一種用於提高人體免疫功能的藥物組合物及製備方法和用途與流程
2023-12-09 05:24:26 2
本發明屬於藥物領域，涉及一種用於提高人體免疫功能的藥物組合物，特別是涉及一種以中藥飲片提取物為原料製成的用於提高人體免疫力的藥物組合物及製備方法。
背景技術：
免疫力是人體自身的防禦機制，是人體識別和消滅外來侵入的任何異物(病毒、細菌等)，處理衰老、損傷、死亡、變性的自身細胞以及識別和處理體內突變細胞和病毒感染細胞的能力。當人體免疫功能低下時，就極為容易招致細菌、病毒、真菌等感染，人體就容易出現疲勞、感冒等一系列疾病。茯苓[poriacocos(schw.)wolf]是一種真菌類中藥，多寄生於松科植物赤松或馬尾松等樹根上。味甘、淡、平，歸心、脾、腎經，具有利水滲溼、健脾和胃、寧心安神等功效。茯苓的主要化學成分為多糖，三萜，脂肪酸，甾醇，酶等，其中多糖含量約為84.2％，含β-茯苓聚糖(β-pachymose)、葡萄糖、蔗糖及果糖等成分。現代研究表明，茯苓多糖具有顯著增加小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬率與吞噬指數的作用，能降低點帶石斑魚血清、白蛋白/球蛋白(a/g)值，提高血清補體c3含量，提高血液白細胞數和白細胞吞噬率，能提高點帶石斑魚非特異性免疫力；對小鼠的非特異性免疫功能和細胞免疫功能有明顯地增強作用。地不容為防己科植物地不容(sephaniadelavayidiels)的塊根。主要分布於雲南及四川等地，具有清熱解毒、消痰、截瘧、止痛的功用。據現代研究報導，地不容含有千金藤素、輪環藤寧、異紫堇定鹼、l-箭毒鹼等4種生物鹼，其中千金藤素具有具有抗結核、抗菌、抗麻風、抗腫瘤、升高白細胞及促進免疫功能等作用。
技術實現要素：
本發明的目的在於解決現有技術的不足，提供一種組成簡單，且由天然藥用原料的有效成分組合而成的具有提高人體免疫功能的藥物組合物。該藥物組合物具有療效好，無毒副作用，不易產生耐受性，服用方便，普遍適用於免疫功能低下的患者。
本發明的另一個目的在於提供一種該藥物組合物的製備方法和用途。本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：一種用於提高人體免疫功能的藥物組合物，其特徵在於：它是由以下組分及重量比的原料組成：茯苓多糖5～50重量份，地不容總生物鹼1～30重量份。優選地，茯苓多糖10～45重量份，地不容總生物鹼3～25重量份。優選地，茯苓多糖15～40重量份，地不容總生物鹼5～20重量份。優選地，茯苓多糖20～35重量份，地不容總生物鹼8～15重量份。優選地，茯苓多糖25～30重量份，地不容總生物鹼10～12重量份。優選地，茯苓多糖8重量份，地不容總生物鹼1重量份。
一種製備上述任一藥物組合物的製備方法，其特徵在於：它包括以下步驟：
s1：稱取原料：按上述組分及重量比稱取茯苓多糖和地不容總生物鹼；
s2：將原料混合均勻後，加入藥學上可接受的輔料製備成藥學上常用的藥物製劑。
本發明的藥物組合物可以根據製藥領域的常規方法製備成任何一種藥劑學上所述的劑型；本發明的藥物組合物可以通過口服、吸入或腸外給藥的方式施用於患者。口服給藥時可以製備成片劑、膠囊劑、丸劑、粉劑、顆粒劑、糖漿或口服液等；在腸外給藥時可以製備成凍乾粉針及注射液等。
本發明所述的藥學上可接受的輔料包括澱粉、硬脂酸鎂、糊精和微晶纖維素。
本發明還提供了該藥物組合物在製備用於提高人體免疫功能藥物中的用途。
為使上述劑型能夠實現，需在製備這些劑型時加入藥學可接受的輔料，例如：填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑等，填充劑包括：澱粉、預膠化澱粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等，崩解劑包括：澱粉、預膠化澱粉、微晶纖維素、羧甲基澱粉鈉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉等，潤滑劑包括：硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化矽等，助懸劑包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等，粘合劑包括，澱粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等，甜味劑包括：糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等，矯味劑包括：甜味劑及各種香精，防腐劑包括：尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等。
本發明所述的茯苓多糖是採用常規水提法、索氏提取等方法從中藥飲片茯苓中提取得到。地不容總生物鹼提取方法如下：稱取地不容藥材粗粉，先用0.5％的稀硫酸溶液進行溶脹1.5-2h，溶脹完畢後，將藥材逐層放入滲漉筒中，緩慢加入0.5％的稀硫酸溶液浸漬12h，然後開始滲漉，滲漉速度為5ml/min，當滲漉至滲漉液與碘化鉍鉀試劑反應無沉澱產生時，停止滲漉，收集滲漉液，再用濃氨水調滲漉液ph值至9～10，產生大量沉澱，抽濾，得沉澱於真空乾燥器中在40℃下乾燥至恆重，得到地不容總生物鹼。為了提高地不容總生物鹼的純度，可以進一步對地不容總生物鹼進行分離純化除去雜質。
本發明的有益效果是：
(1)本發明組合物為茯苓和地不容有效成分的提取物，其組成簡單，無須煎煮服用，在製備成片劑、膠囊、丸劑、顆粒劑、口服液後便於攜帶，且服用方便。
(2)本發明組合物為茯苓和地不容有效成分的提取物，與天然藥物配方相比其雜質含量相對較少，作用機制更加明確，在產業化時則能更好的控制產品質量。
(3)本發明組合物經藥效實驗驗證表明茯苓多糖和地不容總生物鹼配伍後具有不同程度增加脾臟係數和胸腺係數，表明本發明藥物組合物具有提供人體免疫功能的作用。同時，本發明藥物組合物具有較好的兼顧性，對血脂及炎性腫脹均具有較好的治療作用。
(4)茯苓多糖、地不容總生物鹼在單獨應用時對高脂血症的相關指標改善作用不明顯，但是兩種成分按本發明比例混合後，能夠明顯降低高脂模型小鼠血脂水平，對高脂血症疾病具有良好的治療作用，表明茯苓多糖和地不容總生物鹼按本發明比例配伍後具有協同增效的作用。
具體實施方式
下面結合實施例進一步詳細描述本發明的技術方案，但本發明的保護範圍不局限於以下所述。
實施例1：
稱取原料茯苓多糖5g，地不容總生物鹼1g，加入輔料澱粉10g制粒，硬脂酸鎂2g，糊精10g、微晶纖維素10g，均勻製得顆粒，壓片，得到片劑。
實施例2：
稱取原料茯苓多糖50g，地不容總生物鹼30g，加入輔料澱粉100g制粒，硬脂酸鎂10g，糊精100g、微晶纖維素100g，均勻製得顆粒，裝入膠囊，得到膠囊劑。
實施例3：
稱取原料茯苓多糖10g，地不容總生物鹼3g，加入輔料澱粉15g制粒，硬脂酸鎂2g，糊精15g、微晶纖維素15g，均勻製得顆粒，壓片，得到片劑。
實施例4：
稱取原料茯苓多糖45g，地不容總生物鹼25g，加入輔料澱粉80g制粒，硬脂酸鎂4g，糊精80g、微晶纖維素80g，均勻製得顆粒，裝入膠囊，得到膠囊劑。
實施例5：
稱取原料茯苓多糖15g，地不容總生物鹼5g，加入輔料澱粉20g制粒，硬脂酸鎂2g，糊精20g、微晶纖維素20g，均勻製得顆粒，裝入膠囊，得到膠囊劑。
實施例6：
稱取原料茯苓多糖40g，地不容總生物鹼20g，加入輔料澱粉60g制粒，硬脂酸鎂3g，糊精60g、微晶纖維素60g，均勻製得顆粒，壓片，得到片劑。
實施例7：
稱取原料茯苓多糖20g，地不容總生物鹼8g，加入輔料澱粉30g制粒，硬脂酸鎂2g，糊精30g、微晶纖維素30g，均勻製得顆粒，壓片，得到片劑。
實施例8：
稱取原料茯苓多糖35g，地不容總生物鹼15g，加入輔料澱粉50g制粒，硬脂酸鎂4g，糊精50g、微晶纖維素50g，均勻製得顆粒，裝入膠囊，得到膠囊劑。
實施例9：
稱取原料茯苓多糖25g，地不容總生物鹼10g，加入輔料澱粉35g制粒，硬脂酸鎂3g，糊精35g、微晶纖維素35g，均勻製得顆粒，壓片，得到片劑。
實施例10：
稱取原料茯苓多糖30g，地不容總生物鹼12g，加入輔料澱粉50g制粒，硬脂酸鎂2g，糊精50g、微晶纖維素50g，均勻製得顆粒，裝入膠囊，得到膠囊劑。
實施例11：
稱取原料茯苓多糖28g，地不容總生物鹼10g，加入輔料澱粉40g制粒，硬脂酸鎂3g，糊精40g、微晶纖維素40g，均勻製得顆粒，壓片，得到片劑。
實施例12：
稱取原料茯苓多糖10g，地不容總生物鹼50g，加入輔料澱粉200g制粒，硬脂酸鎂4g，糊精100g、微晶纖維素100g，均勻製得顆粒，壓片，得到片劑。
實施例13：
稱取原料茯苓多糖20g，地不容總生物鹼60g，加入輔料澱粉300g制粒，硬脂酸鎂4g，糊精100g、微晶纖維素100g，均勻製得顆粒，壓片，得到片劑。
實施例14：
稱取原料茯苓多糖30g，地不容總生物鹼80g，加入輔料澱粉300g制粒，硬脂酸鎂4g，糊精100g、微晶纖維素100g，均勻製得顆粒，壓片，得到片劑。
實施例15：
稱取原料茯苓多糖50g，地不容總生物鹼100g，加入輔料澱粉600g制粒，硬脂酸鎂8g，糊精200g、微晶纖維素150g，均勻製得顆粒，壓片，得到片劑。
實施例16：
稱取原料茯苓多糖60g，地不容總生物鹼120g，加入輔料澱粉700g制粒，硬脂酸鎂8g，糊精220g、微晶纖維素200g，均勻製得顆粒，壓片，得到片劑。
實施例17：
稱取原料茯苓多糖80g，地不容總生物鹼140g，加入輔料澱粉800g制粒，硬脂酸鎂10，糊精240g、微晶纖維素220g，均勻製得顆粒，壓片，得到片劑。
實施例18：
稱取原料茯苓多糖100g，地不容總生物鹼150g，加入輔料澱粉1000g制粒，硬脂酸鎂15，糊精300g、微晶纖維素300g，均勻製得顆粒，壓片，得到片劑。
實施例19：
稱取原料茯苓多糖10g，地不容總生物鹼50g，加入輔料澱粉200g制粒，硬脂酸鎂4g，糊精100g、微晶纖維素100g，均勻製得顆粒，裝入膠囊，得到膠囊劑。
實施例20：
稱取原料茯苓多糖20g，地不容總生物鹼60g，加入輔料澱粉300g制粒，硬脂酸鎂4g，糊精100g、微晶纖維素100g，均勻製得顆粒，裝入膠囊，得到膠囊劑。
實施例21：
稱取原料茯苓多糖30g，地不容總生物鹼80g，加入輔料澱粉300g制粒，硬脂酸鎂4g，糊精100g、微晶纖維素100g，均勻製得顆粒，裝入膠囊，得到膠囊劑。
實施例22：
稱取原料茯苓多糖50g，地不容總生物鹼100g，加入輔料澱粉600g制粒，硬脂酸鎂8g，糊精200g、微晶纖維素150g，均勻製得顆粒，裝入膠囊，得到膠囊劑。
實施例23：
稱取原料茯苓多糖60g，地不容總生物鹼120g，加入輔料澱粉700g制粒，硬脂酸鎂8g，糊精220g、微晶纖維素200g，均勻製得顆粒，裝入膠囊，得到膠囊劑。
實施例24：
稱取原料茯苓多糖80g，地不容總生物鹼10g，加入輔料澱粉100g制粒，硬脂酸鎂10，糊精100g、微晶纖維素100g，均勻製得顆粒，裝入膠囊，得到膠囊劑。
實施例25：
稱取原料茯苓多糖100g，地不容總生物鹼150g，加入輔料澱粉1000g制粒，硬脂酸鎂15，糊精300g、微晶纖維素300g，均勻製得顆粒，裝入膠囊，得到膠囊劑。
上述片劑、膠囊劑均可以按照常規製備方法製備成規格為5mg/片、10mg/片、20mg/片、0.5g/片，或製備成規格為5mg/粒、10mg/粒、20mg/粒、0.5g/粒等不同規格。
下面通過具體的藥學試驗來證明本發明的有益效果：
一、對環磷醯胺所致免疫功能低下小鼠免疫功能的影響
1材料與方法
1.1實驗藥物
茯苓多糖和地不容總生物鹼分別是從中藥飲片茯苓和地不容中提取得到。注射用環磷醯胺(baxteroncologygmbh公司)。
1.2實驗試劑
小鼠igg、igm檢測試劑盒(bioscience公司)；trizol(invitrogen公司)。
1.3實驗動物及場地
昆明小鼠，普通級，雄性，體重20～25g，四川省醫學科學院實驗動物研究所，川實動管質第15號。實驗場地與一般實驗室隔離，陽光充足，通風良好，溫度控制在25℃，相對溼度40％-70％，室內安裝有紫外線消毒燈。
1.4實驗儀器
多功能酶標儀(tecan公司，型號:geniospro)，pcr儀(bio-rad公司，型號:ptc-100)。生物安全櫃bhc-1300ⅱa2：上海精宏實驗設備有限公司；電熱鼓風乾燥箱cs101-2ebn：重慶四達實驗儀器有限公司恆達儀器廠；培養箱a2型：力康生物醫療科技控股有限公司；電子恆溫水箱：北京中興偉業儀器有限公司；顯微鏡bx-43：olympus。
1.5統計學處理
計量資料結果均以表示，各組間比較，先進行方差齊性檢驗，如方差齊則按多樣本兩兩比較的lsd檢驗，如方差不齊則按h檢驗，進行秩變換分析；數據均用spss21.0軟體處理。
2實驗方法及結果
選用健康雄性昆明小鼠130隻，雌雄各半，按體重隨機分為13組，每組10隻，即正常對照組、模型組，茯苓多糖組、地不容總生物鹼組，混合物a組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝1:1組)，混合物b組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝1:3組)，混合物c組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝1:5組)，混合物d組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝1:8組)，混合物e組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝1:10組)，混合物f組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝3:1組)，混合物g組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝5:1組)，混合物h組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝8:1組)，混合物i組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝10:1組)。
正常動物對照組:灌胃生理鹽水，並於實驗開始後的第5、第7、第9天給動物皮下注射生理鹽水10ml/kg。模型組：灌胃生理鹽水，並於實驗開始後的第5、第7、第9天給動物皮下注射環磷醯胺，80mg/kg。茯苓多糖組、地不容總生物鹼組，混合物a組、混合物b組、混合物c組、混合物d組、混合物e組、混合物f組、混合物g組、混合物h組和混合物i組均按劑量100mg/kg給藥，連續給藥10天，對照組與模型組組灌胃等體積生理鹽水，每天1次。末次給藥24小時後，動物摘眼球取血，待血液凝固後離心分離血清，血清先經緩衝液稀釋100000倍，然後採用elisa方法進行測定血清igg和igm水平，嚴格按照說明書操作。動物摘眼球取血後，頸椎脫臼處死，立即摘取脾臟、胸腺，除去器官周圍的脂肪結締組織，吸盡臟器表面血液，用精密電子天平稱量臟器質量。按照臟器係數公式計算。臟器係數計算公式：臟器係數＝臟器質量/體質量x100％。
模型組環磷醯胺80mg/kg明顯降低小鼠血清igg和igm水平，說明造模成功。單獨應用茯苓多糖時具有升高小鼠血清igg和igm水平，具有統計學意義。單獨應用地不容總生物鹼時小鼠血清igg和igm水平有升高趨勢，但是無統計學意義。當茯苓多糖和地不容總生物鹼按1:1、1:3、1:5、1:8、3:1、5:1、8:1配伍後，按照相同給藥劑量100mg/kg給藥，能明顯提升小鼠血清igg和igm水平，具有統計學意義。其中，茯苓多糖和地不容總生物鹼按5：1和8:1配伍時效果最優。結果見表1。
表1各實驗組對環磷醯胺所致免疫功能低下模型小鼠血清igg和igm水平的影響
註：與空白組比較，**p<0.01；*p<0.05；與模型組比較，##p<0.01；#p<0.05。
與空白組比較，模型組脾臟係數和胸腺係數明顯降低，經過各組藥物治療後，茯苓多糖和地不容總生物鹼配伍後有不同程度增加脾臟係數和胸腺係數，茯苓多糖和地不容總生物鹼按5：1和8:1作用最為明顯，具有顯著性差異(p＜0.05)。結果見表2。
表2各實驗組對環磷醯胺所致免疫功能低下模型小鼠脾臟係數和胸腺係數的影響
註：與空白組比較，**p<0.01；*p<0.05；與模型組比較，##p<0.01；#p<0.05。
二、對高脂乳劑所致高脂模型小鼠血脂水平的影響
選用健康雄性昆明小鼠130隻，雌雄各半，按體重隨機分為13組，每組10隻，即正常對照組、模型組，茯苓多糖組、地不容總生物鹼組，混合物a組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝1:1組)，混合物b組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝1:3組)，混合物c組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝1:5組)，混合物d組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝1:8組)，混合物e組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝1:10組)，混合物f組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝3:1組)，混合物g組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝5:1組)，混合物h組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝8:1組)，混合物i組(茯苓多糖組：地不容總生物鹼組＝10:1組)。
各組動物連續灌胃給藥11d，給藥體積為0.2ml/10g。除空白組每日灌胃給予蒸餾水2次外，其餘各組上午灌胃給予高脂乳劑0.5ml/只，下午灌胃給藥，連續10d。末次給藥前小鼠禁食不禁水12h，末次給藥後1h小鼠摘眼球取血(即實驗第11d)，3000r/min離心5min，分離血清，按照試劑盒說明進行血清tc、tg測定。結果見表3。
表3對高脂乳劑所致高脂模型小鼠血脂水平的影響
註：與模型組比較，**p<0.01；*p<0.05；樣品測定值＝樣品實測值/對照組實測值的平均值×100％，tc、tg是由各測定值/對照組平均值所得的相對值，該做法是為了消除不同批次間動物及試劑的差異性，使結果更為準確。
表3結果表明，灌胃高脂乳劑10d可以造成模型小鼠tg、tc的顯著升高，說明造模成功。單獨應用茯苓多糖和地不容總生物鹼時，具有降低趨勢，但無統計學意義。當茯苓多糖和地不容總生物鹼按1:1、1:3、1:5、1:8、3:1、5:1、8:1配伍後，按照相同給藥劑量100mg/kg給藥，能降低小鼠血清tc、tg水平。其中，混合物混合物g組和混合物h組具有統計學意義。實驗結果表明，在相同給藥劑量100mg/kg給藥時，單獨應用茯苓多糖和地不容總生物鹼降低血脂的療效較弱，兩者通過配伍後，降血脂的療效有所增強，其中混合物g組(5:1)和混合物h組(8:1)作用更為明顯，結果表明茯苓多糖和地不容總生物鹼兩者之間具有協同增效的作用。
另外，在劑量篩選實驗中通過驗證表明當單獨運用地不容總生物鹼(100mg/kg/天)和茯苓多糖(100mg/kg/天)的劑量分別灌胃高脂血症模型大鼠，結果顯示地不容總生物鹼和茯苓多糖在單獨應用時對tc、tg等高脂血症客觀指標有一定程度的改善作用，但不具統計學意義。將地不容總生物鹼和茯苓多糖兩者混合後，按照茯苓多糖(50mg/kg/天)與地不容總生物鹼(10mg/kg/天)配伍，茯苓多糖(80mg/kg/天)與地不容總生物鹼(10mg/kg/天)配伍的劑量灌胃高脂血症模型大鼠，結果顯示地不容總生物鹼和茯苓多糖兩者組合應用時對tc、tg等高脂血症客觀指標有明顯的改善作用，具統計學意義，進而說明在治療高脂血症時將地不容總生物鹼和茯苓多糖組合配伍後不僅可以提高療效，也可以節約能耗，減少原料藥的使用量。
三、本發明組合物對大鼠佐劑性關節炎的影響
1.試驗材料
選用健康成年sd大鼠60隻，雌雄各半，體重200±20g。適應性飼養1周，自由攝食顆粒飼料，動物房溫度維持在18～25℃左右。實驗藥物選用茯苓多糖和地不容總生物鹼，按1:1的劑量進行配伍。試驗前將動物稱重，編號，隨機分成空白對照組、模型對照組，尪痺顆粒劑陽性對照組，本發明組合物高劑量組，本發明組合物中劑量組，本發明組合物低劑量組，一共五組，每組10隻。
2.試驗方法
採用大鼠佐劑性關節炎動物模型，在大鼠右後足蹠皮下進針至踝關節，注射弗氏完全佐劑0.1ml致炎。各給藥組組均於造模前1天開始灌胃給藥，連續給藥3天，1天1次；造模後第8天繼續灌胃，連續給藥14天。空白對照組和模型組給予蒸餾水，高、中、低劑量組給藥劑量分別為720mg/kg/天、360mg/kg/天、180mg/kg/天，陽性對照組給予阿司匹林360mg/kg/天。關節腫脹度於注射佐劑後第6、12、24、48h用特製軟尺測量每隻大鼠右後足蹠定點處周長。每隻大鼠同側足蹠注射前後周長之差為腫脹值。腫脹值＝致炎後大鼠足蹠周長(mm)-致炎前同足蹠周長(mm)。
3.實驗結果
3.1本發明組合物對大鼠佐劑性關節炎大鼠右後足踝關節腫脹的影響。
與模型組比較，本發明藥物組合物高劑量、中劑量組，阿司匹林陽性對照組對大鼠佐劑性關節炎大鼠右後足踝關節腫脹有顯著抑制作用。本發明高劑量、中劑量與陽性對照組療效相近。
表4對大鼠佐劑性關節炎大鼠右後足踝關節腫脹的影響
註：與模型組比較，★p<0.05。
另外，在選用成年昆明小鼠進行扭體鎮痛試驗時發現，本發明組合物均對由醋酸引起的腹痛有抑制作用。綜上所述，本發明藥物不僅具有提高人體免疫功能，同時也具有調節人體血脂及抑制關節炎腫脹、疼痛的作用。