板慄總苞提取物在改善畜禽健康提高其生長性能中的應用的製作方法
2023-11-10 04:58:37 2
專利名稱：板慄總苞提取物在改善畜禽健康提高其生長性能中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於飼料添加劑技術領域，涉及板慄總苞提取物作為飼料添加劑在改善畜禽健康並提高其生長性能中的應用。
背景技術：
板慄(castanea mollissina Blume)屬殼鬥科(Fagceae)慄屬喬木經濟植物，素有「千果之王」的美稱，是世界著名的乾果之一。我國大部分地區均有分布，尤其以華北和長江流域栽培集中，產量居世界第一。近年來，我國板慄產量達到全世界年產量的60%以上，現在仍以年11%的速度增加。板慄產業蓬勃發展，對於板慄總苞、殼、葉、皮等廢棄物的開發和綜合利用，不盡具有重要的經濟意義，而且減少環境汙染，建設社會主義新農村具有重要的生態和社會效益。 據中藥大詞典記載，板慄總苞又名風慄殼、板慄殼鬥，性甘、平、味澀、無毒，具有健脾益氣、補腎強筋、散結解毒之功效，可用於治療丹毒、腫毒、瘰癧等疾病，在民間常作為抗菌、消炎用藥。焦啟揚(2009，瀋陽藥科大學碩士論文)在板慄總苞中已分離得到21個化合物。分別鑑定為5-羥甲基糠醛、沒食子酸、對羥基苯甲酸、對苯二酚、麥角留-6，22-二烯-3 @ , 5a, 8a三醇、莽草酸、豆甾-4-烯_6 ^ -3酮、Ganschisandrin、齊墩果酸、山柰酚-3-0-(6-反式-對-香豆醯基)-0 -D-葡萄吡喃糖苷、山柰酚-3-0-(6」，4」 -雙-反式-對-香豆醯基)-P -D-葡萄吡喃糖苷、2-羥基-丁二酸二丁酯、槲皮素、大黃素、3'，3" -dimethoxylarreatricin、原兒茶酸、烏素酸、山柰酹、蘋果酸二丁酯、胡蘿蔔苷、￠-谷甾醇。葉君(2011，陝西中醫學院碩士論文)研究表明板慄總苞提取物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌及藤黃微球菌均有不同程度的抑制活性。張琳等(2010，瀋陽藥科大學學報)發現板慄總苞含有抗糖尿病活性成分。目前沒有發現將板慄總苞或板慄殼用作飼料添加劑的報導。鑑於板慄總苞所含化合物多數為植物多酚，而植物多酚具有較強的抗菌作用、抗凝血作用、抗自由基、抗衰老作用、抗糖尿病、抗氧化性作用，應用於畜禽生產可以替代抗生素、改善畜禽健康並提高其生長性能。這在世界各國都已經或正在逐步取締飼用抗生素的形勢下顯得尤為重要。目前沒有發現將板慄總苞或板慄殼用作飼料添加劑改善畜禽健康並提高其長性能的報導。
發明內容
本發明的目的在於提供一種提高畜禽生長性能的天然添加劑，研究了板慄總苞提取物作為飼料添加劑對於改善畜禽健康並提高其生長性能的功效。本發明通過試驗發現，板慄總苞提取物添加到小鼠腸上皮細胞(IEC-6)細胞培養液中能夠增強細胞增殖活力，改善細胞抗氧化性能。本發明通過試驗發現，將板慄總苞提取物作為飼料添加劑到畜禽的基礎日糧中，再將其飼餵畜禽，能夠改善畜禽健康，並提高畜禽生長性能。
本發明進一步試驗發現，將板慄總苞提取物按照0. 01-0. 05wt%的比例添加到畜禽的基礎日糧中，有利於改善畜禽健康、提高畜禽生長性能，其中0. 03wt%的添加劑量在方面效果最為明顯，具有顯著性差異(P < 0. 05)。本發明中所述的術語「畜禽」包括但不局限於肉雞、蛋雞、鴨、鵝、豬、肉牛、奶牛、羊。本發明中所述的術語「板慄總苞提取物」可以是採用不同的提取方法從板慄總苞中所得到的各種提取物。所採用的方法可以是以下一種超聲輔助法製備板慄總苞提取物將板慄總苞粉末加入至乙醇水溶液中得到所述、板慄總苞的乙醇水散液，對所述乙醇水散液進行超聲輔助提取後，離心，真空旋轉蒸發上清液，定容，將提取液泵入已平衡好的LSA-21大孔樹脂柱，先用蒸餾水衝洗柱子，再用乙醇水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓旋蒸濃縮，乾燥至粉末，得到棕紅色的板慄總苞提取物粉末。水浴法製備板慄總苞提取物，主要步驟包括(I)乾燥粉碎把採摘來的板慄總苞風乾、粉碎、過篩；(2)浸提取一定量板慄總苞粉末於錐形瓶中，按一定料液比加入乙醇水溶液，充分混勻，一定溫度水浴中密閉浸提，得到浸提液；(3)離心和濃縮將浸提液倒入離心管中，離心，收集上清液，在旋轉蒸發儀上減壓濃縮除去乙醇，定容一定體積，得到粗提液；(4)純化將粗提液泵入已經平衡好的的大孔吸附樹脂，對多酚進行吸附，先用蒸餾水衝洗柱子，再用30% -70%的乙醇水溶液(按體積百分比)洗脫多酚，收集洗脫液；(5)濃縮和乾燥將洗脫液減壓濃縮，冷凍乾燥，得到板慄總苞提取物。板慄總苞提取物作為飼料添加劑到畜禽的基礎日糧中，可根據不同的飼餵對象，採用不同的添加比例，作為參考，所添加的比例如下乳豬專用型乳豬型，每噸配合飼料中添加100-500克板慄總苞提取物；普通型肥育豬、肉雞、蛋雞每噸配合飼料中添加100-400克板慄總苞提取物；反芻動物每噸精料中添加200-600克板慄總苞提取物。本發明公開了採用不同的提取方法從板慄總苞中所得到的提取物，作為飼料添加劑到畜禽的基礎日糧後，可以減少飼用抗生素的使用、預防畜禽腹瀉、改善畜禽健康、提高畜禽生長性能等方面的應用。
具體實施例方式下面結合具體的實施例來進一步闡述本發明。應當理解，這些實施例僅用於說明本發明，而不能限制本發明的保護範圍。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和範圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改或替換均落入本發明的保護範圍內。實施例I板慄總苞提取物的製備將板慄總苞粉碎至60目，稱取IOg板慄總苞粉末加入200mL的30 %乙醇水溶液混合，在60°C水浴鍋中密閉浸提IlOmin,在4000r/min條件下離心15min,,殘洛重複上述浸提60min，料液比為I : 10，收集2次上清液，真空減壓旋蒸上清液(40°C、0. IMP)除去乙醇，定容，將提取液以2mL/min的速度泵入已平衡好的LSA-21大孔樹脂柱，先用2倍柱體積的蒸餾水衝洗柱子，再用2倍50%乙醇水溶液以2mL/min的流速洗脫，收集洗脫液，於40°C、0. IMP下減壓旋蒸濃縮，冷凍乾燥至粉末，提取物的得率為9. 58%，其中多酚含量為70. 28%。實施例2板慄總苞提取物的製備將板慄總苞粉碎至60目，稱取IOg板慄總苞粉末加入200mL的30 %乙醇水溶液混合，與55°C、500W功率下超聲提取30min,在4000r/min條件下離心15min,真空減壓旋蒸浸提液(40°C、0. IMP)，將濃縮浸提液以2mL/min的速度泵入已平衡好的LSA-21大孔樹脂柱，先用2倍柱體積的蒸餾水衝洗柱子，再用70%乙醇水溶液以2mL/min的流速洗脫，收集70%乙醇洗脫液，於40°C、0. IMP下減壓旋蒸濃縮，乾燥至粉末.得到1.368g棕紅色的板慄總苞提取物粉末，提取物的得率為13. 68%，其中多酚的含量為74. 90%。試驗例I板慄總苞提取物促進IEC-6細胞增殖和提高其抗氧化性能試驗
一、試驗材料IEC-6細胞株購自中國協和醫藥科技大學細胞保藏室。供試板慄總苞提取物取實施例I製備的板慄總苞提取物10mg，用5mL DMEM完全培養液溶解後，經①0. 22 ii m濾膜過濾,4°C保存。二、試驗方法IEC-6細胞融合率達95%以上時，用0.25%的胰酶進行消化後加DMEM完全培養液。倒置顯微鏡下進行細胞計數和細胞活力計算後，調整細胞濃度為I X IO5個/mL,向96 孔細胞培養板分別加入90 u L細胞懸液，試驗組再加入10 u LlOO u g/mL板慄總苞提取物，對照組加10 y L DMEM完全培養液。於37°C、5% CO2細胞培養箱44h，每孔加入10 y L 5mg/mL的MTT液，在37 °C下繼續培養4h後加入100 u LDMSO液混勻，於570nm處檢測OD值。IEC-6S0D、GSH-Px活力和MDA含量的測定按照試劑盒說明書進行。所有數據用MeaniSD表示。採用SPSS 11. 0統計軟體進行數據處理和單因子方差分析和多重比較。三、試驗結果板慄總苞提取物對IEC-6細胞增殖和抗氧化指標的影響見表I，和對照組相比，板慄總苞提取物能夠顯著提高IEC-6細胞增殖活力和SOD、GSH-Px活力，降低MDA含量，說明 板慄總苞提取物能夠促進IEC-6細胞生長，並提高其抗氧化性能。表I板慄總苞提取物對細胞增殖和抗氧化指標的影響
權利要求
1.板慄總包提取物在改善畜禽健康提高其生長性能中的應用。
2.根據權利要求I的應用，其特徵在於，板慄總苞提取物有效成分為植物多酚，又稱鞣質、單寧。
3.根據權利要求2的應用，其特徵在於，板慄總苞提取物有效成分含50%以上的植物多酚。
4.根據權利要求I的應用，其特徵在於，將板慄總苞提取物添加到畜禽的基礎日糧中混合均勻，飼餵畜禽。
5.根據權利要求4的應用，其特徵在於，將板慄總苞提取物添加到畜禽的基礎日糧中按照0. 01-0. 05wt %的比例添加到畜禽的基礎日糧中，混合均勻。
6.根據權利要求4的應用，其特徵在於，將板慄總苞提取物添加到畜禽的基礎日糧中按照0. 03wt %的比例添加到畜禽的基礎日糧中，混合均勻。
7.根據權利要求I的應用，其特徵在於，所述板慄總苞提取物按照以下方法製備得到將板慄總苞粉末加入至乙醇水溶液中得到所述板慄總苞的乙醇水散液，對所述乙醇水散液進行超聲輔助提取後，離心，真空旋轉蒸發上清液，定容，將提取液泵入已平衡好的LSA-21大孔樹脂柱，先用蒸餾水衝洗柱子，再用乙醇水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓旋蒸濃縮，乾燥至粉末，得到棕紅色的板慄總苞提取物粉末。
8.根據權利要求I的應用，其特徵在於，所述板慄總苞提取物製備條件板慄總苞粉末的粒度為60目-80目，乙醇水溶液中乙醇質量百分含量為30% -70%,乙醇水溶液為液料比每Ig板慄總苞粉末加10-35mL的乙醇水溶液，超聲溫度為25-75°C，超聲時間為20-60min，大孔吸附樹脂純化多酚提取液用40% -70%乙醇水溶液洗脫。
9.根據權利要求I的應用，其特徵在於，所述板慄總苞提取物製備包括下列步驟 (1)乾燥粉碎把採摘來的板慄總苞風乾、粉碎、過篩； (2)浸提取一定量板慄總苞粉末於錐形瓶中，按一定料液比加入乙醇水溶液，充分混勻，一定溫度水浴中密閉浸提，得到浸提液； (3)離心利濃縮將浸提液倒入離心管中，離心，收集上清液，在旋轉蒸發儀上減壓濃縮除去乙醇，定容一定體積，得到粗提液； (4)純化將多酚粗提液泵入已經平衡好的的大孔吸附樹脂，對多酚進行吸附，先用蒸餾水衝洗柱子，再用30% -70%的乙醇水溶液(按體積百分比)洗脫多酚，收集洗脫液； (5)濃縮和乾燥將洗脫液減壓濃縮，冷凍乾燥，得到板慄總苞提取物。
10.根據權利要求I中所述的方法，其特徵在於所述畜禽包括肉雞、蛋雞、鴨、鵝、豬、肉牛、奶牛、羊。
全文摘要
本發明公開了板慄總苞提取物在改善畜禽健康提高其生長性能中的應用。本發明研究發現採用不同提取方法所得到的板慄總苞提取物植物多酚含量佔60％以上。板慄總苞提取物能夠促進動物細胞和組織增生、提高其抗抗氧化性能，將其作為飼料添加劑添加到基礎日糧中，具有改善動物生產性能、增強動物免疫力和降低死亡率的功效。
文檔編號A23K1/16GK102715352SQ201210148228
公開日2012年10月10日 申請日期2012年5月11日 優先權日2012年5月11日
發明者石恩慧, 郭凱軍, 魯琳 申請人:北京農學院