一種細胞遷移實驗用的裝置製造方法
2023-09-14 03:28:50 2
一種細胞遷移實驗用的裝置製造方法
【專利摘要】一種細胞遷移實驗用的裝置，涉及一種實驗室用器具，包括板體和均勻分布在板體上的孔，孔設置為方形，在孔底部的外側設有柵格，柵格的中心線與孔的中軸線重合，在孔底部的內側貼有分隔條，粘合的材料為醫用高分子粘合劑，分隔條縱向中心線與柵格的中心線重合，所述分隔條的寬度為1mm，長度大於孔長度，在分隔條的一端設有拿持部。本實用新型通過設計為方形孔，劃痕的面積為長方形，與圓形孔相比面積計算更加精確；通過在孔內貼有帶拉環的分隔條，可在劃痕實驗時，揭下分隔條，即可得到大小一致規格整齊的劃痕，且方便快速；通過在孔底部設有柵格，可方便觀測統計細胞移動的位置，計算相對劃痕面積。
【專利說明】一種細胞遷移實驗用的裝置
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及一種實驗室用器具，具體地說是一種細胞遷移實驗用的裝置。
【背景技術】
[0002]細胞遷移在人體的正常生理活動和疾病發生中普遍存在，例如細胞的覓食、傷口損傷癒合、胚胎發生、神經系統形成、免疫反應、癌症轉移等很多事件都涉及到細胞遷移。細胞遷移是當前生命科學研究的一個重要方向和熱點，科學家們試圖通過對細胞遷移的研究，在血管損傷修復、阻止癌症轉移、植皮等醫學應用方面取得更大成果。
[0003]目前研究細胞遷移主要用劃痕實驗。上皮細胞、角質細胞等在生理狀態下形成單層或者復層上皮，在創傷癒合等病理狀態下，細胞發生遷移，以側向的運動為主。劃痕實驗很好地模擬了這種運動形式，並且操作方便，因此是研究細胞遷移的一個很好的模型。在現行的劃痕實驗中，一般採用無菌的塑料槍頭人工手劃，如圖1所示，可見劃痕邊緣不整齊，劃痕中有PBS清洗後殘留的細胞，不同孔中劃痕面積不同，這些都會影響實驗效果及結果的判斷，因此此種方法具有劃痕不直、劃痕位置不準確、劃痕面積不統一等問題。
實用新型內容
[0004]本實用新型的目的在於提供一種細胞遷移實驗用的裝置，可以方便快速的進行劃痕，且劃痕整齊大小一致，板體底部有柵格刻度線，便於觀察及計算相對劃痕面積。
[0005]本實用新型解決其技術問題所採用的技術方案是:一種細胞遷移實驗用的裝置，其特徵是，包括板體和均勻分布在板體上的孔，孔設置為方形，在孔底部的外側設有柵格，柵格的中心線與孔的中軸線重合，在孔底部的內側貼有分隔條，粘合的材料為醫用高分子粘合劑，分隔條縱向中心線與柵格的中心線重合，所述分隔條的寬度為1_，長度大於孔長度，在分隔條的一端設有拿持部。
[0006]所述的柵格間距為0.25mm。
[0007]所述的分隔條的拿持部位於孔外且不高於板蓋，且末端設有拉環。
[0008]所述的分隔條為材質超薄透明塑料膠條。
[0009]本實用新型的有益效果是:通過設計為方形孔，劃痕的面積為長方形，與圓形孔相比面積計算更加精確；通過在孔內貼有帶拉環的分隔條，可在劃痕實驗時，揭下分隔條，即可得到大小一致規格整齊的劃痕，且方便快速；通過在孔底部設有柵格，可方便觀測統計細胞移動的位置，計算相對劃痕面積。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0010]圖1是普通實驗中人工劃痕後的邊緣狀態示意圖，
[0011]圖2是本實用新型的結構示意圖，
[0012]圖3是孔底面仰視圖，
[0013]圖4是孔底面俯視圖，[0014]圖5是圖4的A-A視圖，
[0015]圖6是揭下分隔條後的邊緣狀態示意圖。
[0016]圖中:I板體，2孔，3分隔條，31拿持部，32拉環，4柵格。
【具體實施方式】
[0017]一種細胞遷移實驗用的裝置，包括板體I和均勻分布在板體I上的孔2，孔2設置為方形。可根據需求確定需要的孔的數量，在孔2底部的外側設有柵格4，柵格間距為
0.25_，柵格4的中心線與孔2的中軸線重合。在孔2底部的內側貼有分隔條3為材質超薄透明塑料膠條，粘合的材料為醫用高分子粘合劑，無細胞毒性，去除分隔條3後孔2底部無殘留，不影響細胞生長。分隔條3縱向中心線與柵格4的中心線重合，這樣當分隔條3揭下後，分隔條3兩側的細胞相對於柵格4中心線的距離是相同的，便於數據統計。所述分隔條3的寬度為1_，長度大於方形孔長度，這樣可避免圓形孔邊緣有部分細胞未分割開而導致的劃痕面積計算不準確問題。在分隔條3的一端設有拿持部31，拿持部位於孔外且不高於板蓋，拿持部31高於孔2邊緣部分設有拉環32，便於工作人員拿鑷子夾持製作劃痕。
[0018]實驗步驟:
[0019]1.細胞培養
[0020]以人肝癌細胞系BEL-7402為例，腫瘤細胞在RPMI1640培養基(含10% FBS，100U/ml青黴素，100ug/ml鏈黴素)、37°C、5% C02條件下培養，待細胞達到90%融合度時消化細胞進行計數。
[0021](I) 75%酒精擦拭超淨臺臺面，依次擺好操作所需要的塑料吸管、培養瓶等，紫外線照射30min後使用；PBS磷酸鹽緩衝液、RPMI1640完全培養液及0.25%胰酶置於37°C溫箱中預溫，酒精擦拭後放入超淨臺；
[0022](2)戴好無菌無粉手套，取出培養瓶置於倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長狀態，待細胞生長至大約90%融合度時即可消化細胞進行計數；
[0023](3)吸管吸棄舊培養液，用PBS緩衝液衝洗2遍，加入適量胰酶，胰酶的量以剛好覆蓋細胞即可，必要時放在37°C溫箱中孵育；
[0024](4)顯微鏡下觀察消化細胞，待胞質回縮，細胞間隙增大，肉眼觀察細胞呈沙狀脫落，表明細胞消化適度，吸棄消化液，加入完全培養液終止消化；
[0025](5)用吸管將消化下來的細胞輕柔吹打成細胞懸液。
[0026]2.細胞計數和種板
[0027](I)用75%的酒精棉球將血球計數板及蓋玻片擦拭乾淨，將蓋玻片蓋在血球計數槽上；
[0028](2)將待測細胞懸液吹打均勻，然後吸取少量懸液沿蓋玻片邊緣緩緩滴入，要保證蓋玻片下充滿懸液，注意不能出現氣泡，也不能讓懸液流入旁邊凹槽中，靜置3min後計數；
[0029](3)將血球計數板置於顯微鏡低倍鏡下觀察，計數4角4個大格(每個大格含有16個中格)的細胞總數，按下面公式計算細胞密度:
[0030]細胞懸液的細胞數/ml = (4個大格的細胞總數/4) X 14 ；
[0031]3.劃痕實驗
[0032](I)將細胞懸液分別注入孔2中，至細胞融合度約90%時進行實驗；[0033](2)用無菌鑷子夾住拿持部31輕輕將分隔條3取下，由於採用醫用高分子粘合劑，無細胞毒性，去除分隔條3後孔2底部無殘留，不影響細胞生長；
[0034](3)用PBS洗細胞3次，加入無血清培養基，顯微鏡下選取實驗點並拍照記錄，37°C,5% C02培養箱培養；
[0035](4)48小時後觀察，通過柵格4判斷細胞位置，從而判斷不同組別遷移速度，並拍
昭.[0036](5)運用Image-Pro Plus6.0軟體進行分析。計算相對劃痕面積。各組劃痕面積均以BEL7402細胞Oh劃痕面積為標準取相對值，相對劃痕面積=48h劃痕面積/Oh劃痕面積。
【權利要求】
1.一種細胞遷移實驗用的裝置，其特徵是，包括板體和均勻分布在板體上的孔，孔設置為方形，在孔底部的外側設有柵格，柵格的中心線與孔的中軸線重合，在孔底部的內側貼有分隔條，粘合的材料為醫用高分子粘合劑，分隔條縱向中心線與柵格的中心線重合，所述分隔條寬度為1mm，長度大於孔長度，在分隔條的一端設有拿持部。
2.根據權利要求1所述的一種細胞遷移實驗用的裝置，其特徵是，所述的柵格間距為0.25mm0
3.根據權利要求1或2所述的一種細胞遷移實驗用的裝置，其特徵是，所述的分隔條的拿持部位於孔外且不高於板蓋，且末端設有拉環。
4.根據權利要求1或2任一權項所述的一種細胞遷移實驗用的裝置，其特徵是，所述的分隔條為材質超薄透明塑料膠條。
【文檔編號】C12M1/00GK203820769SQ201420249022
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年5月15日 優先權日:2014年5月15日
【發明者】曹莉莉, 宋豔, 王亮, 孔歉歉, 吳廣萍, 杜娟, 鄭盈盈, 鄭亞冰 申請人:山東省千佛山醫院