治療年齡相關性聽力損失的藥物組合物及其應用的製作方法

2023-09-11 19:12:00

專利名稱：治療年齡相關性聽力損失的藥物組合物及其應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥技術領域，涉及聽力損失的預防和治療，具體地說是一種用來治療由於噪音、手術、毒素以及各種壓力引起年齡相關性的聽力損失和耳鳴的藥物組合物及其應用。
背景技術：
年齡相關性聽力損失(age-related hearing loss, ARHL)，或稱老年性聾 (presbycusis)，是老年人群最常見的感覺缺失，主要表現為嘈雜環境中聽覺敏感程度和言語理解力、聲源定位能力下降，以及聽覺中樞處理聽覺信息的能力減弱。老年性聾對老年人的情緒和行為都有影響，容易導致社會孤立及抑鬱感。年齡、噪聲損傷、耳科疾病或全身疾病、使用耳毒性藥物、遺傳易感性等是老年性聾產生的主要原因(1，2).雖然各國都在努力尋找各類治癒或緩解藥物，但老年性聾無法逆轉，全球都仍無任何一種針對老年性聾的有效藥物問世。目前的治療措施主要是儘可能補償患者聽力損失，以佩戴助聽器(hearing aids)為主，可以改善交流能力，但這個方法不能使得聽力恢復正常。部分患者有植入人工耳蝸的適應證，植入後可以改善聽力，但同樣不能用於治療聽力損失。隨著我國進入老齡化社會，根據2005年全國1%人口抽樣調查主要數據公報，65 歲以上老年人佔總人口的7. 69% (2010年底第六次全國人口普查尚未登出公報)，2050年估計將達25%，患老年性聾的人口絕對數還將持續增長(3，4).可以預見，與發達國家類似，老年性聾也將成為我國一個重要的社會問題。發達國家，例如英國，也並非所有患者都能佩戴上助聽器。人工耳蝸則價格更高(5，6).由於人們意識到聽力下降並尋求醫療幫助往往已經是聽力損傷後的8 20年間，各國耳科學家除了加強老年性聾的宣傳和篩查，都在探索老年性聾的防治措施，主要集中在藥物篩選方面，但目前仍未有突破性進展。我們發現，使用T型Ca2+通道阻斷劑中的一類藥物——抗癲癇藥(例如乙琥胺)，可以獲得延緩年齡相關聽力損失的能力，並且主要是通過減少耳蝸螺旋神經元的丟失來實現。由於人類老年性聾的複雜性，迄今未有一種可以作為「金標準」的動物模型。攜帶 Cdh23基因突變的C57BL/6J小鼠是最常用的老年性聾小鼠模型，其耳聾在出生後2 3個月時就發生並加重。C57BL/6J小鼠與其他小鼠同樣存在相似之處。據我們所知，這一類型的小鼠是唯一的一種被確認的用來研究老年性耳聾的。我們所用方法的優越性在於(I)由於被選擇的藥物分別作用於不同的細胞-分子機制靶位點，聯用兩藥可以產生協同效應; 同時(2)被選擇的藥物是抗氧化劑和FDA批准的藥物組合而成，並且只有很少的副作用。

發明內容
本發明的目的在於克服現有技術中存在的不足，提供一種治療年齡相關性聽力損失的藥物組合物及其應用。本發明的目的之一通過以下的技術方案實現治療年齡相關性聽力損失的藥物組合物，其特徵在於它含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑和/或自由基清除劑。
作為本發明的進一步改進，所述鈣離子通道阻滯劑為已獲FDA批准的能夠阻斷L 型鈣離子通道和/或T型鈣離子通道的抗高血壓或抗癲癇藥物。作為本發明的進一步改進，所述鈣離子通道阻滯劑為惡唑烷二酮的衍生物或丁二醯亞胺的衍生物。作為本發明的進一步改進，所述鈣離子通道阻滯劑為三甲雙酮、地爾硫卓或乙琥胺。作為本發明的進一步改進，所述藥物組合物含有一種或一種以上的自由基清除劑，所述自由基清除劑是已獲FDA批准的抗氧化劑，其用於清除過多的自由基、阻斷自由基信號傳遞。作為本發明的進一步改進，所述自由基清除劑為依布硒林、親水性的維生素C或疏水性的維生素E。作為本發明的進一步改進，所述治療有效劑量範圍為I 1000mg/kg 日，當所述藥物組合物中同時含有鈣離子通道阻滯劑和自由基清除劑時，鈣離子通道阻滯劑與自由基清除劑質量比為I : I到I : 10。本發明的目的之二是提供上述藥物組合物在治療由於噪音、手術、毒素以及各種壓力引起年齡相關性的聽力損失方面的應用。本發明與現有技術相比，優點在於本發明使用兩類已獲FDA批准的藥物，即鈣離子通道阻滯劑和與自由基代謝途徑相關的自由基清除劑(抗氧化劑)，通過將這兩類不同的化學藥物以協同作用的方式聯合使用，可提高其治療ARHL的效果並且降低藥物的毒副作用。本發明的創新之處主要包括以下兩個方面(I)本發明將焦點放在11000餘種已獲 FDA批准的藥物，這些藥物的藥理活性高、副作用小；(2)本發明中所選擇的藥物分別作用於不同的細胞-分子機制靶位點，聯用兩藥可以產生協同效應。


圖I為實驗實施例I中的第一實驗組給藥照組的對比圖。圖2為實驗實施例2中的第二實驗組給藥照組的對比圖。圖3為實驗實施例3中的第三實驗組給藥照組的對比圖。圖4為實驗實施例4中的第四實驗組給藥移與空白對照組的對比圖。圖5為實驗實施例5中的第五實驗組給藥移與空白對照組的對比圖。
(三甲雙酮)前後的ABR閾移與空白對 (依布硒林)前後的ABR閾移與空白對 (地爾硫卓)前後的ABR閾移與空白對 (三甲雙酮+依布硒林)前後的ABR閾 (地爾硫卓+依布硒林)前後的ABR閾
具體實施例方式下面結合具體附圖和實施例對本發明作進一步說明。小鼠的聽性腦幹反應(ABR)測試方法小鼠的耳蝸對頻率在2-100千赫茲的聲音有反應。最敏感的範圍大概是5-40千赫茲。所以我們分別測試了它們對5、10、20、28和40千赫茲的反應。所謂「近場」的聲刺激是指把麥克風放在距離耳朵7釐米左右的地方，使其在耳朵周圍形成一個均勻的聲場。為了確保聲刺激是一個恆定不變的量，一個B&K 4135 1/4英尺麥克風被擺放在老鼠耳朵通常在的位置，並且每次實驗前調到標準的狀態。在實驗開始前，所有的老鼠通過注射戊巴比妥(60mg/kg)麻醉，並且給予硫酸阿託品來降低呼吸困難。耳鏡檢查是為了確保鼓膜是正常的。通過一個自動調溫的電熱毯連同一個直腸探針，中心溫度一般保持在37+/-loC。為了測試聽性腦幹反應(ABR)，一個白金絲針電極皮下注射到右耳後方。電極被連接到一個 P15差分放大器(100-10000赫茲，X100)，然後一個自製的擴音器再另外放大1000倍，最後連接到電腦上進行數字處理。型號為WaVetekl48的振蕩器產生了非正弦波刺激，該振蕩器由一個定製的電子開關組成。聲刺激通過型號為CrownD150A功率放大器放大並且由一個 KSN1020A壓電陶瓷式麥克風輸出。最低的能產生反應的聲壓水平式有由指定的頻率決定的，一般使用5分貝為最小步長。實驗材料實驗動物及分組以10個月大的自交系C57BL/6J小鼠(購自The Jackson Laboratory)作為受試對象，取耳廓反射正常的健康C57BL/6J小鼠48隻，隨機分為七組，其中第一實驗組8隻，第二實驗組8隻，第三實驗組8隻，第四實驗組8隻，第五實驗組8隻和空白對照組8隻。實驗藥品三甲雙酮(TMO)、地爾硫卓(diltiazem)、依布硒林(ebselen),均購自 Sigma-Aldrich 公司。實驗實施例I :三甲雙酮(TMO)對年齡相關性聽力損失的預防性作用以第一實驗組中的8隻10個月大的自交系C57BL/6J小鼠為受試對象，在進行實驗前先使用聽覺腦幹反應(ABR)方法測定小鼠的聽覺閾值。然後通過它們日常的飲用水給它們口服三甲雙酮(TMO)持續兩個月，藥物劑量為每天200mg/kg。小鼠的體重和它們的飲用水量每三天監測一次。三甲雙酮溶液裝在有色瓶子裡，並且每三天更換一次。在給藥兩個月後，利用聽覺腦幹反應(ABR)方法分析檢測小鼠耳朵的聽覺閾值，評定其聽力狀況，分析結果如圖I所示。對比圖I中給藥組的ABR閾移(ABR threshold shifts)和空白對照組的ABR閾移可見，三甲雙酮能夠延緩聽力下降。實驗實施例2 :依布硒林(ebselen)對年齡相關性聽力損失的預防性作用以第二實驗組中的8隻10個月大的自交系C57BL/6J小鼠為受試對象，在進行實驗前先使用聽覺腦幹反應(ABR)方法測定小鼠的聽覺閾值。然後通過它們日常的飲用水給它們口服依布硒林(ebselen)持續兩個月，藥物劑量為每天400mg/kg。小鼠的體重和它們的飲用水量每三天監測一次。依布硒林溶液裝在有色瓶子裡，並且每三天更換一次。在給藥兩個月後，利用聽覺腦幹反應(ABR)方法分析檢測小鼠耳朵的聽覺閾值，評定其聽力狀況， 分析結果如圖2所示。對比圖2中給藥組的ABR閾移(ABR threshold shifts)和空白對照組的ABR閾移可見，依布硒林能夠延緩聽力下降。實驗實施例3 :地爾硫卓(diltiazem)對年齡相關性聽力損失的預防性作用以第三實驗組中的8隻10個月大的自交系C57BL/6J小鼠為受試對象，在進行實驗前先使用聽覺腦幹反應(ABR)方法測定小鼠的聽覺閾值。然後通過它們日常的飲用水給它們口服地爾硫卓(diltiazem)持續兩個月，藥物劑量為每天200mg/kg。小鼠的體重和它們的飲用水量每三天監測一次。地爾硫卓溶液裝在有色瓶子裡，並且每三天更換一次。在給藥兩個月後，利用聽覺腦幹反應(ABR)方法分析檢測小鼠耳朵的聽覺閾值，評定其聽力狀況，分析結果如圖3所示。對比圖3中給藥組的ABR閾移(ABR threshold shifts)和空白對照組的ABR閾移可見，地爾硫卓能夠延緩聽力下降。實驗實施例4:三甲雙酮(TMO)和依布硒林(ebselen)聯合用藥對年齡相關性聽力損失的預防性作用以第四實驗組中的8隻10個月大的自交系C57BL/6J小鼠為受試對象，在進行實驗前先使用聽覺腦幹反應(ABR)方法測定小鼠的聽覺閾值。然後通過它們日常的飲用水給它們口服三甲雙酮(TMO)和依布硒林(ebselen)持續兩個月，其中三甲雙酮的藥物劑量為每天100mg/kg,依布硒林的藥物劑量為每天100mg/kg。小鼠的體重和它們的飲用水量每三天監測一次。三甲雙酮和依布硒林溶液分別裝在有色瓶子裡，並且每三天更換一次。在給藥兩個月後，利用聽覺腦幹反應(ABR)方法分析檢測小鼠耳朵的聽覺閾值，評定其聽力狀況， 分析結果如圖4所示。對比圖4中給藥組的ABR閾移(ABR threshold shifts)和空白對照組的ABR閾移可見，三甲雙酮和依布硒林聯合用藥能夠延緩聽力下降。實驗實施例5 :地爾硫卓(diltiazem)和依布硒林(ebselen)聯合用藥對年齡相關性聽力損失的預防性作用以第五實驗組中的8隻10個月大的自交系C57BL/6J小鼠為受試對象，在進行實驗前先使用聽覺腦幹反應(ABR)方法測定小鼠的聽覺閾值。然後通過它們日常的飲用水給它們口服地爾硫卓(diltiazem)和依布硒林(ebselen)持續兩個月，其中地爾硫卓的藥物劑量為每天100mg/kg,依布硒林的藥物劑量為每天100mg/kg。小鼠的體重和它們的飲用水量每三天監測一次。地爾硫卓和依布硒林溶液分別裝在有色瓶子裡，並且每三天更換一次。在給藥兩個月後，利用聽覺腦幹反應(ABR)方法分析檢測小鼠耳朵的聽覺閾值，評定其聽力狀況，分析結果如圖5所示。對比圖5中給藥組的ABR閾移(ABR threshold shifts) 和空白對照組的ABR閾移可見，地爾硫卓和依布硒林聯合用藥能夠延緩聽力下降。在上述的實驗實施例I 5中，所述空白對照組進行實驗的方法及參數與各實驗組相同，區別僅在於空白對照組中的實驗動物不給任何藥物。在實驗中，我們發現兩類不同的化學藥物對小鼠的聽覺具有良好的保護作用(圖 I 圖3所示)。我們還發現聯合使用兩種不同的化學藥物，可以有效延緩年齡相關性聽力損失。(圖4、圖5所不)。
權利要求
1.治療年齡相關性聽力損失的藥物組合物，其特徵在於它含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑和/或自由基清除劑。
2.如權利要求I所述的治療年齡相關性聽力損失的藥物組合物，其特徵在於所述鈣離子通道阻滯劑為能夠阻斷L型鈣離子通道和/或T型鈣離子通道的抗高血壓或抗癲癇藥物。
3.如權利要求2所述的治療年齡相關性聽力損失的藥物組合物，其特徵在於所述鈣離子通道阻滯劑為惡唑烷二酮的衍生物或丁二醯亞胺的衍生物。
4.如權利要求2所述的治療年齡相關性聽力損失的藥物組合物，其特徵在於所述鈣離子通道阻滯劑為三甲雙酮、地爾硫卓或乙琥胺。
5.如權利要求I所述的治療年齡相關性聽力損失的藥物組合物，其特徵在於所述藥物組合物含有一種或一種以上的自由基清除劑，所述自由基清除劑是抗氧化劑。
6.如權利要求5所述的治療年齡相關性聽力損失的藥物組合物，其特徵在於所述自由基清除劑為依布硒林、親水性的維生素C或疏水性的維生素E。
7.如權利要求I所述的治療年齡相關性聽力損失的藥物組合物，其特徵在於所述治療有效劑量範圍為I 1000mg/kg 日，當所述藥物組合物中同時含有鈣離子通道阻滯劑和自由基清除劑時，鈣離子通道阻滯劑與自由基清除劑質量比為I : I到I : 10。
8.權利要求I 7任一項所述的藥物組合物在治療由於噪音、手術、毒素以及各種壓力引起年齡相關性的聽力損失方面的應用。
全文摘要
本發明涉及一種治療年齡相關性聽力損失的藥物組合物，其特徵在於它含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑和/或自由基清除劑。本發明使用兩類已獲FDA批准的藥物，即鈣離子通道阻滯劑和與自由基代謝途徑相關的自由基清除劑(抗氧化劑)，通過將這兩類不同的化學藥物以協同作用的方式聯合使用，可提高其治療ARHL的效果並且降低藥物的毒副作用。本發明的創新之處主要包括以下兩個方面(1)本發明將焦點放在11000餘種已獲FDA批准的藥物，這些藥物的藥理活性高、副作用小；(2)本發明中所選擇的藥物分別作用於不同的細胞-分子機制靶位點，聯用兩藥可以產生協同效應。
文檔編號A61K31/355GK102526734SQ201210008900
公開日2012年7月4日 申請日期2012年1月12日 優先權日2012年1月12日
發明者王玉豐 申請人:王玉豐