河魨毒素油相製劑的製備方法
2023-10-11 09:41:34 1
專利名稱：河魨毒素油相製劑的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種河魨毒素油相製劑的製備方法。
河魨毒素(Tetrodotoxin)是從河魨魚的內臟中提取出的一種活性物質，其毒性比氰化納高1250倍。現代醫學研究表明，河魨毒素還廣泛存在於蝦虎魚、蠑螈、章魚、貝類、螺類、海星、蟹類等海洋生物體內。河魨毒素的結晶是一種氨基氫化喹唑啉類型化合物，分子式為C11H17N3O8，分子量為319.27。這種令人生畏的毒素，只需0.3mg-0.5mg就可致人於死地，因為它能專一地阻斷神經細胞膜Na+通道，所以，河魨毒素成為神經生物學和生理學研究無可替代的工具藥(S.L.Hu，C.Y.Kao.Toxicon，1985，23723-724.)。
日本對河魨毒素的藥用研究已有七十多年的歷史，據報導河魨毒素具有鎮痛、鎮痙、鎮癢、局麻等醫藥功效(潘心富.1984.藥學通報，440-43)。但是，因河魨毒素的毒性極強，而且河魨毒素的治療劑量與其中毒量接近，故河魨毒素製劑至今尚未被列入藥典。
我國從上世紀八十年代初，開始對河魨毒素的藥用價值進行研究，研究表明河魨毒素除了具有很好的鎮痛和局麻作用外，還發現河魨毒素具有非常好的戒毒效果，且本身無藥物依賴性(CN1227102A；CN1145225A；CN1353990A；CN1356104A)。
現有的河魨毒素製劑，一般是將河魨毒素用酸性水溶解後，再製成注射劑，在醫學上主要用於鎮痛或戒毒，但是有一定的副作用，在臨床使用中，發現部分患者出現不同程度的口、舌、唇、四肢麻木等輕度中毒反應(參見滿洲醫學雜誌，1993，130639；陳冀勝，1986，海洋藥物，231；EP750909)。現有的河魨毒素製劑，僅有水溶液製劑，在治療使用方法上，只是進行皮下、肌肉、靜脈注射或呼吸道給藥。這種水溶液製劑，在胃酸的作用下，毒素很容易被分解，使河豚毒素的活性顯著降低，按目前現有技術製備河豚毒素口服製劑，不但療效差，而且成本很高。
本發明的目的是為了提供一種可以口服使用的河魨毒素油相製劑的製備方法。該製備方法工藝簡單，原料來源方便，生產成本低，容易實施。用該製備方法和工藝製成的河魨毒素油相製劑，除具有鎮痛、戒毒的作用外，還具有使用方便、安全、高效、非成癮性的特點。
為了達到上述目的，本發明主要是通過以下技術手段完成的(1)、將河魨毒素溶解於酸性水或酸性醇或其它酸的緩衝溶液中，混合攪拌均勻，製成「A」溶液(「A」溶液的pH值範圍為4-7)；(2)、將「A」溶液加入到親水非離子表面活性劑(或雙親性油酯，或親水、親油非離子表面活性劑)的混合液中，其比例為1∶1至1∶40；兩種溶液經充分攪拌均勻，混合成為「B」溶液；(3)、將「B」溶液加入到親油非離子表面活性劑中(或親油性乳化劑中，或醫用油中)，溶液「B」與表面活性劑的比例為1∶5至1∶50，經充分攪拌均勻後，混合成為「C」溶液。這樣，即製成了本發明所述的河魨毒素油相製劑。
(註上述溶液在製備過程中，可加入適量的抗氧化劑，若抗氧化劑為水溶性的，可在上述「A」溶液中加入；若抗氧化劑為脂溶性的，可在上述「C」溶液中加入。)上述製備方法製成的河魨毒素油相製劑，其河魨毒素的有效含量為0.01μg/ml—20μg/ml。
上述溶液所涉及的醫用油，為中國藥典規定的注射油或口服油，包括花生油、麻油、豆油、棉子油、杏仁油、茶油和魚油。
上述溶液所涉及到的緩衝液(酸溶液)，包括醋酸、苯甲酸、石炭酸、檸檬酸及其醫學上可接受的酸的緩衝液。
上述溶液所涉及的表面活性劑，主要為苯甲酸苄酯、油酸乙酯、聚乙二醇(PEG)、甘油油酸酯、十甘油單油酸酯、十甘油單辛酸酯、聚乙二醇-8-甘油辛酸酯/癸酸酯、聚甘油-3-油酸酯、六甘油單月桂酸酯、油酸乙脂、吐溫、司盤等。
上述溶液涉及的抗氧化劑，包括沒食子酸丙酯、特丁基苯二酚、叔丁基對羥基茴香醚、VC、VE(其含量為0.001％～0.2％)。
依照本發明製備方法製成的河魨毒素油相製劑，可以直接用來口服，也可以製成液體膠囊、乳劑、營養補劑或栓劑。
動物試驗一、用小白鼠熱板法進行鎮痛試驗熱板恆溫55±1℃，以小白鼠舐後足為反應指標，取預選合格的雌性小白鼠40隻，隨機分為4組，每組10隻。
第1組河魨毒素油相製劑0.1μg/ml第2組河魨毒素油相製劑0.6μg/ml第3組河魨毒素油相製劑1μg/ml第4組花生油(對照組)分別給小白鼠腹腔注射0.1ml/10g的製劑，只用一次，藥後不同時間(40、90分鐘及3、5、10、20小時)測定痛閥平均值。結果河魨毒素油劑的鎮痛時間出現在給藥1.5小時後，高峰在3-5小時，持續時間長達10小時，最長達到20小時，與花生油組比較有顯著差異(P＜0.01)，鎮痛作用呈劑量-效應關係。
二、用小白鼠扭體法作鎮痛試驗取小白鼠20隻(小白鼠體重為22-25g)，隨機分為二組，每組10隻。
第1組河魨毒素油相製劑1μg/ml第2組花生油(對照組)分別給小白鼠灌胃0.2ml/10g，一天兩次，共用三次，次日給藥後10小時分別腹腔注射0.6％醋酸溶液0.1ml/10g，並記錄20分鐘內小白鼠的扭體次數。扭體指標小白鼠腹部內凹，軀幹與後腿伸長，臀部抬起。試驗結果表明，河魨毒素油劑與花生油對照組有顯著差異(P＜0.01)，這一試驗結果與上述熱板法試驗結果相一致。
臨床試驗鎮痛效果收治住院或非住院癌痛患者42例，其中男性25例，女性17例，年齡最小的22歲，最大的76歲。這些自願受試者，分別患有食道賁門癌症12例、肺癌7例、胃癌8例、肝癌5例、淋巴肉瘤4例、腸癌2例、鼻咽癌3例、口腔癌1例，均為中、晚期癌症患者，疼痛劇烈。其中33例已使用過嗎啡、杜冷丁進行緩解疼痛，24例使用過鎮痛藥，並產生了耐藥性。經使用本發明方法製成的軟膠囊(每粒膠囊含油相製劑1ml)、口服油相製劑1ml，每日服用3-4次，每次1-2粒或1ml-2ml油相製劑，用藥7-50天(最長8個月)。經治療後，產生顯著效果17例，緩解23例，無效2例，有效率達到95％。
臨床試驗戒毒效果自願戒毒者28例，均為海洛因吸毒者，其中男性23例，女性5例，年齡最小的17歲，最大的33歲。吸毒史3個月到4年不等，癮量多在0.5g-1.0g間。用藥方法是根據吸毒者癮量的大小、吸毒時間的長短及戒斷反應的輕重，採取不同方法治療，對戒毒患者每天早、中、晚各口服河魨毒素油相製劑膠囊1-2粒(1-2ml油劑)，一般6-7天為一個療程。戒毒患者在第一次口服本發明膠囊時，可輔助使用鎮靜劑(肌肉注射安定、冬眠靈等)，經用藥治療6天以後，戒毒患者的情況明顯好轉，停藥後不再出現嚴重的戒斷反應。用納洛酮做催癮試驗呈陰性，尿嗎啡檢測為陰性，有效率可達到96％。
試驗證明，依照本發明製備方法製成的河魨毒素油相製劑，具有以下幾大特點1、可以阻止河魨毒素與細胞直接接觸，能較好地抵抗胃酸或酶的降解作用，在使用過程中，用微量的河魨毒素製劑，即可發揮很好的鎮痛、戒毒作用，由於給藥劑量遠離中毒劑量，具有相當可靠的安全程度；2、本發明使用油溶液作為藥物載體，其選擇性高，靶向性強，可減少藥物劑量，降低毒性，使藥物的吸收緩慢而藥效持久，其藥效作用的持續時間可達10-20小時。
3、本發明方法製備成的口服製劑，可為患者用藥帶來極大的方便，並可減輕患者的痛苦。即使患者使用嗎啡或杜冷丁產生耐藥成癮後，用本發明製劑，仍能起到很好的療效，而且不會產生耐藥性和成癮性，實現了低毒、高效、無成癮性、無副作用的安全用藥要求。
下面通過實施例對本發明的實施過程做進一步的詳細描述實施例一1、取河魨毒素1mg，加入0.1％醋酸溶液5ml，使其混合溶解成「A」溶液；2、取無水乙醇24ml，將「A」溶液1ml加入混合其中，攪拌製成25ml的「B」溶液；3、取苯甲酸苄脂75ml，將「B」溶液加入混合其中，攪拌製成100ml的「C」溶液；4、在「C」溶液中加入沒食子酸丙酯2ml，再加入花生油至1000ml，混合攪拌均勻後，即製成本發明所述的河魨毒素油相製劑。
實施例二1、取河魨毒素1mg，加入0.05％醋酸溶液10ml，使其混合溶解成「A」溶液；2、取聚乙二醇-8-甘油辛酸/癸酸酯44ml，將「A」溶液4ml加入混合其中，攪拌製成48ml的「B」溶液；3、取聚甘油-3-油酸酯152ml，將「B」溶液加入混合其中，攪拌均勻後，製成200ml的「C」溶液；4、在「C」溶液中加入維生素E200mg，攪拌混合均勻後，即製成本發明所述的河魨毒素油相製劑。
實施例三1、取河魨毒素1mg，加入0.02％醋酸溶液20ml，使其混合溶解成「A」溶液；2、取聚乙二醇-8-甘油辛酸/癸酸酯20ml，將「A」溶液4ml加入混合其中，攪拌均勻後製成24ml的「B」溶液；3、取甘油-3-油酸酯76ml，將「B」溶液加入其中，混合攪拌均勻，製成100ml的「C」溶液；4、在「C」溶液中加入維生素E1g，再加花生油至1000ml，混合攪拌均勻後，即製成本發明所述的河魨毒素油相製劑。
實施例四1、取河魨毒素(含檸檬酸鹽)1mg，加入98％乙醇10ml和維生素C 2g，使其混合溶解成「A」溶液；2、取油酸乙脂40ml，將「A」溶液加入其中，混合攪拌均勻，製成50ml「B」溶液；3、在「B」溶液中加入1g的維生素E，再加入魚油至500ml，混合攪拌均勻，即製成本發明所述的河魨毒素油相製劑。
實施例五1、取河魨毒素1mg，加入0.01％醋酸溶液1ml，使其混合溶解成「A」溶液；2、取吐溫-40 6ml，將「A」溶液1ml加入其中，混合攪拌均勻，製成「B」溶液；3、取司盤-80 13ml，將「B」溶液加入其中，混合攪拌均勻，製成20ml「C」溶液；4、在「C」溶液中加入1g的維生素E，再加入花生油至100ml，混合攪拌均勻，即製成本發明所述的河魨毒素油相製劑。
實施例六1、取河魨毒素1mg，加入0.1％醋酸溶液4ml，使其混合溶解成「A」溶液；2、取六甘油單月桂酸酯26ml，將「A」溶液4ml加入其中，混合攪拌均勻，製成30ml「B」溶液；3、取甘油油酸酯70ml，將上述「B」溶液加入其中，混合攪拌均勻，製成100ml「C」溶液；4、在「C」溶液中加入1g的維生素E，再加入魚油至500ml，混合攪拌均勻，即製成本發明所述的河魨毒素油相製劑。
通過試驗證明，使用本發明方法製備的河魨毒素油相製劑，不但可明顯減輕和緩解癌症、類風溼性關節炎以及其他慢性疾病給患者帶來的痛苦，並且可以戒除人體對海洛因、阿片、嗎啡、杜冷丁等毒品的依賴性。
權利要求
1.河魨毒素油相製劑的製備方法，其特徵在於將河魨毒素溶解於酸性水或酸性醇，或酸的緩衝液中，再與一種或多種表面活性劑或雙親性油酯、醫用油進行溶合後，製成油相製劑，該製劑主要用於鎮痛或戒除藥物依賴。
2.根據權利要求1所述的油相製劑，其特徵在於每毫升油相製劑的河魨毒素有效含量為0.01μg/ml-20μg/ml。
3.根據權利要求1所述的表面活性劑，其特徵在於主要包括苯甲酸苄酯、油酸乙酯、聚乙二醇(PEG)、甘油油酸酯、十甘油單油酸酯、十甘油單辛酸酯、聚乙二醇-8-甘油辛酸酯/癸酸酯、聚甘油-3-油酸酯、吐溫、司盤。
4.根據權利要求1所述的製劑，其特徵在於河魨毒素酸溶液pH值的範圍為3-7；河魨毒素酸溶液與表面活性劑(或雙親性油酯)的比例為1∶1至1∶40。
5.根據權利要求1所述的製劑，其特徵在於將河魨毒素酸溶液加入到親水親油平衡值為9.6＜HLB＜17的親水非離子表面活性劑中，攪拌均勻，再與親水親油平衡值為1＜HLB＜10的親油非離子表面活性劑進行混合，加入抗氧化劑後，充分搖拌均勻，製成透明的油相製劑。
6.根據權利要求1所述的製劑，其特徵在於河魨毒素酸溶液，用濃度為90％以上的乙醇進行稀釋後，與苯甲酸苄酯混合攪拌均勻，再用醫用油進行稀釋、混合、攪拌均勻。
7.根據權利要求6所述的製劑，其特徵在於河魨毒素乙醇溶液與苯甲酸苄酯溶液的比例為1∶1至1∶30。
8.根據權利要求1所述的製劑，其特徵在於可將河魨毒素油相製劑製成膠囊、乳劑、營養補劑、栓劑。
全文摘要
本發明涉及一種河魨毒素油相製劑的製備方法。其特徵是將河魨毒素溶解於酸性水或酸性醇的溶液中，再與一種(或多種)表面活性劑(或雙親性油酯)、醫用油和抗氧化劑製備成油相製劑，本油相製劑可以製成膠囊、乳劑、營養補劑或栓劑等。該製備方法工藝簡單，生產成本低，容易實施，用該方法和工藝製成的河魨毒素油相製劑，具有使用方便、安全、高效、非成癮性的特點，是一種優良的鎮痛和戒除藥物依賴的藥劑。
文檔編號A61K9/00GK1754539SQ20041008055
公開日2006年4月5日 申請日期2004年9月28日 優先權日2004年9月28日
發明者黃致強, 黃海燕, 黃海楓 申請人:黃致強, 黃海燕, 黃海楓