高蟲草素富硒蟲草培植方法

2023-12-08 18:15:01

高蟲草素富硒蟲草培植方法
【專利摘要】本發明一種高蟲草素富硒蟲草培植方法，包括如下步驟：1)蟲草菌一級固體培養；2)蟲草菌二級擴種液體培養；3)蟲草固體生產性培養。本發明適用於冬蟲夏草和北蟲草的人工培養，所獲得的蟲草含蟲草素高，可達到野生蟲草的100-200倍以上；硒含量高，可達到野生蟲草的水平，極大地提高了人工培植蟲草的有效成分和功效，並且用該法培植蟲草菌的抗雜菌力強，產量高，能縮短人工培植時間，有很好的經濟效益。
【專利說明】高蟲草素富砸蟲草培植方法

【技術領域】
[0001]本發明屬於生物領域，涉及一種高蟲草素富硒蟲草培植方法。

【背景技術】
[0002]蟲草分冬蟲夏草和北蟲草兩種，兩者是同科不同種。冬蟲夏草是麥角科蟲草菌寄生於蝙蝠蛾幼蟲體上的子座與幼蟲體的複合物。北蟲草是北冬蟲草的簡稱，也叫蛹蟲草或踴蟲草、蛹草，俗名不老草，是蟲，菌結合的藥用真菌，現代珍稀中草藥，北冬蟲夏草屬於真菌門，子囊菌綱，肉座菌目，麥角菌科，蟲草屬，主要生長在我國的北方地區。蟲草有野生和人工培植兩種。對人體發揮作用的有效成分是蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、超氧化物歧化酶。有補腎益肺，止血化痰，抗癌，提高免疫力，抗疲勞，保護肺、腎、肝等多種功能。深受廣大人群歡迎，稱為保健品中的軟黃金。
[0003]冬蟲夏草和北蟲草的有效成份和功效基本相似，蟲草素是其重要成份，現在市場上人工培植的大多為北蟲草。人工培植雖然提高了實體產量，但是忽視了提高蟲草素的含量。野生蟲草的硒含量是中藥黃芪的三倍，達到了 0.44mg/kg，符合衛生部規定的富硒食品要求。現在還沒有蟲草的人工培植方法能夠使蟲草的硒含量達到野生蟲草的硒含量水平。


【發明內容】

[0004]本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種蟲草素和硒含量高、抗性強的蟲草培植方法。
[0005]本發明的目的是這樣實現的:一種高蟲草素富硒蟲草培植方法，包括如下步驟:
[0006]I)蟲草菌一級固體培養:
[0007]①製備斜面固體培養基:培養基成分配比為:土豆100_140g、葡萄糖10_14g、牛肉膏 4-6g、KH2P04 0.4-0.6g、MgS04 0.2-0.3g、蛋氨酸硒 0.008-0.012g、瓊脂 8_12g ;先將土豆煮熟，搗爛，加入前述其餘成分，加熱煮沸讓瓊脂完全融化，加蒸餾水至500ml，攪拌均勻裝制斜面，滅菌，冷至室溫準備接種；
[0008]②接種、培養:用步驟I製備的斜面固體培養基在無菌條件下接種蟲草的菌絲體，避光24°C培養3-4天，再在20°C培養4-5天，然後在18?22°C自然光照24小時，待用；
[0009]2)蟲草菌二級擴種液體培養:
[0010]①製備二級液體培養基:用蒸餾水配製液體培養基，各組分含量為:蛋白腖13-17g/L、葡萄糖 18-22g/L、KH2PO4 0.8-1.2g/L，7H20.MgSO4 0.4-0.6g/L、VB1 8_12mg/L，蛋氨酸硒0.04-0.06g/L,滅菌待用；
[0011]②接種、培養:用步驟I製備的液體培養基在無菌條件下接種前述一級固體培養得到的菌絲體，避光20?24°C，搖床培養，出現小米粒樣菌絲球時即完成二級擴種液體培養;
[0012]3)蟲草固體生產性培養:
[0013]①製備固體生產性培養基:培養基成分配比為:大米800_1200g、蒸餾水1100-1300g、蛋白腖 10-14g、葡萄糖 16_20g、KH2PO4 1.5-2.5g、7H20.MgSO4 0.8-1.2g、蛋氨酸硒0.4-0.6g、VB1 1.5-2.5mg ;先將除大米以外的各成分用蒸餾水溶解配製成為營養液，再將大米和營養液按比例裝入培養瓶中，封口，蒸至大米熟，冷卻至室溫待用；
[0014]②接種、培養:用步驟I製備的固體培養基在無菌條件下接種前述二級擴種液體培養得到的培養液；放入培養暗室18?23°C避光培養；培養基表面長出白色菌絲時放入自然光或人工光照，18?23°C環境生長，當子座長齊、尖端膨大、孢子形成時即可採收。
[0015]所述步驟2蟲草菌二級擴種液體培養中，接種後搖床培養為130?150轉/min搖床培養48小時。
[0016]所述步驟2中的蟲草菌二級擴種液體培養步驟中，每200ml液體培養基接種一級固體培養得到的菌絲體3-3.5g。
[0017]所述步驟3中蟲草固體生產性培養，大米和營養液按重量比1:1.2的比例裝入培養瓶中，封口，95-100°C蒸30-40分鐘，冷卻至室溫待用。
[0018]所述步驟3中蟲草固體生產性培養，用固體培養基接種二級擴種液體培養得到的培養液，接種量為每10g大米接種0.5ml培養液。
[0019]所述步驟3中蟲草固體生產性培養，接種後放入培養暗室18?23°C避光培養8-10 天。
[0020]本發明的有益效果是:提供了一種低成本、高產出、能夠培養出蟲草素含量高、富硒的蟲草的培植方法。本發明適用於冬蟲夏草和北蟲草的人工培養，所獲得的蟲草含蟲草素高，可達到野生蟲草的100-200倍以上；硒含量高，可達到野生蟲草的水平，極大地提高了人工培植蟲草的有效成分和功效，並且用該法培植蟲草菌的抗雜菌力強，產量高，能縮短人工培植時間，有很好的經濟效益。

【具體實施方式】
[0021]實施例1高蟲草素富硒冬蟲夏草的培植方法
[0022]培植高蟲草素富硒冬蟲夏草的方法，按照如下步驟操作:
[0023]I)蟲草菌一級固體培養:
[0024]①製備斜面固體培養基:培養基成分配比為:土豆120g、葡萄糖12g、牛肉膏5g、KH2PO4 0.5g、MgSO4 0.25g、蛋氨酸硒0.0lg、瓊脂1g ;土豆先煮熟，搗爛，加入前述其餘成分，加熱煮沸讓瓊脂完全融化，加蒸懼水至500ml,攪拌均勻,取40ml的試管,每管裝入培養基7ml，製成斜面，高壓蒸汽滅菌，冷卻至室溫準備接種；
[0025]②接種、培養:用步驟I製備的斜面固體培養基在無菌條件下接種冬蟲夏草的菌絲體3mm2，避光24°C培養3天，再在20°C培養4天，然後在18?22°C自然光照24小時，完成激活。
[0026]2)蟲草菌二級擴種液體培養:
[0027]①製備二級液體培養基:用蒸餾水配製液體培養基，各組分含量為:蛋白腖15g/L、葡萄糖 20g/L、KH2PO4 lg/L,7H20 -MgSO4 0.5g/L、VBi 10mg/L，蛋氨酸硒 0.05g/L，測得 pH值為7.0，滅菌待用；
[0028]②接種、培養:用步驟I製備的液體培養基在無菌條件下接種前述一級固體培養得到的菌絲體，每200ml液體培養基接種菌絲體3g，避光20?24°C，130?150轉/min搖床培養48小時，出現小米粒樣菌絲球時即完成二級擴種液體培養；
[0029]3)蟲草固體生產性培養:
[0030]①製備固體生產性培養基:培養基成分配比為:大米1000g、蒸餾水1200g、蛋白腖12g、葡萄糖 18g、KH2PO4 2g、7H20.MgSO4 lg、蛋氨酸硒 0.5g、VB1 2mg，測得 pH 值為 6.5 ;先將除大米以外的各成分用蒸餾水溶解成為營養液，再將大米和營養液按重量比1:1.2的比例裝入培養瓶，每個500ml的培養瓶中裝入50克大米、60克營養液，封口，95_100°C蒸30分鐘，冷卻至室溫待用；
[0031]②接種、培養:用步驟I製備的固體培養基在無菌條件下接種前述二級擴種液體培養得到的培養液，每10g大米接種0.5ml培養液；放入培養暗室18?23°C避光培養8_10天；培養基表面長出白色菌絲時放入自然光或人工光照，18?23°C環境生長40-55天，當子座長齊、尖端膨大、孢子形成時即可採收。
[0032]利用中國藥典中的方法測得培植出的冬蟲夏草中每10g中蟲草素含量為217.63mg ;測得硒含量為0.327mg/kg，達到了野生蟲草的硒含量水平。
[0033]實施例2高蟲草素富硒北蟲草的培植方法
[0034]培植高蟲草素富硒北蟲草的方法，按照如下步驟操作:
[0035]I)蟲草菌一級固體培養:
[0036]①製備斜面固體培養基:培養基成分配比為:土豆110g、葡萄糖llg、牛肉膏4.5g、KH2PO4 0.4g、MgSO4 0.2g、蛋氨酸硒0.009g、瓊脂9g;土豆先煮熟，搗爛，加入前述其餘成分，加熱煮沸讓瓊脂完全融化，加蒸懼水至500ml,攪拌均勻,取40ml的試管,每管裝入培養基8ml，製成斜面，高壓蒸汽滅菌，冷卻至室溫準備接種；
[0037]②接種、培養:用步驟I製備的斜面固體培養基在無菌條件下接種北蟲草的菌絲體3mm2，避光24°C培養3天，再在20°C培養4天，然後在18?22°C自然光照24小時，完成激活。
[0038]2)蟲草菌二級擴種液體培養:
[0039]①製備二級液體培養基:用蒸餾水配製液體培養基，各組分含量為:蛋白腖Hg/L、葡萄糖 18g/L、KH2PO4 0.9g/L，7H20.MgSO4 0.4g/L、VB1 9mg/L,蛋氨酸硒 0.04g/L,測得pH值為7.1，滅菌待用；
[0040]②接種、培養:用步驟I製備的液體培養基在無菌條件下接種前述一級固體培養得到的菌絲體，每200ml液體培養基接種菌絲體3.5g，避光20?24°C，130?150轉/min搖床培養48小時，出現小米粒樣菌絲球時即完成二級擴種液體培養；
[0041]3)蟲草固體生產性培養:
[0042]①製備固體生產性培養基:培養基成分配比為:大米llOOg、蒸懼水1300g、蛋白腖 13g、葡萄糖 19g、KH2PO4 2.5g,7H20 -MgSO4 1.2g、蛋氨酸硒 0.eg.VB^.5mg，測得 pH 值為6.8 ;先將除大米以外的各成分用蒸餾水溶解，再將大米和營養液按重量比1:1.2的比例裝入培養瓶中，封口，95-100°C蒸35分鐘，冷卻至室溫待用；
[0043]②接種、培養:用步驟I製備的固體培養基在無菌條件下接種前述二級擴種液體培養得到的培養液，每10g大米接種0.5ml培養液；放入培養暗室18?23°C避光培養8_10天；培養基表面長出白色菌絲時放入自然光或人工光照，18?23°C環境生長40-55天，當子座長齊、尖端膨大、孢子形成時即可採收。
[0044]利用中國藥典中的方法測得培植出的北蟲草中每10g中蟲草素含量為210.5mg ；測得硒含量為0.31mg/kg，達到了野生蟲草的硒含量水平。
【權利要求】
1.一種高蟲草素富硒蟲草培植方法，其特徵在於，包括如下步驟: 1)蟲草菌一級固體培養: ①製備斜面固體培養基:培養基成分配比為:土豆100-140g、葡萄糖10-14g、牛肉膏4-6g、KH2PO40.4-0.6g、MgSO40.2-0.3g、蛋氨酸硒 0.008-0.012g、瓊脂 8_12g ;先將土豆煮熟，搗爛，加入前述其餘成分，加熱煮沸讓瓊脂完全融化，加蒸懼水至500ml,攪拌均勻裝制斜面，滅菌，冷至室溫準備接種； ②接種、培養:用步驟I製備的斜面固體培養基在無菌條件下接種蟲草的菌絲體，避光24°C培養3-4天，再在20°C培養4-5天，然後在18?22°C自然光照24小時，待用； 2)蟲草菌二級擴種液體培養: ①製備二級液體培養基:用蒸餾水配製液體培養基，各組分含量為:蛋白腖13_17g/L、葡萄糖 18-22g/L、KH2PO40.8-1.2g/L，7H20.MgSO40.4-0.6g/L、VB^-^mg/L,蛋氨酸硒0.04-0.06g/L,滅菌待用； ②接種、培養:用步驟I製備的液體培養基在無菌條件下接種前述一級固體培養得到的菌絲體，避光20?24°C，搖床培養，出現小米粒樣菌絲球時即完成二級擴種液體培養； 3)蟲草固體生產性培養: ①製備固體生產性培養基:培養基成分配比為:大米800-1200g、蒸餾水1100-1300g、蛋白腖 10-14g、葡萄糖 16-20g、KH2PO4L 5-2.5g、7H20.MgSO40.8-1.2g、蛋氨酸硒 0.4-0.6g、VB1L 5-2.5mg ;先將除大米以外的各成分用蒸餾水溶解配製成為營養液，再將大米和營養液按比例裝入培養瓶中，封口，蒸至大米熟，冷卻至室溫待用； ②接種、培養:用步驟I製備的固體培養基在無菌條件下接種前述二級擴種液體培養得到的培養液；放入培養暗室18?23°C避光培養；培養基表面長出白色菌絲時放入自然光或人工光照，18?23°C環境生長，當子座長齊、尖端膨大、孢子形成時即可採收。
2.根據權利要求1所述的高蟲草素富硒蟲草培植方法，其特徵在於，所述步驟2蟲草菌二級擴種液體培養中，接種後搖床培養為130?150轉/min搖床培養48小時。
3.根據權利要求1所述的高蟲草素富硒蟲草培植方法，其特徵在於，所述步驟2中的蟲草菌二級擴種液體培養步驟中，每200ml液體培養基接種一級固體培養得到的菌絲體3-3.5g。
4.根據權利要求1所述的高蟲草素富硒蟲草培植方法，其特徵在於，所述步驟3中蟲草固體生產性培養，大米和營養液按重量比1:1.2的比例裝入培養瓶中，封口，95-100°C蒸30-40分鐘，冷卻至室溫待用。
5.根據權利要求1所述的高蟲草素富硒蟲草培植方法，其特徵在於，所述步驟3中蟲草固體生產性培養，用固體培養基接種二級擴種液體培養得到的培養液，接種量為每10g大米接種0.5ml培養液。
6.根據權利要求1所述的高蟲草素富硒蟲草培植方法，其特徵在於，所述步驟3中蟲草固體生產性培養，接種後放入培養暗室18?23°C避光培養8-10天。
【文檔編號】A01G1/04GK104396571SQ201410775786
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年12月15日 優先權日:2014年12月15日
【發明者】梁金權 申請人:重慶綜藝製藥有限公司