劑量使用才能達到有效的殺傷腫瘤細胞的效果。抗體單體分子是由兩條相同的重鏈(H鏈)和兩條相同的輕鏈(L鏈)，通過鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結構。H鏈和L鏈包括氨基(N)端和羧基(C)端，靠近N端的可變區(V區)由高變區/互補決定區(HVR/CDR)和骨架區(FR)組成；靠近C端為恆定區(C區)。重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)形成的蛋白質摺疊是抗原結合部位，其中的CDR/HVR是抗體與抗原決定基互補結合的部位，C區引發抗原抗體識別後的反應。抗體根據FR/C區不同可分為人源、鼠源等，鼠源性抗體在人體內使用時具有免疫原性，易引起人體的免疫反應，這些免疫反應可引起對鼠源性抗體的清除以及免疫複合物介導的超敏反應。為了克服鼠源性抗體的缺陷，需要構建高親和力的特異性的嵌合抗體、單鏈抗體或人源化抗體。在構建人源化抗體過程中，採用噬菌體抗體庫等技術獲得的人源化抗體親和力不高，使用劑量大。為提高抗體的親和力，最為重要的是獲得具有良好特異性和親和力的鼠源性親本抗體，克隆其輕鏈和重鏈可變區基因，然後將可變區基因克隆入相應載體構建相應的基因工程抗體重組DNA，表達基因工程抗體來實現人源化。因此，篩選出特異性分泌高親和力鼠源性單克隆抗體的雜交瘤細胞克隆，從中克隆出高親和力抗體的重鏈和輕鏈可變區基因，分析其胺基酸序列對進一步構建高親和力和特異性的人源化基因工程抗體具有決定性的意義。
發明內容本發明的目的在於，提供一種高親和力的抗人IL-13Roc2單克隆抗體的重鏈和輕鏈可變區，包括其基因及其胺基酸序列，為構建高親和力的抗人IL-13Roc2嵌合或人源化基因工程抗體提供支持。為了實現上述發明目的，本發明的技術方案是(1)製備一組小鼠抗人IL-13Rot2單克隆抗體，從中篩選出具有高親和力的抗人IL-13Ra2單克隆抗體FMMU-IL-13Ra2-7;實驗證實該單克隆抗體能夠特異性地結合人IL-13Ra2，所述的證實實驗包括ELISA檢測、流式細胞儀檢測及病理切片免疫組織化學檢測，(2)克隆該單克隆抗體輕鏈和重鏈可變區基因；所述的單克隆抗體可變區基因序列如SEQIDNO.3和SEQIDN0.4所示；(3)獲得該單克隆抗體輕鏈和重鏈可變區基因序列和胺基酸序列，確認該基因序列和相應蛋白序列的惟一性；所述的單克隆抗體可變區胺基酸序列如SEQIDNO.l和SEQIDN0.2所示，並分析出其CDR區；輕鏈的3個CDR序列分別為，CDRhLys-Ser-Val-Ser-Thr-Ser-Gly-Tyr-Ser-Tyr,CDR2:Leu-Val-Ser，CDR3:Gin-His-lie-Arg-Glu-Leu-Thr-Arg;重鏈的3個互補決定區(CDR)序列分別為，CDR1:Gly-Tyr-Thr-Phe-Thr-Asn-Tyr-Trp，CDR2:lie-Tyr-Pro-Gly-Asn-Asp-Asp-Ser，CDR3:Ala-Thr-Gly-Thr-Glu-Phe-(4)設計構建以人IL-13Rcx2為靶點的基因工程抗體或疫苗。本發明的技術效果本發明篩選出高親和力抗人IL-13Roc2的單克隆抗體FMMU-IL-13Roc2-7，並克隆出其輕鏈和重鏈可變區，測序後得到其獨特的核苷酸序列，為構建具有良好藥用價值的抗人IL-13Roc2嵌合抗體、單鏈抗體或人源化抗體奠定了基礎。5圖1是抗人IL-13Roc2單克隆抗體FMMU-IL-13Ra2-7與膠質瘤細胞系U251表面人IL-13Ra2結合的流式細胞儀檢測結果圖(FITC:異硫氰酸螢光素，橫軸為細胞數，縱軸為螢光強度)；圖la為抗葡萄球菌腸毒素D(SED)單克隆抗體對照圖，圖lb為FMMU-IL-13Ra2-7單抗結果圖。圖2是抗人IL-13Ra2單克隆抗體FMMU-IL-13Ra2-7與膠質瘤細胞系U87表面人IL-13Ra2結合的流式細胞儀檢測結果圖；圖2a為SED對照圖，圖2b為FMMU-IL-13Ra2-7單抗結果圖。圖3是抗人IL-13Ra2單克隆抗體(FMMU-IL-13Ra2-7)檢測膠質瘤石蠟切片中人IL-13Ra2表達的免疫組織化學染色圖。具體實施例方式下面對本發明作詳細說明。可變區基因的完整核苷酸序列，尤其是其功能性片段的核苷酸序列(如CDR等)以及抗體可變區的胺基酸序列，是嵌合抗體、單鏈抗體或人源化抗體構建的基礎。為此，申請人用重組人IL-13Ra2免疫BALB/c小鼠，製備了一組小鼠抗人IL-13Rot2單克隆抗體，克隆並從中篩選出能分泌高親和力人IL-13Ra2單克隆抗體FMMU-IL-13Ra2-7的雜交瘤細胞株，該株雜交瘤細胞具有穩定分泌抗體的能力。克隆該單克隆抗體輕鏈和重鏈可變區基因；所述的單克隆抗體可變區基因序列如SEQIDNO.3和SEQIDN0.4所示；獲得該單克隆抗體輕鏈和重鏈可變區基因序列和胺基酸序列，確認該基因序列和相應蛋白序列的惟一性及其CDR序列；所述的單克隆抗體可變區胺基酸序列如SEQIDNO.l和SEQIDNO.2所示.本發明具體按以下步驟實施1小鼠抗人IL-13Ra2高親和力抗體的製備1.1單克隆抗體的製備、純化重組人IL-13Rot2分子委託武漢三鷹生物技術有限公司製備。按單克隆抗體製備方法(細胞和分子免疫學實驗技術第一版，P9-P17)，用重組人IL-13Ra2免疫BALB/c小鼠(購自第四軍醫大學實驗動物中心)，製備一組小鼠抗人IL-13Ra2單克隆抗體，從雜交瘤細胞株FMMU-IL-13Ra2-l14中選擇能分泌高親和力的抗人IL-13Ra2單克隆抗體，發現FMMU-IL-13Ra2-7雜交瘤細胞株分泌的抗體具有較高的親和力及與細胞表面天然表達的人IL-13Ra2分子結合的能力。按小鼠腹水製備方法製備腹水(細胞和分子免疫學實驗技術第一版,P9-P17)。腹水經硫酸銨沉澱後，採用ProteinA親和層析法純化。用SDS-PAGE鑑定純化抗體的純度，純化的抗體FMMU-IL-13Ra2-7純度達到95%。1.2抗人IL-13Ra2單克隆抗體效價測定實驗用IgG亞類檢測試劑盒(美國Sigma公司)分別檢測製備的FMMU-IL-13Ra2-l14單克隆抗體的IgG亞類，間接ELISA法(細胞和分子免疫學實驗技術，第一版，P44-46)檢測FMMU-IL-13Ra2-l14雜交瘤細胞株的腹水效價。以重組人IL-13Ra2為抗原，檢測FMMU-IL-13Ra2-l~14單克隆抗體在免疫印跡法(分子克隆實驗指南，第二版，P888-P897)中結合抗原的能力。用流式細胞術(細胞和分子免疫學實驗技術，第一版，P78-P89)檢測FMMU-IL-13Ra2-l~14單克隆抗體識別高表達人IL-13Ra2的膠質瘤細胞系U251細胞上天然IL-13Ra2的能力。腹水效價實驗結果如表1所示，第7、14雜交瘤細胞株產生的腹水效價最高，為10:表明其與抗原親和力很高；將上述兩株單克隆抗體用於免疫印跡實驗均得到陽性結果。但第14株雜交瘤細胞株不能在流式細胞術檢測中獲得陽性結果，表明其可能不能識別細胞表面的天然IL-13Ra2分子。而第7株雜交瘤細胞株則能夠識別細胞表面的天然IL-13Ra2分子，利用其可變區製備的基因工程抗體更有可能與細胞表面的天然IL-13Ra2結合併進一步發揮生物學作用。tableseeoriginaldocumentpage81.3抗人IL-13Roc2單克隆抗體FMMU-IL-13Rot2-7與膠質瘤細胞系U251和U87表面人IL-13Ra2結合採用間接免疫螢光染色法結合流式細胞術檢測FMMU-IL-13Roc2-7單抗與膠質瘤細胞系U251和U87表面天然IL-13Ra2分子的結合能力(細胞和分子免疫學實驗技術，第一版，P78-80)，以FMMU-IL-13Ra2-7為一抗，FITC標記羊抗小鼠抗體為二抗，流式細胞儀分析。如圖l、2所示，與SED對照相比，FMMU-IL-13Ra2-7單抗與高表達人IL-13Ra2的膠質瘤細胞繫結合能力明顯增強，說明FMMU-IL-13Ra2-7單抗特異性識別膠質瘤細胞表面的IL-13Ra2分子。1.4抗人IL-13Ra2單克隆抗體FMMU-IL-13Rot2-7檢測膠質瘤切片中人IL-13Ra2的表達以FMMU-IL-13Ra2-7單克隆抗體為一抗，用免疫組織化學方法(病理學技術，第一版，P367-372)檢測FMMU-IL-13Ra2-7識別膠質瘤石蠟切片中人IL-13Ra2的能力。如圖3所示，可見FMMU-IL-13Ra2-7單克隆抗體可特異性識別膠質瘤腫瘤細胞表面的人IL-13Ra2分子。2人IL-13Ra2mAb輕鏈和重鏈可變區基因的克隆2.1FMMU-IL-13Ra2-7雜交瘤細胞的培養按常規方法復甦(細胞培養，第一版，P88)FMMU-IL-13Ra2-7細胞，用含10%小牛血清的RPMI1640培養基於37°C，5%C02孵箱中培養。2.2總RNA的提取和cDNA第一鏈的合成用TRIZOLReagent(購自美國GIBCO公司)，按說明書提取總RNA。cDNA第一鏈合成試劑盒購自Fermentas公司(美國)，按產品說明書進行反轉錄合成cDNA第一鏈。2.3PCR法擴增FMMU-IL-13Rot2-7VL和FMMU-IL-13Roc2-7VH基因PCR法擴增試劑盒購自Takara公司，以cDNA第一鏈為模板進行PCR。反應體積50pl，反應條件為95°C30s,58°Clmin，循環35次；VL、Vh的正、反向引物核苷酸序列為VlF:gttagatctccagcttggtcccVlB:gacattcagctgacccagtctccaVHF:tgaggagacggtgaccgtggtcccttggccccagVhB:aggtsmarctgcagsagtcwgg(IUB標準兼併鹼基代碼s:c/g;m:a/c;r:a/g;w:a/t)2.4PCR擴增產物的克隆和篩選PCR產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳，用小量膠回收試劑盒(購自美國Axygen公司)回收抗體重鏈和輕鏈可變區片段，用pMD18T試劑盒(購自日本Takara公司)將該片段按說明書插入pMD18T載體中。轉化E.coliXL-10(購自北京中國普通微生物菌種保藏中心)，用五co/I和I限制性核酸內切酶(購自Takara公司)消化法篩選重組陽性克隆(酶切得到400bp片段)。用雙脫氧核酸末端終止法測定基因序列，由北京奧科生物技術有限責任公司完成，測定結果如SEQIDN0.3和SEQIDN0.4所示。3FMMU-IL-13Ra2-7輕鏈和重鏈可變區的胺基酸序列及同源性分析3.1確定測序無誤後，在GenBank+EMBL+DDBJ+PDB資料庫中，進行核苷酸序列同源性分析(Blastn)。分析結果表明，FMMU-IL-13Rcx2-7單抗輕鏈可變區基因與小鼠抗角蛋白單克隆抗體克隆2H8免疫球蛋白輕鏈可變區同源性最高，同源性為328/330,同源性百分比為99%，(見BLASTNl，說明書第14頁)；FMMU-IL-13Roc2-7單抗重鏈可變區基因與小鼠Igu鏈B2基因V-D-J1區同源性最高，同源性為319/355，同源性百分比為89%，(見BLASTN2,說明書第15頁)。3.2將可變區基因翻譯成胺基酸序列，如SEQIDNO.l和SEQIDN0.2所示。在non-redundantGenbankCDStranslations+PDB+SwissProt+PIR+PRF蛋白質資料庫中,進行胺基酸序列詞源性分析(Blastp)。分析結果表明，FMMU-IL-13Rot2-7單抗輕鏈胺基酸序列與抗角蛋白抗體免疫球蛋白輕鏈可變區同源性最高，同源性為109/110，同源性百分比為99%,(見BLASTP3，說明書第16頁)；FMMU-IL-13Ra2-7單抗重鏈胺基酸序列與小鼠抗獨特性抗體重鏈同源性最高，同源性為105/117，同源性百分比為89%(見BLASTP4，說明書第16頁)。編碼FMMU-IL-13Rot2-7mAb的輕鏈和重鏈可變區的基因的核苷酸序列和胺基酸序列同源性分析結果表明未發現與本發明相同的基因序列。3.3利用IMGT/V-QUEST分析可變區結構，確定CDR區。將測序所得FMMU-IL-13Ra2-7抗體輕鏈和重鏈可變區序列，在IMGT/V-QUEST網站(http:Vimgt.cines.fr/IMGT_vquest/vquest)分析，得出其CDR區。FMMU-IL-13Ra2-7抗體輕鏈CDR區CDR1:Lys-Ser-Val國Ser-Thr國Ser-Gly國Tyr-Ser-TyrCDR2:Leu國Val曙SerCDR3:Gln陽His畫Ile-Arg-Glu-Leu-Thr-ArgFMMU-IL-13Ra2-7抗體重鏈CDR區CDR1:Gly畫Tyr誦Thr醒Phe-Thr誦Asn-Tyr曙TrpCDR2:Ile-Tyr-Pro-Gly-Asn-Asp-Asp-SerCDR3:Ala國Thr國Gly-Thr國Glu-Phe-Thr-Tyr4.基因工程抗體設計基於抗人IL-13Ra2單克隆抗體FMMU-IL-13Ra2-7的表達、純化以及序列分析，設計構建以下生物製品(1)抗人IL-13Ra2單鏈抗體的構建將本發明的單克隆抗體FMMU-IL-13Rot2-7的輕鏈和重鏈可變區基因插入表達載體pCONTAB5E中，獲得的單鏈抗體基因轉化表達菌株，通過誘導該基因的表達，製備對惡性腫瘤有潛在治療作用的單鏈抗體。(2)人源化抗體的構建將本發明的單克隆抗體FMMU-IL-13Ra2-7輕鏈和重鏈可變區的CDR區移植到人源可變區的FR中，形成CDR移植抗體(CDR-gmftedantibody)也稱重構抗體(reshapingantibody)或人源化抗體(humanizedantibody)。禾偶CDR移植技術改造抗體，可以獲得保持鼠源性親本mAb的特異性，同時更加接近人抗體的新型抗體，用於製備對惡性腫瘤有潛在治療作用的人源化抗體。(3)根據本發明的基因序列及其編碼的胺基酸序列，製備針對人IL-13Ra2功能表位的如人鼠嵌合抗體、Fab抗體、疫苗或其他生物製品。抗人IL-13Ra2單克隆抗體FMMU-IL-13Ra2-7胺基酸序列及基因序列〈110〉中國人民解放軍第四軍醫大學PRT1AsplieGhiLeuThrGinSerProAlaSerLeuAlaValSerLeuGlyGinArgAlaThr15101520lieSerTyrArgAlaSerLysSerValSerThrSerGlyTyrSerTyrMetHisTrpAsn2125303540GinGinLysProGlyGinProProArgLeuLeulieTyrLeuValSerAsnLeuGluSer4145505560GlyValProAlaArgPheSerGlySerGlySerGlyThrAspPheThrLeuAsnlieHis6165707580ProValGluGluGluAspAlaAlaThrTyrTyrCysGinHislieArgGluLeuThrArg8185卯95腦SerGluGlyGlyProSerTipArgSerAsn101105110〈210>2〈211〉114<212〉PRT2ValGinLeuGinGluSerGlyAlaGluLeuAlaArgProGlyAlaSerVallysLeuSer15101520CysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrAsnTyrTrpLeuGinTrpValLysGinArgPro2125303540GlyGinGlyLeuGluTrplieGlyAlalieTyrProGlyAsnAspAspSerArgTyrAla4145505560GinLysPheAsnValLysAlaThrLeuThrAlaAspLysSerSerSerThrAlaTyrMet6165707580GinLeuSerAsnLeuAlaSerGluAspSerAlaValTyrTyrCysAlaThrGlvThrGlu81859095100PheThrTvsTrpGlyGinGlyThrThrValThrValSerSer101105110114〈210〉3<211〉330〈212〉DNA<213〉人工合成<400〉3gacattcagctgacccagtctcctgcttccttagctgtatctctggggcagagggccacc60atctcatacagggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggaac120caacagaaaccaggacagccacccagactcctcatctatcttgtatccaacctagaatct180ggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccat240cctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcetgcacattagggagcttacacgt300tcggaggggggaccaagctggagatctaac330<210〉4<211〉342人工合成〈400〉4ggtgcaactgcaggagtctggggctg肪ctggcaagacctggggcttcagtgaagttgtc60ctgcaaggcttctggctacacctttactaactactggttgcagtgggtaaaacagaggcc120tggacagggtctggagtggattggggccatttatcctggaaatgatgattctaggtacgc180tcsaaagttcaatgtcaaggccacattgactgcag3tasatcgtcc3gcacagccacatg240tcaactcagcaatttggcatctgaggactctgcggtctattactgtgcaactgggacgga300gtttacttactggggccaagggaccacggtcaccgtctcctc34215FMMU-IL-13Ra2-7輕鏈和重鏈可變區的基因序列及胺基酸序列同源性分析BLASTN1RID:EK1F2W4W01RDatabase:AllGenBank+EMBL+DDBJ+PDBsequences(butnoEST,STS,GSS，environmentalsamplesorphase0，1or2HTGSsequences)7,567,972sequences;25,029,697,616totallettersLength=330gb|AY247150.11Musmusculusclone2H8anti-keratinimmunoglobulinlightchainvariableregionmRNA，partialcdsLength=330Score=599bits(324),Expect=3e-168Identities=328/330(99%),Gaps=0/330(0%)Strand=Plus/PlusQuery1GACATTCAGCTGACCCAGTCTCCTGCTTCCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACC60Sbjct1GACATTCAGCTGACCCAGTCTCCAGCTTCCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACC60Query61ATCTCATACAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGAAC120Sbjct58ATCTCATACAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGAGC120Query301TCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAGATCTAAC330Sbjct298TCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAGATCTAAC330BLASTN2■DP6ZPU5Z013Database:AllGenBank+EMBL+DDBJ+PDBsequences(butnoEST,STS，GSS，environmentalsamplesorphase0，1or2HTGSsequences)7,538,883sequences;24,955,484,671totallettersLength=342gb|M25110.llMUSIGHZZBMouseIgmu-chainB2geneV-D-JH1region,partialcdsLength=630Score=444bits(240),Expect=le_121Identities=319/355(89%),Gaps=14/355(3%)Strand=Plus/PlusQuery:1GGTGCAACTGCAGGAGTCTGGGGCTGAACTGGCAAGACCTGGGGCTTCAGTGAAGTTGTC60IIIIIIISbjct:276GGTTCAGCTCCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTGGCAAGACCTGGGGCTTCAGTGAAGTTGTC335Query:61CTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACTAACTACTGGTTGCAGTGGGTAAAACAGAGGCC120Sbjct:336CTGCMGGCTTCTGGCTACACCTTTACTAGCTACTGGATGCAGTGGGTAAAACAGAGGCC395Query:121TGGACAGGGTCTGGAGTGGATTGGGGCCATTTATCCTGGAAATGATGATTCTAGGTACGC180Sbjct:396TGGACAGGGTCTGGAATGGATTGGGGCTATTTATCCTGGAGATGGTGATACTAGGTACAC455Query:181TCAAAAGTTCAATGTCAAGGCCACATTGACTGCAGATAAATCGTCCAGCACAGCCTACAT240Sbjct:456TCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGCAGATAAATCCTCCAGCACAGCCTACAT515Query:241GCAACTCAGCAATTTGGCATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAC-TGGG-ACG298Sbjct:516GCAACTCAGCAGCTTGGCATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATGGGGAAG575Query:299GAG-T--T--TACTT--A—-CTGGGGC-CAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTC342Sbjct:576TAGCTACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCA-GGGACCACGGTCACCGTCTCCTC629formulaseeoriginaldocumentpage18權利要求1、一種抗人IL-13Rα2單克隆抗體的重鏈和輕鏈的可變區，其特徵在於，輕鏈的3個互補決定區(CDR)序列分別為，CDR1Lys-Ser-Val-Ser-Thr-Ser-Gly-Tyr-Ser-Tyr，CDR2Leu-Val-Ser，CDR3Gln-His-Ile-Arg-Glu-Leu-Thr-Arg；重鏈的3個互補決定區(CDR)序列分別為，CDR1Gly-Tyr-Thr-Phe-Thr-Asn-Tyr-Trp，CDR2Ile-Tyr-Pro-Gly-Asn-Asp-Asp-Ser，CDR3Ala-Thr-Gly-Thr-Glu-Phe-Thr-Tyr。2、如權利要求1所述的抗人IL-13R(x2單克隆抗體的重鏈和輕鏈的可變區，其特徵在於，所述的輕鏈可變區胺基酸序列如SEQIDNO.l所示，所述的重鏈可變區胺基酸序列如SEQIDN0.2所示。3、一種抗人IL-13Rcx2單克隆抗體的重鏈和輕鏈的可變區，其特徵在於，編碼輕鏈可變區的核苷酸序列如SEQIDN0.3所示，編碼重鏈可變區的核苷酸序列如SEQIDN0.4所示。4、權利要求1或3所述的抗人IL-13Rot2單克隆抗體的重鏈和輕鏈的可變區，其特徵在於，應用於構建以人IL-13Roc2為耙點的基因工程抗體或疫苗的製備。全文摘要一種抗人IL-13Rα2單克隆抗體的重鏈和輕鏈的可變區，用重組人IL-13Rα2免疫BALB/c小鼠，製備一組小鼠抗人IL-13Rα2單克隆抗體，並篩選出具有高親和力的抗人IL-13Rα2單克隆抗體FMMU-IL-13Rα2-7。克隆該單克隆抗體輕鏈和重鏈可變區基因，獲得該單克隆抗體輕鏈和重鏈可變區基因序列和胺基酸序列，確認這些基因序列與蛋白序列的惟一性。可變區的胺基酸序列以及編碼這些可變區的基因序列在構建針對人IL-13Rα2為靶點的對惡性腫瘤有治療作用的單鏈抗體、嵌合抗體、人源化抗體或疫苗方面有重要的潛在應用價值。文檔編號C07K16/18GK101440130SQ200810232360公開日2009年5月27日申請日期2008年11月21日優先權日2008年11月21日發明者宋朝君,徐竹蔚,琨楊,金伯泉,陳麗華,龔玖瑜申請人:中國人民解放軍第四軍醫大學