一種苯並噁嗪並吡唑類及開環化合物的製作方法

2023-09-10 03:35:15 1

專利名稱：：一種苯並噁嗪並吡唑類及開環化合物的製作方法
技術領域：
：本發明屬於藥物化學領域，具體涉及一種苯並噁嗪並吡唑類化合物或其開環化合物、其製備方法，以及在製備治療或預防心腦血管疾病藥物中的應用。血栓形成是腦卒中等致殘和致死率高的心腦血管疾病的病理學基礎，是涉及血管、血液、血流諸因素的病變過程，血栓形成與凝血系統、內皮細胞功能和細胞黏附功能異常等有關。抗血栓藥物包括抗凝血藥、抗血小板藥和以內皮細胞為作用靶點的藥物。目前臨床上常用的抗血小板藥物有阿司匹林、噻氯匹啶和氯吡格雷；血小板GPIIb/llIa受體拮抗劑有單克隆抗體阿昔單抗(abciximab)，合成肽類受體拮抗劑如埃替巴肽(印tifibatide);非肽類受體拮抗劑如環七肽替羅非班(tirofiban)和非肽擬似物拉米非班(lanifiban)。腦卒中發生後，閉塞血管在短期內再通有可能恢復腦功能，但是超過一定時間的持續缺血就會造成不可逆的腦細胞損傷。在不可逆損傷的缺血中心部位的周圍則是可生存的半暗帶，在一定時間後即便恢復血供仍有一部分會發生遲發性神經細胞死亡，會導致興奮性胺基酸釋放、神經細胞鈣內流、自由基產生等各種相關性因子，特別是自由基的產生被認為是造成腦功能障礙的主要因素之一。缺血狀態時花生四烯酸代謝系統亢進可以導致自由基的產生增加，構成細胞膜磷脂中不飽和脂肪酸過氧化會引起細胞膜的損傷，都會加重腦細胞的功能障礙。腦神經保護是腦卒中治療的重要環節，日本最新的腦卒中治療指南中首次根據循證醫學的證據推薦使用腦保護劑依達拉奉，為腦卒中的治療注入了新的生機。腦梗塞急性期的治療，建議使用具有腦保護作用的藥物依達拉奉。臨床研究表明依達拉奉對腦梗塞急性期(發生72小時以內)患者的預後改善有效，尤其是在發病24小時以內療效更為顯著。
背景技術：
：formulaseeoriginaldocumentpage4
發明內容本發明的目的在於提供一種具有藥用價值的苯並噁嗪並吡唑類化合物和其開環化合物。本發明的另一目的在於提供上述各化合物的製備方法。本發明進一步的目的在於提供上述化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療和預防心腦血管藥物中的應用。本發明的目的可以通過以下措施達到一種式I、式II或式III化合物或其藥學上可接受的鹽，式I式II式III。formulaseeoriginaldocumentpage5其中所述的藥學上可接受的鹽是指上述化合物與一般藥學上常用的酸或鹼反應生成的無其他副作用並能夠增加化合物物化性能(如水溶性等)的一般意義上的鹽，其中所述的酸或鹼常選用鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、醋酸、枸嫁酸、酒石酸、苯甲酸、苯磺酸、萘磺酸、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉或氫氧化鉀等。一種式I化合物的製備方法為將化合物A在強鹼性條件下與乙醯乙酸酯反應製備出化合物B,而化合物B在氯化氫氣體的作用下關環即可得到式I化合物。其具體的化學方程式如下formulaseeoriginaldocumentpage5其中R為C14的烷基，優選乙基。在上述式I化合物製備方法的其礎上，將式I化合物在鹼性條件開環即可得到式III化合物，其具體的化學方程式如下'其中r的意義同上。一種式II化合物的製備方法為將化合物M在強鹼性條件下與乙醯乙酸酯反應製備出化合物N，而化合物N在氯化氫氣體的作用下關環即得。其反應方程式如下CN乙醯乙酸酯MN式n在上述式II化合物製備方法的其礎上，進一步將式II化合物在水和濃鹽酸的條件下反應，即可製得式I化合物，其總體反應方程式如下CN乙醯乙酸酯NH2—MN式^-''式j本發明的式ni化合物也可以將化合物d直接與乙醯乙酸酯在醇鈉作用下關環製得，其具體的反應方程式如下OCH-formulaseeoriginaldocumentpage6式III通過以上的製備方法可以看出，本發明三個化合物之間存在緊密的聯繫。式II化合物(也稱為化合物2)可直接製得式I化合物(也稱為化合物1)，而式I化合物在鹼性條件下開環可製得式ni化合物(也稱為化合物3)，而式in化合物在酸性條件下關環則可製得式i化合物。本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽可應用在治療或預防心腦血管疾病。抗DPPH自由基試驗二苯代苦味醯自由基(DPPH)分光光度法是一種篩選抗氧化劑的簡便方法。其原理是利用DPPH溶液在517nm處的特徵吸收峰，當有自由基清除劑存在時，由於自由基清除劑與DPPH單電子配對而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受的電子數成定量關係，樣品的抗氧化活性可以通過清除DPPH的量來評價，因而可用分光法進行定量分析。DPPH標準曲線精密稱取DPPH,置於100ml容量瓶中，並用95X乙醇定容至100ml，在517nm測定其吸收值(A)。表l不同濃度DPPH溶液吸收值tableseeoriginaldocumentpage7DPPH標準曲線如圖1所示。其線性方程為y=0.219x-0.0285;r=0.9994。DPPH溶液的製備精密稱取DPPH,置於100ml容量瓶中，並用95X乙醇定容至100ml，即配成DPPH溶液。試藥溶液製備精密稱取試藥，置於100ml容量瓶中，用95X乙醇20ml溶解後，調pH7.5左右，再用95^乙醇定容至100ml。試藥-DPPH溶液的吸收值測定取DPPH溶液5.0ml,試藥溶液2.0ml，放置於10ml容量瓶中，充分震搖並在室溫約25'C反應一定時間，在517nm處測吸收值(A)。試藥清除DPPH自由基能力E(mgDPPH/mg)計算式formulaseeoriginaldocumentpage7試藥清除DPPH自由基能力V(mmolDPPH/mmo1)計算式formulaseeoriginaldocumentpage7表230min清除DPPH自由基測試結果tableseeoriginaldocumentpage8表3不同反應時間反應液吸收值測定值(DPPH:5.080mg/100ml)tableseeoriginaldocumentpage8tableseeoriginaldocumentpage9抗DPPH自由基能力V(ramolDPPH/mrao1)與反應時間(min)關係如圖2所示。抗DPPH自由基試驗結果表明，30min內試藥清除DPPH能力，化合物3最大，l個分子化合物3能夠清除1.942個分子DPra自由基；比依達拉奉清除DPPH自由基能力稍強，l個依達拉奉清除l.657個分子DPPH自由基。化合物1和化合物2清除DPPH自由基能力與反應時間相關，隨作反應時間延長，化合物1和化合物2逐漸水解成化合物3，因而清除DPPH自由基能力漸漸增強，化合物l在30min時清除DPPH自由基能力是化合物3的八分之一；在反應150min時化合物1清除DPPH自由基能力與化合物3相當。清除DPPH自由基的作用機理如下式所示-formulaseeoriginaldocumentpage9化合物l對小鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用雄性小鼠，隨機分為假手術組、模型組、化合物l組(10、5、2.5mg/kg)和陽性對照依達拉奉組(10mg/kg)。小鼠用戊巴比妥鈉60mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉程度不夠動物輕度乙醚吸入。小鼠仰位固定，切開頸部正中皮膚，鈍性分離肌層，暴露兩側頸總動脈，分離雙側頸總動脈和迷走神經，穿線，順著雙側頸總動脈和迷走神經各置一直徑為0.20mm的細鋼絲，以4號絲線合併迷走神經頸總動脈以及細鋼絲完全結紮，結紮時間為60s。時間到後將細鋼絲抽去，再灌注2min。記錄存活2min的小鼠數，存活不足2min小鼠剔除。迅速取腦置冰鹽水中。假手術組同樣手術，分離但不結紮頸總動脈及迷走神經。將腦在冰鹽水中漂洗去除血汙，去除軟腦膜、嗅球、腦幹及小腦，吸乾並稱重。按腦重生理鹽水=1:9(體積比)加入生理鹽水。在冰浴中勻槳(轉速10000rpm，10s/次，共5次，每次間隔30s)，製成10^勻漿。勻漿置冷凍離心機離心，3500rpmX10min。取上清液凍存備用。取腦組織勻漿上清液以生理鹽水l:9稀釋，按試劑盒測定方法，用考馬斯亮藍顯色方法測定總蛋白含量，測定波長595nm。MDA測定根據測定試劑盒用硫代巴比妥酸法測定腦組織MDA含量，測定波長532nm。SOD測定根據測定試劑盒用黃嘌呤氧化酶法測定腦組織SOD活力，測定波長550nm。表4化合物l對缺血-再灌注小鼠成活率、腦勻漿MDA含量和SOD的影響tableseeoriginaldocumentpage10與假手術組比較P<0.05;與模型組比較"P<0.05，'"P<O.01;與假手術組比較aP<O.05;與模型組比較bP<O.05;與依達拉奉組比較eP<0.05小鼠腦缺血後再灌注2min,5mg/kg劑量化合物1組小鼠成活率(60.0%)與10mg/kg依達拉奉組(66,7%)及模型組(57.1%)相當，沒有顯著性差異；10mg/kg劑量化合物1組，動物存活率有大幅度的提高(90.9%)。與10mg/kg依達拉奉組(6.55±1.90nmolMDA/mg蛋白質)相比，2.5mg/kg化合物l組(6.41±3.04nmolMDA/mg蛋白質)、5mg/kg化合物1組(5.03±2.39nmolMDA/mg蛋白質)和10mg/kg化合物1組(6.80±1.30nmolMDA/mg蛋白質)降低缺血再灌注小鼠腦組織丙二醛(MDA)含量作用相同，沒有統計學差異；與模型組(9.25±3.33nmolMDA/mg蛋白質)相比，5mg/kg化合物1組、10mg/kg化合物1組和10mg/kg依達拉奉組，降低丙二醛作用顯著，有統計學差異。超氧化物歧化酶(SOD)活性測定結果表明，2.5mg/kg化合物l劑量組的SOD活性高於模型組和依達拉奉組，與模型組和依達拉奉組比，具有統計學差異。小鼠腦缺血後再灌注試驗結果表明，化合物1具有顯著的腦神經保護作用，效果優於依達拉奉。其作用機制可能與抑制脂質過氧化、減輕自由基損傷相關。圖i是DPra標準曲線圖2是抗DPPH自由基能力與反應時間的關係圖。具體實施例方式實施例1製備2-甲基-苯並[d][1，3]噁嗪[5-b]吡唑-5-酮(化合物1)2—肼基苯甲酸乙酯鹽酸鹽製備o9在2000ml的三口瓶中加入濃鹽酸600ml，碎冰500ml，2—氨基苯甲酸乙酯82.5g(0.5mo1)，攪拌至完全溶解。冰鹽浴至—7一3'C，滴加亞硝酸鈉溶液34.5g(0.5mo1)溶於水150ml，滴加完畢，攪拌10min，得橙黃色澄清溶液，溶液待用。在5000ml的三口瓶中加入氯化亞錫350g，濃鹽酸1000ml，攪拌至完全溶解，冰鹽浴冷卻-5'C，滴加上述重氮鹽溶液，產生白色沉澱，滴加完畢，繼續攪拌2小時，過濾，濾餅用大量NaCl飽和溶液洗滌，再用冷15%鹽酸洗滌，乾燥得2—肼基苯甲酸乙酯鹽酸鹽42g。1_(2—乙氧羰基苯基)一3—甲基吡唑一5—酮的製備在250ml反應瓶中，加入鹽酸2—肼基苯甲酸乙酯11g(0.051mo1)，乙醯乙酸甲酯6.1g(0.0526mol)，甲醇100ml，攪拌下加入50%甲醇鈉5.5g(0.05lmol)溶於甲醇50ml的溶液，攪拌10min後，加熱回流反應6h，趁熱過濾，固體用甲醇20ml洗滌，回收甲醇剩體積約50ml，攪拌下倒入冰水200ml中，析出固體，過濾水洗滌，得到淺黃色固體，用乙醇重結晶得到淺黃色結晶9.1g，收率74%。2-甲基-苯並[d][l，3]噁嗪[5-b]吡唑-5-酮(化合物l)的製備Oformulaseeoriginaldocumentpage121—(2—乙氧羰基苯基)一3—甲基吡唑—5—酮24.6g(O.lmol)，四氫呋喃300ml，攪拌下通入氯化氫氣體至飽和，室溫攪拌過夜反應，過濾，四氫呋喃洗滌固體,用10%乙醇重結晶，得到類白色結晶12g，收率60%。lH陽NMR(S):8.62ppm，lH,d;7.63ppm,lH,t;7.54ppm,lH,d;7.23ppm,lH，d;6.05ppm，lH,s;2.59,3H,s。IR:3400cm—、3034cm-1，2998cm一1，1722cm—、1639cm—1，1549cm一1。實施例2製備2-甲基-5-亞胺基-苯並[d][1,3]噁嗪[5-b]吡唑(化合物2)2—肼基苯甲腈鹽酸鹽的製備formulaseeoriginaldocumentpage12在2000ml的三口瓶中加入濃鹽酸600ml，碎冰500ml，2—氨基苯腈59g(0.5mo1)，攪拌至完全溶解。冰鹽浴至-7—3°C，滴加亞硝酸鈉溶液34.5g(0.5mol)溶於水150ml，滴加完畢，攪拌10min，得橙黃色澄清溶液，溶液待用。在5000ml的三口瓶中加入氯化亞錫350g，濃鹽酸1000ml，攪拌至完全溶解，冰鹽浴冷卻-5'C，滴加上述重氮鹽溶液，產生白色沉澱，滴加完畢，繼續攪拌2小時，過濾，濾餅用大量NaCl飽和溶液洗滌，再用冷15X鹽酸洗滌，乾燥得2—肼基苯甲腈鹽酸鹽36g。l一(2—氰基苯基)一3—甲基吡唑一5—酮的製備formulaseeoriginaldocumentpage12—0《在250ml反應瓶中，加入鹽酸2—肼基苯甲腈8.5g(0.05mo1)，乙醯乙酸甲酯6g(0.05mol)，甲醇100ml,攪拌下加入50%甲醇鈉5.5g(0.051mol)溶於甲醇50ml的溶液，攪拌10min後，加熱回流反應6h，趁熱過濾，固體用甲醇20ml洗滌，回收甲醇剩體積約50ml，攪拌下倒入冰水200ml中，析出固體，過濾水洗滌，得到淺黃色固體7g。2-甲基-5-亞胺基-苯並[d][1，3]噁嗪[S-b]吡唾(化合物2)的製備1—(2—腈基苯基)一3—甲基吡唑一5—酮20g(O.lmol)，無水四氫呋喃200ml，攪拌下通入乾燥氯化氫氣體至飽和，室溫攪拌過夜反應，真空濃縮至幹，加入無水四氫呋喃100ml，無水乙酸鈉10g，室溫攪拌lh,過濾，真空濃縮四氫呋喃，乙酸乙酯重結晶,得到類白色結晶13g(M/Z[M+l]+,200;[M+Na]+，222)。實施例3製備1—(2—羧基苯基)一3—甲基吡唑一5—酮(化合物3)在250ml反應瓶中，加入鹽酸2—肼基苯甲酸10g(0.053mol)(製備方法參考OrganicSyntheses，Coll.Vol.3，p475，1955),乙醯乙酸乙酯7g(0.054mol),甲醇100ml，攪拌下加入50X甲醇鈉7g(0.065mol)溶於甲醇50ml的溶液，攪拌10min後，加熱回流反應6h,趁熱過濾，固體用甲醇20ml洗滌，回收甲醇至幹，用10%鹽酸重結晶得到鹽酸1一(2—羧基苯基)一3—甲基吡唑一5—酮6.5g，收率48%。lH-NMR(S):8.23ppm，lH,d;7.75ppm,lH,t;7.45ppm,lH，d;7.32ppm,d;2.56ppm,2H,s;1.08,3H,s。實施例4製備2-甲基-苯並[d][1,3]噁嗪[5-b]吡唑-5-酮(化合物1)在250反應瓶中，加入2-甲基-5-亞胺基-苯並[d][1，3]噁嗪[5-b]吡唑6g，水110ml，濃鹽酸10ml，乙醇10ml，加熱回流10min，加入活性碳3g，熱過濾，冷卻結晶，過濾分別用冷水和10%乙醇水溶液洗滌，得到白色結晶2-甲基-苯並[d][1,3]噁嗪[5-b]吡唑-5-酮3g。lH-NMR(S):8.62ppm,lH，d;7.6^ppm,lH,t;7.54ppm，lH,d;7.23ppm，lH,d;6.05ppm,lH,s;2.59,3H,s。IR:3400cm一1，3034cm一1，2998cm-1,1722cm一1，1639cm_1,1549cm—'。(2—羧基苯基)一3—甲基吡唑一5—酮(化合物3)formulaseeoriginaldocumentpage14在100ml反應瓶中，加入2-甲基-苯並[d][1,3]噁嗪[5-b]吡唑-5-酮10g，水50ml，乙醇20ml，氫氧化鈉2g，加熱回流反應lh，加濃鹽酸20ml，冷卻結晶，得到1—(2_羧基苯基)一3—甲基吡唑一5—酮3.1g。,s;1.08,3H,s。權利要求1、一種式I、式II或式III化合物或其藥學上可接受的鹽，式I式II式III。2、一種式I化合物的製備方法，其反應過程如下oo乙醯乙酸酯-—formulaseeoriginaldocumentpage2其中R為C14的垸基。3、一種式in化合物的製備方法，其反應過程如下:OQ其中R為C14的垸基。4、一種式II化合物的製備方法，其反應過程如下:formulaseeoriginaldocumentpage25、一種式I化合物的製備方法，其反應過程如下:formulaseeoriginaldocumentpage36、一種式III化合物的製備方法，其反應過程如下:formulaseeoriginaldocumentpage37、權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療或預防心腦血管疾病藥物中的應用。全文摘要本發明公開了一種苯並噁嗪並吡唑類化合物式I、式II和開環化合物式III，及其製備方法。本發明還公開了式I、式II和式III化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療或預防心腦血管疾病藥物中的應用。文檔編號A61K31/4152GK101318968SQ20081002231公開日2008年12月10日申請日期2008年7月18日優先權日2008年7月18日發明者宇任,孫桂榮,蘇國強,高義才申請人:青島黃海製藥有限責任公司;南京中瑞藥業有限公司