一種丹酚酸a的製備方法

2023-09-13 22:47:25 2

專利名稱：一種丹酚酸a的製備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥、保健食品領域，具體涉及一種丹酚酸A的製備方法。
技術背景
丹參水溶性有效成分-丹酚酸研究進展，基礎醫學與臨床，杜冠華2000，20(5) 10 14.報導丹酚酸是丹參水溶性成分中最重要的活性成分，丹酚酸A是酚酸類化合物， 見(丹酚酸A抗四氯化碳中毒致大鼠肝損傷和肝纖維化的作用，中藥藥理學報，胡義楊 1997,18(5) =478-480.)，但是其在丹參中的含量較低(百萬分之五左右，甚至沒有，中草藥現代研究(第二卷)中國醫學科學院藥物研究所編著2005，Ρ479-496· ！)，即使通過一系列的方法將其提取出來，也只能得到微量的丹酚酸Α，因此存在生產成本高，無法進行工業化生產的難題，限制了人們更好地開發利用。很多醫藥工作者希望將丹酚酸A進行工業化生產，進而開發為醫藥製劑，但鑑於丹酚酸A來源以及其穩定性原因至今還不能解決其實際生產問題。
現有技術公幵了多種丹酚酸A提取純化的工藝方法，如表1所示方法，這些方法都是從藥材進行提取，但是丹酚酸A在藥材中的含量很低，加上工藝步驟複雜，成分損失大， 無法滿足工業化生產丹酚酸A的需求。
表1.現有技術中丹酚酸A的製備方法比較
專利公開號製備來源純化步驟CN1397276A水或醇藥材提取樹脂或聚醯胺層析，再用矽膠柱層析CN1513848A水溫浸離心、超濾、調酸、有機溶劑萃取再反相柱層析CNl 887849水或醇提柱層析、調節pH值、有機溶劑萃取CN101041620水或醇提柱層析、調節pH值、有機溶劑萃取CN101130498水或醇提蛋白吸附、解析、有機溶劑萃取
近幾年來的專利或申請(CN1830947A、CN101230003、CN100999470A等)涉及到經過高溫高壓熱解反應，進而再通過常規的分離純化技術製備丹酚酸Α，但是由於起始原料均是丹參水或醇提取物，成分複雜，採用熱降解法所得反應液更加複雜，造成後續產物分離極其困難，使得丹酚酸A收率極低，無法滿足工業化需求。
本發明人經過大量的實驗研究，提供了一種以丹參多酚酸鹽(國藥準字 Ζ20050246)為原料製備丹酚酸的方法，該方法收率高，能夠滿足工業化生產。發明內容
本發明提供了一種丹酚酸A轉化液的製備方法，其特徵為以丹參多酚酸鹽為原料，加水溶解，調PH值至4. 0-6. 0，在120-130°C，0. 12-0. 20MPa下反應4-5小時，溶液冷卻後，加酸調PH值至2-3。優選方法為用檸檬酸三鈉調節PH至4. 0-6. 0，調pH值至2_3的酸選自醋酸、鹽酸或磷酸。
本發明提供的丹酚酸A轉化液的更優選製備方法為將丹參多酚酸鹽加水稀釋至4濃度為1%，以丹參乙酸鎂計，用檸檬酸三鈉調PH至6.0，於125°C、0. 15MPa條件下轉化4 小時，冷卻至室溫後鹽酸調pH至2. 0 3. 0。
本發明提供的丹酚酸A轉化液的更優選方法為加入保護劑，保護劑選自乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸丁酯中的一種或幾種。
本發明提供的丹酚酸A轉化液的進一步優選方法為將丹參多酚酸鹽加水稀釋至濃度為1%，以丹參乙酸鎂計，用檸檬酸三鈉調PH至6.0，加入乙酸乙酯，於125°C、0. 15MPa 條件下轉化4小時，冷卻至室溫後鹽酸調pH至2. 0 3. 0。
本發明提供了一種丹酚酸A的製備方法，其特徵在於將上述任一所述方法得到的丹酚酸A轉化液依次進行非極性或弱極性大孔樹脂柱層析、萃取和矽膠層析。其中非極性或弱極性大孔樹脂選自HPD-100、HPD-826、ADS-8或CG161中的一種或幾種，萃取中的有機溶劑選自乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲基叔丁基醚或乙醚中的一種或幾種。大孔樹脂的洗脫液為水和乙醇溶液，其中乙醇溶液的濃度範圍為20-40%，矽膠柱的洗脫液為正己烷-乙酸乙
本發明提供了一種優選的丹酚酸A的製備方法，其特徵在於將上述任一所述方法得到的丹酚酸A轉化液過HPD100樹脂柱，依次用水、25 %乙醇溶液洗脫雜質，棄去，再用 40%乙醇溶液洗脫收集丹酚酸A洗脫液1，減壓濃縮至丹酚酸A濃度約25mg/ml ；濃縮液過 CG161樹脂柱，依次用20%乙醇溶液洗脫雜質，棄去，再用35%乙醇溶液洗脫收集丹酚酸A 洗脫液2，減壓濃縮至丹酚酸A濃度約50mg/ml ；鹽酸調pH至2 3，以等體積乙酸乙酯萃取三次，合併萃取液，減壓濃縮，加2. 5倍量矽膠(80 120目)拌勻，乾燥，溼法上矽膠柱 200 300目，2. 5倍量，以正己烷-乙酸乙酯6 4和5 5洗脫，收集正己烷-乙酸乙酯 5 5洗脫液，減壓濃縮至幹，加水適量分散，再減壓濃縮，乾燥，得丹酚酸A。其中丹酚酸A 的純度大於95.0%。
採用本發明方法得到的丹酚酸A的轉化率比已有中國專利Q00710001055.4)公開的轉化方法提高了近3倍，然後再通過大孔樹脂柱層析、萃取、矽膠柱，得到了可工業化生產的丹酚酸A，且該丹酚酸A純度高，保證了用藥的安全性。
本發明為製備丹酚酸A提供了一個簡便高效的方法。使用本發明提供的方法製備丹酚酸A，工藝穩定、質量可控、轉化率高，主要產物丹酚酸A總收率高，成本低；聯用分離純化技術，可大批量工業化製備高純度丹酚酸A。
本發明提供的丹酚酸A的製備方法，生產工藝簡單易控，批間產物變化較小，為製備丹酚酸A提供了切實可行的技術路線。與現有的技術相比，本發明具有以下突出優點 (1)採用純度較高的丹參多酚酸鹽，降解產物和降解工藝方便控制；( 優選採用保護劑， 大大提高丹酚酸A的摩爾轉化率，可達70%; C3)純化工藝利用反相與正相相結合的方式能有效提高丹酚酸A的純度，保證用藥的安全性。


圖1 實施例1的HPLC圖
圖2 實施例6的HPLC圖
圖3 試驗例3的PH穩定圖具體實施方式
下面通過具體實施例對本發明作進一步的說明。
實施例1.製備丹酚酸A轉化液
取丹參多酚酸鹽(以丹參乙酸鎂計含量大於80% ) 12g，加水1L，檸檬酸三鈉調節 pH值至6. 0、置於高壓滅菌鍋中，125°C溫度，0. 15MPa,加熱4小時，溶液冷卻後，加鹽酸調pH 值至2 3，得到丹酚酸A轉化液；轉化液的HPLC分析表明，丹酚酸A的摩爾轉化率45 % (圖 1)。
實施例2.製備丹酚酸A
取實施例1的轉化液丹酚酸A轉化液過HPD100樹脂柱，依次用水洗脫10個柱體積，25%乙醇溶液洗脫8個柱體積，棄去，再用40%乙醇溶液洗脫10個柱體積，收集洗脫液 1，將洗脫液1減壓濃縮至丹酚酸A濃度25mg/ml，濃縮液過CG161樹脂柱，用20%乙醇溶液洗脫10個柱體積，棄去，再用35%乙醇溶液洗脫12個柱體積，收集洗脫液2，減壓濃縮至丹酚酸A濃度50mg/ml ；鹽酸調pH至2 3，以等體積乙酸乙酯萃取三次，合併萃取液，減壓濃縮，加2. 5倍量80 120目矽膠拌勻，乾燥，溼法上200 300目矽膠柱，2. 5倍量，以正己烷-乙酸乙酯6 4洗脫30個柱體積，棄去，再用正己烷-乙酸乙酯5 5洗脫25個柱體積，收集洗脫液3，將洗脫液3減壓濃縮至幹，加水適量分散，再減壓濃縮，乾燥，得丹酚酸A。
實施例3.製備丹酚酸A轉化液
取丹參乙酸鎂10g，加水1L，加乙酸乙酯10ml，調節溶液PH值至6、置於高壓滅菌鍋中，125°C溫度，0. 15MPa,加熱4小時，溶液冷卻後，加鹽酸調pH值至2 3，得到丹酚酸A 轉化液，轉化液的HPLC分析表明，丹酚酸A的摩爾轉化率72%。
實施例4.製備丹酚酸A轉化液
與實施例1方法相同，原料為丹參乙酸鎂12g，加水1L，加乙酸丁酯10ml，調節溶液 PH值至6、置於高壓滅菌鍋中，125°C溫度，0. 15MPa，加熱4小時，溶液冷卻後，加鹽酸調pH 值至2 3，得到丹酚酸A轉化液。
實施例5.製備丹酚酸A
取實施例3轉化液，其它方法同實施例2。
實施例6.製備丹酚酸A轉化液
取丹參多酚酸鹽(YBZ07562005，以丹參乙酸鎂計含量大於80% )12g，加水1L，加乙酸乙酯10ml，檸檬酸三鈉調節pH值至6. 0、置於高壓滅菌鍋中，130°C溫度，0. 20MPa,加熱 4. 0小時，溶液冷卻後，加鹽酸調pH值至2 3，得到丹酚酸A轉化液；轉化液的HPLC分析表明，丹酚酸A的摩爾轉化率62. 3% (圖幻，此外產物中還含有丹參素、原兒茶醛、紫草酸。
實施例7.製備丹酚酸A轉化液
取丹參多酚酸鹽12g，加水1L，加乙酸丁酯10ml，檸檬酸三鈉調節pH值至6.0、置於高壓滅菌鍋中，120°C溫度，0. 12MPa,加熱5. 0小時，溶液冷卻後，加鹽酸調pH值至2 3， 得到丹酚酸A轉化液；轉化液的HPLC分析表明，丹酚酸A的摩爾轉化率66. 7%，此外產物中還含有丹參素、原兒茶醛、紫草酸等。
試驗例1 不同工藝方法丹酚酸A轉化液的的摩爾轉化率
實驗方法一份按照傳統工藝方法(專利C N101130498,實施例一)得到丹酚酸A，一份按照工藝方法(專利CN1830947A，實施例一)得到丹酚酸A，一份按照工藝方法(專利CN101230003A，實施例3中的方法3)得到丹酚酸A，一份按照工藝方法(專利 CN100999470A,實施例一)得到丹酚酸A，一份按照本申請工藝方法(本申請專利的實施例 6)得到丹酚酸A，按照內標法計算樣品中的丹酚酸A，計算丹酚酸A收率以評價不同工藝方法的優劣，實驗結果見表2。表2不同工藝方法丹酚酸A收率
權利要求
1.一種丹酚酸A轉化液的的製備方法，其特徵在於以丹參多酚酸鹽為原料，加水溶解， 用檸檬酸三鈉調PH值至4. 0-6. 0，在120-130°C，0. 12-0. 20MPa下反應4-5小時，溶液冷卻後，加醋酸、鹽酸或磷酸調PH值至2-3。
2.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於丹參多酚酸鹽加水稀釋至濃度為(以丹參乙酸鎂計)，用檸檬酸三鈉調pH至6. 0，於125°C、0. 15MPa條件下轉化4小時，冷卻至室溫後鹽酸調pH至2. 0 3. 0。
3.根據權利要求1或2所述的製備方法，其特徵在於加入保護劑，保護劑選自乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸丁酯中的一種或幾種。
4.一種丹酚酸A的製備方法，其特徵在於將權利要求1-3任一所述方法得到的丹酚酸 A轉化液依次進行非極性或弱極性大孔樹脂柱層析、萃取和矽膠層析。
5.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於非極性或弱極性大孔樹脂選自HPD-100、 HPD-826、ADS-8或CG161中的一種或幾種，萃取中的有機溶劑選自乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲基叔丁基醚或乙醚中的一種或幾種。
6.根據權利要求4或5所述的製備方法，其中大孔樹脂的洗脫液為水和乙醇溶液，其中乙醇溶液的濃度範圍為20-40%，矽膠柱的洗脫液為正己烷-乙酸乙酯。
7.根據權利要求6述的方法，其特徵在於丹酚酸A轉化液過HPD100樹脂柱，依次用水洗脫10個柱體積，25%乙醇溶液洗脫8個柱體積，棄去，再用40%乙醇溶液洗脫10個柱體積，收集洗脫液1，將洗脫液1減壓濃縮至丹酚酸A濃度25mg/ml，濃縮液過CG161樹脂柱， 用20%乙醇溶液洗脫10個柱體積，棄去，再用35%乙醇溶液洗脫12個柱體積，收集洗脫液 2，減壓濃縮至丹酚酸A濃度50mg/ml ；鹽酸調pH至2 3，以等體積乙酸乙酯萃取三次，合併萃取液，減壓濃縮，加2.5倍量80 120目矽膠拌勻，乾燥，溼法上200 300目矽膠柱， 2. 5倍量，以正己烷-乙酸乙酯6 4洗脫30個柱體積，棄去，再用正己烷-乙酸乙酯5 5 洗脫25個柱體積，收集洗脫液3，將洗脫液3減壓濃縮至幹，加水適量分散，再減壓濃縮，乾燥，得丹酚酸A。
8.根據權利要求7所述的方法，其特徵在於丹參多酚酸鹽加水稀釋至濃度為(以丹參乙酸鎂計)，用檸檬酸三鈉調pH至6. 0，於125°C、0. 15MPa條件下轉化4小時，冷卻至室溫後鹽酸調pH至2. 0 3. 0，得丹酚酸A轉化液，丹酚酸A轉化液過HPD100樹脂柱，依次用水洗脫10個柱體積，25%乙醇溶液洗脫8個柱體積，棄去，再用40%乙醇溶液洗脫10個柱體積，收集洗脫液1，將洗脫液1減壓濃縮至丹酚酸A濃度25mg/ml，濃縮液過CG161樹脂柱，用20%乙醇溶液洗脫10個柱體積，棄去，再用35%乙醇溶液洗脫12個柱體積，收集洗脫液2，減壓濃縮至丹酚酸A濃度50mg/ml ；鹽酸調pH至2 3，以等體積乙酸乙酯萃取三次，合併萃取液，減壓濃縮，加2. 5倍量80 120目矽膠拌勻，乾燥，溼法上200 300目矽膠柱，2. 5倍量，以正己烷-乙酸乙酯6 4洗脫30個柱體積，棄去，再用正己烷-乙酸乙酯 5 5洗脫25個柱體積，收集洗脫液3，將洗脫液3減壓濃縮至幹，加水適量分散，再減壓濃縮，乾燥，得丹酚酸A。
9.根據權利要求7所述的方法，其特徵在於丹參多酚酸鹽加水稀釋至濃度為(以丹參乙酸鎂計)，加入乙酸乙酯，用檸檬酸三鈉調pH至6. 0，於125°C、0. 15MPa條件下轉化4 小時，冷卻至室溫後鹽酸調pH至2. 0 3. 0，得丹酚酸A轉化液，丹酚酸A轉化液過HPD100 樹脂柱，依次用水洗脫10個柱體積，25%乙醇溶液洗脫8個柱體積，棄去，再用40%乙醇溶液洗脫10個柱體積，收集洗脫液1，將洗脫液1減壓濃縮至丹酚酸A濃度25mg/ml，濃縮液過CG161樹脂柱，用20%乙醇溶液洗脫10個柱體積，棄去，再用35%乙醇溶液洗脫12個柱體積，收集洗脫液2，減壓濃縮至丹酚酸A濃度50mg/ml ；鹽酸調pH至2 3，以等體積乙酸乙酯萃取三次，合併萃取液，減壓濃縮，加2.5倍量80 120目矽膠拌勻，乾燥，溼法上 200 300目矽膠柱，2. 5倍量，以正己烷-乙酸乙酯6 4洗脫30個柱體積，棄去，再用正己烷-乙酸乙酯5 5洗脫25個柱體積，收集洗脫液3，將洗脫液3減壓濃縮至幹，加水適量分散，再減壓濃縮，乾燥，得丹酚酸A。
10.權利要求4-9任一所述方法得到的丹酚酸A。
全文摘要
本發明提供了一種丹酚酸A轉化液的製備方法，進一步通過大孔樹脂柱層析、萃取、矽膠柱得到丹酚酸A的製備方法，採用本發明方法得到的丹酚酸A可工業化生產，且該丹酚酸A純度高，保證了用藥的安全性。本發明為製備丹酚酸A提供了一個簡便高效的方法。使用本發明提供的方法製備丹酚酸A，工藝穩定、質量可控、轉化率高，主要產物丹酚酸A總收率高，成本低；聯用分離純化技術，可大批量工業化製備高純度丹酚酸A。
文檔編號C07C69/732GK102531901SQ20101062091
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月25日 優先權日2010年12月25日
發明者劉軍鋒, 劉珂, 許卉, 邵萌, 鄒曉麗, 韓飛 申請人:上海綠谷製藥有限公司