白介素－17相關哺乳動物細胞因子、編碼其的多核苷酸、應用的製作方法

2023-07-19 15:26:56 5

專利名稱：白介素－17相關哺乳動物細胞因子、編碼其的多核苷酸、應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及在控制哺乳動物細胞(例如哺乳動物免疫系統細胞)生理學、發育和分化中起作用的蛋白質相關的組合物。具體地說，本發明提供核酸、蛋白質、抗體以及調節各種細胞類型(包括造血細胞)的細胞生理學、發育、分化或功能的模擬物(mimetics)。
背景技術：
脊椎動物的免疫系統由許多器官和幾種不同的細胞類型組成。兩種主要的細胞類型包括骨髓譜系和淋巴譜系。在淋巴樣細胞譜系中有B細胞和T細胞，B細胞最初被鑑定為在胎肝或成體骨髓中分化，而T細胞最初被鑑定為在胸腺中分化。參見例如Paul(編輯，1998)Fundamental Immunology(第4版)Raven Press，New York。
在發生免疫應答或細胞分化的許多方面，稱為細胞因子的可溶性蛋白在調節細胞相互作用方面起關鍵作用。這些細胞因子明顯地以許多方式介導細胞活性。已經表明，它們在許多情況下調節造血幹細胞的增殖、生長和分化為各種各樣的構成負責免疫應答的譜系的祖細胞(progenitor)。
然而，仍未完全鑑定出在這些成熟途徑中由不同發育階段的細胞表達的細胞分子。此外，不太了解誘導、支持或調節這些細胞的各種生理學、發育或增殖狀態的信號分子的作用和作用機制。清楚的是，免疫系統及其對各種脅迫的應答與醫學例如傳染病、癌症相關應答以及治療反應、變應性反應和移植排斥反應有關。參見例如Thorn等，Harrison’s Principles of Internal Medicine McGraw/Hill，New York。
醫學在很大程度上依賴於在實現對環境因子的生理學應答不足或不當的治療中免疫系統的適當募集或抑制。然而，對免疫系統是如何調節或分化缺乏了解已經阻礙了人們有利地調節對生物攻擊的正常防禦機制的能力。因此，仍不能控制特徵為相關細胞的發育或生理學調節異常或不當的醫學病症。特定細胞因子的發現和表徵將有助於開發對各式各樣的變性性病症或影響免疫系統、造血細胞以及其它細胞類型的其它病症的療法。本發明提供了這些問題中的某些問題和許多其它問題的解決方法。
發明概述本發明部分基於編碼表現出與名為CTLA-8的細胞因子有顯著序列相似性的各種細胞因子樣蛋白的cDNA克隆的發現。
本發明包括編碼本發明蛋白的分離的基因；所述編碼的蛋白的變體，例如天然序列的突變物(突變蛋白)、物種變體和等位基因變體；融合蛋白；化學模擬物；抗體；和其它結構或功能類似物。也提供了這些不同核酸或蛋白組合物的各種應用。
在某些核酸實施方案中，本發明提供包含以下序列的分離的或重組的多核苷酸a)來自哺乳動物IL-173的序列，它編碼SEQ ID NO6、8、10或12的至少8個連續胺基酸；編碼至少兩個不同的SEQ IDNO6、8、10或12的至少5個連續胺基酸的區段；或包含一個或多個SEQ ID NO5、7、9或11的至少21個連續核苷酸的區段；b)來自哺乳動物IL-174的序列，它編碼SEQ ID NO14、16或18的至少8個連續胺基酸；編碼至少兩個不同的SEQ ID NO14、16或18的至少5個連續胺基酸的區段；或包含一個或多個SEQ ID NO14、16或18的至少21個連續核苷酸的區段；c)來自哺乳動物IL-176的序列，它編碼SEQ ID NO28的至少8個連續胺基酸；編碼至少兩個不同的SEQ ID NO28的至少5個連續胺基酸的區段；或包含一個或多個SEQ ID NO27的至少21個連續核苷酸的區段；d)來自哺乳動物IL-177的序列，它編碼SEQ ID NO30的至少8個連續胺基酸；編碼至少兩個不同的SEQ ID NO30的至少5個連續胺基酸的區段；或包含一個或多個SEQ ID NO29的至少21個連續核苷酸的區段。其它實施方案包括表達載體中的這種多核苷酸，包含序列a)(IL-173)它編碼SEQ ID NO6、8、10或12的至少12個連續胺基酸；編碼至少兩個不同的SEQ ID NO6、8、10或12的至少7個和10個連續胺基酸的區段；或包含SEQ ID NO5、7、9或11的至少27個連續核苷酸；b)(IL-174)它編碼SEQ ID NO14、16或18的至少12個連續胺基酸；編碼至少兩個不同的SEQ ID NO14、16或18的至少7個和10個連續胺基酸的區段；或包含SEQ ID NO13、15或17的至少27個連續核苷酸；c)(IL-176)它編碼SEQ ID NO28的至少12個連續胺基酸；編碼至少兩個不同的SEQ ID NO28的至少7個和10個連續胺基酸的區段；或包含SEQ ID NO27的至少27個連續核苷酸；或d)(IL-177)它編碼SEQ ID NO30的至少12個連續胺基酸；編碼至少兩個不同的SEQ ID NO30的至少7個和10個連續胺基酸的區段；或包含SEQ ID NO29的至少27個連續核苷酸。某些實施方案包括那些多核苷酸a)(IL-173)它編碼SEQ ID NO6、8、10或12的至少16個連續胺基酸殘基；編碼至少兩個不同的SEQ ID NO6、8、10或12的至少10個和13個連續胺基酸殘基的區段；包含SEQ IDNO5、7、9或11的至少33個連續核苷酸；或包含SEQ ID NO5、7、9或11的整個成熟編碼部分；b)(IL-174)它編碼SEQ ID NO14、16或18的至少16個連續胺基酸殘基；編碼至少兩個不同的SEQID NO14、16或18的至少10個和13個連續胺基酸殘基的區段；包含SEQ ID NO13、15或17的至少33個連續核苷酸；或包含SEQ IDNO13、15或17的整個成熟編碼部分；c)(IL-176)它編碼SEQ IDNO28的至少16個連續胺基酸；編碼至少兩個不同的SEQ ID NO；28的至少10個和14個連續胺基酸殘基的區段；包含SEQ ID NO27的至少33個連續核苷酸；或包含SEQ ID NO27的整個成熟編碼部分；或d)(IL-177)它編碼SEQ ID NO30的至少16個連續胺基酸；編碼至少兩個不同的SEQ ID NO30的至少10個和14個連續胺基酸殘基的區段；包含SEQ ID NO29的至少33個連續核苷酸；或包含SEQ IDNO29的整個成熟編碼部分。
提供各種方法，例如製備以下物質的方法a)多肽，所述方法包括表達所述表達載體，由此產生所述多肽；b)雙鏈體核酸，所述方法包括使一種所述多核苷酸與一種互補核酸接觸，由此導致所述雙鏈體核酸的產生；或c)一種所述多核苷酸，所述方法包括用PCR法進行擴增。
另一方面，本發明提供在至少55℃和低於400mM鹽的嚴格洗滌條件與下述多核苷酸雜交的分離的或重組的多核苷酸a)所述的(IL-173)多核苷酸，它由SEQ ID NO5、7、9或11的編碼部分組成；b)所述的(IL-174)多核苷酸，它由SEQ ID NO13、15或17的編碼部分組成；所述的(IL-176)多核苷酸，它由SEQ ID NO27的編碼部分組成；或d)所述的(IL-177)多核苷酸，它由SEQ ID NO29的編碼部分組成。其它實施方案包括這樣的所述多核苷酸a)其中所述洗滌條件為至少65℃和低於300mM鹽；或b)它包含以下編碼部分的至少50個連續核苷酸SEQ ID NO5、7、9或11(IL-173)的編碼部分；或SEQ IDNO13、15或17(IL-174)的編碼部分；或SEQ ID NO27(IL-176)的編碼部分；或SEQ ID NO29(IL-177)的編碼部分。
提供某些試劑盒，所述試劑盒例如包含一種所述多核苷酸和a)應用所述多核苷酸進行檢測的說明；b)處理所述多核苷酸或所述試劑盒的其它試劑的說明；或c)a和b兩者。
也提供各種細胞，所述細胞例如為含有所述表達載體的細胞，其中所述細胞是原核生物細胞；真核生物細胞；細菌細胞；酵母細胞；昆蟲細胞；哺乳動物細胞；小鼠細胞、靈長類動物細胞；或人細胞。
多肽實施方案包括例如分離的或重組的抗原性多肽a)(IL-173)包含至少i)一個來自SEQ ID NO6、8、10或12的8個相同連續胺基酸的區段；或ii)兩個不同的來自SEQ ID NO6、8、10或12的至少5個連續胺基酸的區段；b)(IL-174)包含至少i)一個來自SEQID NO14、16或18的8個相同連續胺基酸的區段；或ii)兩個不同的來自SEQ ID NO14、16或18的至少5個連續胺基酸的區段；c)(IL-176)包含至少i)一個來自SEQ ID NO28的8個相同連續胺基酸的區段；或ii)兩個不同的來自SEQ ID NO28的至少5個連續胺基酸的區段；或d)(IL-177)包含至少i)一個來自SEQ ID NO30的8個相同連續胺基酸的區段；或ii)兩個不同的來自SEQ ID NO30的至少5個連續胺基酸的區段。另外的實施方案包括這樣一種所述的多肽，其中a)所述8個相同連續胺基酸的區段是至少14個連續胺基酸；或b)所述至少5個連續胺基酸的區段中的一個區段包含至少7個連續胺基酸。其它實施方案包括一種所述多肽，其中A)(IL-173)所述多肽a)包含SEQ ID NO6、8、10或12的成熟序列；b)選擇性地與針對成熟SEQ ID NO6、8、10或12的免疫原產生的多克隆抗體結合；c)包含多個不同的SEQ ID NO6、8、10或12的10個連續胺基酸的多肽區段；d)是SEQ ID NO6、8、10或12的天然等位基因變體；e)其長度至少為30個胺基酸；或f)呈現出至少兩個非重疊表位，所述表位對成熟SEQ ID NO6、8、10或12具有選擇性；B)(IL-174)所述多肽a)包含成熟SEQ ID NO14、16或18；b)選擇性地與針對成熟SEQ ID NO14、16或18的免疫原產生的多克隆抗體結合；c)包含多個不同的SEQ ID NO14、16或18的10個連續胺基酸的多肽區段；d)其長度至少為30個胺基酸；或e)呈現出至少兩個非重疊表位，所述表位對成熟SEQ ID NO14、16或18具有選擇性；或D)(IL-176)所述多肽a)包含SEQ ID NO28；b)選擇性地與針對SEQ IDNO28的免疫原產生的多克隆抗體結合；c)包含多個不同的SEQ IDNO28的10個連續胺基酸的多肽區段；d)其長度至少為30個胺基酸；或e)呈現出至少兩個非重疊表位，所述表位對SEQ ID NO28的靈長類蛋白具有選擇性；或D)(IL-177)所述多肽a)包含SEQ ID NO30；b)選擇性地與針對SEQ ID NO30的免疫原產生的多克隆抗體結合；c)包含多個不同的SEQ ID NO30的10個連續胺基酸的多肽區段；d)其長度至少為30個胺基酸；或e)呈現出至少兩個非重疊表位，所述表位對SEQ ID NO30的靈長類蛋白具有選擇性。各種其它實施方案包括這樣一種所述多肽，所述多肽a)是一種無菌組合物；b)沒有被糖基化；c)是變性的；d)是合成多肽；e)連接於固相支持體；f)是具有檢測標記或純化標記的融合蛋白；g)是天然序列的5重或更少重的置換體；或h)是天然序列的缺失變體或插入變體。
也提供應用所述多肽的方法，例如a)以標記多肽，所述方法包括用放射性標記來標記所述多肽；b)從混合物中的其它多肽中分離所述多肽，所述方法包括將所述混合物在層析基質上進行層析分離，由此分離所述多肽；c)以鑑定選擇性地與所述多肽結合的化合物，所述方法包括將所述化合物與所述多肽在合適條件下溫育，由此使得所述化合物結合於所述多肽；或d)以將所述多肽綴合於一種基質，所述方法包括用反應性試劑將所述多肽衍生化，並將所述多肽綴合於所述基質。
也提供選擇性地與這樣一種所述多肽結合的抗體，包括包含抗體的抗原結合部分的結合化合物，其中所述多肽a)(IL-173)包含SEQID NO6、8、10或12的成熟多肽；b)(IL-174)包含SEQ ID NO14、16或18；c)(IL-176)包含SEQ ID NO28；或d)(IL-177)包含SEQ ID NO30。某些實施方案包括這樣的結合化合物，其中所述抗體是針對下述多肽產生的多克隆抗體，所述多肽為a)(IL-173)SEQID NO6、8、10或12；b)(IL-174)SEQ ID NO14、16或18；c)(IL-176)SEQ ID NO28；或d)(IL-177)SEQ ID NO30。其它實施方案包括這樣的所述結合化合物，其中所述a)抗體i)為免疫選擇的；ii)結合於變性蛋白；或iii)表現出與所述多肽的Kd至少為30mM；或b)所述結合化合物i)連接至固相支持體，包括珠粒或塑料膜；ii)在無菌組合物中；或iii)被可檢測地標記，包括放射性標記或螢光標記。
提供例如產生抗原抗體複合物的方法，所述方法包括使包含來自SEQ ID NO6、8、10、12、14、16、18、28或30的序列的多肽與一種所述結合化合物在允許所述複合物形成的條件下接觸。最好是，所述結合化合物是抗體，而所述多肽是生物樣品。
提供試劑盒，所述試劑盒例如包含一種所述結合化合物和a)SEQ ID NO6、8、10、12、14、16、18、28或30的多肽；b)應用所述結合化合物進行檢測的說明；或c)處理所述結合化合物或所述試劑盒的其它試劑的說明。
提供抗體與SEQ ID NO6、8、10、12、14、16、18、28或30的蛋白結合的選擇性的評價方法，所述方法包括使一種所述抗體與所述蛋白接觸以及與另一種細胞因子接觸；並且比較所述抗體與所述蛋白以及與所述細胞因子的結合。
優選實施方案的詳細描述I.一般描述本發明提供編碼表現出細胞因子特徵性結構特徵的各種哺乳動物蛋白的DNA序列，所述細胞因子尤其涉及名為CTLA-8的細胞因子(也稱為IL-17)。已經描述了CTLA-8的大鼠形式、小鼠形式、人形式和病毒同系物，它們的序列可得自GenBank。參見Rouvier等(1993)J.Immunol.1505445-5456；Yao等(1995)Immunity 3811-821；Yao等(1995)J.Immunol.1555483-5486；和Kennedy等(1996)J.Interferon andCytokine Res.16611-617。CTLA-8具有涉及關節炎、腎移植排斥、腫瘤發生能力、病毒-宿主相互作用和先天免疫的活性；並且看來表現出與IL-6類似的某些調節功能。參見PubMed(IL-17的檢索)；Chabaud等(1998)J.Immnunol.63139-148；Amin等(1998)Curr.Opin.Rheumatol.10263-268；Van Kooten等(1998)J.Am.Soc.Nephrol.91526-1534；Fossiez等(1998)Int.Rev.Immunol.16541-551；Knappe等(1998)J.Virol.725797-5801；Seow(1998)Vet.Immuno.Immunopathol.63139-48；和Teunissen等(1998)J.Invest.Dermatol.111645-649。關於通過NFΚB轉錄因子發送信號的一篇報導提及一個先天免疫中利用的信號途徑。Shalom-Barak等(1998)J.Biol.Chem.27327467-27473。
所述新介紹的cDNA序列表現出為編碼細胞因子、生長因子和癌基因的mRNA的特徵的各種特性。因為IL-17是這一新識別的與TGF-β相關的細胞因子家族中的第一個成員，所以申請人已經給家族IL-170指定了新成員IL-172、IL-173、IL-174、IL-176、IL-177；和IL-171和IL-175。預測該家族的摺疊方式是細胞因子TGF-β家族的摺疊方式。細胞因子TGF-β和IL-170家族共享胱氨酸結(cystine knot)基序的共同特徵，其特徵在於特定間隔的半胱氨酸殘基。參見例如Sun和Davies(1995)Ann.Rev.Biophys.Biomolec.Struct.24269-291；McDonald等(1993)Cell 73421-424；和Isaacs(1995)Curr.Op.Struct.Biol.5391-395。特別是，所述結構提示有許多保守的半胱氨酸，所述半胱氨酸對應於人IL-172(SEQ ID NO2)中於位置101、103、143、156和158的半胱氨酸，並以所述位置編號。第一個半胱氨酸對應於表7中人IL-172(SEQ ID NOL 2)va119的位置。第四個半胱氨酸對應於小鼠IL-172(SEQ ID NO4)的cys141；人IL-173(SEQ ID NO6)的cys119；小鼠IL-174(SEQ ID NO16)的cys104；和人IL-171(SEQ IDNO21)的cys50。二硫鍵應該是半胱氨酸2與5；和3與6；以及1與4。所述摺疊相似性的功能重要性提示IL-170家族形成二聚體。因此，IL-170二聚體可能一起結合兩個細胞表面受體，信號轉導將通過該受體發生。
這些新蛋白被命名為CTLA-8相關蛋白，或一般稱為IL-170蛋白。所述天然蛋白應該能夠介導導致靶細胞中生物應答或生理應答的各種生理應答，例如細胞因子發送信號的特徵性的那些應答。初步研究已經將編碼該蛋白的信息定位至造血細胞的各種細胞系。已經將編碼原始CTLA-8(IL-17)抗原的基因作圖至小鼠染色體1A和人染色體2q31。鼠類CTLA-8最初由Rouvier等克隆((1993)J.Immunol.1505445-5456)。已將人IL-173作圖至染色體13q11。蛋白在其它哺乳動物物種中的相似序列應該也能夠得到。
當用滑膜細胞培養時，純化CTLA-8也能夠誘導從這些細胞分泌IL-6。加入針對人CTLA-8產生的中和抗體時，這種誘導被逆轉。內皮細胞、上皮細胞、成纖維細胞和癌細胞也表現出對用CTLA-8處理而應答。這一數據提示，CTLA-8可能牽涉到炎性纖維變性，例如銀屑病、硬皮病、肺纖維變性或肝硬化。CTLA-8也可能引起癌或其它癌細胞增生，因為IL-6常常充當這類細胞的生長因子。因此，所述新發現的其它相關家族成員可能具有相似或相關的生物活性。
以下的描述舉例說明涉及鼠類或人IL-170蛋白，但同樣可應用於來自其它物種的相關實施方案。II.核酸表1-6公開了各種新IL-170家族成員序列的核苷酸序列和胺基酸序列。所述核苷酸序列和相關試劑可用於構建用DNA克隆，所述DNA克隆可用於在兩個方向上延伸所述克隆的全長序列或側翼序列的測定、表達IL-170多肽，或例如從另一天然來源分離同源基因。通常，所述序列將可用於從小鼠分離其它基因，例如等位基因變異體，而相似的方法將可應用於從其它物種分離基因，例如從溫血動物如鳥類和哺乳動物中分離基因。交叉雜交將允許分離出來自其它物種的基因。應該可利用許多不同的方法來從其它來源成功地分離出合適的核酸克隆。表1編碼靈長類、例如人IL-172多肽的核苷酸序列和預測的胺基酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。顯示了預測的信號切割位點，但所述信號切割位點可能是其兩側的幾個殘基；推定的糖基化位點位於殘基55-57。SEQ IDNO1和2。ATG GAC TGG CCT CAC AAC CTG CTG TTT CTT CTT ACC ATT TCC ATC TTC48Met Asp Trp Pro His Asn Leu Leu Phe Leu Leu Thr Ile Ser Ile Phe-20 -15 -10 -5CTG GGG CTG GGC CAG CCC AGG AGC CCC AAA AGC AAG AGG AAG GGG CAA96Leu Gly Leu Gly Gln Pro Arg Ser Pro Lys Ser Lys Arg Lys Gly Gln1 5 10GGG CGG CCT GGG CCC CTG GTC CCT GGC CCT CAC CAG GTG CCA CTG GAC144Gly Arg Pro Gly Pro Leu Val Pro Gly Pro His Gln Val Pro Leu Asp15 20 25CTG GTG TCA CGG ATG AAA CCG TAT GCC CGC ATG GAG GAG TAT GAG AGG192Leu Val Ser Arg Met Lys Pro Tyr Ala Arg Met Glu Glu Tyr Glu Arg30 35 40AAC ATC GAG GAG ATG GTG GCC CAG CTG AGG AAC AGC TCA GAG CTG GCC240Asn Ile Glu Glu Met Val Ala Gln Leu Arg Asn Ser Ser Glu Leu Ala45 50 55 60CAG AGA AAG TGT GAG GTC AAC TTG CAG CTG TGG ATG TCC AAC AAG AGG288Gln Arg Lys Cys Glu Val Asn Leu Gln Leu Trp Met Ser Asn Lys Arg65 70 75AGC CTG TCT CCC TGG GGC TAC AGC ATC AAC CAC GAC CCC AGC CGT ATC336Ser Leu Ser Pro Trp Gly Tyr Ser Ile Asn His Asp Pro Ser Arg Ile80 85 90CCC GTG GAC CTG CCG GAG GCA CGG TGC CTG TGT CTG GGC TGT GTG AAC384Pro Val Asp Leu Pro Glu Ala Arg Cys Leu Cys Leu Gly Cys Val Asn95 100 105CCC TTC ACC ATG CAG GAG GAC CGC AGC ATG GTG AGC GTG CCG GTG TTC432Pro Phe Thr Met Gln Glu Asp Arg Ser Met Val Ser Val Pro Val Phe110 115 120AGC CAG GTT CCT GTG CGC CGC CGC CTC TGC CCG CCA CCG CCC CGC ACA480Ser Gln Val Pro Val Arg Arg Arg Leu Cys Pro Pro Pro Pro Arg Thr125 130 135 140GGG CCT TGC CGC CAG CGC GCA GTC ATG GAG ACC ATC GCT GTG GGC TGC528Gly Pro Cys Arg Gln Arg Ala Val Met Glu Thr Ile Ala Val Gly Cys145 150 155ACC TGC ATC TTC TGA543Thr Cys Ile Phe160MDWPHNLLFLLTISIFLGLG QPRSPKSKRKGQGRPGPLVPGPHQVPLDLVSRMKPYARMEEYERNIEEMVAQLRNSSELAQRKCEVNLQLWMSNKRSLSPWGYSINHDPSRIPVDLPEARCLCLGCVNPFTMQEDRSMVSVPVFSQVPVRRRLCPPPPRTGPCRQRAVMETIAVGCTCIF特別感興趣的區段包括例如始於或終止於以下位置的那些區段ghn1、Val19、pro20、pro22、lys34、pro35、leu78、ser79、glu98、ala99、phe110、thr111、cys143或arg144。編碼齧齒動物、例如小鼠IL-172多肽的核苷酸序列和預測的胺基酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。顯示了預測的信號切割位點，但所述信號切割位點可能是其兩側的幾個殘基；推定的糖基化位點位於殘基53-55。SEQ ID NO3和4。ATG GAC TGG CCG CAC AGC CTG CTC TTC CTC CTG GCC ATC TCC ATC TTC 48Met Asp Trp Pro His Ser Leu Leu Phe Leu Leu Ala Ile Ser Ile Phe-22 -20 -15 -10CTG GCG CCA AGC CAC CCC CGG AAC ACC AAA GGC AAA AGA AAA GGG CAA 96Leu Ala Pro Ser His Pro Arg Asn Thr Lys Gly Lys Arg Lys Gly Gln-5 1 5 10GGG AGG CCC AGT CCC TTG GCC CCT GGG CCT CAT CAG GTG CCG CTG GAC 144Gly Arg Pro Ser Pro Leu Ala Pro Gly Pro His Gln Val Pro Leu Asp15 20 25CTG GTG TCT CGA GTA AAG CCC TAC GCT CGA ATG GAA GAG TAT GAG CGG 192Leu Val Ser Arg Val Lys Pro Tyr Ala Arg Met Glu Glu Tyr Glu Arg30 35 40AAC CTT GGG GAG ATG GTG GCC CAG CTG AGG AAC AGC TCC GAG CCA GCC 240Asn Leu Gly Glu Met Val Ala Gln Leu Arg Asn Ser Ser Glu Pro Ala45 50 55AAG AAG AAA TGT GAA GTC AAT CTA CAG CTG TGG TTG TCC AAC AAG AGG 288Lys Lys Lys Cys Glu Val Asn Leu Gln Leu Trp Leu Ser Asn Lys Arg60 65 70AGC CTG TCC CCA TGG GGC TAC AGC ATC AAC CAC GAC CCC AGC CGC ATC 336Ser Leu Ser Pro Trp Gly Tyr Ser Ile Asn His Asp Pro Ser Arg Ile75 80 85 90CCT GCG GAC TTG CCC GAG GCG CGG TGC CTA TGT TTG GGT TGC GTG AAT 384Pro Ala Asp Leu Pro Glu Ala Arg Cys Leu Cys Leu Gly Cys Val Asn95 100 105CCC TTC ACC ATG CAG GAG GAC CGT AGC ATG GTG AGC GTG CCA GTG TTC 432Pro Phe Thr Met Gln Glu Asp Arg Ser Met Val Ser Val Pro Val Phe110 115 120AGC CAG GTG CCG GTG CGC CGC CGC CTC TGT CCT CAA CCT CCT CGC CCT 480Ser Gln Val Pro Val Arg Arg Arg Leu Cys Pro Gln Pro Pro Arg Pro125 130 135GGG CCC TGC CGC CAG CGT GTC GTC ATG GAG ACC ATC GCT GTG GGT TGC 528Gly Pro Cys Arg Gln Arg Val Val Met Glu Thr Ile Ala Val Gly Cys140 145 150ACC TGC ATC TTC TGA 543Thr Cys Ile Phe155MDWPHSLLFLLAISIFLAPSHP RNTKGKRKGQGRPSPLAPGPHQVPLDLVSRVKPYARMEEYERNLGEMVAQLRNSSEPAKKKCEVNLQLWLSNKRSLSPWGYSINHDPSRIPADLPEARCLCLGCVNPFTMQEDRSMVSVPVFSQVPVRRRLCPQPPRPGPCRQRVVMETIAVGCTCIF特別感興趣的區段包括例如始於或終止於以下位置的那些區段arg1、ala17、pro18、pro20、his21、lys32、pro33、leu76、ser77、glu96、ala97、phe108、thr109、cys141或arg142。表2編碼靈長類、例如人IL-173多肽的核苷酸序列和預測的胺基酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。SEQ ID NO5和6。TGC GCG GAC CGG CCG GAG GAG CTA CTG GAG CAG CTG TAC GGG CGC CTG 48Cys Ala Asp Arg Pro Glu Glu Leu Leu Glu Gln Leu Tyr Gly Arg Leu1 5 10 15GCG GCC GGC GTG CTC AGT GCC TTC CAC CAC ACG CTG CAG CTG GGG CCG 96Ala Ala Gly Val Leu Ser Ala Phe His His Thr Leu Gln Leu Gly Pro20 25 30CGT GAG CAG GCG CGC AAC GCG AGC TGC CCG GCA GGG GGC AGG CCC GCC 144Arg Glu Gln Ala Arg Asn Ala Ser Cys Pro Ala Gly Gly Arg Pro Ala35 40 45GAC CGC CGC TTC CGG ACG CCC ACC AAC CTG CGC AGC GTG TCG CCC TGG 192Asp Arg Arg Phe Arg Thr Pro Thr Asn Leu Arg Ser Val Ser Pro Trp50 55 60GCC TAC AGA ATC TCC TAC GAC CCG GCG AGG TAC CCC AGG TAC CTG CCT 240Ala Tyr Arg Ile Ser Tyr Asp Pro Ala Arg Tyr Pro Arg Tyr Leu Pro65 70 75 80GAA GCC TAC TGC CTG TGC CGG GGC TGC CTG ACC GGG CTG TTC GGC GAG 288Glu Ala Tyr Cys Leu Cys Arg Gly Cys Leu Thr Gly Leu Phe Gly Glu85 90 95GAG GAC GTG CGC TTC CGC AGC GCC CCT GTC TAC ATG CCC ACC GTC GTC 336Glu Asp Val Arg Phe Arg Ser Ala Pro Val Tyr Met Pro Thr Val Val100 105 110CTG CGC CGC ACC CCC GCC TGC GCC GGC GGC CGT TCC GTC TAC ACC GAG 384Leu Arg Arg Thr Pro Ala Cys Ala Gly Gly Arg Ser Val Tyr Thr Glu115 120 125GCC TAC GTC ACC ATC CCC GTG GGC TGC ACC TGC GTC CCC GAG CCG GAG 432Ala Tyr Val Thr Ile Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Pro Glu Pro Glu130 135 140AAG GAC GCA GAC AGC ATC AAC T454Lys Asp Ala Asp Ser Ile Asn145 150CADRPEELLEQLYGRLAAGVLSAFHHTLQLGPREQARNASCPAGGRPADRRFRTPTNLRSVSPWAYRISYDPARYPRYLPEAYCLCRGCLTGLFGEEDVRFRSAPVYMPTVVLRRTPACAGGRSVYTEAYVTIPVGCTCVPEPEKDADSIN補充的編碼靈長類、例如人IL-173多肽的核苷酸序列和預測的胺基酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。SEQ ID NO7和8。gcccgggcag gtggcgacct cgctcagtcg gcttctcggt ccaagtcccc gggtctgg 58atg ctg gta gcc ggc ttc ctg ctg gcg ctg ccg ccg agc tgg gcc gcg 106Met Leu Val Ala Gly Phe Leu Leu Ala Leu Pro Pro Ser Trp Ala Ala-15 -10 -5ggc gcc ccg agg gcg ggc agg cgc ccc gcg cgg ccg cgg ggc tgc gcg 154Gly Ala Pro Arg Ala Gly Arg Arg Pro Ala Arg Pro Arg Gly Cys Ala-1 1 5 10 15gac cgg ccg gag gag cta ctg gag cag ctg tac ggg cgc ctg gcg gcc 202Asp Arg Pro Glu Glu Leu Leu Glu Gln Leu Tyr Gly Arg Leu Ala Ala20 25 30ggc gtg ctc agt gcc ttc cac cac acg ctg cag ctg ggg ccg cgt gag 250Gly Val Leu Ser Ala Phe His His Thr Leu Gln Leu Gly Pro Arg Glu35 40 45cag gcg cgc aac gcg agc tgc ccg gca ggg ggc agg ccc gcc gac cgc 298Gln Ala Arg Asn Ala Ser Cys Pro Ala Gly Gly Arg Pro Ala Asp Arg50 55 60cgc ttc cgg ccg ccc acc aac ctg cgc agc gtg tcg ccc tgg gcc tac 346Arg Phe Arg Pro Pro Thr Asn Leu Arg Ser Val Ser Pro Trp Ala Tyr65 70 75aga atc tcc tac gac ccg gcg agg tac ccc agg tac ctg cct gaa gcc 394Arg Ile Ser Tyr Asp Pro Ala Arg Tyr Pro Arg Tyr Leu Pro Glu Ala80 85 90 95tac tgc ctg tgc cgg ggc tgc ctg acc ggg ctg ttc ggc gag gag gac 442Tyr Cys Leu Cys Arg Gly Cys Leu Thr Gly Leu Phe Gly Glu Glu Asp100 105 110gtg cgc ttc cgc agc gcc cct gtc tac atg ccc acc gtc gtc ctg cgc 490Val Arg Phe Arg Ser Ala Pro Val Tyr Met Pro Thr Val Val Leu Arg115 120 125cgc acc ccc gcc tgc gcc ggc ggc cgt tcc gtc tac acc gag gcc tac 538Arg Thr Pro Ala Cys Ala Gly Gly Arg Ser Val Tyr Thr Glu Ala Tyr130 135 140gtc acc atc ccc gtg ggc tgc acc tgc gtc ccc gag ccg gag aag gac 586Val Thr Ile Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Pro Glu Pro Glu Lys Asp145 150 155gca gac agc atc aac tcc agc atc gac aaa cag ggc gcc aag ctc ctg 634Ala Asp Ser Ile Asn Ser Ser Ile Asp Lys Gln Gly Ala Lys Leu Leu160 165 170 175ctg ggc ccc aac gac gcg ccc gct ggc ccc tgaggccggt cctgccccgg 684Leu Gly Pro Asn Asp Ala Pro Ala Gly Pro180 185gaggtctccc cggcccgcat cccgaggcgc ccaagctgga gccgcctgga gggctcggtc 744ggcgacctct gaagagagtg caccgagcaa accaagtgcc ggagcaccag cgccgccttt 804ccatggagac tcgtaagcag cttcatctga cacgggcatc cctggcttgc ttttagctac 864aagcaagcag cgtggctgga agctgatggg aaacgacccg gcacgggcat cctgtgtgcg 924gcccgcatgg agggtttgga aaagttcacg gaggctccct gaggagcctc tcagatcggc 984tgctgcgggt gcagggcgtg actcaccgct gggtgcttgc caaagagata gggacgcata 1044tgctttttaa agcaatctaa aaataataat aagtatagcg actatatacc tacttttaaa 1104atcaactgtt ttgaatagag gcagagctat tttatattat caaatgagag ctactctgtt 1164acatttctta acatataaac atcgtttttt acttcttctg gtagaatttt ttaaagcata 1224attggaatcc ttggataaat tttgtagctg gtacactctg gcctgggtct ctgaattcag 1284cctgtcaccg atggctgact gatgaaatgg acacgtctca tctgacccac tcttccttcc 1344actgaaggtc ttcacgggcc tccaggcctc gtgccgaatt c 1385MLVAGFLLALPPSWAAGAPRAGRRPARPRGCADRPEELLEQLYGRLAAGVLSAFHHTLQLGPREQARNASCPAGGRPADRRFRPPTNLRSVSPWAYRISYDPARYPRYLPEAYCLCRGCLTGLFGEEDVRFRSAPVYMPTVVLRRTPACAGGRSVYTEAYVTIPVGCTCVPEPEKDADSINSSIDKQGAKLLLGPNDAPAGP預測的重要基序包括例如cAMP PK，位於50-53、66-69、72-75和113-116；CaPhos，位於82-84和166-168；肉豆蔻醯位點，位於57-61和164-166；磷酸化位點，位於50、53、72、75、80、82、113和116。編碼齧齒動物、例如小鼠IL-173多肽的核苷酸序列和預測的胺基酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。SEQ ID NO9和10。TTT CCG AGA TAC CTG CCC GAA GCC TAC TGC CTG TGC CGA GGC TGT CTG48Phe Pro Arg Tyr Leu Pro Glu Ala Tyr Cys Leu Cys Arg Gly Cys Leu1 5 10 15ACC GGG CTC TAC GGT GAG GAG GAC TTC CGC TTT CGC AGC GCA CCC GTC96Thr Gly Leu Tyr Gly Glu Glu Asp Phe Arg Phe Arg Ser Ala Pro Val20 25 30TTC TCT CCG GCG GTG GTG CTG CGG CGC ACG GCG GCC T 133Phe Ser Pro Ala Val Val Leu Arg Arg Thr Ala Ala35 40FPRYLPEAYCLCRGCLTGLYGEEDFRFRSAPVFSPAVVLRRTAA補充的編碼齧齒動物、例如小鼠IL-173多肽的核苷酸序列和預測的胺基酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。SEQ ID NO11和12。atg ttg ggg aca ctg gtc tgg atg ctc ctc gtc ggc ttc ctg ctg gca 48Met Leu Gly Thr Leu Val Trp Met Leu Leu Val Gly Phe Leu Leu Ala-20 -15 -10ctg gcg ccg ggc cgc gcg gcg ggc gcg ctg agg acc ggg agg cgc ccg 96Leu Ala Pro Gly Arg Ala Ala Gly Ala Leu Arg Thr Gly Arg Arg Pro-5 -1 1 5gcg cgg ccg cgg gac tgc gcg gac cgg cca gag gag ctc ctg gag cag 144Ala Arg Pro Arg Asp Cys Ala Asp Arg Pro Glu Glu Leu Leu Glu Gln10 15 20ctg tac ggg cgg ctg gcg gcc ggc gtg ctc agc gcc ttc cac cac acg 192Leu Tyr Gly Arg Leu Ala Ala Gly Val Leu Ser Ala Phe His His Thr25 30 35 40ctg cag ctc ggg ccg cgc gag cag gcg cgc aat gcc agc tgc ccg gcc 240Leu Gln Leu Gly Pro Arg Glu Gln Ala Arg Asn Ala Ser Cys Pro Ala45 50 55ggg ggc agg gcc gcc gac cgc cgc ttc cgg cca ccc acc aac ctg cgc 288Gly Gly Arg Ala Ala Asp Arg Arg Phe Arg Pro Pro Thr Asn Leu Arg60 65 70agc gtg tcg ccc tgg gcg tac agg att tcc tac gac cct gct cgc ttt 336Ser Val Ser Pro Trp Ala Tyr Arg Ile Ser Tyr Asp Pro Ala Arg Phe75 80 85ccg agg tac ctg ccc gaa gcc tac tgc ctg tgc cga ggc tgc ctg acc 384Pro Arg Tyr Leu Pro Glu Ala Tyr Cys Leu Cys Arg Gly Cys Leu Thr90 95 100ggg ctc tac ggg gag gag gac ttc cgc ttt cgc agc aca ccc gtc ttc 432Gly Leu Tyr Gly Glu Glu Asp Phe Arg Phe Arg Ser Thr Pro Val Phe105 110 115 120tct cca gcc gtg gtg ctg cgg cgc aca gcg gcc tgc gcg ggc ggc cgc 480Ser Pro Ala Val Val Leu Arg Arg Thr Ala Ala Cys Ala Gly Gly Arg125 130 135tct gtg tac gcc gaa cac tac atc acc atc ccg gtg ggc tgc acc tgc 528Ser Val Tyr Ala Glu His Tyr Ile Thr Ile Pro Val Gly Cys Thr Cys140 145 150gtg ccc gag ccg gac aag tcc gcg gac agt gcg aac tcc agc atg gac 576Val Pro Glu Pro Asp Lys Ser Ala Asp Ser Ala Asn Ser Ser Met Asp155 160 165aag ctg ctg ctg ggg ccc gcc gac agg cct gcg ggg cgc tgatgccggg625Lys Leu Leu Leu Gly Pro Ala Asp Arg Pro Ala Gly Arg170 175 180gactgcccgc catggcccag cttcctgcat gcatcaggtc ccctggccct gacaaaaccc 685accccatgat ccctggccgc tgcctaattt ttccaaaagg acagctacat aagctttaaa 745tatatttttc aaagtagaca ctacatatct acaactattt tgaatagtgg cagaaactat 805tttcatatta gtaatttaga gcaagcatgt tgtttttaaa cttctttgat atacaagcac 865atcacacaca tcccgttttc ctctagtagg attcttgagt gcataattgt agtgctcaga 925tgaacttcct tctgctgcac tgtgccctgt ccctgagtct ctcctgtggc ccaagcttac 985taaggtgata atgagtgctc cggatctggg cacctaaggt ctccaggtcc ctggagaggg 1045agggatgtgg gggggctagg aaccaagcgc ccctttgttc tttagcttat ggatggtctt 1105aactttataa agattaaagt ttttggtgtt attctttc 1143MLGTLVWMLLVGFLLALAPGRAAGALRTGRRPARPRDCADRPEELLEQLYGRLAAGVLSAFHHTLQLGPREQARNASCPAGGRAADRRFRPPTNLRSVSPWAYRISYDPARFPRYLPEAYCLCRGCLTGLYGEEDFRFRSTPVFSPAVVLRRTAACAGGRSVYAEHYITIPVGCTCVPEPDKSADSANSSMDKLLLGPADRPAGR.
預測的重要基序包括例如cAMP PK位點，位於50-53、66-69、72-75和113-116；鈣磷酸化位點，位於82-84、159-161和166-168；肉豆蔻醯位點，位於57-61和101-105；N-糖基位點，位於51-53和164-166；磷酸化位點，位於50、53、72、71、80、82、113和116；和PKC磷酸化位點，位於4-6。表3編碼靈長類、例如人IL-174多肽的核苷酸序列和預測的胺基酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。SEQ ID NO13和14。tgagtgtgca gtgccagc atg tac cag gtg gtt gca ttc ttg gca atg gtc 51Met Tyr Gln Val Val Ala Phe Leu Ala Met Val-15 -10atg gga acc cac acc tac agc cac tgg ccc agc tgc tgc ccc agc aaa 99Met Gly Thr His Thr Tyr Ser His Trp Pro Ser Cys Cys Pro Ser Lys-5 -1 1 5 10ggg cag gac acc tct gag gag ctg ctg agg tgg agc act gtg cct gtg 147Gly Gln Asp Thr Ser Glu Glu Leu Leu Arg Trp Ser Thr Val Pro Val15 20 25cct ccc cta gag cct gct agg ccc aac cgc cac cca gag tcc tgt agg 195Pro Pro Leu Glu Pro Ala Arg Pro Asn Arg His Pro Glu Ser Cys Arg30 35 40gcc agt gaa gat gga ccc ctc aac agc agg gcc atc tcc ccc tgg aga 243Ala Ser Glu Asp Gly Pro Leu Asn Ser Arg Ala Ile Ser Pro Trp Arg45 50 55tat gag ttg gac aga gac ttg aac cgg ctc ccc cag gac ctg tac cac 291Tyr Glu Leu Asp Arg Asp Leu Asn Arg Leu Pro Gln Asp Leu Tyr His60 65 70 75gcc cgt tgc ctg tgc ccg cac tgc gtc agc cta cag aca ggc tcc cac 339Ala Arg Cys Leu Cys Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr Gly Ser His80 85 90atg gac ccc cgg ggc aac tcg gag ctg ctc tac cac aac cag act gtc 387Met Asp Pro Arg Gly Asn Ser Glu Leu Leu Tyr His Asn Gln Thr Val95 100 105ttc tac cgg cgg cca tgc cat ggc gag aag ggc acc cac aag ggc tac 435Phe Tyr Arg Arg Pro Cys His Gly Glu Lys Gly Thr His Lys Gly Tyr110 115 120tgc ctg gag cgc agg ctg tac cgt gtt tcc tta gct tgt gtg tgt gtg 483Cys Leu Glu Arg Arg Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys Val Cys Val125 130 135cgg ccc cgt gtg atg ggc tag 504Arg Pro Arg Val Met Gly140 145MYQVVAFLAMVMGTHTYSHWPSCCPSKGQDTSEELLRWSTVPVPPLEPARPNRHPESCRASEDQPLNSRAISPWRYELDRDLNRLPQDLYHARCLCPHCVSLQTGSHMDPRGNSELLYHNQTVFYRRPCHGEKGTHKGYCLERRLYRVSLACVCVRPRVMG預測的重要基序包括例如cAMP PK位點，位於21-24、53-56和95-98；鈣磷酸化位點，位於15-17、16-18和45-47；肉豆蔻醯位點，位於12-16、115-119和118-122；N-糖基位點，位於104-107；磷酸化位點，位於21、23、43、53、56、95、98和131；PKC磷酸化位點，位於41-43和119-121；和酪氨酸激酶位點，位於95-102。編碼齧齒動物、例如小鼠IL-174多肽的核苷酸序列和預測的胺基酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。SEQ ID NO15和16。CGG CAC AGG CGG CAC AAA GCC CGG AGA GTG GCT GAA GTG GAG CTC TGC 48Arg His Arg Arg His Lys Ala Arg Arg Val Ala Glu Val Glu Leu Cys1 5 10 15ATC TGT ATC CCC CCC AGA GCC TCT GAG CCA CAC CCA CCA CGC AGA ATC 96Ile Cys Ile Pro Pro Arg Ala Ser Glu Pro His Pro Pro Arg Arg Ile20 25 30CTG CAG GGC CAG CAA GGA TGG CCT CTC AAC AGC AGG GCC ATC TCT CCT 144Leu Gln Gly Gln Gln Gly Trp Pro Leu Asn Ser Arg Ala Ile Ser Pro35 40 45TGG AGC TAT GAG TTG GAC AGG GAC TTG AAT CGG GTC CCC CAG GAC TGG 192Trp Ser Tyr Glu Leu Asp Arg Asp Leu Asn Arg Val Pro Gln Asp Trp50 55 60TAC CAC GCT CGA TGC CTG TGC CCA CAC TGC GTC ACG CTA CAG ACA GGC 240Tyr His Ala Arg Cys Leu Cys Pro His Cys Val Thr Leu Gln Thr Gly65 70 75 80TCC CAC ATG GAC CCG CTG GGC AAC TCC GTC CCA CTT TAC CAC AAC CAG 288Ser His Met Asp Pro Leu Gly Asn Ser Val Pro Leu Tyr His Asn Gln85 90 95ACG GTC TTC TAC CGG CGG CCA TGC ATG GCG AGG AAG GTA CCC ATC GCC 336Thr Val Phe Tyr Arg Arg Pro Cys Met Ala Arg Lys Val Pro Ile Ala100 105 110GCT ACT GCT TGG AGC GCA GGT CTA CCG AGT CTC CTT GGC TTG TGT GTG 384Ala Thr Ala Trp Ser Ala Gly Leu Pro Ser Leu Leu Gly Leu Cys Val115 120 125TGT GCG GCC CCG GGT CAT GGC TTA GTC ATG CTC ACC ATC TGC CTG AGG 432Cys Ala Ala Pro Gly His Gly Leu Val Met Leu Thr Ile Cys Leu Arg130 135 140TGAATGCCGG GTGGGAGAGA GGGCCAGGTG TACATCACCT GCCAATGCGG GCCGGGTTCA 492AGCCTGCAAA GCCTACCTGA AGCAGCAGGT CCCGGGACAG GATGGAGACT TGGGGAGAAA 552TCTGACTTTT GCACTTTTTG GAGCATTTTG GGAAGAGCAG GTTCGCTTGT GCTGTAGAGA 612TGCTGTTG620RHRRHKARRVAEVELCICIPPRASEPHPPRRILQGQQGWPLNSRAISPWSYELDRDLNRVPQDWYHARCLCPHCVTLQTGSHMDPLGNSVPLYHNQTVFYRRPCMARKVPIAATAWSAGLPSLLGLCVCAAPGHGLVMLTICLR補充的編碼齧齒動物、例如小鼠IL-174多肽的核苷酸序列和預測的胺基酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。SEQ ID NO17和18。atg tac cag gct gtt gca ttc ttg gca atg atc gtg gga acc cac acc 48Met Tyr Gln Ala Val Ala Phe Leu Ala Met Ile Val Gly Thr His Thr-15 -10 -5 -1gtc agc ttg cgg atc cag gag ggc tgc agt cac ttg ccc agc tgc tgc 96Val Ser Leu Arg Ile Gln Glu Gly Cys Ser His Leu Pro Ser Cys Cys1 5 10 15ccc agc aaa gag caa gaa ccc ccg gag gag tgg ctg aag tgg agc tct 144Pro Ser Lys Glu Gln Glu Pro Pro Glu Glu Trp Leu Lys Trp Ser Ser20 25 30gca tct gtg tcc ccc cca gag cct ctg agc cac acc cac cac gca gaa 192Ala Ser Val Ser Pro Pro Glu Pro Leu Ser His Thr His His Ala Glu35 40 45tcc tgc agg gcc agc aag gat ggc ccc ctc aac agc agg gcc atc tct 240Ser Cys Arg Ala Ser Lys Asp Gly Pro Leu Asn Ser Arg Ala Ile Ser50 55 60cct tgg agc tat gag ttg gac agg gac ttg aat cgg gtc ccc cag gac 288Pro Trp Ser Tyr Glu Leu Asp Arg Asp Leu Asn Arg Val Pro Gln Asp65 70 75 80ctg tac cac gct cga tgc ctg tgc cca cac tgc gtc agc cta cag aca 336Leu Tyr His Ala Arg Cys Leu Cys Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr85 90 95ggc tcc cac atg gac ccg ctg ggc aac tcc gtc cca ctt tac cac aac 384Gly Ser His Met Asp Pro Leu Gly Asn Ser Val Pro Leu Tyr His Asn100 105 110cag acg gtc ttc tac cgg cgg cca tgc cat ggt gag gaa ggt acc cat 432Gln Thr Val Phe Tyr Arg Arg Pro Cys His Gly Glu Glu Gly Thr His115 120 125cgc cgc tac tgc ttg gag cgc agg ctc tac cga gtc tcc ttg gct tgt 480Arg Arg Tyr Cys Leu Glu Arg Arg Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys130 135 140gtg tgt gtg cgg ccc cgg gtc atg gct tagtcatgct caccacctgc 527Val Cys Val Arg Pro Arg Val Met Ala145 150ctgaggctga tgcccggttg ggagagaggg ccaggtgtac aatcaccttg ccaatgcggg 587ccgggttcaa gccctccaaa gccctacctg aagcagcagg ctcccgggac aagatggagg 647acttggggag aaactctgac ttttgcactt tttggaagca cttttgggaa ggagcaggtt 707ccgcttgtgc tgctagagga tgctgttgtg gcatttctac tcaggaacgg actccaaagg 767cctgctgacc ctggaagcca tactcctggc tcctttcccc tgaatccccc aactcctggc 827acaggcactt tctccacctc tccccctttg ccttttgttg tgtttgtttg tgcatgccaa 887ctctgcgtgc agccaggtgt aattgccttg aaggatggtt ctgaggtgaa agctgttatc 947gaaagtgaag agatttatcc aaataaacat ctgtgttt 985MYQAVAFLAMIVGTHTVSLRIQEGCSHLPSCCPSKEQEPPEEWLKWSSASVSPPEPLSHTHHAESCRASKDGPLNSRAISPWSYELDRDLNRVPQDLYHARCLCPHCVSLQTGSHMDPLGNSVPLYHNQTVEYRRPCHGEEGTHRRYCLERRLYRVSLACVCVRPRVMA
預測的重要基序包括例如cAMP PK位點，位於29-32和61-64；鈣磷酸化位點，位於18-20、53-55和67-69；肉豆蔻醯位點，位於123-127；N-糖基化位點，位於112-114；和磷酸化位點，位於29、31、51、53、61、64、139和141；和PKC磷酸化位點，位於2-4、49-51和127-129。表4編碼靈長類、例如人IL-171的按照IUPAC代碼的核苷酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。SEQ ID NO19。GACACGGATG AGGACCGCTA TCCACAGAAG CTGGCCTTCG CCGAGTGCCT GTGCAGAGGC 60TGTATCGATG CACGGACGGG CCGCGAGACA GCTGCGCTCA ACTCCGTGCG GCTGCTCCAG 120AGCCTGCTGG TGCTGCGCCG CCGGCCCTGC TCCCGCGACG GCTCGGGGCT CCCCACACCT 180GGGGCCTTTG CCTTCCACAC CGAGTTCATC CACGTCCCCG TCGGCTGCAC CTGCGTGCTG 240CCCCGTTCAA GTGTGACCGC CAAGGCCGTG GGGCCCTTAG NTGACACCGT GTGCTCCCCA 300GAGGGACCCC TATTTATGGG AATTATGGTA TTATATGCTT CCCACATACT TGGGGCTGGC 360ATCCCGNGCT GAGACAGCCC CCTGTTCTAT TCAGCTATAT GGGGAGAAGA GTAGACTTTC 420AGCTAAGTGA AAAGTGNAAC GTGCTGACTG TCTGCTGTCG TNCTACTNAT GCTAGCCCGA 480GTGTTCACTC TGAGCCTGTT AAATATAGGC GGTTATGTAC C 521SEQ ID NO20和21是PATENTIN可翻譯cDNA序列和多肽序列GAC ACG GAT GAG GAC CGC TAT CCA CAG AAG CTG GCC TTC GCC GAG TGC48Asp Thr Asp Glu Asp Arg Tyr Pro Gln Lys Leu Ala Phe Ala Glu Cys1 5 10 15CTG TGC AGA GGC TGT ATC GAT GCA CGG ACG GGC CGC GAG ACA GCT GCG96Leu Cys Arg Gly Cys Ile Asp Ala Arg Thr Gly Arg Glu Thr Ala Ala20 25 30CTC AAC TCC GTG CGG CTG CTC CAG AGC CTG CTG GTG CTG CGC CGC CGG144Leu Asn Ser Val Arg Leu Leu Gln Ser Leu Leu Val Leu Arg Arg Arg35 40 45CCC TGC TCC CGC GAC GGC TCG GGG CTC CCC ACA CCT GGG GCC TTT GCC192Pro Cys Ser Arg Asp Gly Ser Gly Leu Pro Thr Pro Gly Ala Phe Ala50 55 60TTC CAC ACC GAG TTC ATC CAC GTC CCC GTC GGC TGC ACC TGC GTG CTG240Phe His Thr Glu Phe Ile His Val Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Leu65 70 75 80CCC CGT TCA AGT GTG ACC GCC AAG GCC GTG GGG CCC TTA GnT GAC ACC288Pro Arg Ser Ser Val Thr Ala Lys Ala Val Gly Pro Leu Xaa Asp Thr85 90 95GTG TGC TCC CCA GAG GGA CCC CTA TTT ATG GGA ATT ATG GTA TTA TAT336Val Cys Ser Pro Glu Gly Pro Leu Phe Met Gly Ile Met Val Leu Tyr100 105 110GCT TCC CAC ATA CTT GGG GCT GGC ATC CCG nGC TGAGACAGCC CCCTGTTCTA 389Ala Ser His Ile Leu Gly Ala Gly Ile Pro Xaa115 120TTCAGCTATA TGGGGAGAAG AGTAGACTTT CAGCTAAGTG AAAAGTGCAA CGTGCTGACT 449GTCTGCTGTC GTCCTACTCA TGCTAGCCCG AGTGTTCACT CTGAGCCTGT TAAATATAGG 509CGGTTATGTA CC 521DTDEDRYPQKLAFAECLCRGCIDARTGRETAALNSVRLLQSLLVLRRRPCSRDGSGLPTPGAFAFHTEFIHVPVGCTCVLPRSSVTAKAVGPLXDTVCSPEGPLFMGIMVLYASHILGAGIPX補充的編碼靈長類、例如人IL-171的核苷酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。SEQ ID NO22和23。gtgtggcctc aggtataaga gcggctgctg ccaggtgcat ggccaggtgc acctgtggga 60ttgccgccag gtgtgcaggc cgctccaagc ccagcctgcc ccgctgccgc cacc atg 117Metacg ctc ctc ccc ggc ctc ctg ttt ctg acc tgg ctg cac aca tgc ctg 165Thr Leu Leu Pro Gly Leu Leu Phe Leu Thr Trp Leu His Thr Cys Leu-15 -10 -5 -1gcc cac cat gac ccc tcc ctc agg ggg cac ccc cac agt cac ggt acc 213Ala His His Asp Pro Ser Leu Arg Gly His Pro His Ser His Gly Thr1 5 10 15cca cac tgc tac tcg gct gag gaa ctg ccc ctc ggc cag gcc ccc cca 261Pro His Cys Tyr Ser Ala Glu Glu Leu Pro Leu Gly Gln Ala Pro Pro20 25 30cac ctg ctg gct cga ggt gcc aag tgg ggg cag gct ttg cct gta gcc 309His Leu Leu Ala Arg Gly Ala Lys Trp Gly Gln Ala Leu Pro Val Ala35 40 45ctg gtg tcc agc ctg gag gca gca agc cac agg ggg agg cac gag agg 357Leu Val Ser Ser Leu Glu Ala Ala Ser His Arg Gly Arg His Glu Arg50 55 60ccc tca gct acg acc cag tgc ccg gtg ctg cgg ccg gag gag gtg ttg 405Pro Ser Ala Thr Thr Gln Cys Pro Val Leu Arg Pro Glu Glu Val Leu65 70 75 80gag gca gac acc cac cag cgc tcc atc tca ccc tgg aga tac cgt gtg 453Glu Ala Asp Thr His Gln Arg Ser Ile Ser Pro Trp Arg Tyr Arg Val85 90 95gac acg gat gag gac cgc tat cca cag aag ctg gcc ttc gcc gag tgc 501Asp Thr Asp Glu Asp Arg Tyr Pro Gln Lys Leu Ala Phe Ala Glu Cys100 105 110ctg tgc aga ggc tgt atc gat gca cgg acg ggc cgc gag aca gct gcg 549Leu Cys Arg Gly Cys Ile Asp Ala Arg Thr Gly Arg Glu Thr Ala Ala115 120 125ctc aac tcc gtg cgg ctg ctc cag agc ctg ctg gtg ctg cgc cgc cgg 597Leu Asn Ser Val Arg Leu Leu Gln Ser Leu Leu Val Leu Arg Arg Arg130 135 140ccc tgc tcc cgc gac ggc tcg ggg ctc ccc aca cct ggg gcc ttt gcc 645Pro Cys Ser Arg Asp Gly Ser Gly Leu Pro Thr Pro Gly Ala Phe Ala145 150 155 160ttc cac acc gag ttc atc cac gtc ccc gtc ggc tgc acc tgc gtg ctg 693Phe His Thr Glu Phe Ile His Val Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Leu165 170 175ccc cgt tca gtg tgaccgccga ggccgtgggg cccctagact ggacacgtgt 745Pro Arg Ser Val180gctccccaga gggcaccccc tatttatgtg tatttattgg tatttatatg cctcccccaa 805cactaccctt ggggtctggg cattccccgt gtctggagga cagcccccca ctgttctcct 865catctccagc ctcagtagtt gggggtagaa ggagctcagc acctcttcca gcccttaaag 925ctgcagaaaa ggtgtcacac ggctgcctgt accttggctc cctgtcctgc tcccggcttc 985ccttacccta tcactggcct caggcccccg caggctgcct cttcccaacc tccttggaag 1045tacccctgtt tcttaaacaa ttatttaagt gtacgtgtat tattaaactg atgaacacat 1105cc1107MTLLPGLLFLTWLHTCLAHHDPSLRGHPHSHGTPHCYSAEELPLGQAPPHLLARGAKWGQALPVALVSSLEAASHRGRHERPSATTQCPVLRPEEVLEADTHQRSISPWRYRVDTDEDRYPQKLAFAECLCRGCIDARTGRETAALNSVRLLQSLLVLRRRPCSRDGSGLPTPGAFAFHTEFIHVPVGCTCVLPRSV表5編碼靈長類、例如人IL-175序列的按照IUPAC代碼的核苷酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。SEO ID NO24。GAGAAAGAGC TTCCTGCACA AAGTAAGCCA CCAGCGCAAC ATGACAGTGA AGACCCTGCA 60TGGCCCAGCC ATGGTCAAGT ACTTGCTGCT GTCGATATTG GGGCTTGCCT TTCTGAGTGA 120GGCGGCAGCT CGGAAAATCC CCAAAGTAGG ACATACTTTT TTCCAAAAGC CTGAGAGTTG 180CCCGCCTGTG CCAGGAGGTA GTATGAAGCT TGACATTGGC ATCATCAATG AAAACCAGCG 240CGTTTCCATG TCACGTAACA TCGAGAGCCG CTCCACCTCC CCCTGGAATT ACACTGTCAC 300TTGGGACCCC AACCGGTACC CCTCGAAGTT GTACAGGC C AAGTGTAGGA ACTTGGGCTG 360TATCAATGCT CAAGGAAAGG AAGACATCTN CATGAATTCC GTC 403SEQ ID NO25和26是PATENTIN可翻譯cDNA序列和多肽序列。顯示了預測的信號切割位點，但所述信號切割位點也可以是兩側的幾個殘基；推定的糖基化位點位於53-55GAGAAAGAGC TTCCTGCACA AAGTAAGCCA CCAGCGCAAC ATGACAGTGA AGACCCTGCA 60TGGCCCAGCC ATG GTC AAG TAC TTG CTG CTG TCG ATA TTG GGG CTT GCC 109Met Val Lys Tyr Leu Leu Leu Ser Ile Leu Gly Leu Ala-20 -15 -10TTT CTG AGT GAG GCG GCA GCT CGG AAA ATC CCC AAA GTA GGA CAT ACT157Phe Leu Ser Glu Ala Ala Ala Arg Lys Ile Pro Lys Val Gly His Thr-5 1 5TTT TTC CAA AAG CCT GAG AGT TGC CCG CCT GTG CCA GGA GGT AGT ATG205Phe Phe Gln Lys Pro Glu Ser Cys Pro Pro Val Pro Gly Gly Ser Met10 15 20 25AAG CTT GAC ATT GGC ATC ATC AAT GAA AAC CAG CGC GTT TCC ATG TCA253Lys Leu Asp Ile Gly Ile Ile Asn Glu Asn Gln Arg Val Ser Met Ser30 35 40CGT AAC ATC GAG AGC CGC TCC ACC TCC CCC TGG AAT TAC ACT GTC ACT301Arg Asn Ile Glu Ser Arg Ser Thr Ser Pro Trp Asn Tyr Thr Val Thr45 50 55TGG GAC CCC AAC CGG TAC CCC TCG AAG TTG TAC AGG CCC AAG TGT AGG349Trp Asp Pro Asn Arg Tyr Pro Ser Lys Leu Tyr Arg Pro Lys Cys Arg60 65 70AAC TTG GGC TGT ATC AAT GCT CAA GGA AAG GAA GAC ATC TCC ATG AAT397Asn Leu Gly Cys Ile Asn Ala Gln Gly Lys Glu Asp Ile Ser Met Asn75 80 85TCC GTC403Ser Val90MVKYLLLSILGLAFLSEAAARKIPKVGHTFFQKPESCPPVPGGSMKLDIGIINENQRVSMSRNIESRSTSPWNYTVTWDPNRYPSKLYRPKCRNLGCINAQGKEDIXMNSV特別感興趣的區段包括例如始於或終止於以下位置的那些區段arg1、cys17、pro18、pro19、va120、thr49、ser50、arg69、pro70和所述可利用序列的末端。表6編碼靈長類、例如人IL-176的核苷酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。SEQ ID NO27和28。tc gtg ccg tat ctt ttt aaa aaa att att ctt cac ttt ttt gcc tcc 47Val Pro Tyr Leu Phe Lys Lys Ile Ile Leu His Phe Phe Ala Ser1 5 10 15tat tac ttg tta ggg aga ccc aat ggt agt ttt att cct tgg gga tac95Tyr Tyr Leu Leu Gly Arg Pro Asn Gly Ser Phe Ile Pro Trp Gly Tyr20 25 30ata gta aat act tca tta aag tcg agt aca gaa ttt gat gaa aag tgt143Ile Val Asn Thr Ser Leu Lys Sar Ser Thr Glu Phe Asp Glu Lys Cys35 40 45gga tgt gtg gga tgt act gcc gcc ttc aga agt cca cac act gcc tgg191Gly Cys Val Gly Cys Thr Ala Ala Phe Arg Ser Pro His Thr Ala Trp50 55 60agg gag aga act gct gtt tat tca ctg att aag cat ttg ctg tgt acc239Arg Glu Arg Thr Ala Val Tyr Ser Leu I1e Lys His Leu Leu Cys Thr65 70 75aac tac ttt tca tgt ctt atc tta att Gtc ata aca gtc att281Asn Tyr Phe Ser Cys Leu Ile Leu Ile Leu Ile Thr Val Ile80 85 90tgatatttta aaaaacccca gaaatctgag aaagagataa agtggtttgc tcaaggttat 341agaacagact accatgtgtt gtatttcaga ttttaattca tgtttgtctg attttaagtt 401ttgttcgctt gccagggtac cccacaaaaa tgccaggcag ggcattttca tgatgcactt 461gagatacctg aaatgacagg gtagcatcac acctgagagg ggtaaaggat gggaacctac 521cttccatggc cgctgcttgg cagtctcttg ctgcatgcta gcagagccac tgtatatgtg 581ccgaggctct gagaattaac tgcttaaaga actgccttct ggagggagaa gagcacaaga 641tcacaattaa ccatatacac atcttactgt gcgaggtcat tgagcaatac aggagggatt 701ttatacattt tagcaactat cttcaaaacc tgagctatag ttgtattctg cccccttcct 761ctgggcaaaa gtgtaaaagt ttg 784VPYLFKKIILHFFASYYLLGRPNGSFIPWGYIVNTSLKSSTEFDEKCGCVGCTAAFRSPHTAWRERTAVYSLIKHLLCTNYFSCLILILITVI編碼靈長類、例如人IL-177的核苷酸序列。也可以將互補核酸序列應用於許多目的。SEQ ID NO29和30。gtg act gta ttg tgg gga cag gaa gca caa att ccc atg tgg atc act 48Val Thr Val Leu Trp Gly Gln Glu Ala Gln Ile Pro Met Trp Ile Thr1 5 10 15agg aga gat aat aag tgg ggt cat ttc acc cct tgg tcc cct gct tcc 96Arg Arg Asp Asn Lys Trp Gly His Phe Thr Pro Trp Ser Pro Ala Ser20 25 30aga ccc aaa gag gcc tac atg gca ttg tgc ttc ctt ctt agt tgt agg 144Arg Pro Lys Glu Ala Tyr Met Ala Leu Cys Phe Leu Leu Ser Cys Arg35 40 45agg tgt gag ata caa tca ttt gcc tct gac ttt gag ggt tgg tcc 189Arg Cys Glu Ile Gln Ser Phe Ala Ser Asp Phe Glu Gly Trp Ser50 55 60tagcatgccc ctgaccagta gccccttaaa tacttcattg atatggaagg tctctgaatc 249ttcgtgggct taatctacca ctctctgaag ttcttatgtc tttcaaaggc ctctaaaatc 309tctgccatgt cttgctcatc cagttgttag catgatgtca ttgatacagt ggactttgga 369atctaagtgg ggagacactg gtaagtgacc aattacttca cctgtggtgt gcaagccaga 429tcaggaagcc tctacctgca cgacaacaca t460VTVLWGQEAQIPMWITRRDNKWGHFTPWSPASRPKEAYMALCFLLSCRRCEIQSFASDFEGWS表7各種CTLA-8/IL-170家族成員的序列對比。大鼠CTLA-8序列是SEQ ID NO31(參見GB L13839；293329/30)；小鼠CTLA-8序列是SEQ ID NO32(參見GB1469917/8)；人CTLA-8是SEQ ID NO33(參見GB U32659；115222/3)；和鼠猴皰疹病毒(Herpes Saimiri virus)的ORF13是SEQ ID NO34(參見GB Y13183；2370235)。CLUSTAL X(1.64b)多序列序列對比IL-74_Mu ---------MYQAVAFLAMIVGTHTVSLRI----QEGCSHLPSCCPSKEQEPPEEWLKWSIL-74_Hu ---------MYQVVAFLAMVMGTHTY---------S---HWPSCCPSKGQDTSEELLRWSIL-72_Hu ------MDWPHNLLFLLTISIFLGLGQPRSPKSKRKGQGRPGPLVPGPHQVPLDLVSRMKIL-72_Mu ------MDWPHSLLFLLAISIFLAPSHPRNTKGKRKGQGRPSPLAPGPHQVPLDLVSRVKIL-73_Mu --MLGTLVWMLLVGFLLALAPGRAAGALRT--GRRP--ARPRDCADRPEELLEQLYGRLAIL-73_Hu ---------MLVAGFLLALPPSWAAGAPRA--GRRP--ARPRGCADRPEELLEQLYGRLAIL-17_Hu --MTPGKTSLVSLLLLLSLEAIVKAGITIP---------RNPGCPNSEDKNFPRTVMVNLIL-17_Hs --MTFRKTSLV-LLLLLSIDCIVKSEITSA---------QTPRCLAANN-SFPRSVMVTLIL-17_Rt --------MCLMLLLLLNLEATVKAAVLIP---------QSSVCPNAEANNFLQNVKVNLIL-17_Mu -----------MLLLLLSLAATVKAAAIIP---------QSSACPNTEAKDFLQNVKVNLIL-75_Hu -------MVKYLLLSILGLAFLSEAAARKIPKVGHTFFQKPESCPPVPGGSMKLDIGIINIL-71_Hu MTLLPGLLFLTWLHTCLAHHDPSLRGHPHSHGTPHCYSAEELPLGQAPPHLLARGAKWGQ* *IL-74_Mu S---------ASVSPP-EPLSHTHHAES---CRASKD-GPLNSRAISPWSYELDRDLNRVIL-74_Hu T---------VPVPPL-EPARPNRHPES---CRASED-GPLNSRAISPWRYELDRKLNRLIL-72_Hu P-YARMEEYERNIEEMVAQLRNSSELAQ-RKCEVNLQLWMSNKRSLSPWGYSINHDPSRIIL-72_Mu P-YARMEEYERNLGEMVAQLRNSSEPAK-KKCEVNLQLWLSNKRSLSPWGYSINHDPSRIIL-73_Mu AGVLSAFHHTLQLGPR-EQARNASCPAGGRAADRRFR-PPTNLRSVSPWAYRISYDPARFIL-73_Hu AGVLSAFHHTLQLGPR-EQARNASCPAGGRPADRRFR-PPTNLRSVSPWAYRISYDPARYIL-17_Hu N------------------IHNRNTNTN-----P-KRSSDYYNRSTSPWNLHRNEDPERYIL-17_Hs S------------------IRNWNTSS--------KRASDYYNRSTSPWTLHRNEDQDRYIL-17_Rt K------------------VINSLSSKA-----SSRRPSDYLNRSTSPWTLSRNEDPDRYIL-17_Mu K------------------VFNSLGAKV-----SSRRPSDYLNRSTSPWTLHRNEDPDRYIL-75_Hu E------------------N--QRVSMS--------R--NIESRSTSPWNYTVTWDPNRYIL-71_Hu ALPVALVSSLEAASHRGRHERPSATTQCPVLRPEEVLEADTHQRSISPWRYRVDTDEDRY*: *****IL-74_Mu PQDLYHARCLCPHCVSLQTGSHMDPLGNSVPLYHNQTVFYRR--PCHGEEGTHRRYCLERIL-74_Hu PQDLYHARCLCPHCVSLQTGSHMDPRGNSELLYHNQTVFYRR--PCHGEKGTHKGYCLERIL-72_Hu PVDLPEARCLCLGCVNPFTM-QEDRSMVSVPVFS-QVPVRRR--LCPPPP--RTGPCRQRIL-72_Mu PADLPEARCLCLGCVNPFTM-QEDRSMVSVPVFS-QVPVRRR--LCPQPP--RPGPCRQRIL-73_Mu PRYLPEAYCLCRGCLTGLYG-EEDFRFRSTPVFS-PAVVLRRTAACAG------GRSVYAIL-73_Hu PRYLPEAYCLCRGCLTGLFG-EEDVRFRSAPVYM-PTVVLRRTPACAG------GRSVYTIL-17_Hu PSVIWEAKCRHLGCINADGN--VDYHMNSVPIQQEILVLRREPPHCPN---------SFRIL-17_Hs PSVIWEAKCRYLGCVNADGN--VDYHMNSVPIQQEILVVRKGHQPCPN---------SFRIL-17_Rt PSVIWEAQCRHQRCVNAEGK--LDHHMNSVLIQQEILVLKREPEKCPF---------TFRIL-17_Mu PSVIWEAQCRHQRCVNAEGK--LDHHMNSVLIQQEILVLKREPESCPF---------TFRIL-75_Hu PSEVVQAQCRNLGCINAQGK--EDISMNSVPIQQETLVVRRKHQGCSV---------SFQIL-71_Hu PQKLAFAECLCRGCIDARTG-RETAALNSVRLLQSLLVLRRRPCSRDGSGLPTPGAFAFH* : * **: * : . :IL-74_Mu RLYR-VSLACVCVRPRVMA--------------------------IL-74_Hu RLYR-VSLACVCVRPRVMG--------------------------IL-72_Hu AVMETIAVGCTCIF-------------------------------IL-72_Mu VVMETIAVGCTCIF-------------------------------IL-73_Mu EHYITIPVGCTCVPEPDKSADSANSSMDK----LLLGPADRPAGRIL-73_Hu EAYVTIPVGCTCVPEPEKDADSINSSIDKQGAKLLLGPNDAPAGPIL-17_Hu LEKILVSVGCTCVTPIVHHVA------------------------IL-17_Hs LEKMLVTVGCTCVTPIVHNVD------------------------IL-17_Rt VEKMLVGVGCTCVSSIVRHAS------------------------IL-17_Mu VEKMLVGVGCTCVASIVRQAA------------------------IL-75_Hu LEKVLVTVGCTCVTPVIHHVQ------------------------IL-71_Hu TEFIHVPVGCTCVLPRSV---------------------------: :.*.*:
特別感興趣的區段包括例如對應於上述IL-172或IL-175區段以及所述其它家族成員的那些區段。
純化的蛋白或多肽可用於通過標準方法產生抗體，如上所述。可以將合成肽或純化蛋白呈遞給免疫系統，以產生特異性結合組合物，例如單克隆抗體或多克隆抗體。參見例如Coligan(1991)CurrentProtocols in Immunology Wiley/Greene；和Harlow和Lane(1989)AntibodiesA Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Press。
例如，所述特異性結合組合物可以用來篩選由表達IL-170蛋白的細胞系製備的表達文庫。所述篩選可以是表面表達的蛋白的標準染色，或通過淘選。可以通過各種染色或免疫螢光方法，進行胞內表達的篩選。結合組合物可以用來親和純化或分選出表達所述蛋白的細胞。
本發明考慮了編碼相應的生物活性IL-170蛋白或多肽的分離的DNA或片段的應用。另外，本發明包括編碼生物活性蛋白或多肽、並且能夠在合適條件下與本文所述DNA序列雜交的分離或重組的DNA。所述生物活性蛋白或多肽可以是完整的抗原或片段，並具有公開於表1-6中的胺基酸序列。此外，本發明包括其編碼的蛋白表現出與IL-170蛋白同源、或利用編碼IL-170蛋白的cDNA作為探針而分離出來的分離或重組的DNA或其片段的應用。所述分離的DNA可以在5』側翼和3』側翼具有各自相應的調節序列，例如啟動子、增強子、poly-A添加信號和其它序列。
「分離的」核酸是與天然伴隨天然序列的其它組分(例如核糖體、聚合酶和來自起源物種的側翼基因組序列)基本上分離的核酸，例如RNA、DNA或混合聚合物。該術語包括已經從其天然存在的環境中取出的核酸序列，包括重組的或克隆的DNA分離物和化學合成的類似物或通過異源系統生物合成的類似物。大致純的分子包括分離形式的所述分子。另一方面，可以將從來自重組表達系統的宿主組分中分離純化的種類。這樣的核酸的同源性大小通常低於大載體，例如低於數十個kB，通常低於幾個kB，優選範圍為2-6kB。
分離的核酸一般是分子的同種組合物，但在某些實施方案中，將含有少量異質性。這種異質性通常發現於所述聚合物末端或對於所需生物功能或活性不重要的部分。
「重組的」核酸根據或者其生產方法或者其結構定義。對於其生產方法，例如應用一種方法生產的產物，所述方法是應用重組核酸技術，例如涉及在所述核苷酸序列中人的幹涉，通常為選擇或生產。或者，它可以是用以下方法製備的核酸產生包含天然相互不相鄰的兩種片段的融合體的序列，但是指排除天然產物，例如天然存在的突變體。因此，例如，包括用任何非天然存在的載體轉化細胞而製備的產物，同樣包括包含用任何合成寡核苷酸方法所衍生序列的核酸。通常進行這樣一種方法，以用編碼同一種胺基酸或保守的胺基酸的豐餘密碼子取代一個密碼子，同時通常引入或去除一個序列識別位點。或者，進行該方法，以將所需功能的核酸區段連接在一起，以產生包括所需功能組合的單一的遺傳實體，其中所述功能組合是未在通常可得到的天然形式中發現的組合。限制性酶的識別位點常常是這類人工操作的靶，但可以通過設計，加入其它位點特異性靶，例如啟動子、DNA複製位點、調節序列、控制序列或其它有用的特徵。相似的概念將用於重組(例如融合)多肽。具體包括合成的核酸，它由於遺傳密碼的豐餘性而編碼與這些抗原片段相似的多肽；和來自各種不同物種變體的序列的融合體。
在核酸方面，有效「片段」是一連續的區段，它至少為大約17個核苷酸，一般至少為20個核苷酸，更一般至少為23個核苷酸，普通的是至少26個核苷酸，更普通的是至少29個核苷酸，常常至少為32個核苷酸，更常常是至少35個核苷酸，典型的是至少38個核苷酸，更典型的是至少41個核苷酸，通常至少為44個核苷酸，更通常至少47個核苷酸，優選至少為50個核苷酸，更優選至少為53個核苷酸，在特別優選的實施方案中，將至少為56個或更多個核苷酸。所述片段可以在任何位置具有末端，但尤其是在結構域之間的邊界具有末端。
在其它實施方案中，本發明提供包含多個不同的(例如非重疊的)特定長度區段的多核苷酸(或多肽)。通常，所述多個將至少是2個，更通常至少是3個，優選是5個、7個或甚至更多個。雖然提供了最小長度，但各種大小的較長的長度也是合適的，例如1個長度為7個的片段以及2個長度為12個的區段。
編碼IL-170蛋白的DNA將尤其可用來鑑定編碼相關或同源蛋白的基因、mRNA和cDNA種類，以及鑑定編碼來自不同物種的同源蛋白的DNA。在包括靈長類在內的其它物種中可能有同系物。各種CTLA-8蛋白應該是同源的，包括於此中。然而，如果這些序列的同源性足夠大，則在合適條件下採用這些序列，甚至可以容易地分離與所述抗原的進化關係更遙遠的蛋白。對靈長類CTLA-8蛋白特別感興趣。
本發明還包括其DNA序列與本文所述的分離DNA相同或高度同源的重組DNA分子和片段。特別是，通常將所述序列有效(operably)連接於控制轉錄、翻譯和DNA複製的DNA區段。另一方面，衍生自基因組序列(例如含有內含子)的重組克隆，將可用於轉基因研究，包括例如轉基因細胞和生物，也可以用於基因治療。參見例如Goodnow(1992)「轉基因動物」，Roitt(編輯)Encyclopedia of Immunology，Academic Press，San Diego，第1502-1504頁；Travis(1992)Science2561392-1394；Kuhn等(1991)Science 254707-710；Capecchi(1989)Science 2441288；Robertson(1987)(編輯)Teratocarcinomas andEmbryonic Stem CellsA Practical Approach，IRL Press，Oxford；Rosenberg(1992)J.Clinical Oncology 10180-199；和Cournoyer和Caskey(1993)Ann.Rev.Immunol.11297-329。
同源核酸序列在對比時，表現出顯著的相似性。核酸中同源性的標準也是本領域通過序列對比或基於雜交條件而通常使用的同源性的度量。以下更詳細地描述所述雜交條件。
在核酸序列比較方面，大致同源性是指當對比時，或者所述區段或者其互補鏈，在通過適當的核苷酸插入或缺失進行最佳對比時，至少大約50％的核苷酸相同，相同的核苷酸一般至少佔56％，更一般至少佔59％，經常至少佔62％，更通常至少佔65％，常常至少佔68％，更常常至少佔71％，典型的至少佔74％，更典型的至少佔77％，通常至少佔80％，更通常至少佔約85％，優選至少佔約90％，更優選至少佔約95％至98％或更多，而在特定實施方案中，高達大約99％或更多的核苷酸相同。另一方面，當所述區段在選擇性雜交條件下與一條鏈或其互補鏈雜交時，存在著大致同源性，所述的一條鏈一般使用衍生自表2、3或6的序列。通常，當在一段至少大約14個核苷酸的序列中有至少大約55％同源性時，將發生選擇性雜交，優選同源性至少為大約65％，更優選至少為大約75％，最優選至少為大約90％。參見Kanehisa(1984)Nuc.Acids Res.12203-213。同源性比較的長度如上所述，可以為更長的序列段，在某些實施方案中為一段至少為大約17個核苷酸的序列，一般至少為大約20個核苷酸，更一般至少為24個核苷酸，通常至少為大約28個核苷酸，更通常至少為大約40個核苷酸，優選至少為大約50個核苷酸，更優選至少為大約75-100個或更多的核苷酸。
就雜交方面的同源性而論，嚴格條件將是通常在雜交反應中的鹽、溫度、有機溶劑和其它參數的嚴格性的組合條件，它們通常是受控制的。嚴格性溫度條件通常包括超過大約30℃的溫度，更通常為超過大約37℃的溫度，典型的是超過大約45℃的溫度，更典型的是超過大約55℃的溫度，優選為超過大約65℃的溫度，而更優選為超過大約70℃的溫度。嚴格性的鹽條件一般低於大約1000mM，通常低於大約500mM，更通常低於大約400mM，典型的低於大約300mM，優選低於大約200mM，而更優選低於大約150mM。然而，參數的組合比任何單個參數的測量值更為重要。參見例如，Wetmur和Davidson(1968)J.Mol.Biol.31349-370。在嚴格條件下雜交得到的背景應該是超過背景至少2倍，最好至少3-5倍或更高。
另一方面，對於序列比較，通常一個序列充當參比序列，將測試序列與其比較。當使用一種序列比較算法時，將測試序列和參比序列輸入計算機，必要時指定亞序列坐標，並且指定序列運算規則程序的參數。然後，該序列比較算法根據指定的程序參數，計算測試序列相對於參比序列的序列同一性百分率。
可以用如下進行用於比較的序列的光學序列對比(opticalalignment)例如用Smith和Waterman(1981)Adv.Appl.Math.2482的局部同源性算法、用Needleman和Wunsch(1970)J.Mol.Biol.48443的同源性序列對比算法、通過Pearson和Lipman(1988)Proc.Nat』l Acad.Sci.USA 852444的相似性方法的檢索、通過計算機實現這些算法(Wisconsin Genetics軟體包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Genetics Computer Group，575 Science Dr.，Madison，WI)、或通過目測檢查(一般參見Ausubel等，見上文)。
有用的算法的一個實例是PILEUP。PILEUP採用漸進的成對序列對比，產生來自一組相關序列的一個多重序列對比，以顯示關係和序列同一性的百分率。它也繪出一個樹(tree)或枝叉圖(dendogram)，顯示用來產生所述序列對比的成簇關係。PILEUP採用Feng和Doolittle(1987)J.Mol.Evol.35351-360的漸進序列對比法的簡化方法。所用的方法類似於Higgins和Sharp(1989)CABIOS 5151-153描述的方法。該程序可以對多達300個序列進行序列對比，每個序列的最大長度為5,000個核苷酸或胺基酸。多重序列對比法以兩個最相似的序列的成對序列對比開始，產生一組(a cluster of)兩個對比的序列。然後將該組與下一個最相關的序列或下一組對比的序列進行序列對比。通過簡單地延伸兩個單獨序列的成對序列對比，將兩組序列進行序列對比。通過一系列漸進的成對序列對比，得到最後的序列對比。通過指定序列比較區的特定序列及其胺基酸或核苷酸坐標，並且指定該程序的參數，運行該程序。例如，可以將參比序列與其它測試序列比較，以採用以下參數測定序列同一性關係的百分率默認間隙加權值(3.00)、默認間隙長度加權值(0.10)和加權的末端間隙。
適用於測定序列同一性和序列相似性百分率的算法的另一實例是BLAST算法，在Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215403-410中有描述。公眾可從國家生物技術信息中心(httpwww.ncbi.nlm.nih.gov/)得到進行BLAST分析的軟體。該算法包括首先通過在查詢序列中鑑別長度為W的短字(short Words)，而鑑別高計分序列對(HSP)，當與一資料庫序列中相同長度的字進行序列對比時，它們或者匹配或者滿足某些陽性值的閾值計分T。T稱為相鄰字計分閾值(Altschul等，見上文)。這些起始的相鄰字命中(word hit)用作種子，起始搜尋以尋找含所述字命中的較長的HSP。然後，只要可以增加累積的序列對比計分，則所述字命中在兩個方向上沿每個序列延伸。在以下情況下，每個方向上所述字命中的延伸停止由於來自其最大得到的數值的數量X，累積的序列對比計分下降；由於一個或多個負計分的殘基序列對比的累積，累積計分轉為零或零以下；或達到兩個序列之一的末端。BLAST算法的參數W、T和X決定該序列對比的靈敏度和速度。BLAST程序使用時，默認字長(W)為11，BLOSUM62計分矩陣(參見Henikoff和Henikoff(1989)Proc.Na』l Acad.Sci.USA 8910915)序列對比(B)為50，期望值(E)為10，M＝5，N＝4，並且比較兩條鏈。
除計算序列同一性百分率外，BLAST算法也進行兩個序列之間相似性的統計學分析(參見例如Karlin和Altschul(1993)Proc.Nat』lAcad.Sci.USA 905873-5787)。BLAST算法提供的相似性的一種測量是最小和概率(P(N))，這提供偶然發生兩個核苷酸序列或胺基酸序列之間匹配概率的指標。例如，如果在測試核酸與參比核酸的比較中，最小和概率低於大約0.1，更優選低於大約0.01，最優選低於大約0.001時，認為該核酸與參比序列相似。
兩個多肽的核酸序列大致相同的再一指標是如以下所述，使第一種核酸編碼的多肽與第二種核酸編碼的多肽免疫交叉反應。因此，例如在一種多肽與第二種多肽僅由於保守取代而不同時，這兩種多肽通常大致相同。兩個核酸序列大致相同的另一指標是所述兩種分子在嚴格條件下相互雜交，如下所述。
通過如表1-7中公開的密切相關物種(例如人)的交叉物種雜交，可以克隆並分離來自其它哺乳動物物種的CTLA-8樣蛋白。在遠緣物種之間的同源性可能相對低，因此最好是相對密切相關的物種的雜交。或者，表現出物種特異性較低的抗體製備物的製備，可用於表達克隆方法。III.純化的IL-170蛋白靈長類(例如人)和齧齒動物(例如小鼠)IL-173多肽序列的預測序列示於表2。同樣，在表3中提供靈長類(例如人)IL-174序列，並指定為SEQ ID NO14。齧齒動物(例如小鼠)IL-174也描述於表3中。所述肽序列使得能夠製備肽以產生識別這類區段的抗體。
當用於蛋白質方面時，本文所用的術語「靈長類IL-170蛋白」和「齧齒動物IL-170蛋白」將包括具有表1-7中所示指定胺基酸序列的蛋白質、或這種蛋白的有效片段(significant fragment)。它也指表現出相似生物功能或與IL-170蛋白特異性結合組分相互作用的靈長類或齧齒動物衍生多肽。這些結合組分(例如抗體)通常以高親和性與IL-170蛋白結合，所述親和性例如以至少約100nM，通常優於約30nM，優選優於約10nM，更優選優於約3nM。同源蛋白可能發現於非大鼠或人類的哺乳動物物種(例如小鼠、靈長類)和皰疹病毒基因組(例如ORF13)中。非哺乳動物物種也應該具有結構或功能相關的基因和蛋白。
本文所用的術語「多肽」包括有效片段或區段，包括一段至少約8個胺基酸，一般至少10個胺基酸，更一般至少12個胺基酸，通常至少14個胺基酸，更通常至少16個胺基酸，通常至少18個胺基酸，更通常至少20個胺基酸，常常至少22個胺基酸，更常常至少24個胺基酸，優選至少26個胺基酸，更優選至少28個胺基酸，在特別優選的實施方案中，為至少約30個或更多個胺基酸的胺基酸殘基。這種區段的具體末端將以任何組合位於所述蛋白中，優選包括結構域。
術語「結合組合物」是例如以配體-受體型方式、抗體-抗原相互作用特異性地與IL-170蛋白結合的分子，或者是化合物，例如在天然生理學相關蛋白-蛋白相互作用中或者共價或者非共價地與IL-170蛋白特異性結合的蛋白。所示分子可以是聚合物或化學試劑。除了所述相互作用表現出相似的特異性，例如特定親和性以外，不代表暗示IL-170蛋白是否是配體-受體相互作用的配體或是受體。功能類似物可以是具有結構修飾的蛋白質，或它可以是例如具有與所述合適結合決定簇相互作用的分子形狀的完全不相關的分子。所述蛋白可以用作受體的激動劑或拮抗劑，參見例如Goodman等(編輯，1990)Goodman Gilman’sThe Parmacological Bases of Therapeutics(第8版)PergamonPress。
多肽或片段的溶解性取決於環境和所述多肽。許多參數影響多肽的溶解性，包括溫度、電解質環境、所述多肽的大小和分子特徵以及溶劑的性質。通常，使用所述多肽的溫度範圍為約4℃至約65℃。所述使用溫度通常高於約18℃，更通常高於約22℃。對於診斷目的，所述溫度通常約為室溫或更溫暖，但低於該測定中組分的變性溫度。對於治療目的，所述溫度通常為體溫，對於人類而言通常為約37℃，儘管在某些情況下該溫度可以在原位或體外升高或降低。
所述電解質通常接近原位生理條件，但在有利的情況下可以將其修改至較高或較低的離子強度。可以修改實際的離子，例如以符合生理學方面或分析方面所用的標準緩衝液。
所述多肽的大小和結構應該一般處於大致穩定的狀態，通常不是變性狀態。所述多肽可以在四級結構中與其它多肽締合例如以提供溶解性，或以接近天然脂質雙層相互作用的方式與脂質或去垢劑締合。
所述溶劑通常是用於保存生物活性的類型的生物相容緩衝液，通常接近生理溶劑。所述溶劑通常具有中性pH，常常為約5至10之間，優選約7.5。在某些情況下，將加入去垢劑，通常為溫和的非變性去垢劑，例如CHS或CHAPS，或去垢劑的濃度足夠低，以免顯著破壞所述抗原的結構或生理特性。
溶解性反映在以斯韋柏單位測量的沉降作用，斯韋柏單位是在特定條件分子沉降速度的度量。沉降速度的測定傳統上在分析型超速離心機中進行，但現在通常在標準超速離心機中進行。參見Freifelder(1982)Physical Biochemistry(第2版)，W.H.Freeman；和Cantor和Schimmel(1980)Biophysical Chemistry，第1-3部分，W.H.Freeman Co.，San Francisco。作為粗略測量，將含有推定可溶性多肽的樣品在標準滿容量(full-sized)超速離心機中以約50K rpm離心約10分鐘，可溶性分子保留在上清液中。可溶性粒子或多肽通常低於約30S，更通常低於約15S，常常低於約10S，更常常低於約6S，而在具體實施方案中，優選低於約4S，更優選低於約3S。IV.製備IL-170蛋白；模擬物通過化學合成、篩選cDNA文庫，或通過篩選由各式各樣的細胞系或組織樣品製備的基因組文庫，可以獲得編碼所述IL-170蛋白或其片段的DNA。
該DNA可以在各種各樣的宿主細胞中表達，以合成全長蛋白或片段，所述蛋白或片段可以再例如用來產生多克隆抗體或單克隆抗體；用於結合研究；用來構建和表達修飾的分子；和用於結構/功能研究。可以將每種抗原或其片段在用合適的表達載體轉化或轉染的宿主細胞中表達。可以將這些分子大致純化，以除衍生自所述重組宿主的所述分子以外，不含蛋白或細胞汙染物，因此這些分子當與藥學上可接受的載體和/或稀釋劑結合時，尤其可用於藥用組合物。所述抗原或其部分可以作為具有其它蛋白的融合體表達。
表達載體通常是自主複製型DNA或RNA構成物，它們含有所需抗原基因或其片段，所述基因或片段通常有效連接於在合適宿主細胞中被識別的合適的遺傳控制元件。這些控制元件能夠實現在合適宿主中的表達。實現表達所必需的控制元件的具體類型將取決於所使用的最終宿主細胞。一般而言，所述遺傳控制元件可以包括原核生物啟動子系統或真核生物啟動子表達控制系統，並且通常包括轉錄啟動子和任選的控制轉錄開始的操縱基因、提高mRNA表達水平的轉錄增強子、編碼合適的核糖體結合位點的序列、以及終止轉錄和翻譯的序列。表達載體也通常含有允許所述載體獨立於宿主細胞進行複製的複製起點。擴增載體拷貝數的方法也是已知的，參見例如Kaufman等(1985)Molec.and Cell.Biol.51750-1759。
本發明的載體含有編碼IL-170蛋白或其片段的DNA，所述DNA通常編碼生物活性多肽。所述DNA可以處於病毒啟動子的控制之下，並且可以編碼選擇標記。本發明還設想了這樣的表達載體應用，所述表達載體能夠在原核生物宿主或真核生物宿主中表達編碼IL-170蛋白的真核cDNA，其中所述載體與所述宿主相容，並且其中將編碼所述抗原的真核生物cDNA插入所述載體中，以使含有所述載體的宿主的生長表達所述cDNA。通常，表達載體設計用於在其宿主細胞中穩定複製，或設計用於擴增以大大增加每個細胞中所需基因的總拷貝數。不必總是要求表達載體在宿主細胞中複製，例如，用不含有被宿主細胞識別的複製起點的載體，在各種宿主中實現瞬時表達所述抗原或其片段是可能的。應用引起IL-170蛋白基因或其片段通過重組整合到宿主DNA中，或整合控制內源基因表達的啟動子也是可能的。
本文所用的載體包括質粒、病毒、噬菌體、整合型DNA片段和能夠將DNA片段整合入宿主基因組中的其它載體。表達載體是含有影響有效連接的基因表達的遺傳控制元件的特化載體。質粒是最常用形式的載體，但起同等功能作用的所有其它形式以及本領域已知或將已知的載體均適用於本文中。參見例如Pouwels等(1985和增補本)Cloning VectorsA Laboratory Manuial.Elsevier，N.Y.；和Rodriquez等(編輯，1988)VectorsA Survey of Molecular Cloning Vectors and TheirUses，Buttersworth，Boston，MA.
轉化的細胞包括已經用含有IL-170基因、通常是利用重組DNA技術構建的載體轉化或轉染的細胞，最好是哺乳動物細胞。轉化的宿主細胞通常表達所述抗原或其片段，但對於克隆、擴增和操作其DNA的目的，不必表達所述蛋白。本發明還設想了在營養培養基中培養轉化的細胞，因此允許所述蛋白在培養物中積累。可以或者從培養物或者從培養基中回收所述蛋白。
對於本發明的目的，當DNA序列在功能上相互相關時，將它們有效地連接。例如，如果DNA作為前蛋白表達或參與將所述多肽導向細胞膜或指導分泌所述多肽，則將前序列(presequence)或分泌前導序列的DNA有效地連接至所述多肽。如果啟動子控制所述多肽的轉錄，則將該啟動子有效地連接至編碼序列；如果將核糖體結合位點定位以允許翻譯，則將核糖體結合位點有效地連接至編碼序列。通常，有效地連接是指鄰接的並且符合讀框，然而，諸如阻抑物基因的某些遺傳元件不是鄰近連接的，但仍結合於操縱基因序列，進而控制表達。
合適的宿主細胞包括原核生物細胞、低等真核生物細胞和高等真核生物細胞。原核生物包括革蘭氏陰性生物和革蘭氏陽性生物，例如大腸桿菌和枯草桿菌。低等真核生物包括酵母，例如釀酒酵母(S.cerevisiae)和畢赤酵母屬(Pichia)；和網柄菌屬(Dictyostelium)。高等真核生物包括來自動物細胞的確立組織培養細胞系，它們可以來源於非哺乳動物(例如昆蟲細胞和鳥類)和哺乳動物(例如人類、靈長類和齧齒動物)。
原核宿主-載體系統包括各種各樣的用於不同物種的載體。如本文所用的，從種屬上說，將大腸桿菌及其載體用來包括用於其它原核生物中的等同載體。用於擴增DNA的代表性載體是pBR322或許多其衍生物。可以用來表達所述IL-170蛋白或其片段的載體包括但不限於諸如含有以下啟動子的載體lac啟動子(pUC系列)、trp啟動子(pBR322-trp)、Ipp啟動子(pIN系列)、λpP或pR啟動子(pOTS)或雜種啟動子，例如ptac(pDR540)。參見Brosius等(1988)「使用λ-、trp-、lac-和Ipp衍生啟動子的表達載體」，Rodriguez和Denhardt(編輯)VectorsA Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses，Buttersworth，Boston，第10章，第205-236頁。
低等真核生物例如酵母和網柄菌屬可以用編碼IL-170蛋白的載體轉化。對於本發明的目的，最常用的低等真核生物宿主是麵包酵母，即釀酒酵母。從種屬上說，用其代表低等真核生物，儘管也可利用許多其它菌株和物種。酵母載體通常包含複製起點(除非是整合型的)、選擇基因、啟動子、編碼所需蛋白或其片段的DNA、以及翻譯終止、聚腺苷酸化和轉錄終止的序列。合適的酵母表達載體包含諸如3-磷酸甘油激酶的組成型啟動子和各種其它糖酵解酶基因啟動子或諸如乙醇脫氫酶2啟動子或金屬硫蛋白啟動子的誘導型啟動子。合適的載體包括以下類型的衍生物自主複製低拷貝數類型(例如YRp系列)、自主複製高拷貝數類型(例如YEp系列)；整合型(例如YIp系列)或微型染色體(例如YCp系列)。
高等真核生物組織培養細胞是用於表達功能活性IL-170蛋白的優選的宿主細胞。原則上，許多高等真核生物組織培養細胞系無論是來自無脊椎動物還是來自脊椎動物，都是有效的，例如昆蟲杆狀病毒表達系統。然而，最好是哺乳動物細胞，因為可以進行共翻譯加工和翻譯後加工。這類細胞的轉化或轉染以及繁殖已經成為常規方法。有用細胞系的實例包括HeLa細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞系、幼齡大鼠腎(BRK)細胞系、昆蟲細胞系、鳥類細胞系和猴(COS)細胞系。用於這類細胞系的表達載體通常包括複製起點、啟動子、翻譯起始位點、RNA剪接位點(如果使用基因組DNA)、聚腺苷酸化位點和轉錄終止位點。這些載體也通常含有選擇基因或擴增基因。合適的表達載體可以是攜帶例如衍生自諸如以下來源的啟動子的質粒、病毒或反轉錄病毒、腺病毒、SV40、細小病毒、痘苗病毒或巨細胞病毒。合適表達載體的代表性實例包括pCDNA1；pCD，參見Okayama等(1985)Mol.Cell Biol.51136-1142；pMClneo poly-A，參見Thomas等(1987)Cell 51503-512；和杆狀病毒載體，例如pAC 373或pAC 610，參見O』Reilly等(1992)Baculovirus Expression VectorsA Laboratory ManualFreeman and Co.，CRC Press，Boca Raton，Fla。
通常希望在提供特定或限定糖基化模式的系統中表達IL-170蛋白多肽。在這種情況下，通常的模式將是由所述表達系統天然提供的。然而，通過將所述多肽、例如未糖基化形式的多肽暴露於引入異源表達系統的合適糖基化蛋白，將可修飾所述模式。例如，所述IL-170蛋白基因可以與一種或多種編碼哺乳動物糖基化酶或其它糖基化酶的基因一起共轉化。利用該方法，在原核生物細胞或其它細胞中將可得到或接近某些哺乳動物糖基化模式。
可以將所述IL-170蛋白或其片段工程化，以經磷脂醯肌醇(PI)連接於細胞膜上，但可以通過用磷脂醯肌醇切割酶(例如磷脂醯肌醇磷脂酶-C)處理將其從膜上除去。這釋放出生物活性形式的所述抗原，並允許通過蛋白化學的標準方法進行純化。參見例如Low(1989)Biochim.Biophys.Acta 988427-454；Tse等(1985)Science 2301003-1008；和Brunner等(1991)J.Cell Biol.1141275-1283。
由於已經表徵了所述IL-170蛋白，因此通過合成肽的常規方法可以製備其片段或衍生物。這些方法包括例如在以下文獻中描述的方法Stewart和Young(1984)Solid Phase Peptide Synthesis，PierceChemical Co.，Rockford，IL；Bodanszky和Bodanszky(1984)The Practiceof Peptide Synthesis，Springer-Verlag，New York；和Bodanszky(1984)The Principles of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，New York。例如，可以使用疊氮化物法、醯基氯法、酸酐法、混合酐法、活性酯法(例如，對硝基苯酯、N-羥基琥珀醯亞胺酯或氰基甲酯)、碳二咪唑(carbodiimidazole)法、氧化還原法或二環己基碳二亞胺(DCCD)/加成法。固相合成和溶液相合成均可應用於上述方法。
按照通常用於肽合成的上述方法，一般或者通過所謂的分步法，或者通過將肽片段偶聯至末端胺基酸，適當地製備所述IL-170蛋白、片段或衍生物，所述分步法包括在將胺基酸一個接一個順序縮合至末端胺基酸上。通常保護在偶聯反應中未使用的氨基，以防止在不正確的位置上偶聯。
如果採用固相合成，則將C末端胺基酸通過其羧基連接於不溶性載體或支持體上。所述不溶性載體並不特別受限制，只要它具有與反應性羧基結合的能力。這類不溶性載體的實例包括滷代甲基樹脂(例如氯甲基樹脂或溴甲基樹脂)、羥甲基樹脂、酚樹脂、叔烷氧羰基-醯肼樹脂等。
通過將氨基受保護的胺基酸的活化羧基與先前形成的肽或鏈的反應性氨基縮合，順序連接所述氨基受保護的胺基酸，以逐步合成所述肽。在合成完整的序列後，從不溶性載體上切下所述肽，以產生所述肽。Merrifield等(1963)J.Am.Chem.Soc.852149-2156全面地描述了這種固相法。
可以通過肽分離方法，例如通過提取、沉澱、電泳和各種形式的層析等，從反應混合物中分離並純化所製備的蛋白及其片段。本發明的IL-170蛋白根據其所需用途，可以以不同純度獲得。利用本文公開的蛋白純化技術，或在免疫吸附親和層析中應用本文所述的抗體，可以完成純化。首先將所述抗體連接於固相支持體上，然後使所連接的抗體與合適來源細胞的溶解裂解液、表達所述蛋白的其它細胞的裂解液或由於DNA技術而產生所述IL-170蛋白的細胞的裂解液或上清液接觸，進行這種免疫吸附親和層析，參見下文。V.物理變體本發明也包括與所述IL-170蛋白的胺基酸序列具有大致胺基酸序列同源性的蛋白或肽。所述變體包括物種變體或等位基因變體。
通過使殘基匹配最優化，必要時，根據需要引入間隙，確定胺基酸序列的同源性或序列同一性。當將保守取代考慮為匹配時，序列同源性或同一性會有變化。保守取代通常包括以下組內的取代甘氨酸、丙氨酸；纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸；天冬氨酸、穀氨酸；天冬醯胺、穀氨醯胺；絲氨酸、蘇氨酸；賴氨酸、精氨酸；和苯丙氨酸、酪氨酸。同源的胺基酸序列通常計劃包括每種相應蛋白質序列中的天然等位基因變異和種間變異。典型的同源蛋白或肽與所述IL-170蛋白的胺基酸序列的同源性將從25-100％(如果可以引入間隙)至50-100％(如果包括保守取代)。同源性測量結果將至少為大約35％，一般至少為40％，更一般至少為45％，常常至少為50％，更常常至少為55％，典型的至少為60％，更典型的至少為65％，通常至少為70％，更通常至少為75％，優選至少為80％，而更優選至少為80％，在特別優選的實施方案中，至少為85％或更高。也參見Needleham等(1970)J.Mol.Biol.48443-453；Sankoff等，(1983)Time Warps，String Edits，and MacromoleculesThe Theory and Practice of Sequence Comparsion的第1章，Addison-Wesley，Reading，MA；和IntelliGenetics(Mountain View，CA)的軟體包；和the University of Wisconsin Genetics Computer Group(Madison，WI)的軟體包。
通過核苷酸置換、核苷酸缺失、核苷酸插入和核苷酸序列段倒位，可以容易地修飾編碼IL-170蛋白的分離的DNA。這些修飾產生編碼這些抗原、其衍生物或具有相似生理活性、免疫原性或抗原性的蛋白質的新的DNA序列。這些修飾的序列可以用來產生突變抗原，或增強表達。增強的表達可以包括基因擴增、轉錄增加、翻譯增加和其它機制。這樣的突變IL-170蛋白衍生物包括所述相應蛋白或其片段的預定突變或定點突變。「突變IL-170蛋白」包括這樣的多肽，它們在其它方面屬於以上提出的鼠類IL-170或人IL-170蛋白的同源性定義內，但其胺基酸序列或者由於缺失、置換，或者由於插入，而不同於自然界中發現的IL-170蛋白的胺基酸序列。特別是，「定點突變IL-170蛋白」一般包括這樣的蛋白，它們與具有來自表1-6的序列具有顯著同源性、並且與那些序列共享各種生物活性(例如抗原性或免疫原性)的蛋白，在優選實施方案中，含有所公開序列的大部分。相似的概念適用於不同的IL-170蛋白，特別是在各種溫血動物(例如哺乳動物和鳥類)中發現的那些IL-170蛋白。如上所述，強調的是，這些描述一般是指包括所有的IL-170蛋白，但不限於具體討論的小鼠實施方案。
雖然定點突變位點是預定的，但突變體不必是定點的。可以通過製備胺基酸插入或缺失，進行IL-170蛋白的誘變。可以產生置換、缺失、插入或任何組合，以得到最終的構成物。插入包括氨基末端或羧基末端融合。可以於靶密碼子進行隨機誘變，然後對所表達的突變體篩選所需活性。於序列已知的DNA中預定位點製備置換突變的方法是本領域眾所周知，例如通過M13引物誘變或聚合酶鏈式反應(PCR)技術。也參見例如Sambrook等(1989)和Ausubel等(1987和增補本)。
通常，所述DNA中的突變不應該將編碼序列置於讀框之外，最好不產生可能雜交產生例如環或髮夾的mRNA二級結構的互補區。
本發明也提供重組蛋白，例如採用來自這些蛋白的區段的異源融合蛋白。異源融合蛋白是天然情況下通常不以同一方式融合的蛋白或區段的融合體。因此，免疫球蛋白與IL-170多肽的融合產物是具有以典型肽鍵融合的序列的連續蛋白分子，它們通常作為單一翻譯產物而製備，並且表現出得自各個源肽的特性。相似的概念適用於異源核酸序列。
另外，可以組合源自其它蛋白的相似的功能域而製備新的構成物。例如，抗原結合區段或其它區段可以在不同的新融合多肽或片段之間「交換」。參見例如Cunningham等(1989)Science 2431330-1336；和O』Dowd等(1988)J.Biol.Chem.26315985-15992。因此，表現出新的特異性組合的新嵌合多肽將產生於生物相關結構域和其它功能結構域的功能結合。
由Beaucage和Carruthers(1981)Tetra.Letts.221859-1862描述的亞磷醯胺法將產生合適的合成DNA片段。或者通過合成互補鏈並使所述鏈在合適的條件下相互退火，或者通過用DNA聚合酶與合適的引物序列，加入互補鏈(例如PCR技術)，通常可獲得雙鏈片段。VI.功能變異體可以由於抑制(例如通過競爭性抑制)所述抗原與其天然結合配偶體的結合，導致阻斷對IL-170的生理反應。因此，本發明的體外測定通常使用分離的蛋白、來自表達重組膜結合IL-170蛋白的細胞的膜、包含結合區段的可溶性片段、或連接至固相基質的片段。這些測定也將使得可以對或者結合區段突變和修飾、或者蛋白突變和修飾(例如類似物)的效應進行診斷性測定。
本發明也設想使用競爭性藥物篩選測定，例如其中針對抗原或結合配偶體片段的中和抗體與測試化合物競爭與所述蛋白的結合。以這種方式，可以利用所述抗體檢測享有所述蛋白的一個或多個抗原結合位點的任何多肽的存在，並且也可以利用所述抗體佔據在其它情況下可能與結合配偶體相互作用的該蛋白上的結合位點。
另外，針對所述IL-170蛋白和含有高親和性受體結合位點的所述抗原的可溶性片段的中和抗體，可以用來抑制組織(例如經歷異常生理學的組織)中的抗原功能。
所述IL-170抗原的「衍生物」包括胺基酸序列突變體、糖基化變體、以及與其它化學部分的共價或聚集綴合物。通過採用本領域熟知的方法將官能團(functionality)連接至在所述IL-170胺基酸側鏈或於N末端或C末端發現的基團上，可以製備共價衍生物。這些衍生物可以包括但不限於羧基末端或含羧基側鏈殘基的脂族酯或醯胺、含羥基殘基的O-醯基衍生物、以及氨基末端胺基酸或含氨基殘基(例如賴氨酸或精氨酸)的N-醯基衍生物。醯基選自烷基部分(包括C3-C18正烷基)的基團，由此形成烷醯基、芳醯基種類。當免疫原部分是半抗原時，與載體蛋白共價結合可能是重要的。
具體地說，糖基化改變包括例如通過在多肽合成和加工期間、或在進一步加工步驟中修飾多肽糖基化模式而產生的糖基化改變。完成這一步特別優選的方法是通過將所述多肽暴露於得自正常提供這種加工的細胞的糖基化酶，例如哺乳動物糖基化酶。也設想了去糖基化酶。也包括具有相同一級胺基酸序列、具有其它微小修飾的形式，所述微小修飾包括磷酸化胺基酸殘基，例如磷酸酪氨酸、磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸。
主要一組衍生物是所述IL-170蛋白或其片段與其它蛋白或多肽的共價綴合物。這些衍生物可以在重組培養物中合成，例如N末端融合體或C末端融合體，或利用本領域已知在通過反應性側基交聯蛋白中有用的試劑來合成。用交聯劑衍生的優選的抗原衍生位點位於游離氨基、糖部分和半胱氨酸殘基。
也提供所述IL-170蛋白和其它同源或異源蛋白之間的融合多肽。同源多肽可以是不同表面標記之間的融合體，產生例如表現出受體結合特異性的雜種蛋白。同樣，可以構建可能表現出所述衍生蛋白特性或活性組合的異源融合體。典型的實例是報導多肽(例如螢光素酶)與抗原區段或結構域(例如受體結合區段)的融合體，使得可以容易地確定所述融合抗原的存在或位置。參見例如Dull等的美國專利第4,859,609號。其它基因融合配偶體包括細菌β-半乳糖苷酶、trpE、A蛋白、β-內醯胺酶、α澱粉酶、乙醇脫氫酶和酵母α交配因子。參見例如Godowski等(1988)Science 241812-816。
由Beaucage和Carruthers(1981)Tetra.Letts.221859-1862描述的亞磷醯胺法將產生合適的合成DNA片段。或者通過合成互補鏈並使所述鏈在合適的條件下相互退火，或者通過用DNA聚合酶與合適的引物序列，加入互補鏈，通常可獲得雙鏈片段。
這樣的多肽也可以具有已被化學修飾的胺基酸殘基，所述化學修飾通過磷酸化、磺化、生物素化或加入或除去其它部分、特別是分子形狀類似於磷酸基團的那些部分而進行的。在某些實施方案中，所述修飾將是有用的標記試劑，或者用作純化靶，例如親和配體。
融合蛋白通常通過或者重組核酸法或通過合成多肽法製備。用於核酸操作和表達的技術全面描述於例如Sambrook等(1989)MolecularCloningA Laboratory Manual(第2版)，第1-3卷，Cold Spring HarborLaboratory。用於多肽合成的技術描述於例如Merrifield(1963)J.Amer.Chem.Soc.852149-2156；Merrifield(1986)Science 232341-347；和Atherton等(1989)Solid Phase Peptide SynthesisA Practical Approach，IRL Press，Oxford。
本發明也設想使用非胺基酸序列改變或糖基化改變的所述IL-170蛋白的衍生物。這類衍生物可以包括與化學部分的共價或聚集結合。這些衍生物一般分為三類(1)鹽，(2)側鏈和末端殘基共價修飾，和(3)吸附複合物，例如與細胞膜的吸附複合物。這樣的共價或聚集衍生物可用作免疫原、免疫測定中的試劑，或用於諸如親和純化抗原或其它結合蛋白的純化方法中。例如，通過用本領域熟知的方法將IL-170抗原共價結合於諸如溴化氰活化的Sepharose的固相支持體，或通過或不通過戊二醛交聯吸附至聚烯烴表面上，可以將IL-170抗原固定化，以用於抗IL-170蛋白抗體或其受體或其它結合配偶體的測定或純化。所述IL-170抗原也可以用可檢測基團標記，例如用氯胺T法放射性碘標記、共價連接於稀土螯合物、或綴合於另一螢光部分，以用於診斷測定。通過固定化抗體或結合配偶體，可以實現IL-170蛋白的純化。
本發明的溶解的IL-170抗原或片段可以用作免疫原，用於產生對所述蛋白或其片段特異性的抗血清或抗體。純化的抗原可以用來篩選通過用各種形式的含所述蛋白的不純製劑免疫而製備的單克隆抗體或結合片段。特別是，術語「抗體」也包括天然抗體的抗原結合片段。純化的IL-170蛋白也可以用作試劑，以檢測對存在水平提高的所述蛋白或含所述抗原的細胞片段應答而產生的任何抗體，所述蛋白或含所述抗原的細胞片段可以是異常或特定的生理學病症或疾病病症是診斷指標(diagnostic)。另外，抗原片段也可以用作產生下文馬上要描述的本發明抗體的免疫原。例如，本發明考慮了針對表1-6中所示核苷酸序列編碼的胺基酸序列或含有所述序列的蛋白的片段而產生的抗體。特別是，本發明考慮了對預測位於脂雙層之外的特定片段具有結合親和性的抗體或針對所述特定片段產生的抗體。
本發明考慮了另外的密切相關物種變體的分離。DNA印跡分析確立相似的遺傳實體存在於其它哺乳動物(例如大鼠和人類)中。可能所述IL-170蛋白廣布於物種變體中，其中所述物種例如為齧齒動物、兔形目動物、食肉動物、偶蹄類、奇蹄目和靈長類。
本發明也提供分離一組相關抗原的方法，其中所述相關抗原在結構、表達和功能方面既表現出不同，又表現出相似性。不同物種變體的分離和表徵，將大大促進所述抗原的許多生理效應的闡明。特別是，本發明提供用於鑑別不同物種中另外的同源遺傳實體的有用探針。
所述分離的基因將使得可以轉化缺乏相應IL-170蛋白表達的細胞，例如缺乏相應抗原並表現出陰性背景活性的或者物種類型或者細胞。轉化基因的表達將允許分離具有限定的或單一的物種變體的抗原性純的細胞系。該方法將提供對IL-170蛋白的生理效應更靈敏的檢測和鑑別。可以分離並使用亞細胞片段，例如胞質片段或膜片段。
採用現代分子生物學標準技術，特別是在比較相關類別的成員時，解剖影響由所述蛋白提供的各種生理或分化功能的關鍵結構元件是可能的。參見例如在Cunningham等(1989)Science 2431339-1336中描述的同系物掃描誘變技術；和O』Dowd等(1988)J.Biol.Chem.26315985-15992和Lechleiter等(1990)EMBO J.94381-4390中所用的方法。
特別是，可以在物種變體之間置換功能結構域或區段，以確定在結合配偶體親和性和特異性方面以及信號轉導方面哪些結構特徵是重要的。將使用一系列不同變體來篩選表現出與結合配偶體的不同物種變體相互作用的組合特性的分子。
在某些情況下抗原內化可以發生，以及胞內組分和參與相互作用的蛋白「胞外」區段之間的相互作用可以發生。通過誘變或直接生化方法(例如交聯法或親和法)，可以鑑別IL-170與其它胞內組分相互作用的特定區段。也可應用採用晶體學方法或其它物理方法進行的結構分析。生物功能機制的進一步研究，將包括可以通過親和法或遺傳學方法(例如互補分析突變體)研究可分離的結合組分。
我們將繼續IL-170蛋白表達和控制的進一步研究。與所述抗原連接的控制元件可以表現出差別發育、組織特異性或其它表達模式。對例如控制元件的遺傳區上遊或下遊很感興趣。
所述抗原的結構研究將導致設計出新的變異體，特別是對結合配偶體表現出激動劑或拮抗劑特性的類似物。這可以與先前描述的篩選方法結合，以分離表現出所需活性譜的變體。
在其它細胞類型中的表達通常導致特定抗原的糖基化差異。根據非胺基酸序列的結構差異，不同的物種變體可以表現出不同的功能。差別修飾可能負責差別功能，使得所述效應闡明現在成為可能。
因此，本發明提供與抗原-結合配偶體相互作用相關的重要試劑。雖然上述說明主要集中於鼠類IL-170和人IL-170蛋白，但本領域技術人員將立即認識到，本發明包括其它抗原，例如小鼠和其它哺乳動物物種變體或等位基因變體以及它們的變體。VII.抗體可以產生針對其天然存在形式和其重組形式的各種IL-170蛋白(包括物種變異體或等位基因變異體)及其片段的抗體。另外，可以產生針對或者活性形式或者無活性形式的IL-170蛋白抗體。也考慮了抗獨特型抗體。
通過用所述抗原預定片段與免疫原性蛋白的綴合物免疫動物，可以產生針對所述片段的抗體，包括結合片段和單鏈形式的抗體。由分泌所需抗體的細胞製備單克隆抗體。這些抗體可以根據與正常或缺陷的IL-170蛋白的結合進行篩選，或根據例如通過結合配偶體介導的激動劑或拮抗劑活性進行篩選。這些單克隆抗體通常以至少約1mM的KD結合，其結合KD更通常至少約300μM，典型的至少約10μM，更典型至少約30μM，優選至少約10μM，更優選至少約3μM或更好。
通常在免疫測定中確定與針對限定的免疫原(例如由成熟SEQ IDNO8的胺基酸序列或其片段組成的免疫原或由SEQ ID NO7的核酸產生的多肽)而產生的抗體(例如多克隆抗體)特異性結合或特異性免疫反應的IL-170多肽。包括在本發明範圍內的是本文描述的那些核酸序列，包括功能變體，所述核酸序列編碼與針對本文在結構和功能上限定的原型IL-173、IL-174、IL-176或IL-177多肽產生的多克隆抗體選擇性結合的多肽。所述免疫測定通常應用針對例如SEQ ID NO8的蛋白產生的多克隆抗血清。選擇這種抗血清以對合適的其它IL-170家族成員(最好來自相同物種)具有低交叉反應性，並且在用於所述免疫測定之前，通過免疫吸附除去任何這樣的交叉反應性。可以分離並表徵合適的選擇性血清製劑。
為了產生用於免疫測定的抗血清，按照本文所述分離所述蛋白，例如SEQ ID NO8的蛋白。例如，可以在哺乳動物細胞系中產生重組蛋白。採用標準佐劑，例如弗氏佐劑，以及利用標準小鼠免疫方案(參見Harlow和Lane)，用SEQ ID NO8的蛋白免疫合適的宿主，例如近交品系的小鼠，例如Balb/c。另一方面，可以將衍生自本文所公開序列的基本上全長的合成肽用作免疫原。收集多克隆血清，並在免疫測定中，例如在具有固定於固相支持體上的免疫原的固相免疫測定中，測定針對所述免疫原蛋白的效價。選擇效價為104或更高的多克隆抗血清，並採用競爭性結合免疫測定，例如Harlow和Lane(參見上文)在第570-573頁中描述的那些測定，測試其針對其它IL-170家族成員(例如IL-171、IL-172或IL-175)的交叉反應性。在該測定中結合所述靶最好使用至少兩種IL-170家族成員。這些IL-170家族成員可以作為重組蛋白產生，並用本文描述的標準分子生物學和蛋白化學技術進行分離。因此，可以鑑定並產生對IL-170家族成員亞組具有所需選擇性或特異性的抗體製劑。
競爭性結合形式的免疫測定可以用於交叉反應性的測定。例如，可以將成熟SEQ ID NO8的蛋白固定於固相支持體上。加入該測定中的蛋白與所述抗血清競爭與所述固定化抗原的結合。將上述蛋白與抗血清競爭與固定化蛋白結合的能力與SEQ ID NO8的蛋白相比。採用標準計算法計算上述蛋白的交叉反應性百分比。選擇並合併與每種以上所列蛋白的交叉反應性低於10％的那些抗血清。然後通過用以上所列蛋白進行免疫吸附，從合併的抗血清中除去交叉反應性抗體。
然後將經免疫吸附並合併的抗血清用於如上所述的競爭性結合免疫測定中，以將第二種蛋白與所述免疫原蛋白進行比較。為了進行這種比較，在寬範圍的濃度下分別分析所述兩種蛋白，並測定抑制抗血清與固定化蛋白結合的50％所需的每種蛋白量。如果第二種蛋白的需要量低於所述蛋白(例如SEQ ID NO8的蛋白)的需要量的兩倍，則所述第二種蛋白被認為是與針對所述免疫原產生的抗體特異性地結合。
本發明的抗體包括抗原結合片段可能具有重大的診斷或治療價值。它們可能是與結合配偶體結合併抑制抗原結合或抑制抗原引發生物反應的能力的有效的拮抗劑。它們也可以用作非中性抗體，並可以偶聯於毒素或放射性核素，使得當所述抗體結合於所述抗原時，殺傷例如在表面上表達所述抗原的細胞。此外，這些抗體可以或者直接或者藉助接頭間接綴合於藥物或其它治療劑，可以實現藥物導向。
本發明的抗體也可用於診斷應用。作為捕獲抗體或非中和抗體，可以篩選其結合所述抗原、而不抑制配偶體結合的能力。作為中和抗體，它們可以用於競爭性結合測定。它們也可用於檢測或定量測定IL-170蛋白或其結合配偶體。參見例如Chan(編輯1987)ImmunoassavA Practical Guide.Academic Press，Orlando，Fla；和Ngo(編輯1988)Nonisotopic Immunoassay，Plenum Press，NY；和Price和Newman(編輯1991)Principles and Practice of Immunoassay，Stockton Press，NY；。
可以將抗原片段連接至其它物質上，特別是連接至多肽，作為待用作免疫原的融合多肽或共價連接多肽。抗原及其片段可以融合或共價連接至多種免疫原，諸如匙孔血藍蛋白、牛血清白蛋白、破傷風類毒素等。關於製備多克隆抗血漿的方法的描述，參見Microbiology，Hoeber Medical Division，Harper和Row，1969；Landsteiner(1962)Specificity of Serological Reactions，Dover Publications，New York；和Williams等(1967)Methods in Immunology and Immunochemistry，第1卷，Academic Press，New York。典型的方法包括用抗原超免疫動物。然後在重複免疫後不久，收集該動物的血液，並分離γ球蛋白。
在某些情況下，最好從各種哺乳動物宿主製備單克隆抗體，所述哺乳動物宿主諸如小鼠、齧齒動物、靈長類、人類等。在例如Stites等(編輯)Basic and Clinical Immunology，(第4版)，Lange MedicalPublications，Los Altos，CA和其中引用的參考文獻；Harlow和Lane(1988)AntibodiesA Laboratory Manual，CSH Press；Goding(1986)Monoclonal AntibodiesPrinciples and Practice(第2版)，Academic Press，New York中；和特別是在Kohler和Milstein(1975)Nature 256495-497中(該文獻討論了產生單克隆抗體的一種方法)，可以找到製備這類單克隆抗體的技術的描述。總而言之，該方法包括給動物注射免疫原。然後處死該動物並從其脾臟中取出細胞，然後將所述細胞與骨髓瘤細胞融合。結果是雜種細胞或「雜交瘤」，它能夠在體外繁殖。然後篩選雜交瘤群體，以分離各個克隆，每種所述克隆分泌抗所述免疫原的單一抗體種類。以該方式，所獲得的各個抗體種類是來自所述免疫動物、對在免疫原性物質上識別的特定位點應答產生的無限增殖化的或克隆的單一B細胞的產物。
其它合適的技術涉及將淋巴細胞體外暴露於抗原多肽，或者暴露於噬菌體或相似載體中抗體文庫的選擇。參見Huse等(1989)「在噬菌體λ中產生免疫球蛋白所有組成組分的大聯合文庫」，Science2461275-1281；和Ward等(1989)Nature 341544-456。本發明的多肽和抗體可以經修飾或不修飾而使用，包括嵌合抗體或人源化抗體。通常通過或者共價或者非共價連接提供可檢測信號的物質，來標記所述多肽和抗體。種類繁多的標記和綴合技術是已知的，並且在科學文獻和專利文獻中進行了廣泛的報導。合適的標記包括放射性核素、酶、底物、輔因子、抑制劑、螢光部分、化學發光部分、磁性粒子等。指出這類標記用途的專利包括美國專利第3,817,837；3,850,752；3,939,350；3,996,345；4,277,437；4,275,149；和4,366,241號。也可以產生重組免疫球蛋白，參見Cabilly的美國專利第4,816,567號。
本發明的抗體也可以用於分離所述蛋白的親和層析。當將所述抗體連接至固相支持體(例如粒子，諸如瓊脂糖、Sephadex等)時，可以製備柱子，其中可以使細胞裂解液通過該柱，將該柱洗滌，然後增加溫和變性劑的濃度，由此將釋放所純化的IL-170蛋白。
也可以用所述抗體，根據特定表達產物篩選表達文庫。通常，用於這種方法中的抗體用允許通過抗體結合容易地檢測出抗原存在的部分來標記。
針對每種IL-170蛋白產生的抗體也可以用來產生抗獨特型抗體。這些抗體可用於檢測或診斷與所述相應抗原表達相關的各種免疫學病症。VIII.用途本發明提供將應用於本文其它地方描述的診斷應用的試劑，所述描述例如關於生理異常或發育異常的一般描述，或以下關於診斷試劑盒的描述。
本發明也提供具有重大治療價值的試劑。所述IL-170(天然存在的或重組的)、其片段及其抗體與被鑑定為對IL-170蛋白具有結合親和性的化合物，應該可用作治療與異常生理學(包括異常增生)或發育相關的病症，例如癌症或變性性病症。通過採用本文提供的組合物進行適當的治療性治療，可以對異常增生、再生、變性和萎縮進行調節。例如，與異常表達或IL-170抗原的異常信號相關的疾病或紊亂應該是所述蛋白的激動劑或拮抗劑的靶。
已知在通過RNA印跡分析表現出具有IL-170抗原mRNA的細胞類型中的其它異常發育性病症。參見Berkow(編輯)The Merck Manualof Diagnosis and Therapy，Merck Co.，Rahway，N.J.；和Thorn等，Harrison’s Principles of Internal Medicine，McGraw-Hill，N.Y.。這些問題可能對利用本文提供的組合物的預防或治療敏感。
可以純化與IL-170結合的重組抗體，然後將其給予患者。可以例如在常規藥學上可接受的載體或稀釋劑(例如免疫原性佐劑)中，將這些試劑聯合另外的活性或惰性組分以及生理上無毒的穩定劑和賦形劑，用於治療用途。可以將這些組合物過濾除菌，將這些組合物通過在劑量管制瓶中凍幹或貯存於穩定化水性製劑中，以劑量形式放置。本發明也設想了包括非補體結合形式在內的抗體或其結合片段的應用。
可以進行用IL-170篩選結合配偶體或對IL-170抗原具有結合親和性的化合物，包括相關組分的分離。然後，可以利用後續的生物測定，確定所述化合物是否具有內在生物活性，並且是否由此因為阻斷所述抗原活性而為激動劑劑或拮抗劑。本發明還設想了抗IL-170蛋白抗體作為拮抗劑的治療用途。該方法應該對於其它IL-170蛋白的物種變體特別有用。
有效治療必需的試劑量將取決於許多不同因素，包括給藥方法、靶部位、所述患者的生理狀況和給予的其它藥物。因此，應該確定治療劑量，以優化安全性和效力。通常，體外所用的劑量可以在原位給予這些試劑的用量方面提供有用的指南。治療特定疾病的有效量的動物測試將提供進一步的人類劑量的預測性指標。例如在Gilman等(編輯1990)Goodman and Gilman’sThe Pharmacological Bases ofTherapeutics，第8版，Pergamon Press；和Remington’s PharmaceuticalSciences，第17版，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Penn中，描述了各種考慮。其中以及下文討論了給藥方法，例如經口、靜脈內、腹膜內或肌內給藥、透皮擴散和其它給藥方法。也參見Langer(1990)Science 2491527-1533。藥學上可接受的載體將包括水、鹽水、緩衝液和例如在Merck Index，Merck Co.，Rahway，New Jersey中描述的其它化合物。通常預計具有合適載體的劑量範圍為低於1mM濃度的量，通常低於約10μM濃度，常常低於約100nM，優選低於約10pM(皮摩爾濃度)，最優選低於約1fM(費摩爾濃度)。緩釋製劑或緩釋裝置通常用於持續給藥。
IL-170蛋白、其片段、其抗體或抗體片段、拮抗劑和激動劑，可以直接給予待治療宿主，或根據所述化合物的大小，可能最好在給予它們之前，將它們綴合於諸如卵清蛋白或血清白蛋白的載體蛋白。治療製劑可以以任何常規劑量製劑給予。儘管可能單獨給予所述活性組分，但最好將其作為藥用製劑給予。製劑通常包含至少一種以上定義的活性組分與其一種或更多種可接受的載體。在與其它組分相容並且對所述患者無害的意義上，每種載體應該是藥學上和生理上可接受的。製劑包括適用於經口、直腸、鼻或胃腸外(包括皮下、肌內、靜脈內和皮內)給藥的製劑。所述製劑可以方便地以單位劑型給予，並且可以用藥學領域熟知的任何方法製備。參見例如Gilman等(編輯1990)Goodman and Gilman’sThe Pharmacological Bases of Therapeutics，第8版，Pergamon Press，Parrytown，NY；Remington’s Pharmaceutical Sciences，第17版，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Penn.；Avis等(編輯1993)Pharmaceutical Dosage FormsParenteral Medications，第2版，Dekker，NY；Lieberman等(編輯1990)Pharmaceutical Dosage FormsTablets，第2版，Dekker，NY；和Lieberman等(編輯1990)Pharmaceutical DosageFormsDisperse Systems Dekker，NY。本發明的療法可以與其它治療劑聯合，或結合其它治療劑使用，其它治療劑包括細胞因子、試劑。
天然存在形式和重組形式的本發明IL-170蛋白在能夠篩選對所述蛋白有結合活性的化合物的試劑盒和測定方法中特別有用。最近數年已經開發了幾種自動測定方法，以便使得可以在短時間內篩選數萬種化合物。參見例如Fodor等(1991)Science 251767-773，該文獻描述了用於通過在固相支持體上合成的多種限定聚合物測試結合親和性的方法。如本發明提供的大量純化、可溶性IL-170蛋白的可得性，可以大大促進合適測定的開發。
本發明在通過在多種藥物篩選技術中任一種中應用重組抗原篩選化合物方面特別有用。在篩選特異性配體中使用重組蛋白的優點包括(a)來自特定來源的所述抗原的可更新來源的改進；(b)每個細胞抗原分子數潛在地更大，在測定中產生的信號與噪聲之比更好；和(c)物種變體特異性(理論上產生更高的生物特異性和疾病特異性)。所述純化的蛋白可以在多種測定中測試，通常在體外測定中測試，評估生物相關的反應。參見例如Coligan Current Protocols in Immunology；Hood等Immunology Benjamin/Cummings；Paul(編輯)FundamentalImmunology；和Methods in Enzymology Academic Press。
一種藥物篩選方法利用表達所述IL-170抗原的重組DNA分子穩定轉化的真核或原核宿主細胞。可以分離表達與其它功能等同抗原分離的抗原的細胞。或者活細胞形式或者固定形式的這種細胞可以用於標準的蛋白-蛋白結合測定。也參見Parce等(1989)Science 246243-247；和Owicki等(1990)Proc.Nat』l Acad.Sci.USA 874007-4011，所述文獻描述了測定細胞反應的靈敏方法。在所述細胞(IL-170蛋白來源)與標記結合配偶體或者對該配體具有已知結合親和性的抗體(例如125I抗體)以及正在測定與所述結合組合物的結合親和性的試驗樣品接觸並一起溫育時，競爭性測定特別有用。然後分離結合的和游離的標記結合組合物，以評價抗原結合程度。結合的試驗化合物的量與標記受體與所述已知來源的結合量成反比。可以使用多種技術中的任一種，將結合的抗原與游離抗原分離，以評價結合程度。這種分離步驟可能通常涉及諸如以下的一種方法粘附到濾膜上，然後洗滌；粘附到塑料上，然後洗滌；或將細胞膜離心。也可以用活細胞篩選藥物對IL-170蛋白介導的功能的效應，例如第二信使水平，即Ca++；細胞增殖；肌醇磷酸庫改變；和其它效應。某些檢測方法便於消除分離步驟，例如親近敏感性檢測系統。鈣敏感染料可用來利用螢光計或螢光細胞分類裝置檢測Ca++水平。
另一種方法利用來自轉化的真核生物或原核生物宿主細胞的膜作為所述IL-170蛋白源。用指導膜結合IL-170蛋白(例如工程膜結合形式)的表達的DNA載體穩定轉化這些細胞。實質上，能夠由所述細胞製備所述膜，並將其用於任何受體/配體類型的結合測定，例如上述的競爭性測定。
再一種方法是利用來自轉化真核生物或原核生物宿主細胞的溶解的、未純化的或溶解的純化IL-170蛋白。這可供用於「分子」結合測定，優點是特異性提高，能夠自動進行，並且是藥物測試高通量的。
用於藥物篩選的另一技術涉及一種方法，該方法提供對IL-170具有合適結合親和性的化合物的高通量篩選，該方法詳細描述於1984年9月13日公開的Geysen的歐洲專利申請84/03564。首先，在例如塑料釘或某些其它合適表面的固體基質上合成大量的不同小肽試驗化合物，參見Fodor等(1991)。然後，使所有釘與溶解的未純化或溶解的純化IL-170結合組合物反應，然後洗滌。下一步涉及測定結合的結合組合物。
合理的藥物設計也可以基於所述IL-170蛋白或其它效應物或類似物的分子形狀的結構研究。效應物可以是對抗原結合應答而介導其它功能的其它蛋白，或為正常與所述抗原相互作用的其它蛋白。用於確定哪些位點與特定的其它蛋白相互作用的一種方法是物理結構測定，例如X射線晶體學或二維NMR技術。這些將為哪些胺基酸殘基形成分子接觸區提供指南。關於蛋白結構測定的詳細描述，參見例如Blundell和Johnson(1976)Protein Crystallography，Academic Press，NewYork。
可以將純化的IL-107蛋白直接包被到板上，用於上述藥物篩選技術。然而，可以用這些配體的非中和性抗體作為捕獲抗體，以將所述相應的配體固定到固相支持體上。IX.試劑盒本發明也設想了IL-170蛋白、其片段、肽和它們的融合產物在用於檢測結合組合物存在的多種診斷試劑盒和方法中的用途。通常，所述試劑盒會具有含或者特定IL-170肽或基因區段或者識別一種或另一種(例如抗原片段或抗體)的試劑的區室。
用於測定試驗化合物對IL-170蛋白的結合親和性的試劑盒通常包含一種試驗化合物；一種標記化合物，例如對所述抗原具有已知結合親和性的一種抗體；一種IL-170蛋白源(天然存在的或重組的)；和用於將結合的標記化合物與游離標記化合物分離的工具，例如用於將該抗原固定化的固相。一旦篩選出化合物，則可以在本領域熟知的合適的生物測定中評估對該抗原具有合適結合親和性的那些化合物，以測定它們是否表現出與天然抗原相似的生物活性。重組IL-170蛋白多肽的可得性也提供了很好確定的校準這類測定的標準。
用於測定樣品中例如IL-170蛋白濃度的優選試劑盒通常包含一種標記化合物，例如對所述抗原具有已知結合親和性的抗體；一種抗原源(天然存在的或重組的)和一種將結合標記化合物與游離標記化合物分離的工具，例如用於將所述IL-170蛋白固定化的固相。通常提供含試劑的區室和說明。
用於測定樣品中IL-170蛋白濃度的一種方法通常包括以下步驟(1)由包含膜結合IL-170蛋白源的樣品製備膜；(2)洗滌所述膜並將其懸浮於緩衝液中；(3)通過將所述膜在已經加入合適去垢劑的培養基中溫育，溶解所述抗原；(4)調節所述溶解的抗原的去垢劑濃度；(5)使所述稀釋液與放射標記的抗體接觸並一起溫育，以形成複合物；(6)回收所述複合物，例如通過聚乙烯亞胺處理的濾膜過濾來回收；和(7)測定所回收的複合物的放射性。
包括抗原結合片段在內的所述IL-170蛋白或片段的特異性抗體，可用於檢測水平提高的IL-170蛋白和/或其片段存在的診斷應用。這類診斷測定可以使用裂解液、活細胞、固定細胞、免疫螢光、細胞培養物、體液，還可以涉及血清中與所述蛋白相關的抗原的檢測等。診斷測定可以是均相(在游離試劑和蛋白-蛋白複合物之間無分離步驟)或異相的(有分離步驟)。存在各種商業測定，諸如放射免疫測定(RIA)、酶聯免疫吸附測定(ELISA)、酶免疫測定(ELA)、酶倍增免疫測定(enzyme-multiplied immunoassay)技術(EMIT)、底物標記螢光免疫測定(SLFIA)等。例如可以通過用標記的並識別抗IL-170蛋白或其特定片段的抗體的第二抗體，利用未標記抗體。在文獻中也已經在多方面討論了相似的測定。參見例如Harlow和Lane(1988)AntibodiesA LaboratoryManual，CSH。
抗獨特型抗體可以相似地用來診斷抗IL-170蛋白的抗體的存在，這樣可以診斷各種異常狀態。例如，IL-170蛋白的超量產生可能導致產生可能是異常生理狀況診斷標誌的各種免疫反應，所述異常生理狀況特別是增生性細胞病症(諸如癌症)或異常分化。
通常，用於診斷測定的試劑在試劑盒中供應，以便使該測定的靈敏度最佳化。對於本發明，根據該測定的性質，提供所述方案和所述標記，所述標記或者標記或未標記的抗體，或者標記的IL-170蛋白。這通常與其它添加劑結合，所述添加劑諸如緩衝液、穩定劑、信號產生必需的物質，諸如酶的底物等。所述試劑盒最好也含有正確使用和使用後正確處理內容物的說明。所述試劑盒通常具有每種有用試劑的區室。當所述試劑可以在水性介質中重建，提供進行該測定的合適試劑濃度時，所述試劑最好是作為乾燥的凍乾粉提供。
所述藥物篩選和所述診斷測定的任一上述組分可以不經修飾而使用，或可以以多種方式進行修飾。例如，通過共價或非共價結合直接或間接提供可檢測信號的部分，可以達到標記。在這些測定中的任一種中，可以或者直接或間接地標記所述抗原、試驗化合物、IL-170蛋白或其抗體。直接標記的可能性包括標記基團諸如125I的放射標記；酶(美國專利第3,645,090號)，諸如過氧化物酶和鹼性磷酸酶；和能夠監測螢光強度、波長移動或螢光偏振方面變化的螢光標記(美國專利第3,940,475號)。間接標記的可能性包括將一種組分生物素化，然後結合於偶聯至一種上述標記基團的抗生物素蛋白。
也有分離結合抗原與游離抗原、或者分離結合試驗化合物與游離試驗化合物的許多方法。可以將所述IL-170蛋白固定於各種基質上，然後進行洗滌。合適的基質包括諸如ELISA板的塑料、濾膜和珠粒。將所述IL-170蛋白固定到基質上的方法包括但不限於直接粘附至塑料、應用捕獲抗體、化學偶聯和生物素-抗生物素蛋白。該途徑中的最後一步涉及通過幾種方法中的任一種來沉澱蛋白-蛋白複合物，所述方法包括利用例如有機溶劑(例如聚乙二醇)或鹽(例如硫酸銨)的那些方法。其它合適的分離技術包括但不限於Rattle等(1984)Clin.Chem.301457-1461中描述的螢光抗體可磁化微粒法、以及美國專利第4,659,678號中描述的雙抗體磁粒子分離法。
在所述文獻中已經廣泛報導了用於將蛋白或其片段交聯於各種標記的方法，在此不需要詳細討論。這些技術中的許多技術涉及或者通過碳二亞胺或者活性酯來應用活化羧基，形成肽鍵；通過巰基與活化滷素(諸如氯乙醯)或活化烯烴(諸如馬來醯亞胺)反應形成硫醚，以用於連接等。融合蛋白也可應用於這些應用中。
本發明的另一診斷方面涉及應用取自IL-170蛋白序列的寡核苷酸序列或多核苷酸序列。這些序列可以用作探針，以檢測懷疑患有異常病症(例如癌症或發育問題)患者樣品中抗原信息的水平。RNA和DNA核苷酸序列的製備、所述序列的標記和所述序列的優選大小在所述文獻中有大量的描述和討論。通常，寡核苷酸探針應該具有至少約14個核苷酸，通常至少約18個核苷酸，所述多核苷酸探針可以多至數千鹼基。可以採用各種標記，最常用的標記是放射性核素，特別是32P。然而，也可以使用其它技術，例如採用生物素修飾的核苷酸以用於引入多核苷酸中。然後所述生物素用作與抗生物素蛋白或抗體結合的位點，所述抗生物素蛋白或抗體可以用各種各樣的標記來標記，所述標記例如放射性核素、螢光劑、酶等。另一方面，可以使用識別特定雙鏈體的抗體，所述雙鏈體包括DNA雙鏈體、RNA雙鏈體、DNA-RNA雜種雙鏈體或DNA-蛋白雙鏈體。所述抗體進而又可以被標記，並且進行所述測定，其中所述雙鏈體結合於表面上，使得當所述表面上形成雙鏈體時，可以檢測到結合於所述雙鏈體的抗體的存在。可以以任何常規技術，例如核酸雜交、正和負篩選、重組探測、雜交體釋放翻譯(HRT)和雜交體扣留翻譯(HART)，進行針對所述新反義RNA的探針的應用。這也包括擴增技術，例如聚合酶鏈式反應(PCR)。另一種方法利用例如反義核酸，包括引入雙鏈RNA(dsRNA)以遺傳幹擾基因功能，如例如描述於Misquitta等(1999)Proc.Nat』l Acad.Sci.USA 961451-1456；和/或核酶，以阻斷特定IL-170 mRNA的翻譯。應用反義方法以抑制基因的體外翻譯是本領域眾所周知的。Marcus-Sakura(1988)Anal.Biochem.172289；Akhtar(編輯1995)DeliveryStrategies for Antisense Oligonucleotide Therapeutics CRC Press，Inc.。
也設想了也測試其它標記定性或定量存在的診斷試劑盒。診斷或預後可能取決於用作標記的多種指標的組合。因此，試劑盒可以測試標記的組合。參見例如Viallet等(1989)Progress in Growth Factor Res.189-97。
參考以下實施例可最好地理解本發明的廣大範圍，所述實施例不是用來將本發明限制於具體的實施方案。
實施例I.通用方法在Maniatis等(1982)Molecular CloningA Laboratory Manual ColdSpring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor Press；Sambrook等(1989)Molecular CloningA Laboratory Manual(第2版)第1-3卷，CSH Press，NY；Ausubel等，Biology Greene Publishing Associates，Brooklyn，NY；或Ausubel等(1987和增補本)Current Protocols in Molecular BiologyGreene/Wiley，New York；Innis等(編輯1990)PCR ProtocolsA Guide toMethods and Applications Academic Press，N.Y.；和Kohler等(1995)Quantitation of mRNA by Polymerase Chain Reaction Springer-Verlag，Berlin中，描述或引用的許多所述標準方法。用於蛋白純化的方法包括諸如硫酸銨沉澱、柱層析、電泳、離心、結晶的方法和其它方法。參見例如Ausubel等(1987和定期增補本)；Deutscher(1990)「蛋白純化指南」，載於Methods in Enzymology第182卷和該系列中的其它卷；和例如Pharmacia，Piscataway，N.J.或Bio-Rad，Richmond，CA的生產商關於蛋白純化產品使用的文獻。與重組技術結合，使得可以與合適區段融合，例如與FLAG序列或可以通過蛋白酶可去除序列融合的相當序列融合。參見例如Hochuli(1989)Chemische Industrie 1269-70；Hochuli(1990)「用金屬螯合吸收劑純化重組蛋白」，載於Setlow(編輯)GeneticEngineering，Principle and Methods 1287-98，Plenum Press，N.Y.；和Crowe等(1992)QIAexpressThe High Level Expression ProteinPurification System QUIAGEN，Inc.，Chatsworth，CA。
通過引用也結合到本文中的是涉及IL-171和IL-175細胞因子的相似的專利申請，所述申請的代理律師登記號為DX0918P，在同該專利申請的同一日期申請。
例如在Hertzenberg等(編輯1996)Weir’s Handbook of ExperimentalImmnology第1-4卷，Blackwell Science；Coligan(1991)CurrentProtocols in Immunology Wiley/Greene，NY；和Methods in Enzymology第70、73、74、84、92、93、108、116、121、132、150、162和163卷中，描述了標準免疫學技術。例如在Thomson(編輯1998)The Cytokine Handbook(第3版)Academic Press，San Diego；Mire-Sluis和Thorpe(1998)Cytokines Academic Press，San Diego；Metcalf和Nicola(1995)The Hematopoietic Colony Stimulating Factors CambridgeUniversity Press；以及Aggarwal和Gutterman(1991)Human CytokinesBlackwell Pub.中，描述了細胞因子測定。
血管生物活性的測定是本領域熟知的。它們包括腫瘤或其它組織(例如動脈平滑肌)增生(參見例如Koyoma等(1996)Cell 871069-1078)、單核細胞粘著於血管上皮(參見McEvoy等(1997)J.Exp.Med.1852069-2077)等中的血管生成活性和血管抑制(angiostatic)活性。也參見Ross(1993)Nature 362801-809；Rekhter和Gordon(1995)Am.J.Pathol.147668-677；Thyberg等(1990)Atherosclerosis 10966-990；和Gumbiner(1996)Cell 84345-357。
例如在Wouterlood(編輯1995)Neuroscience Protocols modules 10，Elsevier；Methods in Neurosciences Academic Press；和NeuromethodsHumana Press，Totowa，NJ中，描述了用於神經細胞生物活性的測定。例如在Meisami(編輯)Handbook of Human Growth and DevelopmentalBiology CRC Press；和Chrispeels(編輯)Molecular Techniques andApproaches in Developmental Biology Interscience中，描述了發育系統的方法學。
例如採用可得到軟體程序，包括得自GCG (U.Wisconsin)和GenBank來源的軟體程序，進行計算機序列分析。也可以利用例如來自GenBank和其它的公共序列資料庫。
可用於IL-170的許多技術可以應用於這些新實體，如例如在USSN中描述的，其中每種技術通過引用結合到本文中以用於所有目的。
在Melamed等(1990)Flow Cytometry and Sorting Wiley-Liss，Inc.，New York，NY；Shapiro(1988)Practical Flow Cytometry Liss，New York，NY；和Robinson等(1993)Handbook of Flow Cytometry Methods Wiley-Liss，New York，NY中，描述了FACS分析。II.編碼IL-170蛋白的DNA克隆的分離在Rouvier等(1993)J.Immunol.1505445-5456中描述了鼠類CTLA-8的分離。相似的方法可用於分離所述IL-173、IL-174、IL-176和IL-177以及所述IL-171、IL-172和IL-175的物種對應物。所述IL-170信息源用合適的探針篩選高水平信息表達的各種細胞系。根據所述合適的IL-170信息的表達水平，選擇合適的細胞系。IL-170編碼克隆的分離用標準PCR技術，從基因組文庫或cDNA文庫、或mRNA中擴增IL-170基因序列。獲得人基因組文庫或cDNA文庫，並用合適的cDNA或合成探針進行篩選。可以製備PCR引物。例如從所提供的序列中，選擇合適的引物，並分離全長克隆。可以製備各種長度且可能具有序列差異的引物的各種組合。可以用所述全長克隆作為雜交探針，以用嚴格性雜交條件或嚴格性較低的雜交條件篩選其它同系物基因。
在另一種方法中，用寡核苷酸篩選文庫。結合聚合酶鏈式反應(PCR)技術，將合適方向的合成寡核苷酸用作引物，以從文庫中選擇正確的克隆。III.IL-170蛋白的生化表徵將IL-170蛋白在異源細胞中表達，所述IL-170蛋白例如為天然形式或在羧基末端表現出FLAG肽的重組形式。參見例如Crowe等(1992)QIAexpressThe High Level Expression and Protein Purification SystemQIAGEN，Inc.Chatsworth，CA；和Hopp等(1988)Bio/Technology61204-1210。將這兩種形式分別引入表達載體中，例如pME18S或pEE12，隨後將其轉染到合適的細胞中，例如COS-7或NSO細胞。在補充10％胎牛血清的RPMI培養基中將電穿孔細胞培養例如48小時。然後將細胞與35S-Met和35S-Cys一起溫育，以便標記細胞蛋白。在SDS-PAGE上還原條件下的所述蛋白的比較應該表明，用全長克隆轉染的細胞應該分泌合適大小(例如約15,000道爾頓)的多肽。用內切糖苷酶處理將證明是否有N-糖基化形式。IV.IL-170的大規模生產、純化對於生物測定，例如用在補充1％Nutridoma HU (BoehringerMannheim，Mannheim，德國)的RPMI培養基中生長的轉染的COS-7細胞，大量生產哺乳動物IL-170，並隨後將其純化。純化可以使用利用抗體的親和層析，或例如利用抗體的蛋白純化技術，以測定分離特性。
為了產生大量的天然蛋白，可以按照Celltech開發的方法(Slough，Berkshire，UK；國際專利申請WO86/05807、WO87/04462、WO89/01036和WO89/10404)，製備NSO細胞的穩定轉化體。
通常，使1升含有人IL-173或IL-173-FLAG的上清液通過例如60ml移植至螯合型Sepharose Fast Flow基質(Pharmacia，Upsalla，瑞士)的Zn++離子柱上。用10倍體積結合緩衝液(His結合緩衝液試劑盒，Novagen，Madison，WI)洗滌後，用20-100mM咪唑梯度洗脫出由所述金屬離子保留的蛋白。採用抗FLAG單克隆抗體M2(Eastman Kodak，New Haven，CT)，通過斑點印跡法測定所洗脫出的部分中人IL-173-FLAG的含量，而通過非還原性SDS-PAGE的銀染，評價人IL-173的含量。然後將含所述IL-170的部分合併，並對PBS透析，然後或者用於生物測定中，或者進一步純化，例如通過DEAE柱上的離子交換HPLC純化。可以在SUPERDEX G-75 HRD30柱(Pharmacia Uppsala，瑞士)上進行第三步的凝膠過濾層析。可以例如通過銀染的SDS-PAGE評估純化。V.抗IL-173抗體的製備在第0天，用例如在弗氏完全佐劑中乳化的1ml純化的人IL-173FLAG腹膜內免疫近交Balb/c小鼠，並在第15天和第22天用在弗氏不完全佐劑中乳化的1ml純化的人IL-173 FLAG免疫近交Balb/c小鼠。小鼠以靜脈內給予的0.5ml純化的人IL-173加強。
收集多克隆抗血清。可以將血清純化為抗體。可以將所述抗體進一步加工，例如加工為Fab、Fab2、Fv或相似的片段。
用例如非分泌性骨髓瘤細胞系SP2/0-Ag8，並用聚乙二醇1000(Sigma，St.Louis，MO)作為融合劑，產生雜交瘤。將雜交瘤細胞置於96孔Falcon組織培養板(Becton Dickinson，NJ)中，並用補充80μg/ml慶大黴素、2mM穀氨醯胺、10％馬血清(Gobco，Gaithersburg，MD)、1％ADCM(CRTS，Lyon，法國)、10-5M重氮絲氨酸(Sigma，St.Louis，MO)和5×10-5M次黃嘌呤的DMEM F12(Gibco，Gaithersburg，MD)飼餵雜交瘤細胞。利用丙酮固定的人IL-173轉染的COS-7細胞，通過免疫細胞化學(ICC)以及用從COS-7上清液中純化的人IL-173-FLAG作為包被抗原，通過ELISA，篩選產生抗人IL-173抗體的雜交瘤上清液。將等份的陽性細胞克隆擴增6天，並將其深低溫保存，以及將其在15天之前已經接受姥鮫烷(2，6，10，14-四甲基十五烷，Sigma，St.Louis，MO)腹膜內注射的姥鮫烷處理的Balb/c小鼠的腹水中繁殖。通常，腹膜內給予1ml PBS中的約105雜交瘤細胞，10天後，從每隻小鼠收集腹水。
將腹水離心後，通過硫酸銨沉澱和在用20mM Tris pH 8.0平衡的Zephyr-D矽柱(IBF Sepracor)上的離子交換層析，分離抗體部分。用NaCl梯度(範圍為0-1 M NaCl)洗脫蛋白。收集2ml部分，並通過ELISA測試抗IL-173抗體的存在。將含有特異性抗IL-173活性的部分合併、透析和冷凍。可以用過氧化物酶標記等份的所述純化單克隆抗體。
可以將多克隆或單克隆的抗體製劑交叉吸附、消耗或混合，以產生表現出所需選擇性和特異性組合的試劑。可以將限定的特定抗原固定至固相基質上，用來選擇性地消耗或根據所需的結合能力進行選擇。VI.人IL-173的定量在IL-173特異性抗體中，選擇合適的克隆分離物，以採用夾層技術定量測定人IL-173的水平。將純化的抗體在包被緩衝液(碳酸緩衝液pH 9.6，15mM Na2CO3、35mM NaHCO3)中以例如2μg/ml稀釋。將這種稀釋溶液於室溫下過夜包被到96孔ELISA板(ImmunoplateMaxisorp F96 certified，NUNC，丹麥)的各孔上。然後例如用由磷酸緩衝鹽溶液和0.05％吐溫20(Technicon Diagnositics，USA)組成的洗滌緩衝液進行人工洗滌所述板。將110μl在TBS-B-T緩衝液[20mM Tris、150mM NaCl、1％BSA(Sigma，St.Louis，MO)和0.05％吐溫20]中稀釋的純化人CTLA-8加入各孔中。於37℃溫育3小時後，將所述板洗滌1次。將100μl在TBS-B-T緩衝液中稀釋至5μg/ml的過氧化物酶標記的Ab加入各孔中，並於37℃溫育2小時。然後在洗滌緩衝液中將各孔洗滌3次。將100μl在檸檬酸/磷酸緩衝液中稀釋至1mg/ml的過氧化物酶底物2，2』連氮基-雙(3-乙基苯並thiazoine-6-磺酸)(ABTS)加入各孔中，並讀出405nm下的比色反應讀數。VII.IL-170基因的分布從來源於得自癲癇患者腦前額皮質cDNA文庫的序列中，鑑定出人IL-173。從來自耳蝸、大腦、小腦、眼、肺和腎的cDNA文庫中得到大鼠IL-173。再者，所述基因看來是相當罕見的，這提示所述表達分布可能是高度受限制的。
從來源於得自小鼠胚胎的cDNA文庫的序列中，鑑定出小鼠IL-174。該基因看來是相當罕見的，這提示所述表達分布可能是高度受限制的。
從來源於程序性細胞死亡T細胞的序列中，鑑定出人IL-171。該基因看來是相當罕見的，這提示所述表達分布可能是高度受限制的。
從來源於人胎兒心、肝和脾、胸腺、胸腺腫瘤和全胎兒的序列中，鑑定出人IL-172。從來源於小鼠胚胎、乳腺和混合器官的序列中得到小鼠IL-172。這兩種基因看來是相當罕見的，這提示它們的表達分布可能是高度受限制的。
從來源於12小時硫尿嘧啶活化的T細胞的序列中，鑑定出人IL-175。該基因看來是相當罕見的，這提示所述表達分布可能是高度受限制的。VIII.IL-170基因的染色體作圖使用編碼合適IL-170基因的分離的cDNA。染色體作圖是一種標準技術。參見例如BIOS Laboratories(New Haven，CT)和採用一組小鼠體細胞雜種和PCR的方法。
人IL-173作圖至人染色體13q11。IX.IL-170同系物的分離使用結合組合物(例如抗體)篩選由表達IL-170蛋白的細胞系製備的表達文庫。用標準染色技術，對胞內或表面表達的抗原進行檢測或分類，或通過淘選篩選表面表達的轉化細胞。用各種染色方法或免疫螢光方法，進行胞內表達的篩選。也參見MeMahan等(1991)EMBO J.102821-2832。
可應用相似的方法來分離或者物種變體或者等位基因變體。採用基於來自一個物種作為探針的全長分離物或片段、或來自合適物種的全長分離物或片段的交叉物種雜交，分離物種變體。X.IL-170受體的分離可使用用於篩選有表達潛在IL-170受體的細胞系製備的表達文庫的方法。如上所述產生標記的IL-170配體。用標準染色技術來檢測表面表達的受體或將其分類，或通過淘選篩選表面表達的轉化細胞。也參見McMahan等(1991)EMBO J.102821-2832。
例如，在第0天，用1ml/室10ng/ml纖聯蛋白的PBS於室溫下預包被2室permanox玻片30分鐘。用PBS衝洗1次。然後，以2-3×105細胞/室將COS細胞平板接種到1.5ml生長培養基中。於37℃溫育過夜。
對於每種樣品，在第1天，製備0.5ml含66μg/ml DEAE-葡聚糖、66μM氯喹和4μg DNA的無血清DME溶液。對於每組，製備例如huIL-170-FLAG cDNA的1和1/200稀釋度的陽性對照以及一個陰性模擬。用無血清DME衝洗細胞。加入所述DNA溶液，並於37℃溫育5小時。除去培養基，並加入0.5ml 10％DMSO的DME達2.5分鐘。除去DME並用DME洗滌1次。加入1.5ml生長培養基並溫育過夜。
第2天，更換培養基。第3天或第4天，將細胞固定並染色。用Hank緩衝鹽溶液(HBSS)衝洗所述細胞2次，並在4％低聚甲醛(PFA)/葡萄糖中固定5分鐘。用HBSS洗滌3次。在除去所有液體後，將玻片貯藏於-80℃。對於每個室，如下進行0.5ml的溫育。加入HBSS/皂苷(0.1％)和32μl/ml 1M NaN3達20分鐘。然後用HBSS/皂苷洗滌細胞1次。將可溶性抗體加入細胞中並溫育30分鐘。用HBSS/皂苷洗滌細胞2次。加入第二抗體，例如Vector抗小鼠抗體的1/200稀釋液並溫育30分鐘。製備ELISA溶液，例如Vector Elite ABC辣根過氧化物酶溶液，並預溫育30分鐘。每2.5ml HBSS/皂苷使用例如1滴溶液A(抗生物素蛋白)和1溶液B(生物素)。用HBSS/皂苷將細胞洗滌2次。加入ABC HRP溶液，並溫育30分鐘。用HBSS洗滌細胞2次，第二次洗滌2分鐘，這將細胞封閉。然後加入Vector二氨基苯甲酸(DAB)達5-10分鐘。每5ml玻璃蒸餾水使用2滴緩衝液加上4滴DAB加上2滴H2O2。小心地除去室，並在水中衝洗玻片。風乾數分鐘，然後加入1滴Crystal Mount並加上蓋玻片。於85-90℃烘烤5分鐘。
另一方面，用所標記的配體來親和純化或分選出表達所述受體的細胞。參見例如Sambrook等或Ausubel等。
本文引用的所有參考文獻均通過引用結合到本文中，其程度與具體和單獨地表明每個單獨的出版物或專利申請通過引用結合到本文中的程度一樣。
可以對本發明進行許多修改和變化，而不偏離本發明的精神和範圍，這對於本領域技術人員是顯而易見的。提供本文描述的具體實施方案僅僅是舉例說明，本發明僅受所附權利要求書的條款以及這些權利要求賦予的相當物的全部範圍的限制。
序列表SEQ ID NO1是靈長類IL-172核酸序列。SEQ ID NO2是靈長類IL-172多肽序列。SEQ ID NO3是鼠類IL-172核酸序列。SEQ ID NO4是鼠類IL-172多肽序列。SEQ ID NO5是靈長類IL-173核酸序列。SEQ ID NO6是靈長類IL-173多肽序列。SEQ ID NO7是補充的靈長類IL-173核酸序列。SEQ ID NO8是補充的靈長類IL-173多肽序列。SEQ ID NO9是鼠類IL-173核酸序列。SEQ ID NO10是鼠類IL-173多肽序列。SEQ ID NO11是補充的鼠類IL-173核酸序列。SEQ ID NO12是補充的鼠類IL-173多肽序列。SEQ ID NO13是靈長類IL-174核酸序列。SEQ ID NO14是靈長類IL-174多肽序列。SEQ ID NO15是鼠類IL-174核酸序列。SEQ ID NO16是鼠類IL-174多肽序列。SEQ ID NO17是補充的鼠類IL-174核酸序列。SEQ ID NO18是補充的鼠類IL-174多肽序列。SEQ ID NO19是靈長類IL-171 IUPAC核酸序列。SEQ ID NO20是靈長類IL-171核酸序列。SEQ ID NO21是靈長類IL-171多肽序列。SEQ ID NO22是補充的靈長類IL-171核酸序列。SEQ ID NO23是補充的靈長類IL-171多肽序列。SEQ ID NO24是靈長類IL-175 IUPAC核酸序列。SEQ ID NO25是靈長類IL-175核酸序列。SEQ ID NO26是靈長類IL-175多肽序列。SEQ ID NO27是靈長類IL-176核酸序列。SEQ ID NO28是靈長類IL-176多肽序列。SEQ ID NO29是靈長類IL-177核酸序列。SEQ ID NO30是靈長類IL-177多肽序列。SEQ ID NO31是大鼠CTLA-8多肽序列。SEQ ID NO32是小鼠CTLA-8多肽序列。SEQ ID NO33是靈長類CTLA-8多肽序列。SEQID NO34是病毒CTLA-8多肽序列。110Schering Corporation120純化的哺乳動物細胞因子；相關試劑和方法130DX0917K140141150USSN 09/228,8221511999-01-1116034170PatentIn Ver.2.12101211543212DNA213靈長類220221CDS222(1)..(540)220221成熟肽222(61)..(540)4001atg gac tgg cct cac aac ctg ctg ttt ctt ctt acc att tcc atc ttc 48Met Asp Trp Pro His Asn Leu Leu Phe Leu Leu Thr Ile Ser Ile Phe-20 -15 -10 -5ctg ggg ctg ggc cag ccc agg agc ccc aaa agc aag agg aag ggg caa 96Leu Gly Leu Gly Gln Pro Arg Ser Pro Lys Ser Lys Arg Lys Gly Gln-1 1 5 10ggg cgg cct ggg ccc ctg gtc cct ggc cct cac cag gtg cca ctg gac 144Gly Arg Pro Gly Pro Leu Val Pro Gly Pro His Gln Val Pro Leu Asp15 20 25ctg gtg tca cgg atg aaa ccg tat gcc cgc atg gag gag tat gag agg 192Leu Val Ser Arg Met Lys Pro Tyr Ala Arg Met Glu Glu Tyr Glu Arg30 35 40aac atc gag gag atg gtg gcc cag ctg agg aac agc tca gag ctg gcc 240Asn Ile Glu Glu Met Val Ala Gln Leu Arg Asn Ser Ser Glu Leu Ala45 50 55 60cag aga aag tgt gag gtc aac ttg cag ctg tgg atg tcc aac aag agg 288Gln Arg Lys Cys Glu Val Asn Leu Gln Leu Trp Met Ser Asn Lys Arg65 70 75agc ctg tct ccc tgg ggc tac agc atc aac cac gac ccc agc cgt atc 336Ser Leu Ser Pro Trp Gly Tyr Ser Ile Asn His Asp Pro Ser Arg Ile80 85 90ccc gtg gac ctg ccg gag gca cgg tgc ctg tgt ctg ggc tgt gtg aac 384Pro Val Asp Leu Pro Glu Ala Arg Cys Leu Cys Leu Gly Cys Val Asn
95 100 105ccc ttc acc atg cag gag gac cgc agc atg gtg agc gtg ccg gtg ttc 432Pro Phe Thr Met Gln Glu Asp Arg Ser Met Val Ser Val Pro Val Phe110 115 120agc cag gtt cct gtg cgc cgc cgc ctc tgc ccg cca ccg ccc cgc aca 480Ser Gln Val Pro Val Arg Arg Arg Leu Cys Pro Pro Pro Pro Arg Thr125 130 135 140ggg cct tgc cgc cag cgc gca gtc atg gag acc atc gct gtg ggc tgc 528Gly Pro Cys Arg Gln Arg Ala Val Met Glu Thr Ile Ala Val Gly Cys145 150 155acc tgc atc ttc tga 543Thr Cys Ile Phe1602102211180212PRT213靈長類4002Met Asp Trp Pro His Asn Leu Leu Phe Leu Leu Thr Ile Ser Ile Phe-20 -15 -10 -5Leu Gly Leu Gly Gln Pro Arg Ser Pro Lys Ser Lys Arg Lys Gly Gln-1 1 5 10Gly Arg Pro Gly Pro Leu Val Pro Gly Pro His Gln Val Pro Leu Asp15 20 25Leu Val Ser Arg Met Lys Pro Tyr Ala Arg Met Glu Glu Tyr Glu Arg30 35 40Asn Ile Glu Glu Met Val Ala Gln Leu Arg Asn Ser Ser Glu Leu Ala45 50 55 60Gln Arg Lys Cys Glu Val Asn Leu Gln Leu Trp Met Ser Asn Lys Arg65 70 75Ser Leu Ser Pro Trp Gly Tyr Ser Ile Asn His Asp Pro Ser Arg Ile80 85 90Pro Val Asp Leu Pro Glu Ala Arg Cys Leu Cys Leu Gly Cys Val Asn95 100 105Pro Phe Thr Met Gln Glu Asp Arg Ser Met Val Ser Val Pro Val Phe110 115 120Ser Gln Val Pro Val Arg Arg Arg Leu Cys Pro Pro Pro Pro Arg Thr125 130 135 140Gly Pro Cys Arg Gln Arg Ala Val Met Glu Thr Ile Ala Val Gly Cys145 150 155Thr Cys Ile Phe1602103211543212DNA213齧齒動物220221CDS222(1)..(540)220221成熟肽222(67)..(540)4003atg gac tgg ccg cac agc ctg ctc ttc ctc ctg gcc atc tcc atc ttc 48Met Asp Trp Pro His Ser Leu Leu Phe Leu Leu Ala Ile Ser Ile Phe-20 -15 -10ctg gcg cca agc cac ccc cgg aac acc aaa ggc aaa aga aaa ggg caa 96Leu Ala Pro Ser His Pro Arg Asn Thr Lys Gly Lys Arg Lys Gly Gln-5 -1 1 5 10ggg agg ccc agt ccc ttg gcc cct ggg cct cat cag gtg ccg ctg gac 144Gly Arg Pro Ser Pro Leu Ala Pro Gly Pro His Gln Val Pro Leu Asp15 20 25ctg gtg tct cga gta aag ccc tac gct cga atg gaa gag tat gag cgg 192Leu Val Ser Arg Val Lys Pro Tyr Ala Arg Met Glu Glu Tyr Glu Arg30 35 40aac ctt ggg gag atg gtg gcc cag ctg agg aac agc tcc gag cca gcc 240Asn Leu Gly Glu Met Val Ala Gln Leu Arg Asn Ser Ser Glu Pro Ala45 50 55aag aag aaa tgt gaa gtc aat cta cag ctg tgg ttg tcc aac aag agg 288Lys Lys Lys Cys Glu Val Asn Leu Gln Leu Trp Leu Ser Asn Lys Arg60 65 70agc ctg tcc cca tgg ggc tac agc atc aac cac gac ccc agc cgc atc 336Ser Leu Ser Pro Trp Gly Tyr Ser Ile Asn His Asp Pro Ser Arg Ile75 80 85 90cct gcg gac ttg ccc gag gcg cgg tgc cta tgt ttg ggt tgc gtg aat 384Pro Ala Asp Leu Pro Glu Ala Arg Cys Leu Cys Leu Gly Cys Val Asn95 100 105ccc ttc acc atg cag gag gac cgt agc atg gtg agc gtg cca gtg ttc 432Pro Phe Thr Met Gln Glu Asp Arg Ser Met Val Ser Val Pro Val Phe110 115 120agc cag gtg ccg gtg cgc cgc cgc ctc tgt cct caa cct cct cgc cct 480Ser Gln Val Pro Val Arg Arg Arg Leu Cys Pro Gln Pro Pro Arg Pro125 130 135ggg ccc tgc cgc cag cgt gtc gtc atg gag acc atc gct gtg ggt tgc 528Gly Pro Cys Arg Gln Arg Val Val Met Glu Thr Ile Ala Val Gly Cys140 145 150acc tgc atc ttc tga 543Thr Cys Ile Phe1552104211180212PRT213齧齒動物4004Met Asp Trp Pro His Ser Leu Leu Phe Leu Leu Ala Ile Ser Ile Phe-20 -15 -10Leu Ala Pro Ser His Pro Arg Asn Thr Lys Gly Lys Arg Lys Gly Gln-5 -1 1 5 10Gly Arg Pro Ser Pro Leu Ala Pro Gly Pro His Gln Val Pro Leu Asp15 20 25Leu Val Ser Arg Val Lys Pro Tyr Ala Arg Met Glu Glu Tyr Glu Arg30 35 40Asn Leu Gly Glu Met Val Ala Gln Leu Arg Asn Ser Ser Glu Pro Ala45 50 55Lys Lys Lys Cys Glu Val Asn Leu Gln Leu Trp Leu Ser Asn Lys Arg60 65 70Ser Leu Ser Pro Trp Gly Tyr Ser Ile Asn His Asp Pro Ser Arg Ile75 80 85 90Pro Ala Asp Leu Pro Glu Ala Arg Cys Leu Cys Leu Gly Cys Val Asn95 100 105Pro Phe Thr Met Gln Glu Asp Arg Ser Met Val Ser Val Pro Val Phe110 115 120Ser Gln Val Pro Val Arg Arg Arg Leu Cys Pro Gln Pro Pro Arg Pro125 130 135Gly Pro Cys Arg Gln Arg Val Val Met Glu Thr Ile Ala Val Gly Cys140 145 150Thr Cys Ile Phe1552105211454212DNA213靈長類220221CDS222(1)..(453)4005tgc gcg gac cgg ccg gag gag cta ctg gag cag ctg tac ggg cgc ctg 48Cys Ala Asp Arg Pro Glu Glu Leu Leu Glu Gln Leu Tyr Gly Arg Leu1 5 10 15gcg gcc ggc gtg ctc agt gcc ttc cac cac acg ctg cag ctg ggg ccg 96Ala Ala Gly Val Leu Ser Ala Phe His His Thr Leu Gln Leu Gly Pro20 25 30cgt gag cag gcg cgc aac gcg agc tgc ccg gca ggg ggc agg ccc gcc 144Arg Glu Gln Ala Arg Asn Ala Ser Cys Pro Ala Gly Gly Arg Pro Ala35 40 45gac cgc cgc ttc cgg acg ccc acc aac ctg cgc agc gtg tcg ccc tgg 192Asp Arg Arg Phe Arg Thr Pro Thr Asn Leu Arg Ser Val Ser Pro Trp50 55 60gcc tac aga atc tcc tac gac ccg gcg agg tac ccc agg tac ctg cct 240Ala Tyr Arg Ile Ser Tyr Asp Pro Ala Arg Tyr Pro Arg Tyr Leu Pro65 70 75 80gaa gcc tac tgc ctg tgc cgg ggc tgc ctg acc ggg ctg ttc ggc gag 288Glu Ala Tyr Cys Leu Cys Arg Gly Cys Leu Thr Gly Leu Phe Gly Glu85 90 95gag gac gtg cgc ttc cgc agc gcc cct gtc tac atg ccc acc gtc gtc 336Glu Asp Val Arg Phe Arg Ser Ala Pro Val Tyr Met Pro Thr Val Val100 105 110ctg cgc cgc acc ccc gcc tgc gcc ggc ggc cgt tcc gtc tac acc gag 384Leu Arg Arg Thr Pro Ala Cys Ala Gly Gly Arg Ser Val Tyr Thr Glu115 120 125gcc tac gtc acc atc ccc gtg ggc tgc acc tgc gtc ccc gag ccg gag 432Ala Tyr Val Thr Ile Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Pro Glu Pro Glu130 135 140aag gac gca gac agc atc aac t 454Lys Asp Ala Asp Ser Ile Asn145 1502106211151212PRT213靈長類4006Cys Ala Asp Arg Pro Glu Glu Leu Leu Glu Gln Leu Tyr Gly Arg Leu1 5 10 15Ala Ala Gly Val Leu Ser Ala Phe His His Thr Leu Gln Leu Gly Pro20 25 30Arg Glu Gln Ala Arg Asn Ala Ser Cys Pro Ala Gly Gly Arg Pro Ala35 40 45Asp Arg Arg Phe Arg Thr Pro Thr Asn Leu Arg Ser Val Ser Pro Trp50 55 60Ala Tyr Arg Ile Ser Tyr Asp Pro Ala Arg Tyr Pro Arg Tyr Leu Pro65 70 75 80Glu Ala Tyr Cys Leu Cys Arg Gly Cys Leu Thr Gly Leu Phe Gly Glu85 90 95Glu Asp Val Arg Phe Arg Ser Ala Pro Val Tyr Met Pro Thr Val Val100 105 110Leu Arg Arg Thr Pro Ala Cys Ala Gly Gly Arg Ser Val Tyr Thr Glu115 120 125Ala Tyr Val Thr Ile Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Pro Glu Pro Glu130 135 140Lys Asp Ala Asp Ser Ile Asn145 15021072111385212DNA213靈長類220221CDS222(59)..(664)220221成熟肽222(110)..(664)4007gcccgggcag gtggcgacct cgctcagtcg gcttctcggt ccaagtcccc gggtctgg 58atg ctg gta gcc ggc ttc ctg ctg gcg ctg ccg ccg agc tgg gcc gcg 106Met Leu Val Ala Gly Phe Leu Leu Ala Leu Pro Pro Ser Trp Ala Ala-15 -10 -5ggc gcc ccg agg gcg ggc agg cgc ccc gcg cgg ccg cgg ggc tgc gcg 154Gly Ala Pro Arg Ala Gly Arg Arg Pro Ala Arg Pro Arg Gly Cys Ala-1 1 5 10 15gac cgg ccg gag gag cta ctg gag cag ctg tac ggg cgc ctg gcg gcc 202Asp Arg Pro Glu Glu Leu Leu Glu Gln Leu Tyr Gly Arg Leu Ala Ala20 25 30ggc gtg ctc agt gcc ttc cac cac acg ctg cag ctg ggg ccg cgt gag 250Gly Val Leu Ser Ala Phe His His Thr Leu Gln Leu Gly Pro Arg Glu35 40 45cag gcg cgc aac gcg agc tgc ccg gca ggg ggc agg ccc gcc gac cgc 298Gln Ala Arg Asn Ala Ser Cys Pro Ala Gly Gly Arg Pro Ala Asp Arg50 55 60cgc ttc cgg ccg ccc acc aac ctg cgc agc gtg tcg ccc tgg gcc tac 346Arg Phe Arg Pro Pro Thr Asn Leu Arg Ser Val Ser Pro Trp Ala Tyr65 70 75aga atc tcc tac gac ccg gcg agg tac ccc agg tac ctg cct gaa gcc 394Arg Ile Ser Tyr Asp Pro Ala Arg Tyr Pro Arg Tyr Leu Pro Glu Ala80 85 90 95tac tgc ctg tgc cgg ggc tgc ctg acc ggg ctg ttc ggc gag gag gac 442Tyr Cys Leu Cys Arg Gly Cys Leu Thr Gly Leu Phe Gly Glu Glu Asp100 105 110gtg cgc ttc cgc agc gcc cct gtc tac atg ccc acc gtc gtc ctg cgc 490Val Arg Phe Arg Ser Ala Pro Val Tyr Met Pro Thr Val Val Leu Arg115 120 125cgc acc ccc gcc tgc gcc ggc ggc cgt tcc gtc tac acc gag gcc tac 538Arg Thr Pro Ala Cys Ala GIy Gly Arg Ser Val Tyr Thr Glu Ala Tyr130 135 140gtc acc atc ccc gtg ggc tgc acc tgc gtc ccc gag ccg gag aag gac 586Val Thr Ile Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Pro Glu Pro Glu Lys Asp145 150 155gca gac agc atc aac tcc agc atc gac aaa cag ggc gcc aag ctc ctg 634Ala Asp Ser Ile Asn Ser Ser Ile Asp Lys Gln Gly Ala Lys Leu Leu160 165 170 175ctg ggc ccc aac gac gcg ccc gct ggc ccc tgaggccggt cctgccccgg 684Leu Gly Pro Asn Asp Ala Pro Ala Gly Pro180 185gaggtctccc cggcccgcat cccgaggcgc ccaagctgga gccgcctgga gggctcggtc 744ggcgacctct gaagagagtg caccgagcaa accaagtgcc ggagcaccag cgccgccttt 804ccatggagac tcgtaagcag cttcatctga cacgggcatc cctggcttgc ttttagctac 864aagcaagcag cgtggctgga agctgatggg aaacgacccg gcacgggcat cctgtgtgcg 924gcccgcatgg agggtttgga aaagttcacg gaggctccct gaggagcctc tcagatcggc 984tgctgcgggt gcagggcgtg actcaccgct gggtgcttgc caaagagata gggacgcata 1044tgctttttaa agcaatctaa aaataataat aagtatagcg actatatacc tacttttaaa 1104atcaactgtt ttgaatagag gcagagctat tttatattat caaatgagag ctactctgtt 1164acatttctta acatataaac atcgtttttt acttcttctg gtagaatttt ttaaagcata 1224attggaatcc ttggataaat tttgtagctg gtacactctg gcctgggtct ctgaattcag 1284cctgtcaccg atggctgact gatgaaatgg acacgtctca tctgacccac tcttccttcc 1344actgaaggtc ttcacgggcc tccaggcctc gtgccgaatt c 13852108211202212PRT213靈長類4008Met Leu Val Ala Gly Phe Leu Leu Ala Leu Pro Pro Ser Trp Ala Ala-15 -10 -5Gly Ala Pro Arg Ala Gly Arg Arg Pro Ala Arg Pro Arg Gly Cys Ala-1 1 5 10 15Asp Arg Pro Glu Glu Leu Leu Glu Gln Leu Tyr Gly Arg Leu Ala Ala20 25 30Gly Val Leu Ser Ala Phe His His Thr Leu Gln Leu Gly Pro Arg Glu35 40 45Gln Ala Arg Asn Ala Ser Cys Pro Ala Gly Gly Arg Pro Ala Asp Arg50 55 60Arg Phe Arg Pro Pro Thr Asn Leu Arg Ser Val Ser Pro Trp Ala Tyr65 70 75Arg Ile Ser Tyr Asp Pro Ala Arg Tyr Pro Arg Tyr Leu Pro Glu Ala80 85 90 95Tyr Cys Leu Cys Arg Gly Cys Leu Thr Gly Leu Phe Gly Glu Glu Asp100 105 110Val Arg Phe Arg Ser Ala Pro Val Tyr Met Pro Thr Val Val Leu Arg115 120 125Arg Thr Pro Ala Cys Ala Gly Gly Arg Ser Val Tyr Thr Glu Ala Tyr130 135 140Val Thr Ile Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Pro Glu Pro Glu Lys Asp145 150 155Ala Asp Ser Ile Asn Ser Ser Ile Asp Lys Gln Gly Ala Lys Leu Leu160 165 170175Leu Gly Pro Asn Asp Ala Pro Ala Gly Pro180 1852109211133212DNA213齧齒動物220221CDS222(1)..(132)4009ttt ccg aga tac ctg ccc gaa gcc tac tgc ctg tgc cga ggc tgt ctg 48Phe Pro Arg Tyr Leu Pro Glu Ala Tyr Cys Leu Cys Arg Gly Cys Leu1 5 10 15acc ggg ctc tac ggt gag gag gac ttc cgc ttt cgc agc gca ccc gtc 96Thr Gly Leu Tyr Gly Glu Glu Asp Phe Arg Phe Arg Ser Ala Pro Val20 25 30ttc tct ccg gcg gtg gtg ctg cgg cgc acg gcg gcc t133Phe Ser Pro Ala Val Val Leu Arg Arg Thr Ala Ala35 402101021144212PRT213齧齒動物40010Phe Pro Arg Tyr Leu Pro Glu Ala Tyr Cys Leu Cys Arg Gly Cys Leu1 5 10 15Thr Gly Leu Tyr Gly Glu Glu Asp Phe Arg Phe Arg Ser Ala Pro Val20 25 30Phe Ser Pro Ala Val Val Leu Arg Arg Thr Ala Ala35 40210112111143212DNA213齧齒動物220221CDS222(1)..(615)220221成熟肽222(73)..(615)40011atg ttg ggg aca ctg gtc tgg atg ctc ctc gtc ggc ttc ctg ctg gca 48Met Leu Gly Thr Leu Val Trp Met Leu Leu Val Gly Phe Leu Leu Ala-20 -15 -10ctg gcg ccg ggc cgc gcg gcg ggc gcg ctg agg acc ggg agg cgc ccg 96Leu Ala Pro Gly Arg Ala Ala Gly Ala Leu Arg Thr Gly Arg Arg Pro-5 -1 1 5gcg cgg ccg cgg gac tgc gcg gac cgg cca gag gag ctc ctg gag cag 144Ala Arg Pro Arg Asp Cys Ala Asp Arg Pro Glu Glu Leu Leu Glu Gln10 15 20ctg tac ggg cgg ctg gcg gcc ggc gtg ctc agc gcc ttc cac cac acg 192Leu Tyr Gly Arg Leu Ala Ala Gly Val Leu Ser Ala Phe His His Thr25 30 35 40ctg cag ctc ggg ccg cgc gag cag gcg cgc aat gcc agc tgc ccg gcc 240Leu Gln Leu Gly Pro Arg Glu Gln Ala Arg Asn Ala Ser Cys Pro Ala45 50 55ggg ggc agg gcc gcc gac cgc cgc ttc cgg cca ccc acc aac ctg cgc 288Gly Gly Arg Ala Ala Asp Arg Arg Phe Arg Pro Pro Thr Asn Leu Arg60 65 70agc gtg tcg ccc tgg gcg tac agg att tcc tac gac cct gct cgc ttt 336Ser Val Ser Pro Trp Ala Tyr Arg Ile Ser Tyr Asp Pro Ala Arg Phe75 80 85ccg agg tac ctg ccc gaa gcc tac tgc ctg tgc cga ggc tgc ctg acc 384Pro Arg Tyr Leu Pro Glu Ala Tyr Cys Leu Cys Arg Gly Cys Leu Thr90 95 100ggg ctc tac ggg gag gag gac ttc cgc ttt cgc agc aca ccc gtc ttc 432Gly Leu Tyr Gly Glu Glu Asp Phe Arg Phe Arg Ser Thr Pro Val Phe105 110 115 120tct cca gcc gtg gtg ctg cgg cgc aca gcg gcc tgc gcg ggc ggc cgc 480Ser Pro Ala Val Val Leu Arg Arg Thr Ala Ala Cys Ala Gly Gly Arg125 130 135tct gtg tac gcc gaa cac tac atc acc atc ccg gtg ggc tgc acc tgc 528Ser Val Tyr Ala Glu His Tyr Ile Thr Ile Pro Val Gly Cys Thr Cys140 145 150gtg ccc gag ccg gac aag tcc gcg gac agt gcg aac tcc agc atg gac 576Val Pro Glu Pro Asp Lys Ser Ala Asp Ser Ala Asn Ser Ser Met Asp155 160 165aag ctg ctg ctg ggg ccc gcc gac agg cct gcg ggg cgc tgatgccggg625Lys Leu Leu Leu Gly Pro Ala Asp Arg Pro Ala Gly Arg170 175 180gactgcccgc catggcccag cttcctgcat gcatcaggtc ccctggccct gacaaaaccc 685accccatgat ccctggccgc tgcctaattt ttccaaaagg acagctacat aagctttaaa 745tatatttttc aaagtagaca ctacatatct acaactattt tgaatagtgg cagaaactat 805tttcatatta gtaatttaga gcaagcatgt tgtttttaaa cttctttgat atacaagcac 865atcacacaca tcccgttttc ctctagtagg attcttgagt gcataattgt agtgctcaga 925tgaacttcct tctgctgcac tgtgccctgt ccctgagtct ctcctgtggc ccaagcttac 985taaggtgata atgagtgctc cggatctggg cacctaaggt ctccaggtcc ctggagaggg 1045agggatgtgg gggggctagg aaccaagcgc ccctttgttc tttagcttat ggatggtctt 1105aactttataa agattaaagt ttttggtgtt attctttc 114321012211205212PRT213齧齒動物40012Met Leu Gly Thr Leu Val Trp Met Leu Leu Val Gly Phe Leu Leu Ala-20 -15 -10Leu Ala Pro Gly Arg Ala Ala Gly Ala Leu Arg Thr Gly Arg Arg Pro-5 -1 1 5Ala Arg Pro Arg Asp Cys Ala Asp Arg Pro Glu Glu Leu Leu Glu Gln10 15 20Leu Tyr Gly Arg Leu Ala Ala Gly Val Leu Ser Ala Phe His His Thr25 30 35 40Leu Gln Leu Gly Pro Arg Glu Gln Ala Arg Asn Ala Ser Cys Pro Ala45 50 55Gly Gly Arg Ala Ala Asp Arg Arg Phe Arg Pro Pro Thr Asn Leu Arg60 65 70Ser Val Ser Pro Trp Ala Tyr Arg Ile Ser Tyr Asp Pro Ala Arg Phe75 80 85Pro Arg Tyr Leu Pro Glu Ala Tyr Cys Leu Cys Arg Gly Cys Leu Thr90 95 100Gly Leu Tyr Gly Glu Glu Asp Phe Arg Phe Arg Ser Thr Pro Val Phe105 110 115 120Ser Pro Ala Val Val Leu Arg Arg Thr Ala Ala Cys Ala Gly Gly Arg125 130 135Ser Val Tyr Ala Glu His Tyr Ile Thr Ile Pro Val Gly Cys Thr Cys140 145 150Val Pro Glu Pro Asp Lys Ser Ala Asp Ser Ala Asn Ser Ser Met Asp155 160 165Lys Leu Leu Leu Gly Pro Ala Asp Arg Pro Ala Gly Arg170 175 18021013211504212DNA213靈長類220221CDS222(19)..(501)220221成熟肽222(67)..(501)40013tgagtgtgca gtgccagc atg tac cag gtg gtt gca ttc ttg gca atg gtc 51Met Tyr Gln Val Val Ala Phe Leu Ala Met Val
-15 -10atg gga acc cac acc tac agc cac tgg ccc agc tgc tgc ccc agc aaa 99Met Gly Thr His Thr Tyr Ser His Trp Pro Ser Cys Cys Pro Ser Lys-5 -1 1 5 10ggg cag gac acc tct gag gag ctg ctg agg tgg agc act gtg cct gtg 147Gly Gln Asp Thr Ser Glu Glu Leu Leu Arg Trp Ser Thr Val Pro Val15 20 25cct ccc cta gag cct gct agg ccc aac cgc cac cca gag tcc tgt agg 195Pro Pro Leu Glu Pro Ala Arg Pro Asn Arg His Pro Glu Ser Cys Arg30 35 40gcc agt gaa gat gga ccc ctc aac agc agg gcc atc tcc ccc tgg aga 243Ala Ser Glu Asp Gly Pro Leu Asn Ser Arg Ala Ile Ser Pro Trp Arg45 50 55tat gag ttg gac aga gac ttg aac cgg ctc ccc cag gac ctg tac cac 291Tyr Glu Leu Asp Arg Asp Leu Asn Arg Leu Pro Gln Asp Leu Tyr His60 65 70 75gcc cgt tgc ctg tgc ccg cac tgc gtc agc cta cag aca ggc tcc cac 339Ala Arg Cys Leu Cys Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr Gly Ser His80 85 90atg gac ccc cgg ggc aac tcg gag ctg ctc tac cac aac cag act gtc 387Met Asp Pro Arg Gly Asn Ser Glu Leu Leu Tyr His Asn Gln Thr Val95 100 105ttc tac cgg cgg cca tgc cat ggc gag aag ggc acc cac aag ggc tac 435Phe Tyr Arg Arg Pro Cys His Gly Glu Lys Gly Thr His Lys Gly Tyr110 115 120tgc ctg gag cgc agg ctg tac cgt gtt tcc tta gct tgt gtg tgt gtg 483Cys Leu Glu Arg Arg Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys Val Cys Val125 130 135cgg ccc cgt gtg atg ggc tag 504Arg Pro Arg Val Met Gly140 14521014211161212PRT213靈長類40014Met Tyr Gln Val Val Ala Phe Leu Ala Met Val Met Gly Thr His Thr-15 -10 -5 -1Tyr Ser His Trp Pro Ser Cys Cys Pro Ser Lys Gly Gln Asp Thr Ser1 5 10 15Glu Glu Leu Leu Arg Trp Ser Thr Val Pro Val Pro Pro Leu Glu Pro20 25 30Ala Arg Pro Asn Arg His Pro Glu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asp Gly35 40 45Pro Leu Asn Ser Arg Ala Ile Ser Pro Trp Arg Tyr Glu Leu Asp Arg50 55 60Asp Leu Asn Arg Leu Pro Gln Asp Leu Tyr His Ala Arg Cys Leu Cys65 70 75 80Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr Gly Ser His Met Asp Pro Arg Gly85 90 95Asn Ser Glu Leu Leu Tyr His Asn Gln Thr Val Phe Tyr Arg Arg Pro100 105 110Cys His Gly Glu Lys Gly Thr His Lys Gly Tyr Cys Leu Glu Arg Arg115 120 125Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys Val Cys Val Arg Pro Arg Val Met130 135 140Gly14521015211620212DNA213齧齒動物220221CDS222(1)..(432)40015cgg cac agg cgg cac aaa gcc cgg aga gtg gct gaa gtg gag ctc tgc 48Arg His Arg Arg His Lys Ala Arg Arg Val Ala Glu Val Glu Leu Cys1 5 10 15atc tgt atc ccc ccc aga gcc tct gag cca cac cca cca cgc aga atc 96Ile Cys Ile Pro Pro Arg Ala Ser Glu Pro His Pro Pro Arg Arg Ile20 25 30ctg cag ggc cag caa gga tgg cct ctc aac agc agg gcc atc tct cct 144Leu Gln Gly Gln Gln Gly Trp Pro Leu Asn Ser Arg Ala Ile Ser Pro35 40 45tgg agc tat gag ttg gac agg gac ttg aat cgg gtc ccc cag gac tgg 192Trp Ser Tyr Glu Leu Asp Arg Asp Leu Asn Arg Val Pro Gln Asp Trp50 55 60tac cac gct cga tgc ctg tgc cca cac tgc gtc acg cta cag aca ggc 240Tyr His Ala Arg Cys Leu Cys Pro His Cys Val Thr Leu Gln Thr Gly65 70 75 80tcc cac atg gac ccg ctg ggc aac tcc gtc cca ctt tac cac aac cag 288Ser His Met Asp Pro Leu Gly Asn Ser Val Pro Leu Tyr His Asn Gln85 90 95acg gtc ttc tac cgg cgg cca tgc 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52121020211521212DNA213靈長類220221CDS222(1)..(369)220221misc_feature222(281)223注釋＝「核苷酸281、367、437、462和468是指示的c；每個可以或者是a、g或t；翻譯的胺基酸取決於遺傳密碼」40020gac acg gat gag gac cgc tat cca cag aag ctg gcc ttc gcc gag tgc 48Asp Thr Asp Glu Asp Arg Tyr Pro Gln Lys Leu Ala Phe Ala Glu Cys1 5 10 15ctg tgc aga ggc tgt atc gat gca cgg acg ggc cgc gag aca gct gcg 96Leu Cys Arg Gly Cys Ile Asp Ala Arg Thr Gly Arg Glu Thr Ala Ala20 25 30ctc aac tcc gtg cgg ctg ctc cag agc ctg ctg gtg ctg cgc cgc cgg 144Leu Asn Ser Val Arg Leu Leu Gln Ser Leu Leu Val Leu Arg Arg Arg35 40 45ccc tgc tcc cgc gac ggc tcg ggg ctc ccc aca cct ggg gcc ttt gcc 192Pro Cys Ser Arg Asp Gly Ser Gly Leu Pro Thr Pro Gly Ala Phe Ala50 55 60ttc cac acc gag ttc atc cac gtc ccc gtc ggc tgc acc tgc gtg ctg 240Phe His Thr Glu Phe Ile His Val Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Leu65 70 75 80ccc cgt tca agt gtg acc gcc aag gcc gtg ggg ccc tta gct gac acc 288Pro Arg Ser Ser Val Thr Ala Lys Ala Val Gly Pro Leu Ala Asp Thr85 90 95gtg tgc tcc cca gag gga ccc cta ttt atg gga att atg gta tta tat 336Val Cys Ser Pro Glu Gly Pro Leu Phe Met Gly Ile Met Val Leu Tyr100 105 110gct tcc cac ata ctt ggg gct ggc atc ccg cgc tgagacagcc ccctgttcta 389Ala Ser His Ile Leu Gly Ala Gly Ile Pro Arg115 120ttcagctata tggggagaag agtagacttt cagctaagtg aaaagtgcaa cgtgctgact 449gtctgctgtc gtcctactca tgctagcccg agtgttcact ctgagcctgt taaatatagg 509cggttatgta cc 52121021211123212PRT213靈長類40021Asp Thr Asp Glu Asp Arg Tyr Pro Gln Lys Leu Ala Phe Ala Glu Cys1 5 10 15Leu Cys Arg Gly Cys Ile Asp Ala Arg Thr Gly Arg Glu Thr Ala Ala20 25 30Leu Asn Ser Val Arg Leu Leu Gln Ser Leu Leu Val Leu Arg Arg Arg35 40 45Pro Cys Ser Arg Asp Gly Ser Gly Leu Pro Thr Pro Gly Ala Phe Ala50 55 60Phe His Thr Glu Phe Ile His Val Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Leu65 70 75 80Pro Arg Ser Ser Val Thr Ala Lys Ala Val Gly Pro Leu Ala Asp Thr85 90 95Val Cys Ser Pro Glu Gly Pro Leu Phe Met Gly Ile Met Val Leu Tyr
100 105110Ala Ser His Ile Leu Gly Ala Gly Ile Pro Arg115 120210222111107212DNA213靈長類220221CDS222(115)..(705)220221成熟肽222(166)..(705)40022gtgtggcctc aggtataaga gcggctgctg ccaggtgcat ggccaggtgc acctgtggga 60ttgccgccag gtgtgcaggc cgctccaagc ccagcctgcc ccgctgccgc cacc atg 117Metacg ctc ctc ccc ggc ctc ctg ttt ctg acc tgg ctg cac aca tgc ctg 165Thr Leu Leu Pro Gly Leu Leu Phe Leu Thr Trp Leu His Thr Cys Leu-15 -10 -5 -1gcc cac cat gac ccc tcc ctc agg ggg cac ccc cac agt cac ggt acc 213Ala His His Asp Pro Ser Leu Arg Gly His Pro His Ser His Gly Thr1 5 10 15cca cac tgc tac tcg gct gag gaa ctg ccc ctc ggc cag gcc ccc cca 261Pro His Cys Tyr Ser Ala Glu Glu Leu Pro Leu Gly Gln Ala Pro Pro20 25 30cac ctg ctg gct cga ggt gcc aag tgg ggg cag gct ttg cct gta gcc 309His Leu Leu Ala Arg Gly Ala Lys Trp Gly Gln Ala Leu Pro Val Ala35 40 45ctg gtg tcc agc ctg gag gca gca agc cac agg ggg agg cac gag agg 357Leu Val Ser Ser Leu Glu Ala Ala Ser His Arg Gly Arg His Glu Arg50 55 60ccc tca gct acg acc cag tgc 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40321025211403212DNA213靈長類220221CDS222(71)..(403)220221成熟肽222(131)..(403)220221misc_feature222(1)..(403)223注釋＝「n可以是a、c、g或t；翻譯的胺基酸取決於遺傳密碼」40025gagaaagagc ttcctgcaca aagtaagcca ccagcgcaac atgacagtga agaccctgca 60tggcccagcc atg gtc aag tac ttg ctg ctg tcg ata ttg ggg ctt gcc109Met Val Lys Tyr Leu Leu Leu Ser Ile Leu Gly Leu Ala-20 -15 -10ttt ctg agt gag gcg gca gct cgg aaa atc ccc aaa gta gga cat act 157Phe Leu Ser Glu Ala Ala Ala Arg Lys Ile Pro Lys Val Gly His Thr-5 -1 1 5ttt ttc caa aag cct gag agt tgc ccg cct gtg cca gga ggt agt atg 205Phe Phe Gln Lys Pro Glu Ser Cys Pro Pro Val Pro Gly Gly Ser Met10 15 20 25aag ctt gac att ggc atc atc aat gaa aac cag cgc gtt tcc atg tca 253Lys Leu Asp Ile Gly Ile Ile Asn Glu Asn Gln Arg Val Ser Met Ser30 35 40cgt aac atc gag agc cgc tcc acc tcc ccc tgg aet tac act gtc act 301Arg Asn Ile Glu Ser Arg Ser Thr Ser Pro Trp Asn Tyr Thr Val Thr45 50 55tgg gac ccc aac cgg tac ccc tcg aag ttg tac agg ccc aag tgt agg 349Trp Asp Pro Asn Arg Tyr Pro Ser Lys Leu 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Gly Ser Phe Ile Pro Trp Gly Tyr20 25 30ata gta aat act tca tta aag tcg agt aca gaa ttt gat gaa aag tgt 143Ile Val Asn Thr Ser Leu Lys Ser Ser Thr Glu Phe Asp Glu Lys Cys35 40 45gga tgt gtg gga tgt act gcc gcc ttc aga agt cca cac act gcc tgg 191Gly Cys Val Gly Cys Thr Ala Ala Phe Arg Ser Pro His Thr Ala Trp50 55 60agg gag aga act gct gtt tat tca ctg att aag cat ttg ctg tgt acc 239Arg Glu Arg Thr Ala Val Tyr Ser Leu Ile Lys His Leu Leu Cys Thr65 70 75aac tac ttt tca tgt ctt atc tta att ctc ata aca gtc att 281Asn Tyr Phe Ser Cys Leu Ile Leu Ile Leu Ile Thr Val Ile80 85 90tgatatttta aaaaacccca gaaatctgag aaagagataa agtggtttgc tcaaggttat 341agaacagact accatgtgtt gtatttcaga ttttaattca tgtttgtctg attttaagtt 401ttgttcgctt gccagggtac cccacaaaaa tgccaggcag ggcattttca tgatgcactt 461gagatacctg aaatgacagg gtagcatcac acctgagagg ggtaaaggat gggaacctac 521cttccatggc cgctgcttgg cagtctcttg ctgcatgcta gcagagccac tgtatatgtg 581ccgaggctct gagaattaac tgcttaaaga actgccttct ggagggagaa gagcacaaga 641tcacaattaa 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權利要求
1.分離的或重組的多核苷酸，包含選自以下的序列a)哺乳動物IL-173序列，它i)編碼成熟SEQ ID NO6、8、10或12的至少8個連續胺基酸；ii)編碼至少兩個不同的成熟SEQ ID NO6、8、10或12的至少5個連續胺基酸的區段；或iii)包含一個或多個SEQ ID NO5、7、9或11的至少21個連續核苷酸的區段；b)哺乳動物IL-174序列，它i)編碼成熟SEQ ID NO14、16或18的至少8個連續胺基酸；ii)編碼至少兩個不同的成熟SEQ ID NO14、16或18的至少5個連續胺基酸的區段；或iii)包含一個或多個SEQ ID NO14、16或18的至少21個連續核苷酸的區段；c)哺乳動物IL-176序列，它i)編碼成熟SEQ ID NO28的至少8個連續胺基酸；ii)編碼至少兩個不同的成熟SEQ ID NO28的至少5個連續胺基酸的區段；或iii)包含一個或多個SEQ ID NO27的至少21個連續核苷酸的區段；d)哺乳動物IL-177的序列，它i)編碼成熟SEQ ID NO30的至少8個連續胺基酸；ii)編碼至少兩個不同的成熟SEQ ID NO30的至少5個連續胺基酸的區段；或iii)包含一個或多個SEQ ID NO29的至少21個連續核苷酸的區段。
2.表達載體中的權利要求1的多核苷酸，包含選自以下的一種序列a)IL-173序列，它i)編碼SEQ ID NO6、8、10或12的至少12個連續胺基酸；ii)編碼至少兩個不同的SEQ ID NO6、8、10或12的至少7個和10個連續胺基酸的區段；或iii)包含SEQ ID NO5、7、9或11的至少27個連續核苷酸；b)IL-174序列，它i)編碼SEQ ID NO14、16或18的至少12個連續胺基酸；ii)編碼至少兩個不同的SEQ ID NO14、16或18的至少7個和10個連續胺基酸的區段；或iii)包含SEQ ID NO13、15或17的至少27個連續核苷酸；c)IL-176序列，它i)編碼SEQ ID NO28的至少12個連續胺基酸；ii)編碼至少兩個不同的SEQ ID NO28的至少7個和10個連續胺基酸的區段；或iii)包含SEQ ID NO27的至少27個連續核苷酸；d)IL-177序列，它i)編碼SEQ ID NO30的至少12個連續胺基酸；ii)編碼至少兩個不同的SEQ ID NO30的至少7個和10個連續胺基酸的區段；或iii)包含SEQ ID NO29的至少27個連續核苷酸。
3.選自以下的權利要求2的多核苷酸a)IL-173序列，它i)編碼成熟SEQ ID NO6、8、10或12的至少16個連續胺基酸殘基；ii)編碼至少兩個不同的成熟SEQ ID NO6、8、10或12的至少10個和13個連續胺基酸殘基的區段；iii)包含SEQ ID NO5、7、9或11的至少33個連續核苷酸；或iv)包含SEQ ID NO5、7、9或11的整個成熟編碼部分；b)IL-174序列，它i)編碼成熟SEQ ID NO14、16或18的至少16個連續胺基酸殘基；ii)編碼至少兩個不同的成熟SEQ ID NO14、16或18的至少10個和13個連續胺基酸殘基的區段；iii)包含SEQ ID NO13、15或17的至少33個連續核苷酸；或iv)包含SEQ ID NO13、15或17的整個成熟編碼部分；c)IL-176序列，它i)編碼成熟SEQ ID NO28的至少16個連續胺基酸；ii)編碼至少兩個不同的成熟SEQ ID NO28的至少10個和14個連續胺基酸殘基的區段；iii)包含SEQ ID NO27的至少33個連續核苷酸；或iv)包含SEQ ID NO27的整個成熟編碼部分；d)IL-177序列，它i)編碼成熟SEQ ID NO30的至少16個連續胺基酸；ii)編碼至少兩個不同的成熟SEQ ID NO30的至少10個和14個連續胺基酸殘基的區段；iii)包含SEQ ID NO29的至少33個連續核苷酸；或iv)包含SEQ ID NO29的整個成熟編碼部分。
4.製備以下物質的方法a)多肽，所述方法包括表達權利要求2的所述表達載體，由此產生所述多肽；b)雙鏈體核酸，所述方法包括使權利要求2的多核苷酸與一種互補核酸接觸，由此導致所述雙鏈體核酸的產生；或c)權利要求2的多核苷酸，所述方法包括用PCR法進行擴增。
5.分離的或重組的多核苷酸，它在至少55℃和低於400nM鹽的嚴格性洗滌條件下與以下的多核苷酸雜交a)權利要求3的IL-173多核苷酸，它由SEQ ID NO5、7、9或11的成熟編碼部分組成；b)權利要求3的IL-174多核苷酸，它由SEQ ID NO13、15或17的成熟編碼部分組成；c)權利要求3的IL-176多核苷酸，它由SEQ ID NO27的成熟編碼部分組成；或d)權利要求3的IL-177多核苷酸，它由SEQ ID NO29的成熟編碼部分組成。
6.權利要求5的多核苷酸a)其中所述洗滌條件為至少65℃和低於300mM鹽；或b)它包含以下成熟編碼部分的至少50個連續核苷酸i)SEQ ID NO5、7、9或11(IL-173)；ii)SEQ ID NO13、15或17(IL-174)；ii)SEQ ID NO27(IL-176)；或iv)SEQ ID NO29(IL-177)。
7.試劑盒，包含權利要求6的所述多核苷酸和a)應用所述多核苷酸進行檢測的說明；b)處理所述多核苷酸或所述試劑盒的其它試劑的說明；或c)a和b兩者。
8.含有權利要求3的所述表達載體的細胞，其中所述細胞是a)原核生物細胞；b)真核生物細胞；c)細菌細胞；d)酵母細胞；e)昆蟲細胞；f)哺乳動物細胞；g)小鼠細胞；h)靈長類動物細胞；或i)人細胞。
9.分離的或重組的抗原性多肽a)(IL-173)包含至少i)一個來自SEQ ID NO6、8、10或12的成熟編碼部分的8個相同連續胺基酸的區段；或ii)兩個不同的來自SEQ ID NO6、8、10或12的成熟編碼部分的至少5個連續胺基酸的區段；或b)(IL-174)包含至少i)一個來自SEQ ID NO14、16或18的成熟編碼部分的8個相同連續胺基酸的區段；或ii)兩個不同的來自SEQ ID NO14、16或18的成熟編碼部分的至少5個連續胺基酸的區段；c)(IL-176)包含至少i)一個來自SEQ ID NO28的成熟編碼部分的8個相同連續胺基酸的區段；或ii)兩個不同的來自SEQ ID NO28的成熟編碼部分的至少5個連續胺基酸的區段；d)(IL-177)包含至少i)一個來自SEQ ID NO30的成熟編碼部分的8個相同連續胺基酸的區段；或ii)兩個不同的來自SEQ ID NO30的成熟編碼部分的至少5個連續胺基酸的區段。
10.權利要求9的多肽，其中a)所述8個相同連續胺基酸的區段是至少14的連續胺基酸；或b)所述至少5個連續胺基酸的區段中的一個區段包含至少7個連續胺基酸。
11.權利要求9的多肽，其中A)(IL-173)所述多肽a)包含SEQ ID NO6、8、10或12；b)選擇性地與針對成熟SEQ ID NO6、8、10或12的免疫原產生的多克隆抗體結合；c)包含多個不同的成熟SEQ ID NO6、8、10或12的10個連續胺基酸的多肽區段；d)是SEQ ID NO8或12的天然等位基因變體；e)其長度至少為30個胺基酸；或f)呈現出至少兩個非重疊表位，所述表位對成熟SEQ ID NO6、8、10或12具有選擇性；B)(IL-174)所述多肽a)包含成熟SEQ ID NO14、16或18；b)選擇性地與針對成熟SEQ ID NO14、16或18的免疫原產生的多克隆抗體結合；c)包含多個不同的成熟SEQ ID NO14、16或18的10個連續胺基酸的多肽區段；d)是SEQ ID NO14或18的天然等位基因變體；e)其長度至少為30個胺基酸；或f)呈現出至少兩個非重疊表位，所述表位對成熟SEQ ID NO14、16或18的靈長類蛋白具有選擇性；C)(IL-176)所述多肽a)包含SEQ ID NO28的成熟序列；b)選擇性地與針對成熟SEQ ID NO28的免疫原產生的多克隆抗體結合；c)包含多個不同的成熟SEQ ID NO28的10個連續胺基酸的多肽區段；d)是SEQ ID NO28的天然等位基因變體；e)其長度至少為30個胺基酸；或f)呈現出至少兩個非重疊表位，所述表位對成熟SEQ ID NO28具有選擇性；或D)(IL-177)所述多肽a)包含SEQ ID NO30的成熟序列；b)選擇性地與針對成熟SEQ ID NO30的免疫原產生的多克隆抗體結合；c)包含多個不同的成熟SEQ ID NO30的10個連續胺基酸的多肽區段；d)是SEQ ID NO30的天然等位基因變體；e)其長度至少為30個胺基酸；或f)呈現出至少兩個非重疊表位，所述表位對成熟SEQ ID NO30具有選擇性。
12.權利要求11的多肽，所述多肽a)在無菌組合物中；b)沒有被糖基化；c)是變性的；d)是合成多肽；e)連接於固相支持體；f)是具有檢測標記或純化標記的融合蛋白；g)是天然序列的5重或更少重的置換體；或h)是天然序列的缺失變體或插入變體。
13.應用權利要求9的所述多肽的方法a)以標記所述多肽，包括用放射性標記來標記所述多肽；b)從混合物中的其它多肽中分離所述多肽，包括將所述混合物在層析基質上進行層析分離，由此分離所述多肽；c)以鑑定選擇性地與所述多肽結合的化合物，包括將所述化合物與所述多肽在合適條件下溫育，由此使得所述化合物結合於所述多肽；或d)以將所述多肽綴合於一種基質，包括用反應性試劑將所述多肽衍生化，並將所述多肽綴合於所述基質。
14.結合化合物，包含來自選擇性與權利要求11的所述多肽結合的抗體的抗原結合部分，其中所述多肽a)(IL-173)包含成熟SEQ ID NO6、8、10或12；或b)(IL-174)包含成熟SEQ ID NO14、16或18；c)(IL-176)包含成熟SEQ ID NO28；或d)(IL-177)包含成熟SEQ ID NO30。
15.權利要求14的結合化合物，其中所述抗體是針對下述多肽產生的多克隆抗體a)(IL-173)SEQ ID NO6、8、10或12；或b)(IL-174)SEQ ID NO14、16或18；c)(IL-176)SEQ ID NO28；或d)(IL-177)SEQ ID NO30。
16.權利要求14的結合化合物，其中所述a)抗體i)為免疫選擇的；ii)結合於變性蛋白；或iii)表現出與所述多肽的Kd至少為30mM；或b)所述結合化合物i)連接至固相支持體，包括珠粒或塑料膜；ii)在無菌組合物中；或iii)被可檢測地標記，包括放射性標記或螢光標記。
17.產生抗原抗體複合物的方法，所述方法包括使包含來自SEQID NO6、8、10、12、14、16、18、28或30的序列的多肽與權利要求14的結合化合物在允許所述複合物形成的條件下接觸。
18.權利要求17的方法，其中所述結合化合物是抗體，而所述多肽是生物樣品。
19.試劑盒，包含權利要求14的所述結合化合物和a)成熟SEQ ID NO6、8、10、12、14、16、18、28或30的多肽；b)應用所述結合化合物進行檢測的說明；或c)處理所述結合化合物或所述試劑盒的其它試劑的說明。
20.抗體與成熟SEQ ID NO6、8、10、12、14、16、18、28或30的蛋白結合的選擇性的評價方法，所述方法包括使所述抗體與所述蛋白接觸以及與另一種細胞因子接觸；並且比較所述抗體與所述蛋白以及與所述細胞因子的結合。
全文摘要
提供了來自哺乳動物的CTLA－8相關抗原、涉及其的試劑包括純化蛋白、特異性抗體和編碼所述抗原的核酸。也提供了使用所述試劑的方法和診斷試劑盒。
文檔編號C07K16/24GK1357042SQ00802614
公開日2002年7月3日 申請日期2000年1月10日 優先權日1999年1月11日
發明者D·M·戈曼, J·F·巴贊, R·A·卡斯特萊恩 申請人:先靈公司