一種提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法

2023-12-05 06:09:26

一種提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法
【專利摘要】本發明公開了一種提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，是在組培苗快繁增殖培養過程中，以WPM培養基為基本培養基，利用4種植物生長調節劑不同濃度配比，大幅度提高了絨毛白蠟組培苗的增殖倍數；以大量元素減半的1/2WPM培養基為基本培養基，附加2種生長素和1種細胞分裂素及低糖度的組合誘導組培苗生根獲得完整植株。本發明方法有效解決了絨毛白蠟增殖率低的問題，實驗統計：試管苗的增殖率由原來最高的3.59倍提高到10倍以上，增殖係數提高2～3倍，實現了絨毛白蠟快繁增殖的目的。應用本發明方法在短時間內能獲得大量的種苗，可充分滿足大面積鹽鹼地造林的需要。
【專利說明】一種提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法

【技術領域】
[0001]本發明涉及一種提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，尤其涉及一種利用4種植物生長調節劑不同濃度配比提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，屬於生物【技術領域】。

【背景技術】
[0002]絨毛白臘^61111:1118為木犀科(01080080)白臘屬(辦^^皿8111111.)落葉喬木，原產於北美，抗逆性強，主要應用於園林綠化、鹽鹼地造林和用材樹種。早在1911年引種到濟南(孟昭和等，2001), 1953年被轉引到天津(楊瑞興等，1996)，80年代後在華北華東地區廣泛栽培。
[0003]土壤鹽潰化是影響農林業生產和生態環境的重要因素。全球鹽潰土約佔陸地面積的三分之一，我國鹽潰土面積約1億卜!!!2 (張世功等，2000)。隨著工業汙染的加劇及化肥使用不當等原因，使次生鹽潰化的土地面積還在繼續擴大，而且有逐年增加的趨勢(中國統計局，1997)。這些鹽鹼土地主要分布在新疆、甘肅、山東、河北、東北等沿海地區以及內陸乾旱、半乾旱地區(曹福亮，2000)。鹽鹼地是潛在的土地資源，如何開發鹽鹼地和撂荒土地發展林業、改善生態環境是當代林業迫切需要解決的重大課題。由於絨毛白蠟抗逆性較強，分布範圍廣，對鹽鹼地等不良環境表現出極強的適應能力，因此目前已成為我國部分沿海城市以及鹽鹼地區造林和綠化的優良樹種(楊瑞興等，1996)。
[0004]國內關於白蠟生態特性、生長習性方面的研究較多，主要側重於白蠟的耐鹽鹼性、苗木繁育、造林技術等方面。樊寶敏(1992)報導，絨毛白蠟對呈鹼性反應的濱海鹽土較為敏感；孟康敏(1999)對5個濱海鹽鹼地引種的樹種幼苗進行盆栽耐鹽性試驗，根據耐鹽性生理指標進行綜合分析，結果表明絨毛白蠟耐鹽力最強；王友平等(2009)研究了鹽潰生境下1-3年生絨毛白蠟不同營養器官中鹽離子分布規律。陳之群等(2006)以絨毛白蠟幼嫩莖段為材料研究了其組織培養和植株再生技術；燕麗萍等(2013)開發鹼絨毛白蠟耐鹽30^標記，應用於輔助選擇育種中。近年來國外報導多集中在歐洲白蠟(匕6X^181010、美國白￠￠1 811161108118)、青、花白臘等(八 1~1~111已邑8 1,61: , 1992 ；311乂611~8 02, 61: 3,1,1993出誦社七X 6七￡11, 1992 ^1111 18,6^ &1，1997)，通過腋芽增殖獲得再生植株的報導。國內外對絨毛白蠟組培快繁的文獻較少，且文獻報導增殖率低，王磊等(2008)用絨毛白蠟成熟胚和莖段進行培養繁殖體，平均增殖係數為3.59，因此提高絨毛白蠟組培快繁增殖率，為迅速擴大絨毛白蠟優良品系的無性繁殖，滿足大面積鹽鹼地造林需要，具有重要的意義。


【發明內容】

[0005]針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，以解決絨毛白蠟增殖率低的問題。
[0006]本發明所述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，步驟包括:(1)無菌苗建立，
(2)快繁增殖；(3)組培苗生根；(4)煉苗移栽；
[0007]其特徵在於:
[0008]步驟(I)所述無菌苗建立的方法是:選取無病蟲害籽粒飽滿的種子，去掉種皮，滅菌後接種到種子萌發培養基中，置於組培室，晝夜光照周期培養條件為:白天光照強度為2000?3000Lux，光照時間12?14h.cf1，溫度25±1°C ;夜間溫度18±1°C ；7?1d後種子萌發，獲得無菌苗；
[0009]其中:所述種子萌發培養基配方是:WPM+6-BA0?0.3mg噸―1+蔗糖25?35g -Γ1+瓊脂 4 ?5g.L-1, pH 值 5.8 ?6.0 ;
[0010]上述WPM 培養基的組分是=NH4NO3 400mg.?Λ Ca (Ν03) 2.4H20 556mg.?ΛK2SO4 990mg.ΙΛ CaCl2.2Η20 96mg.?Λ ΚΗ2Ρ04 170mg.?Λ Na2MoO4.2Η20 0.25mg.?ΛMgS O 4.7Η20 370mg.?Λ MnS04.4Η20 22.4mg.?Λ ZnS04.7Η20 8.6mg.?Λ CuS04.5Η200.25mg.ΙΛ FeS04.7Η20 27.8mg.?Λ Na2-EDTA 37.3mg.L—1，鹽酸硫胺素 1.0mg.L'煙酸 0.5mg.L—1,鹽酸比 P多酉享 0.5mg.L-1,肌酉享 10mg.I71，甘氨酸 2.0mg.I71。
[0011]步驟(2)所述快繁增殖的方法是:將步驟(I)獲得的無菌苗剪成I?2cm長帶芽莖段，轉接於快繁增殖培養基中，以步驟(I)所述條件進行晝夜光照周期培養，25?30d後誘導形成叢生芽，增殖倍數8?10倍；
[0012]其中:所述快繁增殖培養基是以WPM培養基為基本培養基，於基本培養基中添加苯基噻二唑基脲(TDZ)、玉米素(ZT)、6_苄氨基腺嘌呤出-BA)、萘乙酸(NAA)四種植物生長調節劑製成，該快繁增殖培養基配方是:WPM+TDZ0.5?2.0mg.Γ'+ΖΤΙ.0?2.0mg *L ^Θ-ΒΑΟ.5 ?1.5mg.L ^NAA0.5 ?1.0mg *L 1+25 ?35mg.L 1 鹿糖 +4 ?5mg *L 1瓊脂，pH值5.8?6.0 ;
[0013]步驟(3)所述組培苗生根的方法是:待步驟(2)培養的試管苗長到3?5cm時，將其切成單株，接種到生根培養基中，以步驟(I)所述條件進行晝夜光照周期培養，15?20d後獲得生根植株，其生根數4?6條,根長I?3cm ；
[0014]其中:所述生根培養基配方是:l/2WPM+0.7?2.1mg.L_1IBA+0.01?0.03mg.L ^AA+0.1 ?0.2mg/L ZT+18 ?25g.L1 鹿糖+4 ?5g.L1 瓊月旨，pH 值 5.7 ?5.9 ；
[0015]上述1/2WPM是指培養基的組分中WPM大量元素減半及其餘為WPM全量元素，其具體組分為:NH4NO3 400mg.?Λ Ca (Ν03) 2.4H20 556mg.?Λ K2SO4 990mg.?Λ CaCl2.2Η2096mg.I/1，ΚΗ2Ρ04 170mg.I/1，Na2MoO4.2Η20 0.25mg.I/1，MgSO4.7H20370mg.I/1，MnS04.4Η20 22.4mg.L—1，ZnS04.7H20 8.6mg.L—1，CuS04.5H200.25mg.L—1，FeS04.7H2027.8mg.I71, Na2-EDTA 37.3mg.I/1,鹽酸硫胺素 1.0mg.L—1,煙酸 0.5mg.L—1,鹽酸比P多酉享0.5mg.L—1,肌酉享 10mg.I71，甘氨酸 2.0mg.L-1 ；
[0016]步驟(4)所述煉苗移栽的方法是:把步驟(3)中已生根的瓶苗轉移到煉苗溫室中適應I?2d，然後用清水逐棵洗去苗根部殘留的培養基，並將其移栽到裝有輕型基質的無紡布營養杯中，放置於遮光度60%?70%遮蔭網塑料大棚內，利用自動間歇噴霧裝置保持棚內空氣相對溼度在80%以上，煉苗8?1d後，棚內逐漸通風，再繼續培養10?12d，移栽於大田；
[0017]其中:所述無紡布營養杯中的輕型基質的成分以體積比計為:蛭石:珍珠巖:草炭土 =2: 3: 5，且在無紡布營養杯中輕型基質上面還撒放一層厚度為1.5?2cm的細沙。
[0018]上述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法中，步驟(I)、(2)或(3)所述晝夜光照周期培養條件優選為:白天光照強度2500LUX，光照時間13h.cf1，溫度25°C ;夜溫度18°C。
[0019]上述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法中，所述種子萌發培養基或快繁增殖培養基中，瓊脂優選4.5g.ΙΛ蔗糖優選30g.ΙΛ pH值優選5.8。
[0020]上述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法中，步驟(2)所述的快繁增殖培養基配方優選是:WPM+TDZ1.5mg.L'ZTl.5mg.L_1+6-BAl.0mg.I^+NAA0.7mg.L_1+30mg.L-1 蔗糖 +4.5mg.L-1 瓊脂，pH 值 5.8 ?6.0。
[0021]上述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法中，步驟(3)所述的生根培養基配方優選是:1/2WPM+1.0mg.L_1IBA+0.02mg.L_1NAA+0.15mg.L_1ZT+20g.L-1 蔗糖 +4g.L-1 瓊脂，pH 值 5.7。
[0022]本發明提供的提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，是在組培苗快繁增殖培養過程中，以WPM培養基為基本培養基，利用4種植物生長調節劑不同濃度配比，大幅度提高了絨毛白蠟組培苗的增殖倍數；以大量元素減半的1/2WPM培養基為基本培養基，附加2種生長素和I種細胞分裂素及低糖度的組合誘導組培苗生根，以獲得完整植株。本發明方法有效解決了絨毛白蠟增殖率低的問題，經實驗統計:試管苗的增殖率由原來最高的3.59倍提高到10倍以上，增殖係數提高2?3倍，實現了絨毛白蠟快繁增殖的目的。應用本發明方法在短時間內能獲得大量的種苗，可充分滿足大面積鹽鹼地造林的需要。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1無菌苗建立。
[0024]圖2增殖培養。
[0025]圖3生根培養。
[0026]圖4煉苗移栽。

【具體實施方式】
[0027]下面結合實施例對本
【發明內容】
作進一步闡明:
[0028]實施例1
[0029]挑選飽滿無病蟲害的絨毛白蠟種子，剝去種皮放於無菌的玻璃瓶中，用70%乙醇滅菌20秒，再用0.1 %氯化汞滅菌6分鐘，然後用無菌水洗滌4次，在無菌條件下接種到WPM+0.3mg Ll-BA+t 5g L—1瓊脂+30g L—1蔗糖萌發培養基中(pH值5.9)，培養條件為晝溫度25°C，夜溫度18°C，光照強度2500LX，光照時間13h.dl培養條件下同)，7d後種子萌發，獲得無菌苗。
[0030]將無菌苗剪成Icm 長帶芽莖段，轉接於 WPM+TDZ0.5mg.171+ZT2.0mg ?Γ'+Θ-ΒΑΟ.5mg -U1+MA0.5mg ?r1+25mg -Γ1蔗糖+4mg -Γ1瓊脂增殖培養基中(pH值6.0)，以上述條件進行晝夜光照周期培養，25d後誘導形成叢生芽，增殖倍數8倍。
[0031]待試管苗長到3cm，將其切成單株，接種到生根培養基中(1/2WPM+0.7mg ?PlBA+O? Olmg -Γ'ΝΑΑ+Ο.lmg/L ZT+18g.L—1 蔗糖 +4.5g.L—1 瓊脂，pH 值 5.8)，培養條件同上為晝夜光照周期培養，培養15d獲得生根植株，生根數4條，根長1cm。
[0032]把生根的瓶苗轉移到煉苗溫室中適應Id後，用鑷子將苗輕輕夾出，快速放到盛有清水的容器中，用清水洗去根部殘留的培養基，並將其移栽到裝有輕型基質(所述基質購於壽光市恆先育苗基質加工廠)的無紡布營養杯中，放置於遮光度60 %?70 %遮蔭網塑料大棚內，利用自動間歇噴霧裝置保持棚內空氣相對溼度在80 %以上，煉苗8(1後，棚內逐漸通風，再繼續培養10山移栽於大田，成活率89%以上。
[0033]實施例2
[0034]挑選飽滿無病蟲害的絨毛白蠟種子，剝去種皮放於無菌的玻璃瓶中，用70%乙醇滅菌30秒，再用0.1 %氯化汞滅菌7分鐘，然後用無菌水洗滌5次，在無菌條件下接種到-1+0.11118/16-8^+4^/1瓊脂+25^/1蔗糖萌發培養基中(邱值5.8)，培養條件為晝溫度251，夜溫度181，光照強度2500匕，光照時間13卜-11 (培養條件下同)，9(1後種子萌發，
獲得無菌苗。
[0035]將無菌苗剪成1.50111長帶芽莖段，轉接於191+1021.5呢5呢-1^+6-8^1.0呢-1^+^0.7呢-1^+30^噸―1蔗糖+4.5呢噸―1瓊脂增殖培養基中(邱值5.8)，以上述條件進行晝夜光照周期培養，30(1後誘導形成叢生芽，增殖倍數10倍。
[0036]待試管苗長到50111，將其切成單株，接種到生根培養基中(1/2191+1.-1^18^+0.02呢.1^^+0.15^/1 21+20^.[-1蔗糖+?.[-1瓊脂，邱值5.7)，培養18(1獲得生根植株，生根數6條，根長2(3！！！，培養條件為步驟(1)所述晝夜光照周期培養。
[0037]把生根的瓶苗轉移到煉苗溫室中適應2(1後，用鑷子將苗輕輕夾出，快速放到盛有清水的容器中，用清水洗去根部殘留的培養基，移栽到裝有輕型基質的無紡布營養杯中，放置於遮光度60%?70%遮蔭網塑料大棚內，利用自動間歇噴霧裝置保持棚內空氣相對溼度在80%以上，煉苗10(1後，棚內逐漸通風，再繼續培養12山栽植於大田，成活率92%以上。
[0038]實施例3
[0039]挑選飽滿無病蟲害的絨毛白蠟種子，剝去種皮放於無菌的玻璃瓶中，用70%乙醇滅菌25秒，再用0.1 %氯化汞滅菌8分鐘，然後用無菌水洗滌6次，在無菌條件下接種到1^1+5.0^/1瓊脂+358/1蔗糖萌發培養基中(邱值6.0)，培養條件為晝溫度251，夜溫度181，光照強度2500匕，光照時間131^(1—\培養條件下同)，10(1後種子萌發，獲得無菌苗。
[0040]將無菌苗剪成2。111長帶芽莖段，轉接於191+11)22.0呢0呢-1^+6-8^1.5?80呢-1^+35^噸―1蔗糖+5呢噸―1瓊脂增殖培養基中(邱值5.7)，以上述條件進行晝夜光照周期培養，35(1後誘導形成叢生芽，增殖倍數9倍。
[0041]待試管苗長到40111，將其切成單株，接種到生根培養基中(1/2191+2.1呢-1^18^+0.03呢.1^^+0.2111^/1 21+25^.[-1 蔗糖 +5^.[-1 瓊脂，邱值 5.9)，培養 20(1 獲得生根植株，生根數5條，根長3(3111，培養條件為晝夜光照周期培養。
[0042]把生根的瓶苗轉移到煉苗溫室中適應1(1後，用鑷子將苗輕輕夾出，快速放到盛有清水的容器中，用清水洗去根部殘留的培養基，移栽到裝有輕型基質的無紡布營養杯中，放置於遮光度60%?70%遮蔭網塑料大棚內，利用自動間歇噴霧裝置保持棚內空氣相對溼度在80 %以上，煉苗9(1後，棚內逐漸通風，再繼續培養11山栽植於大田，成活率85 %以上。
[0043]本發明方法實施例中採用的培養基及其配方是:
[0044]胃？1培養基的組分為:順4唚3 400^ ? 08(^03)2 ? 4！！20 556^ ? ^1,尺2304990呢.[―1，03012.2！！20 96呢.[―1，狃2？04 170呢.[―1，琴。04.2！！20 0.25呢.[―1，
0 4 ? 7！！20 370^ ? 171，1=304 ? 4！！20 22.4呢 ? 171，2=304 ? 7！！20 8.6呢 ? 171，011804 ? 5！！200.25mg.ΙΛ FeS04.7H20 27.8mg.?Λ Na2-EDTA 37.3mg.L—1，鹽酸硫胺素 1.0mg.L'煙酸 0.5mg.L—1,鹽酸比 P多酉享 0.5mg.L-1,肌酉享 10mg.I71，甘氨酸 2.0mg.I71。
[0045]1/2WPM是指培養基的組分中WPM大量元素減半及其餘為WPM全量元素，其具體組分為:NH4NO3 200mg.?Λ Ca (Ν03) 2.4H20 278mg.?Λ K2SO4 495mg.?Λ CaCl2.2Η2048mg.L-1，ΚΗ2Ρ04 85mg.L-1，Na2MoO4.2Η20 0.25mg.L-1，MgS O 4.7H20370mg.L-1，MnS04.4Η2022.4mg.ΙΛ ZnS04.7H20 8.6mg.?Λ CuS04.5H200.25mg.?Λ FeS04.7H20 27.8mg.?ΛNa2-EDTA 37.3mg.L—1,鹽酸硫胺素 1.0mg.L—1,煙酸 0.5mg.L—1,鹽酸比P多醇 0.5mg.L—1,肌醇 10mg.L-1,甘氨酸 2.0mg.L'
[0046]萌發培養基配方是:WPM+6-BA0?0.3mg.L—1+蔗糖25?35g.L—1+瓊脂4?5g.ΙΛ pH 值 5.8 ?6.0 ;
[0047]快繁增殖培養基配方是:WPM+TDZ0.5?2.0mg.L_1+ZT1.0?2.0mg *L ^Θ-ΒΑΟ.5 ?1.5mg.L ^NAA0.5 ?1.0mg *L 1+25 ?35mg.L 1 鹿糖 +4 ?5mg *L 1瓊脂，pH值5.8?6.0 ;
[0048]生根培養基配方是:1/2WPM+0.7 ?2.1mg.L_1IBA+0.01 ?0.03mg.L_1NAA+0.1 ?0.2mg/L ZT+18 ?25g.L-1 鹿糖 +4 ?5g.L-1 瓊脂，pH 值 5.7 ?5.9 ;
[0049]上述無紡布營養杯中的輕型基質的成分以體積比計為:蛭石:珍珠巖:草炭土 =2:3: 5，且在無紡布營養杯中輕型基質上面還撒放一層厚度為1.5?2cm的細沙。所述輕型基質可購於壽光市恆先育苗基質加工廠。
【權利要求】
1.一種提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，步驟包括:(1)無菌苗建立，(2)快繁增殖;(3)組培苗生根；(4)煉苗移栽； 其特徵在於: 步驟(I)所述無菌苗建立的方法是:選取無病蟲害籽粒飽滿的種子，去掉種皮，滅菌後接種到種子萌發培養基中，置於組培室，晝夜光照周期培養條件為:白天光照強度為2000?3000Lux，光照時間12?14h.cf1，溫度25±1°C ;夜間溫度18±1°C ；7?1d後種子萌發，獲得無菌苗； 其中:所述種子萌發培養基配方是:WPM+6-BA0?0.3mg.Γ1+蔗糖25?35g.Γ1+瓊月旨4?58.171，卩!1值5.8?6.0; 步驟(2)所述快繁增殖的方法是:將步驟(I)獲得的無菌苗剪成I?2cm長帶芽莖段，轉接於快繁增殖培養基中，以步驟(I)所述條件進行晝夜光照周期培養，25?30d後誘導形成叢生芽，增殖倍數8?10倍； 其中:所述快繁增殖培養基是以WPM培養基為基本培養基，於基本培養基中添加苯基噻二唑基脲(TDZ)、玉米素(ZT)、6_苄氨基腺嘌呤出-BA)、萘乙酸(NAA)四種植物生長調節劑製成，該快繁增殖培養基配方是:WPM+TDZ0.5?2.0mg.Γ'+ΖΤΙ.0?2.0mg *L ^Θ-ΒΑΟ.5 ?1.5mg.L ^NAA0.5 ?1.0mg *L 1+25 ?35mg.L 1 鹿糖 +4 ?5mg *L 1瓊脂，pH值5.8?6.0 ; 步驟(3)所述組培苗生根的方法是:待步驟(2)培養的試管苗長到3?5cm時，將其切成單株，接種到生根培養基中，以步驟(I)所述條件進行晝夜光照周期培養，15?20d後獲得生根植株，其生根數4?6條,根長I?3cm ； 其中:所述生根培養基配方是:l/2WPM+0.7?2.1mg.L_1IBA+0.01?0.03mg.L ^AA+0.1 ?0.2mg/L ZT+18 ?25g.L1 鹿糖+4 ?5g.L1 瓊月旨，pH 值 5.7 ?5.9 ； 上述1/2WPM是指培養基的組分中WPM大量元素減半及其餘為WPM全量元素，其具體組分為:NH4NO3 400mg.?Λ Ca (Ν03) 2.4H20 556mg.?Λ K2SO4 990mg.?Λ CaCl2.2Η2096mg.I/1，ΚΗ2Ρ04 170mg.I/1，Na2MoO4.2Η20 0.25mg.I/1，MgSO4.7H20370mg.I/1，MnS04.4H20 22.4mg.L—1，ZnS04.7H20 8.6mg.L—1，CuS04.5H200.25mg.L—1，FeS04.7H2027.8mg.I71, Na2-EDTA 37.3mg.I/1,鹽酸硫胺素 1.0mg.L—1,煙酸 0.5mg.L—1,鹽酸比P多酉享0.5mg.L—1,肌酉享 10mg.I71，甘氨酸 2.0mg.L-1 ； 步驟(4)所述煉苗移栽的方法是:把步驟(3)中已生根的瓶苗轉移到煉苗溫室中適應I?2d，然後用清水逐棵洗去苗根部殘留的培養基，並將其移栽到裝有輕型基質的無紡布營養杯中，放置於遮光度60%?70%遮蔭網塑料大棚內，利用自動間歇噴霧裝置保持棚內空氣相對溼度在80%以上，煉苗8?1d後，棚內逐漸通風，再繼續培養10?12d，移栽於大田； 其中:所述無紡布營養杯中的輕型基質的成分以體積比計為:蛭石:珍珠巖:草炭土= 2:3: 5，且在無紡布營養杯中輕型基質上面還撒放一層厚度為1.5?2cm的細沙。
2.如權利要求1所述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，其特徵在於，步驟(I)、(2)或(3)所述晝夜光照周期培養條件為:白天光照強度2500LUX，光照時間溫度25 0C ;夜溫度 18 °C。
3.如權利要求1所述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，其特徵在於，所述種子萌發培養基或快繁增殖培養基中，瓊脂為4.5g.L_\蔗糖為30g.L-1, pH值為5.8。
4.如權利要求1所述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，其特徵在於，步驟(2)所述的快繁增殖培養基配方是:WPM+TDZ 1.5mg.L_1+ZT 1.5mg.L_1+6-BA 1.0mg.L'NAA0.7mg.L ^SOmg.L 1 鹿糖 +4.5mg.L 1 瓊脂，pH 值 5.8 ?6.0。
5.如權利要求1所述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，其特徵在於，步驟(3)所述的生根培養基配方是:1/2WPM+1.0mg.L_1IBA+0.02mg.L_1NAA+0.15mg.L_1ZT+20g.Γ1 蔗糖+『g.!/1 瓊脂，pH 值 5.7。
【文檔編號】A01C1/00GK104381128SQ201410546879
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月15日 優先權日:2014年10月15日
【發明者】劉翠蘭, 燕麗萍, 李麗, 王開芳, 夏陽, 王振猛 申請人:山東省林業科學研究院