一類具抗腫瘤活性的水溶性酚性三萜化合物及其製備方法

2023-12-05 20:29:16 1

專利名稱：：一類具抗腫瘤活性的水溶性酚性三萜化合物及其製備方法
技術領域：
：本發明涉及酚性三萜化合物，更具體地說涉及一類具抗腫瘤活性的水溶性酚性三萜化合物及其製備方法。
背景技術：
：癌症是人類健康的大敵，是疾病導致死亡的頭號殺手，目前，中國每年死於癌症的人數為140萬到150萬，其造成的經濟損失，專家估計為每年140億。抗腫瘤藥物治療是癌症治療的主要方法之一，天然產物是發現新抗腫瘤藥物的寶庫，許多抗腫瘤藥物的先導化合物都是從天然中獲得，如長春鹼、長春新鹼、喜樹鹼、紫杉醇等，但這些天然化合物往往由於毒副作用、溶解性、穩定性等，需要進行結構修飾或改造，才能成為臨床使用的抗腫瘤藥物。醌甲基三萜化合物是天然存在的一類具有抗腫瘤作用的化合物，由於其A環存在特異的醌甲基結構，使得其具備抗腫瘤活性的同時，也容易發生聚合等反應，在溶液中對PH值高度敏感，在酸性和鹼性條件下均不穩定，異發生開環、重排等多種反應[文獻l:K.Nakanishi，Y.TakahashiandH.Budzikiewicz,Pristimerin.SpectroscopicPropertiesoftheDienone-Phenol-TypeRearrangementProductsandotherDerivatives.J.Org.Chem.30:1729(1965)]。天然產生的醌甲基三萜化合物為酯溶性成分，在水中幾乎不溶解，難以直接以靜脈注射方式給藥。
發明內容為了解決上述技術問題，本發明提供了一種6位帶磺酸基並成鹽的水溶性酚性三萜化合物，以克服醌甲基三萜化合物對PH值高度敏感的缺點，並大大增加水溶性。本發明的另一目的是提供該化合物的製備方法。本發明提供了一種具有體內抗癌活性的水溶性酚性三萜類化合物，其結構式如下式所示:(I)formulaseeoriginaldocumentpage5M=Na、K、肌或Ca;R產H或C廣Ct2垸基；R2=H、d-C,2垸基或CrC,2醯基等；R3、R4為H或OH，或者R3為H且R4為(=0)，或R3、R4所在的7、8位碳原子間為雙鍵。本發明還涉及上述化合物(I)的結晶水合物及化合物(I)在藥學上可接受的劑型。本發明化合物(I)的製備方法，包括以下步驟a)醌甲基三萜化合物用與水相混溶的有機溶劑溶解後，和亞硫酸氫鹽的水溶液混合均勻，在室溫下攪拌至反應溶液呈接近無色；4(TC以下減壓濃縮至幹，得粗品，反應式如下所示。b)步驟a)所得粗品中加入甲醇、無水乙醇或異丙醇使其溶解，過濾，濾液4(TC以下減壓濃縮至幹，所得固體用溶劑於04'C重結晶，析出白色結晶，過濾，即得產品。上述製備方法中，醌甲基三萜化合物是指2位為羰基，1與10位間、3與4位間、5與6位間都為雙鍵，4位為甲基，3位為羥基或烷氧基或醯氧基的三萜化合物。上述歩驟a)中，溶解醌甲基三萜化合物的與水混溶的有機溶劑選自丙酮、甲醇、乙醇、異丙醇或四氫呋喃，優選乙醇。亞硫酸氫鹽選自亞硫酸氫鈉、亞硫酸氫鉀、亞硫酸氫銨或亞硫酸氫鈣，優選亞硫酸氫鈉。上述製備方法中，醌甲基三萜化合物與亞硫酸氫鹽的摩爾比為1:l1.2，優選i:i.i。上述步驟b)中，重結晶所用的溶劑選自甲醇、乙醇、氯仿-甲醇、丙酮-水、甲醇-水、乙醇-水、異丙醇-水或者四氫呋喃-水，優選乙醇-水。本發明的化合物(I)可以製成藥學上的各種劑型，包括注射劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑和搽劑等各種劑型，特別適合於製備注射劑。本發明動物體內藥理試驗結果顯示，對人前列腺癌PC-3裸小鼠移植瘤的生長有明顯抑制作用。人前列腺癌PC-3細胞株為抗腫瘤藥物普篩的細胞株，本發明涉及的一類化合物對各種實體瘤、腺瘤、血液系統腫瘤均有治療作用，由於可以靜脈注射方式給藥，尤其適合於對血液系統腫瘤如慢性粒細胞白血病，多發性骨髓瘤等的治療。本發明的有益效果本發明公開的化合物具備優良的水溶性，能配置成穩定的溶液，尤其適合於靜脈注射給藥方式，並且具有較好的抗腫瘤活性。具體實施例方式下面結合具體的實施例對本發明作進一步闡述，但實施例不限制本發明的保護範圍。實施例l:由南蛇藤素(Celastrol)為原料製備化合物A。取20.5mg南蛇藤素(Cdastrol)用lml丙酮溶解後，向其中加入0.5ml亞硫酸氫鈉水溶液(含亞硫酸氫鈉5.66mg)，攪拌下反應至溶液變為無色澄清。4(TC下減壓濃縮至幹，得白色粉末。加異丙醇使溶解，過濾，濾液40。C以下減壓濃縮至幹，用乙醇-水於04。C重結晶，析出白色結晶，減壓過濾得白色針狀結晶20.8mg。實施例2:由南蛇藤素(Celastrol)為原料製備化合物A。取502mg南蛇藤素(Celastrol)用10ml乙醇溶解後，向其中加入5ml亞硫酸氫鈉水溶液(含亞硫酸氫鈉128mg)，攪拌下反應1小時，溶液變為近無色澄清的溶液。40。C下減壓濃縮至幹，得白色粉末。加無水乙醇使溶解，過濾，濾液4(TC以下減壓濃縮至千，用乙醇-水於04'C重結晶，析出白色結晶，減壓過濾得白色針狀結晶516mg。分析結果化合物A的核磁共振光譜數據'HNMR(DMSO-d6,300M),S12.01(1H,s，-COOH)，8.81(1H，s,-OH),7.62(1H,s,-OH),6.58(3H，s,H-l)，5.81(1H,d，J=6.2Hz，H-7),4.49(1H,d，J=6.2Hz,H-6),2.21(3H,s.23-CH3)，1.62(3H,s,25-CH3),1.18(3H,s，26-CH3),1.09(3H,s,30-CH3)，1.05(3H，s，28-CH3)，0.59(3H,s,27-CH3)。13CNMR(DMSO,300M),S179.87(C-29)，149.03(C-8)，143.68(C-2),141.57(C醫IO)，140.54(C-3),122.85(C-4)，121.44(C-5),118.30(C-7),108.67(C-l)，59.79(C-6)，44.03(C-18),43.56(C-14)，39.50(C-20),37.67(C國9),37.50(C-13),36.60*(C-ll),36.60*(C-16),34.76*(C-22),34.41(C-25),32.63(C-30),31.55(C-28),30.21(C-12),30.21(C-17),30.21(C-19),29.7(C-21),28.65(C-15),21.21(C-26),18.04(C-27),13.19(C-23)。*表示可能應互換的歸屬。A的質譜數據ESI-MS(負離子)m/z531.7。實施例3:由南蛇藤素(Celastrol)為原料製備化合物A。取10.58g南蛇藤素(Celastrol)用100ml乙醇溶解後，向其中加入50ml亞硫酸氫鈉水溶液(含亞硫酸氫鈉2.64g)，攪拌下反應l小時，溶液變為近無色澄清的溶液。4(TC下減壓濃縮至幹，得白色粉末。加無水乙醇使溶解，過濾，濾液4(TC以下減壓濃縮至幹，加入約170ml無水乙醇和7ml水，超聲使溶解，04"C放置，析出白色晶體，過濾得11.4克。實施例4:由扁蒴藤素(Pristimerin)為原料製備化合物B。取19.5mg扁蒴藤素(Pristimerin)用lml乙醇溶解後，向其中加入0.5ml亞硫酸氫鈉水溶液(含亞硫酸氫鈉4.80mg)，攪拌下反應l小時，溶液變為無色澄清的溶液。4(TC下減壓濃縮至幹，得白色粉末。加異丙醇使溶解，過濾，濾液40。C以下減壓濃縮至幹，用乙醇一水重結晶，過濾，得白色針狀結晶19.2mg。分析結果B化合物B的核磁共振氫譜數據'HNMR(DMSO-d6,300M)，S8.72(1H，brs,-OH)，7.58(1H,brs,-OH)6.53(3H,s，H-l)，5.79(1H，d,J=5.6Hz,H-7),4.43(1H,d，J=5.6Hz,H-6)2.20(3H,s.23-CH3)，1.62(3H,s,25-CH3)，1.18(3H,s,26-CH3)，1.10(3H,s30-CH3),1.06(3H,s,28-CH3),0.42(3H,s,27-CH3)。實施例5:用相同的方法還可以製備如下的化合物:formulaseeoriginaldocumentpage8實施例6:製備化合物A的注射劑取化合物A3.7g，亞硫酸氫鈉5g，加水10L溶解。經0.22微米孔徑的微孔濾膜過濾，分裝於7ml容量的玻璃小瓶，3ml/瓶，加膠塞和鋁蓋密封。116。C溼壓滅菌30min，即得。實施例7:化合物A注射劑製備過程中穩定性考察。實驗條件色譜柱為迪馬C18，5u，250X4.6mm柱，Agilent1100DAD檢測器，檢測波長210nm，流動相乙腈一0.02MKH2PO4(含體積比千分之一的四丁基氫氧化銨，並用三乙胺調PH至7.35)(35:65)，流速lml/min。進樣量20|ll。樣品實施例6中製備化合物A注射劑過程中各步的溶液。實驗數據微孔濾膜過濾前的峰面積1084.4，過濾後的峰面積1078.2，溼壓滅菌後的峰面積1072.9試驗結果顯示化合物A在製成注射劑的過程中穩定性良好。實施例8:化合物A的注射劑穩定性考察實驗條件色譜柱為迪馬C18，5u，250X4.6mm柱，Waters3487檢測器，檢測波長210nm，流動相為乙腈一0.02MKH2PO4(含體積比千分之一的四丁基氫氧化銨並用三乙胺調PH至7.35)(35:65)，流速lml/min。實驗方法實施例6所得製劑於05"C保存，分別於O天、7天、14天、21天、30天和45天精密移取lml，用水溶液定容至5ml，即得樣品溶液。將樣品溶液和對照品溶液各20W注入色譜儀，記錄色譜峰面積，計算樣品溶液含量。實驗數據如下表所示。表1:化合物A的注射劑穩定性考察tableseeoriginaldocumentpage10試驗結果表明，表明該溶液具有良好的穩定性。實施例9:化合物A在PH偏酸和偏鹼條件下穩定性考察實驗條件色譜柱為迪馬C18，5u，250X4.6mm柱，Waters3487檢測器，檢測波長210nm，流動相為乙腈一0.02MKH2P04(含體積比千分之一的四丁基氫氧化銨並用三乙胺調PH至7.35)(35:65)，流速lml/min。實驗方法取化合物A用蒸餾水配成約5mg/ml的溶液，分別量取0.1ml加至下列溶液中a)lmlPH=2的鹽酸稀溶液，b)lml蒸餾水，c)lmlPH=10的碳酸鈉稀溶液。於室溫下放置2小時後，量取上述三種溶液各O.lml分別加至lml流動相中，進樣20)il注入液相色譜儀，測定峰面積並計算。實驗結果見下表。表2:化合物A在PH偏酸和偏鹼條件下穩定性的比較tableseeoriginaldocumentpage10*以在蒸餾水中的峰面積為100%來計算。試驗結果表明化合物A在PH偏酸和偏鹼條件下穩定性良好。實施例10:化合物A的動物體內藥理活性實驗。化合物A對人前列腺癌PC-3裸小鼠移植瘤的實驗治療作用試驗由上海華拓醫藥科技發展股份有限公司委託中科院上海藥物研究所完成。受試化合物化合物A。陽性對照藥物絲裂黴素(MMC)，協和發酵工業株式會社生產，批號468AEF，2mg/瓶，使用時用生理鹽水稀釋。動物和移植瘤BALB/cA裸小鼠，雌性45-50日齡，體重20士lg。人前列腺癌PC-3裸小鼠移植瘤，由PC-3細胞株接種於裸小鼠皮下而建立。評價方法TV(mm3)為腫瘤體積，計算公式為TV=l/2XaXb2，其中a、b分別表示長、寬。d。為分籠給藥時測量所得腫瘤體積，(124為試驗第24天時測量所得腫瘤體積。RTV為相對腫瘤體積，計算公式為RTV=Vt/V。。其中Vo為分籠給藥時(即do)測量所得腫瘤體積，Vt為每一次測量時的腫瘤體積。抗腫瘤活性的評價指標為相對腫瘤增殖率T/C(%)，計算公式如下T/C(%)=(TRTV/CRTV)X100TRTV:治療組RTV;CRTV:陰性對照組RTV。療效評價標準17(3(%)>60%為無效，T/C(%)<=60，並經統計學處理p<0.05為有效。藥理試驗結果見下表。表3:化合物A對人前列腺癌PC-3裸小鼠移植瘤的實驗治療作用tableseeoriginaldocumentpage11試驗結果表明化合物A對人前列腺癌PC-3裸小鼠移植瘤的生長有明顯抑制作用。權利要求1.一類結構式如(I)所示的水溶性酚性三萜化合物。R2為H、C1-C12烷基或C1-C12醯基；M為Na、K、NH4或Ca；R1為H或C1-C12烷基；R3、R4為H或OH，或者R3為H且R4為(O＝)，或R3、R4所在的7、8位碳原子間為雙鍵。2.權利要求1所述化合物的製備方法，包括以下步驟a)將醌甲基三萜化合物用能與水相混溶的有機溶劑溶解後，與亞硫酸氫鹽的水溶液混合均勻，室溫下攪拌至反應溶液呈接近無色，40°C以下減壓濃縮至幹，得粗品，化學反應式如下b)向步驟a)所得粗品中加入有機溶劑使其溶解，過濾，濾液於4(TC以下減壓濃縮至幹，將所得固體用溶劑於04"C重結晶，析出白色結晶，過濾，即得產品。3.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，步驟a)中所述的能與水相混溶的有機溶劑選自丙酮、甲醇、乙醇、異丙醇或四氫呋喃。4.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，所述的亞硫酸氫鹽選自亞硫酸氫鈉、亞硫酸氫鉀、亞硫酸氫銨或亞硫酸氫鈣。5.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，步驟a)中醌甲基三萜化合物與亞硫酸氫鹽的摩爾比為i:ii.2。6.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，步驟b)中a)步驟所得粗品中加入的有機溶劑選自甲醇、無水乙醇或異丙醇。7.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，重結晶所用的溶劑選自甲醇、乙醇、氯仿-甲醇、丙酮-水、甲醇-水、乙醇-水、異丙醇-水或者四氫呋喃-水。8.根據權利要求1所述的化合物，其特徵在於，製成的劑型為注射劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑或搽劑。9.如權利要求1所述的化合物在製備治療抗腫瘤藥物中的應用。10.根據權利要求9所述的用途，其特徵在於，權利要求l中所述的化合物在製備治療前列腺癌藥物中的應用。全文摘要本發明公開了一種結構式如(I)所示的，具抗腫瘤活性的水溶性酚性三萜化合物，以及以醌甲基三萜化合物為起始原料的製備方法。化合物結構式(I)中，R1為H或C1-C12烷基，M為Na、K、NH4或Ca，R2為H、C1-C12烷基或C1-C12醯基，R3、R4為H或OH，或者R3為H且R4為(＝O)或R3、R4所在的7-8位碳原子間為雙鍵。本發明公開的化合物可製成藥學上的各種劑型，包括注射劑，片劑，膠囊劑，顆粒劑和搽劑，特別適合於製備注射劑。文檔編號A61K31/56GK101434635SQ20071017053公開日2009年5月20日申請日期2007年11月16日優先權日2007年11月16日發明者倪慧豔,通方,曾佳烽,勤朱,李寶瑩,潘俊芳申請人:上海華拓醫藥科技發展股份有限公司