抗雄激素劑、皮脂分泌抑制劑、育發劑以及飲食品的製作方法

2023-09-16 09:37:30 3

專利名稱：抗雄激素劑、皮脂分泌抑制劑、育發劑以及飲食品的製作方法
技術領域：
本發明涉及抗雄激素劑、以及含有該抗雄激素劑作為有效成分的皮脂分泌抑制齊U、育發劑。
背景技術：
多數類固醇激素是由產生臟器分泌的分子型，與受體結合發揮其作用，統稱為雄激素的男性激素的情況下，例如睪酮由腦下垂體、腎上腺、睪丸等生成，進入目標臟器的細胞內被睪酮5 a-還原酶還原為5 a-氫睪酮(DHT) 後，與受體結合，發揮作為雄激素的作用。雄激素是重要的激素，如果它過度發揮作用則會誘發男性型禿頭、多毛症、皮脂溢、痤瘡、前列腺肥大症、前列腺腫瘤、男童性早熟等各種不良症狀。因此，考慮通過抑制過剩的雄激素的作用來改善這些不良症狀，作為其方法，有通過阻礙將睪酮還原為活性型DHT的睪酮5 a -還原酶的作用來抑制生成活性DHT的方法，通過阻礙由睪酮產生的DHT與受體結合從而使其不能發揮作用的方法。因此，這一次，通過睪酮5a-還原酶阻礙試驗、雄激素受體結合阻礙試驗以及使用了培養的倉鼠皮脂腺細胞的皮脂腺功能抑制評價法對幾種天然原材料進行篩選，結果發現，哺乳動物的乳汁、淚液、唾液、膽汁等分泌物中存在的乳鐵蛋白具有高抗雄激素作用，具有抑制皮脂分泌的可能性。一直以來，人們進行了各種有關乳鐵蛋白的研究。從這些結果可知，乳鐵蛋白具有以下作用通過螯合作用從葡萄球菌和大腸桿菌中爭奪鐵成分從而抑制菌和病毒的繁殖；增加乳酸菌、雙叉乳酸桿菌等益生菌；提高鐵成分的吸收、預防貧血；使自然殺傷細胞等免疫細胞活性化、提高免疫力；減輕生理痛、預防骨質疏鬆、平定情緒；激動T細胞、降低IgE抗體、減少由肥大細胞產生的組胺、緩解花粉過敏症等的過敏症狀；改善口腔炎、口臭和腳癬等；使針對C型肝炎的血清「白介素-18」上升；保護黏膜、緩解乾眼和幹唇等症狀；抑制致癌性物質的生成、預防肝癌和大腸癌等癌症；抑制弓漿蟲等原蟲的繁殖；減低內臟脂肪
坐寸o關於所述乳鐵蛋白的安全性，目前尚無充分的數據，雖然也有一些關於孕婦和產婦應避免過量攝取乳鐵蛋白的意見，但是乳鐵蛋白是大量存在於母乳和牛乳中的成分，一般認為對人體帶來不良影響的可能性較小。進而，關於所述乳鐵蛋白的種類，牛乳中含有的是牛乳鐵蛋白，人體中含有的是人乳鐵蛋白，雖然兩者是不同的種類，但是如果人攝取了牛乳鐵蛋白那麼在此人的血液中的人乳鐵蛋白會增加。這個機理尚不明了。雖然乳鐵蛋白對於消化酶較有耐受性、不易被分解，但是從被消化酶分解為較大塊狀的乳鐵蛋白生成抗菌作用較強的乳鐵蛋白肽，因此，通常認為這與該機理有關。在這些乳鐵蛋白的研究中，具體可以例舉以下文獻。專利文獻I是涉及痤瘡治療的文獻，權利要求中記載了 「用於配製針對治療痤瘡的口服組合物的、由含有乳鐵蛋白構成的乳漿蛋白質部分的使用」。但是沒有關於其作用機制的詳細記載。專利文獻2、3、4、5是涉及抗炎症、皮脂調節、抗菌活性和由P防衛素(抗菌肽)產生促進而引起的痤瘡的治療的文獻。專利文獻3記載了 「目前已知水解乳蛋白在改善毛髮和皮膚的狀態時使用。該物質改善乾燥肌膚上的皮脂溢出，用作為降低油性肌膚皮脂過剩產生的皮脂調節劑」。但是沒有關於乳鐵蛋白的記載。專利文獻6是涉及由乳鐵蛋白的抗氧化活性引起的抗脫髮效果的文獻，是關於減輕在頭皮表面生成的氧化應激對毛囊的不良影響的內容，沒有關於乳鐵蛋白的抗雄激素作用的記載。專利文獻7是涉及改善源於乳鐵蛋白的抗炎活性的尿頻和前列腺肥大的文獻，是關於將壓迫尿路的炎症平息化，使排尿容易化的內容，沒有關於抗雄激素作用的記載。非專利文獻I提到了乳鐵蛋白對皮脂的效果，但是沒有具體公開詳細內容。如上，現有技術雖然公開了乳鐵蛋白的痤瘡治療效果(口服)、皮脂溢症(外敷)、抗脫髮(外敷)、尿頻改善效果(口服)或基於水解乳蛋白質的皮脂調節的痤瘡治療的內容，但是從乳鐵蛋白的作用機理的觀點，還不存在提及乳鐵蛋白的抗雄激素作用的文獻。
現有技術文獻 專利文獻專利文獻I:日本專利特表2008-533134號公報專利文獻2:日本專利特表2008-501772號公報專利文獻3:日本專利特表2007-523137號公報專利文獻4:日本專利特表2003-89629號公報專利文獻5:國際公開第2005-077349號公報專利文獻6:日本專利特開2007-22923號公報專利文獻7:日本專利特開2006-206547號公報非專利文獻非專利文獻I「Supporting healthy complexion from the inside withPraventin，，DMV international

發明內容
發明所要解決的技術問題本發明的目的是提供具有高抗雄激素作用、無副作用且安全性也優異的抗雄激素齊U，以及以該抗雄激素劑為有效成分的皮脂分泌抑制劑、育發劑。解決技術問題所採用的技術方案為了解決上述技術問題，針對幾種天然原材料進行了篩選，結果發現，哺乳動物的乳汁、淚液、唾液、膽汁等分泌物中存在的乳鐵蛋白具有高抗雄激素作用，從而完成了本發明。本發明涉及抗雄激素劑，其特徵是，含有乳鐵蛋白。本發明涉及皮脂分泌抑制劑，其特徵是，混合上述抗雄激素劑作為有效成分。本發明涉及育發劑，其特徵是，混合上述抗雄激素劑作為有效成分。本發明涉及飲食品，其含有以乳鐵蛋白為有效成分的抗雄激素劑。發明的效果
本發明能製成漱口劑、吸入劑、含片劑等製劑以及製成口香糖、糖果、壓片糖、軟糖、餅乾、巧克力等點心、雪糕、飲料等形式食品日常使用攝取，對於男性型脫髮症和粗毛等毛髮病症、前列腺肥大和前列腺腫瘤等疾病、皮脂分泌過剩引起的尋常性痤瘡和脂溢等皮膚疾病的預防和治療是有效的。進而，本發明的抗雄激素劑效力非常高，且無副作用，安全性也非常優異。


圖I表示睪酮5a—還原酶阻礙活性的圖。圖2表示雄激素受體結合阻礙率的圖。圖3表示皮脂腺細胞的皮脂合成量的圖。圖4表示皮脂腺細胞的油紅0染色(脂腺細胞培養試驗結果)的顯微鏡照片的圖。
具體實施例方式[實施例I]睪酮5 a -還原酶阻礙試驗I. 3. OmM睪酮溶液(用丙二醇溶解)0. Iml中加入5mM Tris-HCl緩衝液(pH7. 2)0. 5ml。2.加入 6. 7mM NADPH 溶液(溶解在 5mM Tris-HCl 緩衝液(pH7. 2)中)0. Iml 和樣品溶液(溶解在50%乙醇中)0.05ml，在37°C下預熱後，加入酶液(S-9，東方酵母(才')二>夕 >酵母))0. 1ml，恆溫I小時。本試驗中，配製來自牛的乳鐵蛋白作為乳鐵蛋白使用，使用前列通(乂 M'>)作為對照。3.然後,加入3ml 二氯甲烷使反應停止，加入0. 5ml的內標溶液(0. lmg/ml的對羥基苯甲酸正己酯)，振蕩10分鐘，以3000rmp的速度離心分離10分鐘。4.分離取出二氯甲烷層，進行減壓乾燥。在乾燥物中加入5ml甲醇使其溶解，製成試樣溶液。通過高效液相色譜法(HPLC)測定獲得的試樣溶液中殘存的睪酮的含量。測定條件使用YMC A-302 (內徑4. 6 X 150mm)柱，柱溫40°C，流速Iml/分鐘，在這樣的條件下用甲醇/水(65/35)洗脫，在254nm處檢測。此外，測定使用內標物法進行，阻礙率(％)由下式求出。阻礙率(％)= (A-B) / (C-B) X 100A :加入試驗液時的睪酮量B :對照物30分鐘的睪酮量(使用50%乙醇溶液代替試驗液進行反應時的睪酮量)C :對照物0分鐘的睪酮量(在混合Tris-HCL緩衝液、睪酮、試驗液和酶液後，加入NADPH前，加入二氯甲烷使反應不進行時的睪酮量)所得的結果示於圖I。由圖I可以清楚地看出，陽性對照的前列通在IOOOppm的濃度顯示出約35%的阻礙活性，乳鐵蛋白沒有看到睪酮5 a -還原酶阻礙活性。
[實施例2]雄激素受體結合阻礙試驗I.使用含有2% DCC處理的FCS的MEM培養基，以I. OX IO4細胞/孔/100 ill的細胞密度將雄激素依賴性小鼠乳癌細胞SC-3細胞接種在96孔微板中，在37°C、5% C02-95% 空氣下培養。2. 24小時後，交換培養基，交換成添加了試驗試樣和10_8M的DHT的HMB培養基(含有0. I % BSA的Ham F12+MEM培養基)，培養48小時。本試驗中，配製來自牛的乳鐵蛋白作為乳鐵蛋白使用，使用螺甾內酯(7 口 7 7夕卜 >)作為陽性對照。3.然後，通過MTT還原法，測定甲臢藍(歹斤一 * 開' >)最大吸收點即570nm處的吸光度，評價細胞增殖。為了校正附著細胞的影響，同時也測定650nm處的吸光度，以兩個吸光度之差作為甲臢藍的生成量。為了考察試樣單獨對SC-3細胞的影響，與上述平行地，在HMB培養基中不添加DHT而只添加試樣，同樣地培養，並進行測定。進而，作為對照，在不添加試樣和DHT的HMB培養基中培養時，以及在不添加試樣只添加DHT的HMB培養基中培養時也進行同樣的測定。由測定結果，通過下式算出顯示抗雄激素作用的結合阻礙率。結合阻礙率(％)=〔 {(A-B) - (C-D)} / (A-B) ) XlOOA :添加DHT、未添加試樣時的吸光度B :未添加DHT、未添加試樣時的吸光度C :添加DHT、添加試樣時的吸光度D :未添加DHT、添加試樣時的吸光度所得的結果示於圖2。由圖2可以清楚地看出，陽性對照螺甾內酯在10_5M的濃度下顯示約70%的結合阻礙活性。關於乳鐵蛋白，可以看到依賴濃度的結合阻礙活性，在60ppm的濃度下顯示約85%的阻礙活性。[實施例3]皮脂腺細胞培養試驗I.本試驗中使用倉鼠皮脂腺細胞培養試劑盒KB-1000 (倉敷紡織株式會社(」 7 々社)制)進行試驗。以5. 0 X 104細胞/孔的密度將來自正常金黃倉鼠耳廓的皮脂腺細胞接種在24孔板。試驗期間，在以I X IO-6M的濃度含有睪酮的培養基中培養。2.培養幾天直至融合,然後,交換成含有試驗試樣的培養基。每隔一天用試樣培養基進行培養基交換，持續培養約2周。本試驗中，配製來自牛的乳鐵蛋白作為乳鐵蛋白使用，使用螺甾內酯作為對照。3.然後，使用皮脂合成測定試劑盒SE-3001 (倉敷紡織株式會社(々9 々社)制)，將WST-8溶液添加到各孔中，在37°C下恆溫培養30分鐘。在波長450nm處測定上清液，計算測定活細胞數。
4.進而，油紅0染色，顯微鏡觀察，同時，用100%的異丙醇萃取，在波長520nm處測
定，計算測量脂質合成量。通過利用下式進行校正，比較每個細胞的脂質合成量。
每個細胞的脂質合成量的比較=吸光度B/吸光度A
吸光度A :細胞數測定值(450nm)吸光度B :脂質合成量測定值(520nm)所得的結果示於圖3和圖4。由圖3和圖4可以清楚地看出，陽性對照螺甾內酯在IXlO-5M的濃度下，在顯微鏡觀察和吸光度測定中，較之於對照，皮脂的合成量減少。另一方面，在顯微鏡觀察和吸光度測定中，乳鐵蛋白濃度依賴性地抑制皮脂合成量，在lOppm、20ppm的濃度下將皮脂合成量抑制到60%。接著，使用乳鐵蛋白依常法配製成藥丸、口香糖、糖果、巧克力、餅乾、軟糖、壓片糖、片劑、冰淇淋、雪糕、飲料。以下顯示為它們的配方。本發明的範圍不受到這些限制。[實施例4]按照以下配方配製藥丸。
權利要求
1.抗雄激素劑，其特徵在於，含有乳鐵蛋白。
2.皮脂分泌抑制劑，其特徵在於，混合權利要求I所述的抗雄激素劑作為有效成分。
3.育發劑，其特徵在於，混合權利要求I所述的抗雄激素劑作為有效成分。
4.飲食品，含有以乳鐵蛋白作為有效成分的抗雄激素劑 。
全文摘要
提供具有高抗雄激素作用、無副作用且安全性也優異的抗雄激素劑，以及以該抗雄激素劑為有效成分的皮脂分泌抑制劑、育發劑。抗雄激素劑的特徵是含有乳鐵蛋白，皮脂分泌抑制劑的特徵是混合該抗雄激素劑作為有效成分，育發劑的特徵是混合該抗雄激素劑作為有效成分，以及提供含有以乳鐵蛋白為有效成分的抗雄激素劑的飲食品。
文檔編號A61K38/16GK102665751SQ201080058700
公開日2012年9月12日 申請日期2010年12月21日 優先權日2009年12月24日
發明者兒玉悠史, 成瀨敦, 樋口裕明, 櫻井孝治 申請人:羅蒂株式會社