一種治療口腔潰瘍的口腔粘貼片及其製備方法
2023-09-18 17:29:00
專利名稱：一種治療口腔潰瘍的口腔粘貼片及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種抗口腔潰瘍藥物重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片及其製備方法。
背景技術：
口腔潰瘍是一種常見病，多發病。其發病率佔口腔門診總病例的15％左右。口腔潰瘍引發的原因有多種，如自身免疫力低下；維生素缺乏；個體創口癒合障礙；各種病毒侵入口腔；血液中白細胞水平低等原因都可以引起口腔潰瘍。口腔潰瘍雖非嚴重疾病，但由於發病人在各年齡組都有，而且病程長，難以治癒，影響飲食甚至交談，故廣大患者盼望有一種使用方便，療效好的藥物劑型。
目前，治療口腔潰瘍的藥物有幾種，中藥有錫類散、冰硼散等散劑，但這種劑型使用時不便，而且即使將其塗於患處，也很快隨唾液而流失，限制了其藥物的充分發揮。西藥有含漱劑、金黴素油膏，B2膜及其它一些藥物的膜劑，抗潰瘍蛋白質藥物現在還沒有上市產品。含漱劑作用時間更短；油膏難於塗於患處；膜劑雖可以貼於潰瘍面，但一般在幾分鐘左右溶解消失，藥物滲透作用不夠，作用發揮不足。國內已生產的用於口腔潰瘍的藥物膜劑有谷固醇膜(黃河藥廠)，利福平膜(北京第六製藥廠)，溶菌酶膜(武漢生物藥廠)，克黴唑膜，蜂皇漿膜(武漢第三製藥廠)，地塞米松中西藥複方口腔潰瘍膜，醋酸地塞米松粘貼片(太太藥業)。以上膜劑均以聚烯醇或羧甲基纖維素鈉為膜材料的單層膜劑，在口腔中保留時間一般不超過5分鐘，不能有更長的用藥時間。國內用於口腔潰瘍的粘貼片有甲硝唑口腔潰瘍粘貼片，能較長時間粘貼在口腔中，但厚度較大，有不適感和藥物損失大等缺點。醋酸地塞米松粘貼片克服了以上的不足，但由於其主藥的作用限制，只對部分病因引起的口腔潰瘍起作用，如由於人體免疫缺陷或各種原因引起的白細胞減少時引起的口腔潰瘍，就起不到應有的作用。
PHarm.Int.，6，196-200，1985報導了日本在八十年代推出的一種含曲安縮松(triamcinolone acetonide)的雙層口腔潰瘍粘貼片商品，商品名為AFTACH。含藥層厚0.4mm，以卡波普和羥丙基纖維素為粘貼劑；背襯層厚0.7mm，以乳糖為基質，能較長時間地粘貼在口腔中。
日本救急藥品工業株式會社在九十年代推出一種含曲安縮松的雙層膜劑，商品名為WAPLON-P。總厚度為0.16mm，直徑為12mm，保護層為羥丙甲基纖維素苯二甲酸脂，粘貼層基質為羥丙甲基纖維素及PVP。該品在口腔中可停留約30分鐘。
英國專利(1279214)介紹了一種海藻酸鈉和海藻酸鈣的雙層膜劑，藥物為二性黴素，用於治療口腔潰瘍。
J.PHarm.Sci.，73，548-552，1989報導了用部分中和的甲基丙烯酸為基質的口腔粘貼膜治療口腔黏膜損害。
J.Clin.PHarm.Ther.，14，153-158，1989報導了用高分子CMC-Na製成的粘貼片劑倍他米松為主藥，能維持四小時之九。
J.PHarm.Sci.，79，116-119，1990報導了口腔粘貼的片劑，其材料HPC和Carbopol的應用
J.Control Rel.，6，123-131，1987報導了口腔三層粘貼片，在口腔中長時間輸送可的松類激素。
Int.J.PHarmaceut，49，231-240，1989報導了含背膜的水凝膠粘貼膜。
Int.J.PHarmaceut，49，231-240，1989報導了一種雙層口腔粘貼膜，一層為不透性背膜，一層為含激素的水凝膠。
目前尚無使用重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子製成的粘貼片，更無一層為含蛋白質藥物的粘附層；另一層為不溶於水的保護層的雙層口腔粘貼片劑的報導。
重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子是近年來發現的重要的細胞因子，由於它具有多種生物學活性，對多種造血譜系和消炎反應有明確作用，而受到越來越多的重視。GM-CSF除具有刺激增殖分化過程中的造血細胞外，對調節髓系成熟細胞的功能也有重要作用。當人體的局部如口腔潰瘍時，GM-CSF起到弱的化學引誘劑的作用，它可以抑制炎症細胞離開炎症部位，且可與G-CSF協同作用。Metcalf認為GM-CSF與其它集落刺激因子協同在炎症反應中發揮作用。GM-CSF可激活中性粒細胞。由於GM-CSF的作用中性粒細胞對趨化因子等呈現高反應性，並增強其氧化代謝，膜去極化及吞噬功能，同時GM-CSF還能激活單核細胞，血液及組織中的巨噬細胞及嗜酸細胞，並刺激其增殖，增強其功能，另外，GM-CSF還可刺激其它細胞因子如TNF，IL-1等的產生，由此可見，GM-CSF能調節免疫功能，並具有一定的免疫增強作用。
為了說明GM-CSF可加強抗感染的作用，慕尼黑大學選擇了32例病人，其中22例接受過3種以上的抗菌素治療，其餘10例也用過全身性的抗真菌藥物，結果發現，凡是使用GM-CSF後白細胞計數迅速升高到正常者，其所需抗菌素治療時間明顯比那些使用GM-CSF後白細胞計數未能迅速升高者少，這一結果有力說明GM-CSF具有一定的抗感染能力。當腫瘤患者需要放化療時，常常會伴有身體各部位的潰瘍，其中口腔黏膜潰瘍為較常見的現象。我們曾用GM-CSF的水溶液漱口或採用局部用藥的方法給病人使用能夠起到治癒的作用，例如Rovirosa等人用GM-CSF漱口水治療頸部等部位的放療年引起的口腔黏膜潰瘍12位患者中有9例(75％)的病情明顯好轉，50％的患者感到微痛，未見GM-CSF有關的其它副作用，在對照中，12例患者的潰瘍都有加重，無一例好轉，結果說明GM-CSF對免疫機能低下和放化療後白細胞減少引起的口腔潰瘍有明顯的作用。Wandl報導了用GM-CSF來治療乳腺癌患者的皮膚潰瘍，也取得了令人滿意的效果。對於很多複雜原因引起的感染，GM-CSF也都具有顯著的作用。如江麗芸等人認為GM-CSF在登革病毒的致病與免疫的過程中起重要作用。
我們通過動物實驗進一步證實GM-CSF對抗單純皰疹病毒感染有療效。以上說明重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子是一種安全有效的抗感染藥物，在臨床上已被廣泛用於提高白細胞。作為體表用藥，如中國專利號02150093.2以及中國專利號0310044.X發明的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子凝膠劑，主要治療皮膚燒傷、燙傷以及皮膚或黏膜的潰瘍，但凝膠劑在皮膚患處滯留的時間短，容易被去除，尤其是口腔用藥，凝膠劑更是容易被唾液衝淡從而達不到治療口腔潰瘍的很好效果。而口腔粘貼片就克服了這一缺點，尤其是使用新的技術將重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子製成雙層粘貼片劑，更是體現了它的獨到之處。這在大分子蛋白類藥物的的製劑中也還曾有報導。
發明內容
本發明的目的是提供一種以重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子作為活性組分的治療口腔潰瘍的口腔粘貼片。
本發明的再一目的是提供製備以重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子作為活性組分的治療口腔潰瘍的口腔粘貼片的方法。
本發明的治療口腔潰瘍的口腔粘貼片以重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子作為活性組分，並且該片劑分為兩層，一層為含活性組分的粘附層，一層為不溶於水的保護層，粘附層與保護層的質量比為1∶1～5∶1，以4∶1做為優選。經過多次大量的試驗，篩選了大量的配方，確定了該口腔粘貼片的粘附層由主藥、穩定劑、透皮吸收劑以及粘附劑組成。其中以重量份計算，主藥佔0.01～0.5份優選0.05重量份、穩定劑佔10～50份、透皮吸收劑佔0.01～0.5份、粘附劑佔0.5～20份。
本發明的口腔粘貼片的穩定劑為一種或多種選自包括甘油、丙二醇、維生素B2、人血白蛋白、乳糖、海藻酸鈉、透明質酸的組的複合穩定劑，優選所述穩定劑為維生素B2、海藻酸鈉、人血白蛋白、乳糖聯合作為穩定劑，且其重量比為1∶5∶1∶10。該穩定劑不僅長時間保持主藥有效的生物活性，而且有效地提高了粘貼片的藥效。
本發明的口腔粘貼片的透皮吸收劑為一種或幾種選自包括卵磷脂、膽酸鈉，脫氧膽酸鈉、油酸、十二烷基硫酸鈉、聚山梨酯80、苄澤的組的物質，優選所述透皮吸收劑為卵磷脂和聚山梨酯80，且其重量比為1∶1～4∶1。該複合透皮吸收劑不僅可以生物降解，對生物膜無任何破壞作用，而且它能夠充分地提高主藥機體的局部或全身的生物利用度。
本發明的口腔粘貼片的粘附劑為一種或多種選自包括粘附劑(或稱膠粘劑)是由卡波姆、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、硬脂酸鎂的組的物質，優選所述粘附劑為卡波姆、羥丙基纖維素和硬脂酸鎂，且其重量比為20∶10∶0.1。
本發明的口腔粘貼片的保護層包括丙烯酸樹脂，聚乙烯醇17-88，甘油，黃色素，鄰苯二甲酸二辛酯，且其重量比為25∶30∶5∶4∶3，所用的色素為黃色素。
本發明的口腔粘貼片的製備方法，包括以下步驟1)製備含重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子的顆粒將重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子與丙二醇、維生素B2、人血白蛋白等穩定劑同促透皮吸收劑按0.05～1.0∶5～20∶0.4的重量比混合製成溶液，將透明質酸、海藻酸鈉和乳糖等穩定劑同粘附劑按25～50∶10～40的重量比製成混合粉末，然後將溶液加入到粉末中充分攪拌混合10～20分鐘，過20目篩後，35℃～42℃乾燥1～3小時，過18目篩整粒；2)壓片，加入0.5～20重量份的粘附劑，然後壓片；3)在藥片表面噴塗保護層將聚乙烯醇17-88按3.0～8.0的重量份加入70ml～100ml蒸餾水中，80℃加熱使溶解完全.再按重量比8.0∶3.0∶1.0∶0.5加入甘油、丙烯酸樹脂、鄰苯二甲酸二辛酯、黃色素研磨均勻，用噴膜機均勻噴塗於藥片表面，經25℃～40℃乾燥後，形成片劑的保護層。
本發明提供的是一種重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片，這種粘貼片是採用對大分子蛋白質起保護作用的可溶性生物粘附性高分子材料以及難溶性水的防水基質製成的一種新穎的含有蛋白質類藥物的雙層片劑。其中一層為含藥的粘附層，這層中含有的成分不僅增強片劑粘附性，而且還保證了主藥的穩定性，提高藥物的藥效，使藥物無刺激性，容易被皮膚或黏膜患處吸收；不溶於水的另一層為保護層，可以延緩藥物在口腔內的溶解過程，防止藥物向口腔黏膜的對側的溶解和片劑在齒齦和口腔黏膜的雙向粘附，從而儘量使藥物向潰瘍面滲入，同時也減少該粘貼片在口腔中的不適感，增加藥物的作用時間，提高局部作用藥物的療效。在上市治療口腔潰瘍藥物中還沒有蛋白質藥物，更沒有重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片。該口貼片選用的主藥是有抗潰瘍作用的蛋白質藥物重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子，此因子對於免疫能力低下和白細胞減少等引起的口腔潰瘍有特效。所以將主藥製成口腔粘貼片劑不僅可以較長時間粘貼在創面，使局部有較高的、較長時間的藥物滯留並保持較好的療效，而且與該主藥的注射劑相比，同樣治療口腔疾患的劑量大大的降低，並且減少了全身副反應。另外，作為口腔粘貼片，迄今尚未見報導有蛋白質類的此劑型。在該口腔粘貼片中，主藥重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子的含量為0.01～0.5重量份，優選為0.05重量份。
如上所述，本發明的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片是一種蛋白質雙層貼片劑，它不同於市場上已有的單獨化學消炎貼片和常見的激素類藥物，無任何副作用。藥效明確，用藥安全，長期使用也無任何潛在不安全因素。這種雙層貼片劑是一種雙層單向釋藥的複合片劑。其中一層為可溶性的高分子組成含藥的粘貼層，另一層為不溶性高分子組成的不含藥的保護層。
如上所述的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片，其製備方法為用含有複合穩定劑維生素B2、人血白蛋白以及複合透皮吸收劑卵磷脂和聚山梨酯80的磷酸緩衝溶液將重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子的原液稀釋成一定的濃度，然後與乳糖混合後制粒，乾燥後加入卡波姆(carbopol)、海藻酸鈉和硬脂酸鎂，混合均勻後壓片，再將含有丙烯酸樹脂，聚乙烯醇17-88，鄰苯二甲酸二辛脂、甘油和色素的溶液噴塗於藥片表面，乾燥後得到重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片。所用到的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子是通過菌體發酵表達出的含有重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子分泌物，經粗提、精提得到符合國家質檢標準的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子原液。其它輔料均為藥用級別的輔料。
對本發明的產品經過光照(2500LUX)、高溫(25℃、37℃)，高溼(RH60％、75％、90％)、室溫空氣各10天的影響因素試驗，加速試驗(37℃、RH75％)三個月和室溫留樣30個月的穩定性考察，製劑的外觀、PH、微生物限度、藥物活性、溶解性等均無明顯變化。
具體實施例方式
實施例一1、組分主藥重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)，是根據《中國生物製品規程》(2000版)，採用菌體發酵，柱層析技術製備的原液。
穩定劑丙二醇、人血白蛋白、乳糖均為藥用級市售產品。
透皮吸收劑脫氧膽酸鈉、油酸均為藥用級市售產品。
粘附劑卡波姆、硬脂酸鎂均為藥用級市售產品。
保護層的輔料丙烯酸樹脂，聚乙烯醇17-88，均為市售產製品。
2、製備1000片的主藥及輔料投量GM-CSF0.1g 丙二醇 5.0g人血白蛋白5.0g 乳糖 40.0g脫氧膽酸鈉0.12g 油酸 0.08g卡波姆13.9g 硬脂酸鎂 0.2g丙烯酸樹脂8.9g 聚乙烯醇17-886.0g甘油 1.0g3、製備方法3.1製備含主藥的顆粒取重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子原液，以及按投料量稱取丙二醇、人血白蛋白、油酸，用PBS配製重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子稀釋液10ml，其中重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子的濃度為10.0mg/ml。按投料量稱取乳糖、卡波姆、硬脂酸鎂加入密閉物料鍋，再加入已配好的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子溶液，開機混合10分鐘，過20目篩制粒，40℃乾燥1小時後，過18目篩整粒。
3.2壓片用直徑8平衝壓片即得，每片約重100mg，含重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子10ug(10IU)。
3.3製備貼片保護層將6.0g聚乙烯醇17-88加入95ml蒸餾水中，80℃加熱使溶解完全。再加入甘油1.0g，丙烯酸樹脂8.9g研磨均勻，用噴膜機均勻噴塗於藥片表面，經25℃～37℃乾燥後，形成片劑的保護層。
實施例二1、組分主藥重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)，是根據《中國生物製品規程》(2000版)，採用菌體發酵，柱層析技術製備的原液。
穩定劑甘油、乳糖、透明質酸均為藥用級市售產品。
透皮吸收劑卵磷脂、油酸均為藥用級市售產品。
粘附劑卡波姆、硬脂酸鎂均為藥用級市售產品。
保護層的輔料聚乙烯醇17-88，鄰苯二甲酸二辛酯，黃色素均為市售產品。
2、製備1000片的主藥及輔料投量GM-CSF 0.3g甘油 2.0g透明質酸5.0g乳糖 30.1g卵磷脂 0.1g油酸 0.1g卡波姆 15.2g 硬脂酸鎂 0.2g黃色素 0.5g聚乙烯醇17-886.0g鄰苯二甲酸二辛酯2.5g甘油 8.0g3、製備方法3.1製備含主藥的顆粒取重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子原液，以及按投料量稱取甘油、透明質酸、油酸、卵磷脂，用PBS配製重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子稀釋液6ml，其中重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子的濃度為50.0mg/ml。按投料量稱取乳糖、卡波姆、硬脂酸鎂加入密閉物料鍋，再加入已配好的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子溶液，開機混合20分鐘，過20目篩制粒，37℃乾燥2小時後，過18目篩整粒。
3.2壓片用直徑8平衝壓片即得，每片約重80mg，含重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子30ug(30IU)。
3.3製備貼片保護層將6.0g聚乙烯醇17-88加入95ml蒸餾水中，80℃加熱使溶解完全，再加入甘油8.0g，鄰苯二甲酸二辛酯2.5g，黃色素0.5g研磨均勻，用噴膜機均勻噴塗於藥片表面，經乾燥後，形成片劑的保護層。
實施例三1、組分主藥重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)，是根據《中國生物製品規程》(2000版)，採用菌體發酵，柱層析技術製備的原液。
穩定劑人血白蛋白、維生素B2、乳糖、海藻酸鈉均為藥用級市售產品。
透皮吸收劑卵磷脂、聚山梨酯80均為藥用級市售產品。
粘附劑卡波姆、羥丙基纖維素、硬脂酸鎂均為藥用級市售產品。保護層的輔料丙烯酸樹脂，聚乙烯醇17-88，甘油，鄰苯二甲酸二辛酯，黃色素均為市售產品。
2、製備1000片的主藥及輔料投量
GM-CSF 0.05g人血白蛋白 2.0g 維生素B2 2.0g海藻酸鈉10.0g乳糖 19.8g卵磷脂 0.15g聚山梨酯80 0.05g卡波姆 20.0g硬脂酸鎂 0.1g羥丙基纖維素10.0g甘油 8.0g丙烯酸樹脂 3.0g 聚乙烯醇17-88 3.5g鄰苯二甲酸二辛酯1.0g 黃色素 0.5g3、製備方法3.1製備含主藥的顆粒取重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子原液，以及按投料量稱取維生素B2、人血白蛋白、卵磷脂、聚山梨酯80，用PBS配製重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子稀釋液8ml，其中重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子的濃度為6.25mg/ml。按投料量稱取海藻酸鈉、乳糖、卡波姆、羥丙基纖維素、硬脂酸鎂加入密閉物料鍋，再加入已配好的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子溶液，開機混合15分鐘，過20目篩制粒，37℃乾燥2小時後，過18目篩整粒。
3.2壓片用直徑8平衝壓片即得，每片約重80mg，含重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子50ug(50IU)。
3.3製備貼片保護層將4.0g聚乙烯醇17-88加入95ml蒸餾水中，80℃加熱使溶解完全。再加入甘油8.0g，丙烯酸樹脂3.0g，鄰苯二甲酸二辛酯1.0g，黃色素0.5g研磨均勻，用噴膜機均勻噴塗於藥片表面，經乾燥後，形成片劑的保護層。
實施例四1、組分主藥重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)，是根據《中國生物製品規程》(2000版)，採用菌體發酵，柱層析技術製備的原液；穩定劑丙二醇、人血白蛋白、乳糖、海藻酸鈉均為藥用級市售產品。
透皮吸收劑卵磷脂、十二烷基硫酸鈉均為藥用級市售產品。
粘附劑卡波姆、羥丙基纖維素、硬脂酸鎂均為藥用級市售產品。
保護層的輔料丙烯酸樹脂，聚乙烯醇17-88，甘油，鄰苯二甲酸二辛酯，黃色素均為市售產品。
2、製備1000片的主藥及輔料投量GM-CSF 0.1g人血白蛋白 3.0g 丙二醇 5.0g海藻酸鈉 10.3g 乳糖 25.1g卵磷脂 0.1g 十二烷基硫酸鈉 0.1g卡波姆 20.0g 硬脂酸鎂 0.1g羥丙基纖維素15.0g 甘油 8.0g丙烯酸樹脂 3.0g 聚乙烯醇17-884.0g鄰苯二甲酸二辛酯1.0g 黃色素 0.5g3、製備方法製備方法實施例同三。
實施例五1、組分主藥重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)，是根據《中國生物製品規程》(2000版)，採用菌體發酵，柱層析技術製備的原液；穩定劑乳糖、海藻酸鈉、透明質酸均為藥用級市售產品。
透皮吸收劑卵磷脂、苄澤均為藥用級市售產品。
粘附劑卡波姆、羥丙基纖維素、硬脂酸鎂均為藥用級市售產品。
保護層的輔料聚乙烯醇17-88，甘油，鄰苯二甲酸二辛酯，黃色素均為市售產品。
2、製備1000片的主藥及輔料投量GM-CSF 0.05g海藻酸鈉6.0g 乳糖 30.0g透明質酸2.0g 卵磷脂 0.1g苄澤0.1g 卡波姆 20.0g羥丙基纖維素10.0g硬脂酸鎂 0.1g甘油8.0g 聚乙烯醇17-884.0g鄰苯二甲酸二辛酯1.0g 黃色素 0.5g3、製備方法製備方法實施例同三。
實施例六1、組分主藥重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)，是根據《中國生物製品規程》(2000版)，採用菌體發酵，柱層析技術製備的原液；穩定劑人血白蛋白、乳糖、海藻酸鈉均為藥用級市售產品。
透皮吸收劑膽酸鈉、聚山梨酯80均為藥用級市售產品。
粘附劑卡波姆、羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂均為藥用級市售產品。
保護層的輔料丙烯酸樹脂，甘油，鄰苯二甲酸二辛酯，黃色素均為市售產品。
2、製備1000片的主藥及輔料投量GM-CSF 0.2g人血白蛋白 2.0g 乳糖 30.0g膽酸鈉 0.15g海藻酸鈉 5.0g聚山梨酯80 0.05g卡波姆 25.0羧甲基纖維素鈉 10.0g硬脂酸鎂 0.1g甘油7.0g 丙烯酸樹脂 3.0g鄰苯二甲酸二辛酯1.0g 黃色素 0.5g3、製備方法製備方法實施例同三。
以上實施例用於描述本發明，但不作為對本發明的限制。
實施例的實驗結果比較試驗實施例一穿透黏膜、粘附力與溶解以及穩定性實驗1.透黏膜試驗(1)實驗材料試驗樣品是按著實施例三製備的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片。對照品按著實施例三製備的不含有促透皮吸收劑的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片。生物膜為市售的雞肫囊。Frank釋放池，保溫箱，高壓液相儀均為市售產品。
(2)實驗方法取雞肫囊作為生物膜，用水洗淨，置生理鹽水中待用。取容積2ml、直徑為1cm的Frank釋放池，二池之間放上生物黏膜，在膜的一側供給室放上本口腔粘貼片一片；另一側接受池加2ml生理鹽水，然後於37℃保溫。樣品與對照品的釋放池每隔1h取出2ml溶液，同時補充2ml生理鹽水。將取出液用高效液相色譜法測定，與標準重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子比較，得出測定的樣品與對照品在釋放池取出溶液的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子的含量。
(3)實驗結果
本品的透黏膜作用要比不含促透皮劑的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子普通粘貼片的透皮作用強，6h本品透過黏膜的量為標示量的26.32％，而重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子普通粘貼片劑透過黏膜的量為標示量的15.86％。
2.粘附力與溶解試驗(1)實驗材料試驗樣品是按著實施例三製備的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片。
對照品按著實施例三製備的不含有促透皮吸收劑的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片。
生物膜為新鮮的雞蛋殼膜。
人工唾液為市售分析純的磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉配製而成。
(2)實驗方法按照中國藥科大學學報2001年第32卷第2期介紹的方法和粘附力測定裝置進行試驗。
將待測藥片的一面粘貼於玻片1上，取新鮮的雞蛋殼膜用人工唾液浸泡45min後，剪取1cm2粘貼於玻片2上，用少量人工唾液將藥片表面潤溼後，迅速將粘有雞蛋膜的玻片2覆蓋於其上，使雞蛋殼膜與藥片緊密接觸，同時施加外力1N，持續5min。5min後撤去外力，調整輸液流量為每秒2滴。稱量玻片2脫落時塑膠袋中的水與玻片2的總重量，即為藥片粘附力的大小。
將片劑粘貼於片劑溶出儀的燒杯中(離開液面約1cm)，以人工唾液為基質，溫度37℃，槳法，100r/min，記錄片劑消失所需時間。
(3)實驗結果
根據上述實驗，選擇主要組成的乳糖∶卡波姆∶羥丙基纖維素為20∶20∶10以及保護層由丙烯酸樹脂，聚乙烯醇17-88，甘油，鄰苯二甲酸二辛酯，黃色素的處方，因為此配方既有較長的粘附力，又可保持適合的溶解時間。
3.穩定性試驗(1)實驗材料試驗樣品是分別按著實施例一、二、三、四、五和六製備的重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片。所用的儀器設備如恆溫箱、冰箱、pH計均為市售產品，所用的細胞培養基RM1640、血清以及TF1細胞均為市售產品。
(2)實驗方法活性測定將重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片用1640細胞培養液溶解，按著《生物製品規程》2000版規P417的方法測定。
pH值測定將重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片用蒸餾水溶解，再利用pH計測定。
粘附力測定，溶解性測定均同上。
(3)實驗結果試驗樣品經加速試驗，即37℃情況下放置，在0、1、2、3個月和25℃室溫情況下放置，在0、1、3、6個月測定其性狀、pH值、粘貼力、活性含量、溶解性等5項穩定性實驗指標，比較六種實施例的樣品，實施例三的樣品的5項指標均與0個月初始情況沒有明顯變化，而其它五種均在不同指標上有所改變。
實驗實施例二藥理及毒理性實驗1、動物的藥理學研究實驗(1)實驗材料豚鼠，小白鼠，貓，均為市售動物；重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片為分別以主藥10ug/片、50ug/片、100ug/片、200ug/片、500ug/片，按照實施例三的輔料配方及方法製備的樣品。
(2)實驗方法①重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片10ug/只組、50ug/只組、100ug/只組、200ug/只組、500ug/只五個劑量，每日分2次，連續7日，貼於豚鼠體表患處，觀察對豚鼠實驗性單皰病毒性皰疹是否有明顯抑制作用；是否隨其劑量強度增大而增強。
②將粘貼片10ug/只組、50ug/只組、100ug/只組、200ug/只組、500ug/只組塗抹小鼠破損皮膚，然後觀察藥物對其自主活動有無明顯影響；③將貓麻醉，然後在其破損的口腔黏膜處貼上該粘貼片10ug片/只、50ug片/只、100ug片/只、200ug片/只、500ug片/只，觀察藥物對其血壓、心率、呼吸頻率、呼吸深度及心電圖有無明顯影響。
(3)實驗結果藥物對豚鼠實驗性單皰病毒性皰疹有明顯抑制作用，且其強度隨劑量增大而增強；對小白鼠自主活動無明顯影響；對麻醉後的貓血壓、心率、呼吸頻率、呼吸深度及心電圖無明顯影響。方法和藥效學實驗所述相同。觀察對潰瘍的抑制作用；對小鼠自主活動的影響；對貓的血壓、心跳、呼吸頻率、呼吸深度及心電圖有無明顯影響。
2、動物的急性毒性實驗(1)實驗材料大鼠為市售動物；重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片——是主藥為2500ug/片按照實施例三的輔料配方及方法製備的樣品。
(2)實驗方法將重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片最大給藥量4×2500ug/片/kg貼於大鼠的體表破損皮膚處，連續觀察7天，記錄異常現象和死亡數。
(3)實驗結果7天內大鼠無一死亡，亦未出現異常反應，該劑量相當於臨床劑量的1.2×104倍，所以臨床用藥非常安全。
3、動物的長期毒性研究實驗(1)實驗材料大鼠為市售動物；重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片為實施例三製備的樣品，(2)實驗方法將重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片按50ug/片/只劑量貼於大鼠潰瘍的皮膚處給藥，每日一次，連續28天(相當於臨床擬用周期的4倍)，與對照品比較，觀察大鼠的活動、體重、飲食量、飲水量、血常規、血生化指標、臟器係數以及進行組織病理學檢查，記錄異常現象和死亡數。
(3)實驗結果與對照組比較，對所觀察的各指標均無明顯異常。連續給藥28天後再停藥觀察14天，上述各指標均無明顯異常。
實驗實施例三安全性檢查實驗1、動物的過敏性研究實驗(1)實驗材料豚鼠為市售動物；重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片為實施例三製備的藥品，主藥含量為50ug/片/80mg；按實施例三製備的不合重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子的口腔粘貼片為陰性對照品；市售的2，4-二硝基氯代苯為陽性對照品。
(2)實驗方法豚鼠背部脫毛後，其分成三，各組分別用重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片、陰性對照品按0.24g/次劑量，陽性對照品按濃度0.1％、0.2毫升/次進行致敏接觸，然後在7天和14天，以同樣的方法各重複一次，再經過14天，用同樣的劑量將受試藥物、陰性對照品和陽性對照品塗於用藥部位進行激發接觸，6小時後去除，即刻觀察皮膚過敏反應情況，然後於24、48、72小時再觀察一次，記錄反應現象。
(3)實驗結果藥品組和陰性對照組君未見紅腫、壞死等過敏反應，陽性對照組則有明顯的過敏性反應。
2、動物的刺激性實驗(1)實驗材料豚鼠為市售動物；口腔粘貼片為實施例三製備的藥品，活性單位為5.0×104IU/g。
(2)實驗方法依照《新藥(西藥)臨床研究指導原則彙編》，中華人民共和國衛生部藥政局，1993年7月，205頁方法和王北嬰的《中藥新藥研製與申報》，中國中藥出版社出版，262頁的方法進行實驗。
(3)實驗結果重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片按50ug/片/次劑量，連續7日貼於皮膚，對豚鼠完整皮膚和破損皮膚無刺激性反應。
實驗實施例四主要藥效學實驗1.動物的藥效學實驗(1)實驗材料豚鼠為市售動物；重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片為分別以主藥10ug/片、50ug/片、100ug/片、200ug/片、500ug/片，按照實施例三的輔料配方及方法製備的樣品。
(2)實驗方法
本發明的產品臨床前動物藥效模型採用豚鼠，攻擊病毒用I型和II型單純庖疹病毒。具體方法是將兩組豚鼠口腔黏膜劃破，兩組分別塗抹一定量的I型和II型單純庖疹病毒，4～5d後造成口腔潰瘍，將造模豚鼠按病變程度均分5組模型組、陽性藥對照組、重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子貼片10ug/只組、50ug/只組、100ug/只組、200IU/只組、500IU/只。
各組豚鼠分別於潰瘍部位貼敷各受試藥物，模型組貼敷等體積的空白基質片，1貼/次，2次/日，連續給藥7d左右。分別於給藥前、給藥期間及給結束根據潰瘍癒合程度按下列評分標準進行半定量評分，結果進行統計學處理。於末次給藥後約16h，處死豚鼠，取潰瘍部位的口腔黏膜置10％中性福馬林溶液中，進行病理組織學檢查。
評分標準
(3)實驗結果本發明的產品各劑量組給藥後，豚鼠口腔黏膜紅腫減輕、潰瘍面縮小、結痂直至潰瘍面完全癒合。病理組織學檢查與對照組比較未見黏膜形態結構異常。
實驗實施例四臨床實驗本發明的產品用於治療皰疹性口炎、復發性口腔潰瘍及放化療引起的口腔黏膜炎的適應症進行了318例病人的臨床實驗。實驗採用隨機單盲法，實驗組(重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口貼片)206例，對照組(安慰組)112例，劑量一次一片(50IU/片)，一日2次。療程皰疹性口炎及復發性口瘡7天；放化療黏膜炎14天。結果顯示試驗組與對照組總有效率分別為93.89％與32.19％。其中皰疹性口炎有效率93.88％和28.65％；復發性口腔潰瘍91.85％和38.52％；防化療黏膜炎91.98％和22.79％。經統計學處理，P＜0.03，顯示試驗組有顯著的療效，且有統計學意義。
權利要求
1.一種治療口腔潰瘍的口腔粘貼片，其特徵在於所述貼片以重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子作為活性組分，並且該片劑分為兩層，一層為含活性組分的粘附層，一層為不溶於水的保護層，兩層的重量比為1∶1～5∶1。
2.如權利要求1所述的口腔粘貼片，其特徵在於粘附層與保護層的重量比的優選為4∶1。
3.如權利要求1所述的口腔粘貼片，其特徵在於該粘貼片的粘附層按重量份含有重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子0.01～0.5份、穩定劑10～50份、透皮吸收劑0.01～0.5份、粘附劑0.5～20份。
4.如權利要求1所述的口腔粘貼片，其特徵在於優選該粘附層中重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子的含量為0.05重量份。
5.如權利要求3所述的口腔粘貼片，其特徵在於所述穩定劑為一種或多種選自包括甘油、丙二醇、維生素B2、人血白蛋白、乳糖、海藻酸鈉、透明質酸的組的物質。
6.如權利要求3所述的口腔粘貼片，其特徵在於優選所述穩定劑為維生素B2、海藻酸鈉、人血白蛋白、乳糖聯合作為穩定劑，且其重量比為1∶5∶1∶10。
7.如權利要求3所述的口腔粘貼片，其特徵在於所述透皮吸收劑為一種或幾種選自包括卵磷脂、膽酸鈉，脫氧膽酸鈉、油酸、十二烷基硫酸鈉、聚山梨酯80、苄澤的組的物質。
8.如權利要求3所述的口腔粘貼片，其特徵在於優選所述透皮吸收劑為卵磷脂和聚山梨酯80，且其重量比為1∶1～4∶1。
9.如權利要求3所述的口腔粘貼片，其特徵在於所述粘附劑為一種或多種選自包括粘附劑是由卡波姆、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、硬脂酸鎂的組的物質。
10.權利要求3所述的口腔粘貼片，其特徵在於優選所述粘附劑為卡波姆、羥丙基纖維素和硬脂酸鎂，且其重量比為20∶10∶0.1。
11.如權利要求1所述的口腔粘貼片，其特徵在於所述保護層包括丙烯酸樹脂、聚乙烯醇17-88、甘油、黃色素、鄰苯二甲酸二辛酯，且其重量比為25∶30∶5∶4∶3。
12.如權利要求1所述的口腔粘貼片的製備方法，包括以下步驟1)製備含重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子的顆粒將重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子與穩定劑同促透皮吸收劑按0.05～1.0∶5～20∶0.4的重量比混合製成溶液，將穩定劑同粘附劑按25～50∶10～40的重量比製成混合粉末，然後將溶液加入到粉末中充分攪拌混合10～20分鐘，過20目篩後，35℃～42℃乾燥1～3小時，過18目篩整粒；2)壓片，加入0.5～20重量份的粘附劑，然後壓片；3)在藥片表面噴塗保護層將聚乙烯醇17-88按3.0～8.0的重量份加入70ml～100ml蒸餾水中，80℃加熱使溶解完全再按重量比8.0∶3.0∶1.0∶0.5加入甘油、丙烯酸樹脂、鄰苯二甲酸二辛酯、黃色素研磨均勻，用噴膜機均勻噴塗於藥片表面，經25℃～40℃乾燥後，形成片劑的保護層。
全文摘要
本發明涉及的是一種抗口腔潰瘍的蛋白質類藥物——重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片及其製備方法。該口腔粘貼片分為兩層一層為含藥的粘附層；一層為不溶於水的保護層。粘附層中不僅含有粘附劑，還含有對蛋白質活性起穩定作用的穩定劑和促進藥物吸收的促透皮吸收劑，並且在製備工藝中採用特殊的處理方法，以充分保護蛋白質主藥的生物活性在製備過程中不受破壞。保護層可以延緩藥物在口腔內的溶解過程，防止片劑的雙向粘附作用而帶來的不適感，增加藥物的作用時間，提高局部作用藥物的療效。該重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子口腔粘貼片具有局部給藥濃度高、藥物緩釋時間長、粘貼效果好等優點，是一種適用於臨床治療的新型製劑。
文檔編號A61P1/02GK1718239SQ200510004909
公開日2006年1月11日 申請日期2005年1月28日 優先權日2005年1月28日
發明者王玉清, 吳歧 申請人:深圳市孚沃德生物技術有限公司