一種中藥川芎注射液的製備方法

2023-10-05 12:18:34 1

專利名稱：：一種中藥川芎注射液的製備方法
技術領域：
：本發明涉及醫藥
技術領域：
，是一種新的以揮發性物質為有效成分的中藥川芎注射液的製備方法。技術背景中藥注射液由於批與批之間的重現性問題限制其進一步推向國際市場，解決中藥注射液重現性問題的關鍵是其源頭——原料的重現性，然而中藥材天然的特殊性，如產地、採收季節、炮製方法等不同，不能保證原料的重現性，尤其是當以揮發性物質為有效成分的中藥材，在貯藏過程中，揮發性成分不同程度的損失，使製備的中藥注射液批與批之間的重現性達不到中藥注射液的要求。為此，本發明人將川芎中藥材中的揮發性物質先經超(近)臨界二氧化碳流體提取法製成川芎油，再以川芎油作為原料製備川芎注射液。提取的川芎油體積小有利於密閉冷藏，也有利於保證揮發性有效成分的穩定性，從而可以根本上解決以揮發性物質為有效成分的中藥川芎注射液批與批之間的重現性(製備方法詳見發明專利CN1546625)。然而將上述川芎油相直接配製的注射液，在動物實驗時發現存在溶血的安全性隱患，因此不符合中藥注射液的要求。
發明內容本發明的目的在於改進上述中藥川芎注射液的製備方法，以克服直接用川芎油配製的注射液存在溶血安全性隱患。本發明以川芎中藥材中的揮發性物質經超(近)臨界二氧化碳流體提取法製成川芎油為原料，與水按一定配比混合後，採取水蒸氣蒸餾法除去川芎油中的溶血性物質，製成川芎注射液，能有效解決溶血隱患。本發明方法簡單，不破壞天然活性成分和熱敏性成分，能最大限度地保持提取物的天然特徵，還由於製備條件溫和，操作條件易控制，工藝穩定，本方法得到的川芎注射液與川芎油相關性好，無溶血性，批與批之間的重現性滿足中藥注射液新藥指紋圖譜的要求。本發明方法也適用於以揮發性物質為有效成份的其他中藥材製備注射液。本發明川芎注射液製備步驟如下1、原料準備將川芎洗淨後與3070'C低溫烘乾，優選溫度為306(TC，最佳溫度為304(TC，粉碎至1020目細粉，最佳為20目。2、萃取川芎細粉採用二氧化碳流體萃取裝置，提取揮髮油，萃取溫度16~60'C，萃取壓力為6.834.5MPa，萃取時間為一個半小時至兩個半小時，提取川芎揮髮油。3、製備注射液將上述所得川芎揮髮油與蒸餾水以h6010000混合，進行水蒸氣蒸餾，至蒸餾液為母液三分之一，所得蒸餾液按體積的0.6%加入吐溫-80助溶，按蒸餾液質量的O.8y。加入氯化鈉調等滲(例如蒸餾液1000ml，則加入6ml吐溫-80，8g氯化鈉)，攪拌均勻，分裝，消毒，即得中藥川芎注射液。具體實施方式實施例l:製備川芎注射液1、原料準備用清水將川芎洗淨，置3(TC低溫烘乾，用粉碎機粉碎至20目細粉；2、萃取取川芎細粉500g，採用二氧化碳萃取裝置(南通華安超臨界萃取儀，下同)，提取揮髮油，萃取溫度為2(TC，萃取壓力為7.2MPa，萃取時間為一個半小時，得揮髮油15ml。3.製備注射液精密稱取上述所得油2.5g，加入150ml蒸餾水，進行水蒸氣蒸餾，收集蒸餾液為50ml，加入0.3ml吐溫-80，加入0.4g氯化鈉調等滲，攪拌均勻，分裝，消毒，即得中藥川芎注射液。實施例2:製備川芎注射液1、原料準備用清水將川芎洗淨，置40'C低溫烘乾，用粉碎機粉碎至20目細粉；2、萃取取川芎細粉500g，採用二氧化碳萃取裝置提取揮髮油，萃取溫度為25'C，萃取壓力為7.0MPa，萃取時間為一個半小時，得揮髮油14ml。3、製備注射液將精密稱取上述所得油2g，加入150ml蒸餾水，進行水蒸氣蒸餾，收集蒸餾液為50ml，加入0.3ml吐溫-80，加入0.4g氯化鈉調等滲，攪拌均勻，用安瓿分裝成10ml/支，10(TC流通蒸汽消毒30min，即得中藥川芎注射液。實施例3:製備川芎注射液1、原料準備用清水將川芎洗淨，置30。C低溫烘乾，用粉碎機粉碎至20目細粉；2、萃取取川尊細粉500g，採用二氧化碳萃取裝置提取揮髮油，萃取溫度為20"C，萃取壓力為7.5MPa，萃取時間為兩個半小時，得揮髮油18ml。3、製備注射液將精密稱取上述所得油2g，加入1500ml蒸餾水，進行水蒸氣蒸餾，收集蒸餾液為500ml，加入3ml吐溫-80，加入4g氯化鈉調等滲，攪拌均勻，用安瓿分裝成10ml/支，10(TC流通蒸汽消毒30min，即得中藥川芎注射液。實施例4:製備川芎注射液1、原料準備用清水將川芎洗淨，置30'C低溫烘乾，用粉碎機粉碎至20目細粉；2、萃取取川芎細粉500g，採用二氧化碳萃取裝置提取揮髮油，萃取溫度為16"C，萃取壓力為7.2MPa，萃取時間為兩個半小時，得揮髮油16ml。3.製備注射液精密稱取上述所得油lg，加入1500ml蒸餾水，進行水蒸氣蒸餾，收集蒸餾液為500ml，加入3ml吐溫-80，加入4g氯化鈉調等滲，攪拌均勻，用安瓿分裝成10ml/支，10(TC流通蒸汽消毒30min，即得中藥川芎注射液。實施例5:製備川芎注射液1、原料準備用清水將川芎洗淨，置3(TC低溫烘乾，用粉碎機粉碎至20目細粉；2、萃取取川芎細粉500g，採用二氧化碳萃取裝置提取揮髮油，萃取溫度為30'C，萃取壓力為7.7MPa，萃取時間為兩個小時，得揮髮油17ml。3、提取精密稱取上述所得油O.5g，加入1500ml蒸餾水，進行水蒸氣蒸餾,收集蒸餾液為500ml，加入3ml吐溫-80，加入4g氯化鈉調等滲，攪拌均勻，用安瓿分裝成10ml/支，100'C流通蒸汽消毒30min，即得中藥川芎注射液。實施例6:超臨界二氧化碳流體萃取法製備川芎注射液1、原料準備用清水將川芎洗淨，置3(TC低溫烘乾，用粉碎機粉碎至20目細粉；2、萃取取川芎細粉500g，採用二氧化碳萃取裝置提取揮髮油，萃取溫度為60'C，萃取壓力為34.5MPa，萃取時間為兩個小時，得揮髮油16ml。3、製備注射液精密稱取上述所得油0.15g，加入1500ml蒸餾水，進行水蒸氣蒸餾，收集蒸餾液為500ml，加入3ml吐溫-80，力H4g氯化鈉調等滲，攪拌均勻，用安瓿分裝成10ml/支，10(TC流通蒸汽消毒30min，即得中藥川芎注射液。實施例7:製備川芎注射液(重複14次)1、原料準備用清水將川芎洗淨，置3(TC低溫烘乾，用粉碎機粉碎至20目細粉；2、萃取取川芎細粉20kg，採用二氧化碳萃取裝置提取揮髮油，萃取溫度為3(TC，萃取壓力為7.0MPa，萃取時間為兩個小時，重複20次，共得揮髮油約12000mlo3.製備注射液精密稱取上述所得油2g，加入1500ml蒸餾水，進行水蒸氣蒸餾，收集蒸餾液為500ml，加入3ml吐溫-80，力卩4g氯化鈉調等滲，攪拌均勻，用安瓿分裝成10ml/支，10(TC流通蒸汽消毒30min，即得中藥川芎注射液。以此條件重複做14次，共得14批中藥川芎注射液。其批號分別為20060711-1、20060711-2、20060710-1、20060710-2、20060616-1、20060616-2、20060615-1、20060615-2、20060614-1、20060614-2、20060613-1、20060613-2、20060612-1、20060612-2。上述各實施例製得的注射液經溶血性試驗，均無溶血現象，並以實施例7製備的14批川芎注射液成品進行氣相色譜-質譜測定，結果表明各批次重現性良好，現以實施例7製品為例，詳細闡述實驗及結果。川芎注射液溶血與凝聚檢查試驗參照2005年版中華人民共和國藥典一部附錄118頁。原理將一定量供試品與2%的兔紅細胞混懸液混合，溫育一定時間後，觀察其對紅細胞狀態是否產生影響。試驗目的觀察川芎注射液對兔紅細胞的影響。受試藥物名稱為川芎注射液，由長海醫院藥學部提供，批號為上述實施例7的14批川芎注射液成品。動物來源為紐西蘭兔，上海復旦大學醫學院實驗動物部(清潔級)，合格證號為醫動字第02-22-8，體重1.8-2.5kg，雌雄隨機，動物數共7隻。器材為離心機、恆溫恆溼箱、試管、離心管，試劑為蒸餾水、生理鹽水，原藥液給藥，實驗室溫度為20士2。C，溼度為50-65%。方法2%紅細胞混懸液的製備取兔(心臟)血約20ml，放入錐形瓶中用玻璃棒攪動血液，除去纖維蛋白原，使成脫纖血液。加入生理鹽水約io倍量，搖勻，每分鐘1000-1500轉離心15分鐘，除去上清液，沉澱的紅細胞再用生理鹽水按上述方法洗滌至上清液不顯紅色為止。將所得紅細胞用生理鹽水配成2%的混懸液，供試驗用。供試品溶液的製備川芎注射液供靜脈滴注(臨床使用濃度為20ml-30ml加入100ml生理鹽水)，溶血與凝聚檢查試驗時未經稀釋而以原液作為供試品溶液。檢査法取潔淨試管5隻，1、2號管為供試品管，3號管為陰性對照管，4號管為陽性對照管，5號管為供試品對照管。按下表1所示依次加入2%紅細胞混懸液、0.9%氯化鈉溶液或蒸餾水，混勻後，立即置37""C土0.5。C的恆溫箱中進行溫育。3小時後觀察溶血和凝聚反應。表l:各試管加液tableseeoriginaldocumentpage8如試驗中的l、2號管溶液呈澄明紅色，管底無細胞殘留或有少量紅細胞殘留，表明有溶血發生；如紅細胞全部下沉，上清液無色澄明，或上清液雖有色澄明，但1號管和5號管比色無顯著差異，則表明無溶血發生。若溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉澱，振搖後不分散，表明有紅細胞凝聚發生。如有紅細胞凝聚發生。如有紅細胞凝聚的現象，可按下法進行進一步判定是凝聚還是假凝聚。若凝聚物在試管振蕩後又能均勻分散，或將凝聚物置於載玻片上，在蓋玻片邊緣滴加2滴0.9%生理鹽水，置顯微鏡下觀察，凝聚紅細胞能被衝散者為假凝聚，若凝聚物不被搖散或在玻片上不被衝散者為凝聚。結果判斷當陰性對照管無溶血和凝聚發生，陽性對照管有溶血發生時，若供試品管中的溶液在3小時內不發生溶血和凝聚，判供試品符合規定；若供試品管中的溶液在3小時內發生溶血和凝聚，判供試品不符合規定，結果見表2。表2:3小時時各試管中紅細胞狀態tableseeoriginaldocumentpage9從表2所列試驗結果可知川芎注射液20060711-1、20060711-2、20060710-1、20060710-2、20060616-1、20060616-2、20060615-1、20060615-2、20060614-1、20060614-2、20060613-1、20060613-2、20060612-1、20060612-2共14批號均不溶血、均不凝聚，從而表明採用本發明製備方法所得中藥川芎注射液不存在溶血的安全性隱患。儀器與試藥氣質聯用儀(Agilent5973NGC/MS),試驗用He(鋼瓶裝ALPHAGAZTM高純He，純度>99.999%)。色譜-質譜條件HP-5柱(29.8mxO.25mmxO.25um)，進樣口壓力8.15psi，柱流量1.0mL/min，平均線速度37cm/sec;程序升溫初始溫度40°C,以4°C/min升至25(TC，保持10min。分流模式進樣，分流比10:1。接口溫度28(TC，離子源溫度230°C,四極杆溫度150。C,El源電壓70eV,質量掃描方式SCAN,掃描質量範圍12.00—500.00amu，溶劑延遲3.00min。14批測定結果見表3。表314批川芎注射液測定結果保留時間A函平均值上限下限Ai/AO(%)Ai/AO(%)Ai/AO(%)Ai/AO(%)Ai/AO(%)(min)20060711-220060711-120060710-220060710-120060616-231.35231.6239.5323.7225.0131.1525力031.0028.3731.90631.6339.5423.7324.6930.9931.5733.7227.0533.24772.7387.2758.1859.7364.3564.6765.8867.8533.38〗19.4224.2814.5714.9719.0416.0816.7818.04*33.62110012080100100100100100Ai/A0Ai/A0Ai/AlAi/AlAi/AOAi/AOAi/AOAi/AOAi/AO(%)(%)(%)(%)(%)(%)(o/o)(%)(o/0)20060616-120060615-220060615-120060614-220060614-120060613-220060613-120060612-220060612-127.5933.6133.6132.4127.1234.8833.5134.7637.1727.7431.4831.2531.0425.4630.0138.893438.0564.8875.5276.3277.0267.3286.3780.2176.8478.2517.8220.6519.3319.1118.0422.523.7121.8323.99100100100100100100100100100注以保留時間為33.621min的峰面積A。為對照，其他符合含量百分比規定需要控制的峰Ai與Aa相比得到峰面積比值即為Ai/Ao，根據含量百分比的新藥規定要求計算Ai/A。上下限範圍。表3結果表明，採用本發明方法製得的中藥川芎注射液，批與批之間的重現性良好，符合中藥注射液的要求。權利要求1.一種中藥川芎注射液的製備方法，步驟如下(1)原料準備將川芎洗淨後於30～70℃低溫烘乾，粉碎至10～20目細粉；(2)萃取川芎細粉採用二氧化碳流體萃取裝置，萃取溫度為16～60℃，萃取壓力為6.8～34.5MPa，萃取一個半小時至兩個半小時，提取川芎揮髮油；(3)製備注射液；其特徵在於製備注射液時，將上述所得川芎揮髮油與蒸餾水以1∶60～10000混合，進行水蒸氣蒸餾，至蒸餾液為母液三分之一，所得蒸餾液按體積的0.6％加入吐溫-80助溶，按蒸餾液質量的0.8％加入氯化鈉調等滲，攪拌均勻，分裝，消毒，即得中藥川芎注射液。2.根據權利要求1所述的川芎注射液製備方法，其特徵在於製備注射液時，川芎揮髮油與蒸餾水之比為l:700800。3.根據權利要求1所述的川芎注射液製備方法，其特徵在於製備注射液時，川芎揮髮油與蒸餾水之比為l:750。4.權利要求1或2或3所述方法製備的中藥川芎注射液。全文摘要本發明涉及醫藥
技術領域：
，是一種製備中藥川芎注射液的方法，包括將川芎製成細粉，將川芎細粉採用二氧化碳流體提取川芎油，以川芎油為原料製備注射液，其特徵在於製備注射液時，將川芎油與蒸餾水以1∶60～10000混合，進行水蒸氣蒸餾，至蒸餾液為母液三分之一，所得蒸餾液按體積的0.6％加入吐溫-80，按蒸餾液質量的0.8％加氯化鈉調等滲，攪拌均勻，分裝，消毒，即成川芎注射液。本發明克服了川芎油直接配製注射液存在的溶血安全性隱患，並且所得川芎注射液批與批之間的重現性能達到中藥注射液指紋圖譜的要求。本發明方法也適用於以揮發性物質為有效成分的其他中藥材製備注射液。文檔編號A61K36/185GK101156880SQ20071004624公開日2008年4月9日申請日期2007年9月21日優先權日2007年9月21日發明者胡晉紅,高麗紅申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學