一種蛹蟲草花生及其製備方法
2023-12-08 15:59:11 2
專利名稱：一種蛹蟲草花生及其製備方法
技術領域：
本發明屬於食品製備技術領域，具體涉及一種蛹蟲草花生及其製備方法。
背景技術：
蛹蟲草(Cordyceps militaris)是子囊菌亞門，核菌綱，肉座菌目，麥角菌科,蟲草屬一個種，與冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)為同屬異種真菌,通常稱為北蟲草。由於與冬蟲夏草具有相同的藥用和滋補功能，而且比冬蟲夏草更易於進行人工栽培，因此蛹蟲草被選為冬蟲夏草的最佳替代品而進行大量的人工培育，並作為新資源食品和一類新藥已獲衛生部和國家食品藥品監督管理局的批准進入市場。蛹蟲草的活性成分包括蟲草菌素、腺苷、蟲草多糖和蟲草酸等，其中對蟲草菌素的研究，成為近年國內外的焦點。蟲草菌素(Cordycepin)又稱蟲草素，即3'-脫氧腺苷(3' -Deoxyadenosine),是一種核苷類抗生素,具有多種生理活性,如抑菌、抗腫瘤、抑制病毒作用，以及增強免 疫功能和防治心腦血管疾病等作用。蟲草菌素的特殊醫療保健功能已經引起國內外專家的高度重視，已有不少以蟲草素為主的保健品、保健食品、化妝品、藥品投放市場。據報導，在美國已將蟲草素作為抗癌抗病毒新藥進入臨床試用。在我國也已將由蟲草素合成的治療白血病的新藥進入一期臨床試用。人工培養的蛹蟲草的純子實體，作為食品用於人體，經研究是完全的，可廣泛用於保健食品、保健膳食和其它滋補類食品，例如做成蛹蟲草飲料、保健酒、營養保健醋等，但大都是以子實體或固體培養基浸提液為原料，工藝相對複雜，成本較高。隨著食品加工技術的進步和人們對蟲草研究的不斷深入，蟲草功能食品應向多元化的方向發展，加工更精細、配方更科學、功能更明確、效果更顯著。而通過生物轉化的途徑，使原來食品中沒有的蟲草菌素產生出來，且對其進行加工成食品，符合21世紀人們對食品的要求，發展前景廣闊。專利CN101171968A公開了通過穀類固態發酵冬蟲夏草和靈芝產品及其製造方法，是利用薏仁、米、小麥、燕麥等不同的穀類或飼料作為冬蟲夏草或靈芝固態發酵的發酵產物，將該發酵產物乾燥磨成粉狀，另外可再加入谷粉及調味劑，即可製成富含膳食纖維、多糖等保健成分，而且方便消費者衝泡飲用的冬蟲夏草或靈芝薏仁粉、米粉、小麥粉或燕麥粉。目前，以蛹蟲草真菌對花生進行生物轉化，即在花生的固體發酵中產生蟲草菌素的研究，在國內外未見有報導。在中國全面建設小康社會之時，如果通過花生的生物轉化及其系列加工產品的途徑攝取蟲草菌素等功效成分，對提高人類健康，具有重要意義，前景十分廣闊。
發明內容
本發明的目的是提供一種蛹蟲草花生及其製備方法，從而彌補現有技術的不足。本發明的蛹蟲草花生是以花生作為固體培養基，接種蛹蟲草菌培養製備的。
本發明的蛹蟲草花生，其一種製備方法如下:將花生用水進行浸泡，浸泡後的花生進行滅菌，冷卻後接入蛹蟲草菌的種子液進行發酵培養，再發酵結束後風乾得到蛹蟲草花生。本發明的蛹蟲草菌的種子液，其製備用的種子培養基組成如下:馬鈴薯18 22%,葡萄糖I 3%，蛋白腖0.1 0.5%，磷酸二氫鉀0.03 0.1%，硫酸鎂0.05 0.5%，餘量為水。上述的種子液，還添加有中華真地鱉肽混合物,添加的濃度為0.005%。所述的中華真地鱉肽混合物，是將中華真地鱉粉加入蒸餾水後，用木瓜蛋白酶進行酶解，酶解液過濾乾燥製備的。上述的發酵培養，是在22 °C下暗室培養5 8天後，接著在明室培養3 6天完成發酵。為了獲得更好的發酵效果，對浸泡的花生在滅菌前用酶進行了處理；所述的用酶進行處理，是對浸泡的花生加入添加有纖維素酶的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩衝液進行酶解；所述的纖維素加酶量為8000 12000U/g花生；50°C下進行酶處理I 3小時。蛹蟲草在花生中進行生物轉化時，花生的種皮對其有抑制作用。因此，對浸泡花生進行去皮處理，能夠提高其發酵後的蟲草菌素含量。故通過纖維素酶處理，達到黃豆去皮的目的，從而提高蛹蟲草黃豆中的蟲草菌素轉化量。
具體實施例方式本發明的蛹蟲草菌(Cordyceps militaris)可選用任一食品領域中應用的蛹蟲草菌的菌種。而且，為了使蛹蟲草菌在培養基中的活力更高，本發明對培養基的組分進行了長期的研究，提供一種能明顯增強蛹蟲草菌活力的培養基。下面結合實施例對本發明的蛹蟲草花生及其製備方法進行詳細的描述。實施例1I)花生浸泡稱取花育23號品種花生250g，加入500g的水，在室溫下浸泡12h，使浸泡後的花生含水量控制在100 120%範圍內。2)滅菌將浸泡後的花生浙幹後，分裝到三角瓶中，蓋好塞子，在121°C溫度下，滅菌30分鐘，冷卻後待接種。3)蛹蟲草菌種斜面培養將保存好的蛹蟲草菌種在斜面培養基上接種，在23°C的溫度下，培養7 9天，其斜面培養基的組成為:馬鈴薯18 22%，葡萄糖I 3%，蛋白腖0.1 1.0%，磷酸二氫鉀
0.1 0.5%，硫酸鎂0.1 0.3%，維生素B1 0.008 0.02%,瓊脂I 3%。其中具體的一種配方如下:馬鈴薯20%，葡萄糖2%，蛋白腖0.5%，磷酸二氫鉀0.3%，硫酸鎂0.25%，維生素B10.01%,瓊脂2%。配製的方法，是將20g馬鈴薯切塊，添加IOOmL水，煮沸20分鐘，在煮沸和冷卻過程中不斷補水，最終調至IOOmL後進行過濾。將2g葡萄糖、0.5g蛋白腖、0.3g磷酸二氫鉀、0.25g硫酸鎂，0.0lg維 生素B1, 2g瓊脂溶於IOOmL馬鈴薯濾液。
4)蛹蟲草液體種子液的培養取面積達10 30 mm 2的斜面蛹蟲草菌種，接到種子液培養基中，在20 25°C的溫度下，培養2 6天得到種子液。其液體種子培養基的質量百分比組成為:馬鈴薯18 22%，葡萄糖I 3%，蛋白腖0.1 0.5%，磷酸二氫鉀0.03 0.1%，硫酸鎂0.05 0.5%。其中具體的一種配方如下:馬鈴薯20%，葡萄糖2%，蛋白腖0.2%，磷酸二氫鉀
0.05%，硫酸鎂0.1%。配製的方法，是將20g馬鈴薯切塊，添加IOOmL水，煮沸20分鐘，在煮沸和冷卻過程中不斷補水，最終調至IOOmL後進行過濾。將2g葡萄糖、0.2g蛋白腖、0.05g磷酸二氫鉀、0.1g硫酸鎂，溶於IOOmL馬鈴薯濾液。5)蛹蟲草液體種子液的擴大培養將上述蛹蟲草 液體種子液，按8 15%的體積比接到擴大液體種子液培養基中，在20 25°C的溫度下，進行蛹蟲草擴大培養2 6天。為了更好的提高培養的蛹蟲草菌的發酵活力，在種子液培養基中添加中華真地鱉肽混合物，添加質量百分比濃度0.005%,即IOOml培養基中添加0.005g的中華真地鱉肽混合物。其中中華真地鱉肽混合物的一種製備方法如下:取20g經冷凍乾燥後的中華真地鱉粉，加入400ml蒸餾水，用10%Na0H調節pH值至
8.2，再按300U/g原料加入木瓜蛋白酶，在37°C下酶解5h。將酶解液在80°C下，滅酶15min後，以10000r/min的轉速離心15min，取上清液，得到中華真地鱉酶解液。為獲得低分子量肽混合物，將酶解液的上清液用2500Da分子量超濾膜進行過濾，除去大分子蛋白質，收集濾過液，再用250Da分子量超濾膜進行過濾，除去小分子鹽類，收集截留液進行濃縮，冷凍乾燥，獲得分子量小於2500Da的中華真地鱉多肽混合物。6)蛹蟲草花生的固體培養將培養好的蛹蟲 草液體擴大種子液，按10 25% (v/w)的接種量接到滅菌後冷卻好的花生上，在22°C下暗室培養5 8天後，接著在明室培養3 6天；所述的明室的光亮度就是IS-RDU3型號恆溫震蕩器中設置的白熾燈功率16瓦。在明室培養過程中適當進行攪拌。7)乾燥發酵結束後的蛹蟲草花生，呈黃色 橙黃色，用自然風進行陰乾，得到蛹蟲草花生成品。8)蟲草菌素含量測定方法採用高效液相色譜法。蟲草菌素的提取:將粉碎好的蛹蟲草花生，過篩(60目)後，按1:20的料液比添加20%的乙醇，在超聲器(40KHz，40°C)中進行提取30 60分鐘。蟲草菌素提取結束後，在IOOOOrpm轉速下離心10分鐘。將利用0.22Mm濾膜過濾後的上清液作為測定蟲草菌素的待測樣品。液相條件為柱子使用KnauerC18 ;柱溫，30°C ;檢測波長，260nm ;流動相，乙腈:7欠=10:90 ;流速:0.8mL/min。在本實施例中製備的蛹蟲草花生中的蟲草菌素含量在9 12g/kg，與大米蛹蟲草和蠶蛹冬蟲夏草中的蟲草菌素含量相比分別提高至2 5倍和15 19倍。而通過添加中華真地鱉肽混合物，使後續製備的花生中的蟲草菌素得到增加，檢測結果表明，添加中華真地鱉肽混合物比不添加的情況下，花生中的蟲草菌素含量提升30 70%ο實施例2I)花生浸泡稱取花育23號品種花生250g，按1:2 1:5的比例加水，在室溫下浸泡10 16h，使花生含水量控制在100 120%。2)花生纖維素酶處理將浸泡好的花生，浙幹後裝入到三角瓶中按1:3 5料液比添加檸檬酸-磷酸氫二鈉緩衝液，在50°C下進行纖維素酶處理I 3小時，加酶量為8000 12000U/g花生，用流水衝洗10 20分鐘後浙幹，在陰乾處乾燥5 8小時。纖維素酶來源於綠色木酶，活力為 11000U/mg。3)滅菌10 15目去皮花生顆粒，分裝到三角瓶中，蓋好塞子，在121 °C溫度下，滅菌30分鐘，冷卻後待接種。4)蛹蟲草菌種斜面培養將保存好的蛹蟲草菌種在斜面培養基上接種，在23°C的溫度下，培養7 9天，其斜面培養基的組成為:馬鈴薯18 22%，葡萄糖I 3%，蛋白腖0.1 1.0%，磷酸二氫鉀
0.1 0.5%，硫酸鎂0 .1 0.3%，維生素B1 0.008 0.02%,瓊脂I 3%。其中具體的一種配方如下:馬鈴薯20%，葡萄糖2%，蛋白腖0.5%，磷酸二氫鉀0.3%，硫酸鎂0.25%，維生素B10.01%,瓊脂2%。配製的方法，是將20g馬鈴薯切塊，添加IOOmL水，煮沸20分鐘，在煮沸和冷卻過程中不斷補水，最終調至IOOmL後進行過濾。將2g葡萄糖、0.5g蛋白腖、0.3g磷酸二氫鉀、0.25g硫酸鎂，0.0lg維生素B1, 2g瓊脂溶於IOOmL馬鈴薯濾液。5)蛹蟲草液體種子液的培養取面積達10 30 mm 2的斜面蛹蟲草菌種，接到種子液培養基中，在20 25°C的溫度下，培養2 6天得到種子液。其液體種子培養基的質量百分比組成為:馬鈴薯18 22%，葡萄糖I 3%，蛋白腖0.1 0.5%，磷酸二氫鉀0.03 0.1%，硫酸鎂0.05 0.5%。其中具體的一種配方如下:馬鈴薯20%，葡萄糖2%，蛋白腖0.2%，磷酸二氫鉀
0.05%，硫酸鎂0.1%。配製的方法，是將20g馬鈴薯切塊，添加IOOmL水，煮沸20分鐘，在煮沸和冷卻過程中不斷補水，最終調至IOOmL後進行過濾。將2g葡萄糖、0.2g蛋白腖、0.05g磷酸二氫鉀、0.1g硫酸鎂，溶於IOOmL馬鈴薯濾液，並加入0.005g的中華真地鱉肽混合物，其中中華真地鱉肽混合物按照實施例1中的方法製備的。6)蛹蟲草液體種子液的擴大培養將上述蛹蟲草液體種子液，按8 15%的體積比接到擴大液體種子液培養基中，在20 25°C的溫度下，進行蛹蟲草擴大培養2 6天。7)蛹蟲草花生的固體培養將培養好的蛹蟲草液體擴大種子液，按10 25% (v/w)的接種量接到滅菌後冷卻好的花生上，在22°C下暗室培養5 8天後，接著在明室培養3 6天；所述的明室的光亮度就是IS-RDU3型號恆溫震蕩器中設置的白熾燈功率16瓦。在明室培養過程中適當進行攪拌。
8)乾燥發酵結束後的蛹蟲草花生，呈黃色 橙黃色，用自然風進行陰乾，得到蛹蟲草花生成品。利用去皮花生製備的蛹蟲草花生中的蟲草菌素含量在13 16g/kg,與未去皮花生相比，蟲草菌素含量提升30 40%。本發明製備的蛹蟲草花生提高免疫及抗氧化效果檢測:小鼠分別餵食含有O (基礎日糧)、3%、6%、12%蛹蟲草花生(實施例2製備的)以及12%普通花生的日糧，以小鼠血漿和肝臟中MDA含量，CAT、GSH-Px、T-SOD活力及抑制羥自由基能力為指標，研究其體內抗氧化活性(小鼠注射D-半乳糖建立衰老模型)；測定血漿和肝臟組織中免疫球蛋白G、M含量及細胞因子白細胞介素4、Y-幹擾素含量，研究小鼠免疫功能。結果表明，添加蛹蟲草花生可以顯著提高小鼠血漿和肝臟中CAT、GSH-Px、T-SOD (P
<0.05)活力，抑制羥自由基能力以及IgG、IgM、IL-4、IFN-Y (P < 0.05)的含量，能夠顯著提高小鼠脾臟和肝臟指數以及顯著降低MDA (P < 0.05)含量，具有延緩衰老以及提高機體免疫功能 的作用。
權利要求
1.一種蛹蟲草花生，所述的蛹蟲草花生是將花生用水進行浸泡，浸泡後的花生進行滅菌，接入蛹蟲草菌的種子液進行發酵培養，再風乾得到的。
2.如權利要求1所述的蛹蟲草花生，其特徵在於所述的蛹蟲草菌的種子液，其製備用的種子培養基組成如下:馬鈴薯18 22%，葡萄糖I 3%，蛋白腖0.1 0.5%，磷酸二氫鉀0.0l 0.06%，硫酸鎂0.1 0.3%，餘量為水。
3.如權利要求2所述的蛹蟲草花生，其特徵在於，所述的種子培養基添加有中華真地鱉肽混合物，添加的濃度為0.005%。
4.如權利要求3所述的蛹蟲草花生，其特徵在於所述的中華真地鱉肽混合物，是將中華真地鱉粉加入蒸餾水後，用木瓜蛋白酶進行酶解，酶解液過濾乾燥製備的。
5.如權利要求1所述的蛹蟲草花生，其特徵在於所述的發酵培養，是在22°C下暗室培養5 8天後，接著在明室培養3 6天完成的。
6.如權利要求1所述的蛹蟲草花生，其特徵在於所述的浸泡的花生在滅菌前用酶進行了處理，是對浸泡的花生加入添 加有纖維素酶的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩衝液進行酶解。
7.如權利要求6所述的蛹蟲草花生，其特徵在於所述的纖維素加酶量為8000 12000萬U/g花生；50°C下進行酶處理I 3小時。
全文摘要
本發明涉及一種蛹蟲草花生，是將花生用水進行浸泡，浸泡後的花生進行滅菌，冷卻後接入蛹蟲草菌的種子液進行發酵培養，再發酵結束後風乾得到蛹蟲草花生。蛹蟲草在花生中進行生物轉化時，花生的種皮對其有適當的抑制作用。因此，對浸泡花生進行去皮處理，能夠提高其發酵後的蟲草菌素含量。另外，增大而均勻接種面積，可以提高蛹蟲草蟲草菌素的生物轉化量。故通過纖維素酶處理，提高對浸泡花生的去皮率，並將去皮後的花生，提高蛹蟲草花生中的蟲草菌素轉化量。
文檔編號A01G1/04GK103229666SQ201310151228
公開日2013年8月7日 申請日期2013年4月27日 優先權日2013年4月27日
發明者樸美子, 王瑩, 程凡升, 郭芳言 申請人:青島農業大學