一種有機汙染物致大鼠的肝腎功能及免疫功能的檢測方法
2023-10-05 09:59:04
一種有機汙染物致大鼠的肝腎功能及免疫功能的檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種有機汙染物致大鼠的肝腎功能及免疫功能的檢測方法，該方法利用固相萃取法提取有機汙染物，對大鼠進行經口亞慢性灌胃染毒，分別採用酶偶聯速率法法檢測、苦味酸法和透射比濁法檢測大鼠體內尿素氮、肌酐和免疫球蛋白，以達到快速明顯檢測大鼠肝臟肝腎功能及免疫功能損傷過程，由於採用了上述技術方案，與現有技術相比，由於穀草轉氨酶(AST)和谷丙轉氨酶(ALT)是存在於肝細胞內的酶，當肝細胞膜受損就會被釋放入血，血清AST、ALT異常間接提示肝細胞受損，血清中的CHE是由肝臟合成的水解酶，其活性水平是評估肝實質細胞損害的重要手段，也可以作為判斷病情程度和預後的一項臨床指標。
【專利說明】-種有機汙染物致大鼠的肝腎功能及免疫功能的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種有機汙染物致大鼠的肝腎功能及免疫功能的檢測方法，屬於衛生 檢測【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 隨著工農業的迅速發展，含有各種有毒有害有機物水進入天然水體，使我國的水 源水及飲用水受到不同程度的汙染，水體汙染事件[1]不斷發生，如2005年松花江重大水 汙染事件，2010年洞庭湖水汙染事件等，據國家環境部口統計，我國82%的河流受到不同程 度的汙染，大部分河段不適合作飲用水源，導致了嚴重的飲用水供應危機，受到各國政府和 公眾高度重視，成為當今世界重大的公共衛生問題之一，研究表明，水體中有機提取物能夠 通過長期積累達到危害人類及其他生物的水平，幹擾神經系統、免疫系統、生殖系統等，導 致組織器官的病變，鑑於人類實際接觸途徑，探討管網末梢水對人體的健康危害具有重要 的現實意義。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的是；提供一種有機汙染物致大鼠的肝腎功能及免疫功能的檢測方 法，能快速檢測有機汙染物致大鼠肝腎功能及免疫功能，得到準確的測定值，W克服現有技 術的不足。
[0004] 本發明的技術方案 一種有機汙染物致大鼠的肝腎功能及免疫功能的檢測方法，該方法利用固相萃取法提 取有機汙染物，對大鼠進行經口亞慢性灌胃染毒，分別採用酶偶聯速率法法檢測、苦味酸法 和透射比濁法檢測大鼠體內尿素氮、肌酢和免疫球蛋白，W達到快速明顯檢測大鼠肝臟肝 腎功能及免疫功能損傷過程。
[0005] 前述的一種有機汙染物致大鼠的肝腎功能及免疫功能的檢測方法中，大鼠選取40 只，雌雄各半，體重80?lOOg，染毒前適應性飼養1周，自由進食飲水，在染毒期間，清潔級 動物房相對溼度為50%?70%，溫度為23 +2°C。
[0006] 前述的一種有機汙染物致大鼠的肝腎功能及免疫功能的檢測方法中，採用固相萃 取法富集水中有機汙染物，萃取劑為XAD-2樹脂，洗脫劑為二氯甲焼和甲醇，水樣過柱流速 為4倍柱體積/min,過柱完後依次用3倍柱體積的二氧甲焼和甲醇先後洗柱，流速0. 1倍柱 體積/min,洗脫液經旋轉蒸發儀25C減壓蒸觸揮幹，將已揮幹的濃縮提取物用玉米油定容 至50L/ml (母液）-200C冰箱保存備用。
[0007] 由於採用了上述技術方案，與現有技術相比，由於穀草轉氨酶（AST)和谷丙轉氨 酶（ALT)是存在於肝細胞內的酶，當肝細胞膜受損就會被釋放入血，血清AST、ALT異常間 接提示肝細胞受損，血清中的CHE是由肝臟合成的水解酶，其活性水平是評估肝實質細胞 損害的重要手段，也可W作為判斷病情程度和預後的一項臨床指標，實驗結果顯示；血清中 ALT、AST、C肥水平隨著染毒劑量的升高而明顯上升，中高劑量組與對照組比較差異具有統 計學意義。
【具體實施方式】
[0008] 下面對本發明進一步的詳細說明，但不作為對本發明的任何限制。
[0009] 2材料與方法 2. 1材料 2. 1. 1實驗動物 健康清潔級成年大鼠40隻，體重155 +18g，由第H軍醫大學大坪醫院實驗動物中也提 供，SCXK(渝）2007-0005。染毒前適應性飼養一周，自由進食飲水。清潔級動物房相對溼度 45%-75%，溫度控制在22 ± 3 °C。
[0010] 2. 1.2主要試劑 葡萄糖測定試劑盒(北京首醫臨床醫學科技中也)、肌酢測定試劑盒(北京九強公司）、 尿素氮試劑盒、穀草轉氨酶測定試劑盒、穀氨轉氨酶測定試劑盒總蛋白測定試劑盒、白蛋 白測定試劑盒、球蛋白測定試劑盒，均來自廈口英科創科技有限公司，血清總膽紅素試劑 盒、間接膽紅素試劑測定盒、結合膽紅素測定試劑盒、膽鹼醋酶試劑測定盒、鹼性磯酸酶試 劑盒、膽固醇測定試劑盒、甘油H脂測定試劑盒、免疫球蛋白（IgM、IgA、IgA)試劑盒、補體 (C3、C4)試劑盒，均來自中生北控生物科技股份有限公司。XAD-2大孔樹脂（20-60目，美 國Sigma公司，）、甲醇、二氯甲焼，均為分析純（美國TEDIA公司）、玉米油（美國Sigma公 司）、生理鹽水、0. 9%戊己比妥軸（美國Sigma公司）。
[0011] 2. 1.3主要儀器 1/%。電子天平（中國奧豪斯公司）、索氏提取器（索氏管+冷凝管+l〇〇〇ml燒瓶）、旋轉 蒸發儀（RE-3000,上海亞英生化儀器有限公司）、循環水式多用真空粟（S皿-III，鄭州長城 科工貿有限公司）、離也機（LD4-2,北京醫用離也機廠)、全自動生化分析儀（AU400,0LYMPUS 有限公司） 2. 2方法 2. 2. 1水樣採集與處理 採集G市某地管網末梢水水樣，採用固相萃取法]富集水中有機物，萃取劑為XAD-2樹 月旨，洗脫劑為二氯甲焼和甲醇，水樣過柱流速為4倍柱體積/min,過柱完後依次用3倍柱體 積的二氧甲焼和甲醇先後洗柱，流速0. 1倍柱體積/min,洗脫液經旋轉蒸發儀25C減壓蒸 觸揮幹，將已揮幹的濃縮提取物用玉米油定容至50L/ml (母液）-200C冰箱保存備用。
[0012] 2.2.2實驗分組、染毒及取材 將40隻雄性大鼠按隨機區組法分為4組，每組10隻，1組為溶劑對照組（予玉米油）， 其餘3組為低、中、高劑量染毒組，染毒劑量分別為3L/kg. bw. day、15L/kg. bw. day、75L/ kg. bw. day,灌胃體積為lOml/kg .bw .day,每天灌胃一次，每隔3d稱重1次，連續染毒28d， 最後一次染毒結束後，用0. 9%戊己比妥軸麻醉大鼠，剪大鼠股動脈取血，收集血液標本於 非抗凝管中，放置2-3小時，3000 r/min，離也15-20 min,分離血清放入-20°C冰箱待測。
[0013] 2. 2. 3大鼠肝功能指標的測定 谷丙轉氨酶(alt)、穀草轉氨酶（AST)、膽鹼醋酶（CHE)使用酶連續監測法檢測，總蛋白 (TP )、球蛋白（GL0)、鹼性磯酸酶(ALB)採用漠甲酷綠法檢測，膽固醇（CH0)採用酶比色法檢 測，血糖（GLU)採用己糖激酶法，直接膽紅素值BIL)、總膽紅素（TBIL)、間接膽紅素（IBIL) 均採用銅酸鹽法檢測。
[0014] 2. 2. 4大鼠腎功能指標的測定 尿素氮（BUN)採用酶偶聯速率法法檢測，肌酢（化）採用苦味酸法檢測。
[0015] 2. 2. 5大鼠免疫能指柄的測定 免疫球蛋白（IgM、IgG、IgA)、補體（C3、C4)均採用透射比濁法檢測。
[0016] 2. 2. 6統計學處理 實驗結果用^ ± S表示，應用SPSS17. 0統計軟體，採用單因素方差分析法進行數據統 計與處理，檢驗水準0=0. 05。
[0017] 3結果與分析 3.1管網末梢水有汙染取物對大鼠肝功能的影響 3. 1. 1對肝細胞血清酶學指標的影響 由表1可見，各染毒組AST、ALT、ALP與對照組比較差異無統計學意義（P〉0. 05)
【權利要求】
1. 一種有機汙染物致大鼠的肝腎功能及免疫功能的檢測方法，其特徵在於：該方法利 用固相萃取法提取有機汙染物，對大鼠進行經口亞慢性灌胃染毒，分別採用酶偶聯速率法 法檢測、苦味酸法和透射比濁法檢測大鼠體內尿素氮、肌酐和免疫球蛋白，以達到快速明顯 檢測大鼠肝臟肝腎功能及免疫功能損傷過程。
2. 根據權利要求1所述的一種有機汙染物致大鼠的肝腎功能及免疫功能的檢測方法， 其特徵在於：大鼠選取40隻，雌雄各半，體重80?100g，染毒前適應性飼養1周，自由進食 飲水，在染毒期間，清潔級動物房相對溼度為50%?70%，溫度為23 ±2°C。
3. 根據權利要求1所述的一種有機汙染物致大鼠的肝腎功能及免疫功能的檢測方法， 其特徵在於：採用固相萃取法富集水中有機汙染物，萃取劑為XAD-2樹脂，洗脫劑為二氯甲 烷和甲醇，水樣過柱流速為4倍柱體積/min，過柱完後依次用3倍柱體積的二氧甲烷和甲醇 先後洗柱，流速〇. 1倍柱體積/min，洗脫液經旋轉蒸發儀25 °C減壓蒸餾揮幹，將已揮幹的濃 縮提取物用玉米油定容至50L/ml (母液）-200C冰箱保存備用。
【文檔編號】G01N21/59GK104502613SQ201410739903
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月8日 優先權日:2014年12月8日
【發明者】敖雲霞 申請人:敖雲霞