一種中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾病的藥物或保健品中的應用的製作方法

2023-12-08 19:25:41 1

一種中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾病的藥物或保健品中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種中藥組合物在製備防治皮膚色素沉著疾病的藥物或保健品中的應用。本發明中藥組合物包含柴胡、香附、大黃、青皮、川芎、莪朮、土鱉蟲、浙貝母、當歸、白芍和王不留行，通過大量實驗研究表明該組合物具有抑制皮膚黑色素生成、減輕黃褐斑形成等功效。本發明提供的中藥組合物在防治黃褐斑、妊娠斑中，具有療效好、副作用小等優點，具有很好的臨床應用前景。
【專利說明】一種中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾病的藥物 或保健品中的應用

【技術領域】
[0001] 本發明屬於中藥【技術領域】，具體是涉及一種包含柴胡、香附、大黃、青皮、川芎、莪 術、土鱉蟲、浙貝母、當歸、白芍和王不留行的中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾 病的藥物或保健品中的應用。

【背景技術】
[0002] 皮膚色素沉著按類型分有黃褐斑、妊娠斑、蝴蝶斑、老年斑、咖啡斑和雀斑，是一種 常見的多發性皮膚疾病。引起皮膚色素沉著的原因主要有人體內分泌失調，新陳代謝功能 減弱，皮膚乾燥、衰老，日曬、紫外線輻射，睡眠不足、身體勞累等等。隨著年齡的增長，色斑 增多，嚴重影響人們的面部美觀，帶來了衰老的心理壓力，從而影響生活質量。
[0003] 黃褐斑也稱肝斑或蝴蝶斑，是一種臨床上較為常見的面部皮膚黑色素沉著疾病， 一般對稱地分布在眼周圍附近、額部、顴頰部、鼻旁和口唇周圍，邊界清楚，未凸出皮膚，無 皮肩脫落，陽光照射會加深其色素。黃褐斑多發於30歲至45歲女性，其使患者的生活和工 作都受到極大影響。
[0004] 妊娠斑是一種好發於面部、鼻和唇周圍的淡褐色或深褐色斑片狀皮膚疾患，是色 素沉著性疾病中的常見病，久治不愈。妊娠斑主要因素為妊娠和口服避孕藥。妊娠斑的病 理改變有：表皮中色素過度沉著，真皮中噬黑素細胞有較多的色素，真皮血管和毛囊周圍有 少許淋巴細胞浸潤。
[0005] 目前，治療皮膚色素沉著類疾病有食調、藥療、物理治療等方法。其中，食調是多食 富含維生素 C和維生素 E的新鮮水果和蔬菜，但起效慢，需要長期調養；藥療方法中採用外 用去色素或脫色素製劑如氫醌類製劑、維甲酸製劑等是治療表皮中黑色素增加最有效的方 法，但只能控制，不能對皮膚色素沉著類疾病進行根除；物理治療是採用雷射、針灸等方法 治療，但價格昂貴且治標不治本。
[0006] 授權發明專利：一種治療乳腺增生病和子宮肌瘤的藥物組合物及其製備方法，公 開號：CN102120020A，公開了一種由柴胡、香附、大黃（酒炙）、青皮、川芍、我術、土鱉蟲、浙 貝母、當歸、白芍、土不留行製成的組合物在治療乳腺增生和子宮肌瘤中的應用，本發明通 過試驗研宄進一步發現該組合物具有防治皮膚色素沉著疾病的作用。


【發明內容】

[0007] 發明目的：本發明的目的在於提供一種包含柴胡、香附、大黃、青皮、川考、莪朮、土 鱉蟲、浙貝母、當歸、白芍和王不留行的中藥組合物的新用途，即在製備用於防治皮膚色素 沉著疾病的藥物或保健品中的應用。
[0008] 技術方案：一種中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾病的藥物或保健品中 的應用。
[0009] 本發明所述中藥組合物由柴胡、香附、大黃、青皮、川芎、莪朮、土鱉蟲、浙貝母、當 歸、白芍、王不留行藥材共11味藥材製成。
[0010] 作為優選方案，發明所述中藥組合物由柴胡125份?250、香附125?250份、大黃 83. 4?166. 8份、青皮83. 4?166. 8份、川芎83. 4?166. 8份、莪朮83. 4?166. 8份，土 鱉蟲83. 4?166. 8份、浙貝母83. 4?166. 8份、當歸125?250份、白芍125?250份、王 不留行83. 4?166. 8份製成。
[0011] 作為優選方案，所述的中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾病的藥物或保 健品中的應用，所述的皮膚色素沉著疾病為黃褐斑、妊娠斑。
[0012] 作為優選方案，所述的中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾病的藥物或保 健品中的應用，將中藥組合物製備成內服製劑。
[0013] 作為優選方案，所述的中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾病的藥物或保 健品中的應用，所述的內服製劑包括丸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液和糖漿劑。可將本 發明的中藥組合物的提取物和藥學上可接受的載體，按 < 中國藥典多或藥學常規方法製備 得到丸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液和糖漿劑。
[0014] 本發明進行了所述中藥組合物抑制黑色素生成、減輕黃褐斑的藥效學試驗。實驗 結果表明，造模後給予高、中、低劑量所述中藥組合物，各給藥組皮膚和肝臟中的酪氨酸酶 含量均明顯降低，其中所述中藥組合物高劑量組小鼠皮膚和肝臟中的酪氨酸酶含量降低最 為明顯，與模型組相比，具有顯著性差異（P〈〇. 01)。造模後，各給藥組肝臟和皮膚中的MDA 含量明顯降低，與模型組相比，具有顯著性差異（P〈〇. 01);各給藥組肝臟中SOD活性顯著升 高（P〈0. 01)。其中所述中藥組合物高劑量組皮膚和肝臟中的MDA含量降低最為明顯、肝臟 中的SOD活力升高最為明顯，與模型組相比，均具有顯著性差異（P〈0. 01)。組織病理學結果 顯示，高、中、低劑量中藥組合物組均能不同程度減輕模型小鼠皮膚上皮細胞變性、壞死及 脫落、真皮層中度炎細胞浸潤、真皮纖維結締組織增生，皮膚附件明顯減少等現象，與模型 組相比，具有顯著性差異（P〈〇. 05、P〈0. 01)。給予不同劑量中藥組合物後皮膚中黑色素細 胞面積和累積光密度均明顯降低，與模型組相比，具有顯著性差異（P〈〇. 01)。
[0015] 本發明還進行所述中藥組合物治療黃褐斑的臨床研宄，結果表明治療組用藥後均 能改善臨床症狀，面積大小、皮損分布、色素程度與治療前比較顯著減低（P< 0.01)。治療 後，治療組對黃褐斑面積大小、色素程度的症狀的改善明顯優於對照組（P < 0. 01)。治療結 束時，所述中藥組合物治療組的總有效率為66. 25%，維生素 C對照組總有效率為45%，兩 組比較，差異有統計學意義（P < 0. 01)。治療組治療前後比較，LH、&水平均顯著降低（P < 0. 05);治療後治療組與對照組各指標比較，LH、E2水平顯著低於對照組（P < 0. 05);所 述中藥組合物治療組血液中MDA含量顯著低於對照組（P < 0. 05)。
[0016] 本發明還進行所述中藥組合物治療妊娠斑的臨床研宄，結果表明所述中藥組合物 治療妊娠斑基本治癒率41.5% ;顯效率30. 2%，有效率10. 7%，無效率17. 6% ;總有效率 82. 4%。未發現明顯不良反應。
[0017] 本發明開發出一種中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾病的藥物或保健 品中的應用，具有療效好、副作用小的優點，有很好的臨床應用前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0018] 圖1為皮膚病理組織學觀察結果。
[0019] 圖2為皮膚黑色素觀察結果。
[0020] 圖中字母分別代表：A空白組；B模型組；C化瘀祛斑膠囊組；D所述中藥組合物膠 囊低劑量組；E所述中藥組合物膠囊中劑量組；F所述中藥組合物膠囊高劑量組。

【具體實施方式】
[0021] 下面結合具體實施例進一步闡明本發明，應理解這些實施例僅用於說明本發明而 不用於限制本發明的範圍，在閱讀了本發明之後，本領域技術人員對本發明的各種等價形 式的修改均落於本申請所附權利要求所限定的範圍。
[0022] 實施例1所述中藥組合物防治黃褐斑藥效學研宄
[0023] 1、材料
[0024] I. 1實驗動物
[0025] ICR小鼠，體重18?20g，雌性，動物許可證號：SCXK(蘇）2012-0004。
[0026] L 2實驗試劑
[0027] 橄欖油，江蘇永華精細化學品有限公司；生理鹽水，江蘇亞邦生緣藥業有限公司； 無水乙醇，南京化學試劑有限公司；冰乙酸，廣東汕頭西隴化工廠；甲醛，西隴化工股份有 限公司；總蛋白定量測試盒（考馬斯亮蘭法），購自南京建成生物工程有限公司；丙二醛 (MDA)試劑盒，購自南京建成生物工程有限公司；超氧化物歧化酶（SOD)測定試劑盒，購自 南京建成生物工程有限公司；酪氨酸酶（TYR)測定試劑盒，購自上海滬鼎生物科技有限公 司。1.3實驗藥品
[0028] 黃體酮注射液20mg · πιΓ1，上海通用藥業股份有限公司生產，使用前用橄欖油稀釋 至所需濃度；
[0029] 化瘀祛斑膠囊：主要成分為柴胡、薄荷、黃芩、當歸、紅花、赤芍，山西仁源堂藥業有 限公司生產，批號：20131005。
[0030] 所述中藥組合物膠囊：處方：柴胡125份、香附125份、大黃83. 4份、青皮83. 4份、 川芎83. 4份、莪朮83. 4份，土鱉蟲83. 4份、浙貝母83. 4份、當歸125份、白芍125份、王 不留行83. 4份；製法：①取香附、青皮、川芎、莪朮和當歸水蒸汽蒸餾4小時，提取揮髮油， 蒸餾後的水溶液濾過，備用，揮髮油用10倍β-環糊精飽和水溶液攪拌法包結，包結物於 50°C乾燥。②取浙貝母、王不留行加體積濃度60%乙醇10倍量，回流提取3次，每次1. 5 小時，濾過，合併濾液，靜置20小時，濾過，濾液回收乙醇並濃縮成清膏，備用。③取50%重 量的大黃粉碎成細粉，備用。④將剩餘50%重量大黃、柴胡、土鱉蟲、白芍，加水10倍量，煎 煮3次，每次2小時，濾過；⑤合併濾液和上述蒸餾後的水溶液，濃縮至相對密度為1. 05? 1. 10 (50°C )，靜置18小時，離心除雜，取上清液濃縮成清膏，和上述醇提清膏混合後繼續濃 縮至相對密度為1. 15?1. 20 (50°C )的清濃縮清膏。將濃縮清膏噴霧乾燥，加入50%重量 酒大黃細粉、β -環糊精包結物混合後，加入適量糊精澱粉，用80 %乙醇制粒，乾燥，裝入膠 囊，即得，規格為：每粒裝〇.3g。
[0031] 1.4實驗儀器
[0032] FA2104分析天平，上海HANGPING公司；
[0033] Direct-Q 超純水儀，美國 MILLIPORE 公司；
[0034] IKA T18B組織勻漿機，德國IKA公司；
[0035] COUVTER高速冷凍離心機，美國BECKMAN公司；
[0036] DKB-8A電熱恆溫水槽，上海精宏實驗設備有限公司；
[0037] DHG-9123A型電熱恆溫鼓風乾燥箱，上海精宏實驗設備有限公司；
[0038] Biopr印-24生物樣品均質儀，杭州奧盛儀器有限公司；
[0039] Mix-100混勻小精靈，杭州奧盛儀器有限公司；
[0040] C02lncubator，日本 SANYO 公司；
[0041] 754型紫外分光光度計，上海光譜儀器有限公司；
[0042] Synergy HT 酶標儀，美國 BioTeK 公司。
[0043] 2、方'法
[0044] 2. 1造模方法
[0045] 本實驗採用黃體酮注射液攻擊方法配合紫外照射的進行造模。方法：取雌性ICR 小鼠，體重18?22g。模型組予以每日肌肉注射黃體酮20mg*kg'l日1次，同時以脫毛 器配合8 % Na2S水溶液脫去背部毛髮，裸露皮膚面積約3*2cm，每兩天脫毛1次，以波長為 320nm的中波紫外線（UVB)照射小鼠裸露皮膚，一日1次，每次60分鐘，連續36天。每天觀 察其脫毛部位皮膚變化情況。
[0046] 2. 2分組及給藥
[0047] 將小鼠隨機分為6組，每組15隻，為⑴模型組mSZOml.kgO)化瘀祛斑膠囊 組 ：3g*kg\(3)所述中藥組合物膠囊低劑量組：lg*kg、（4)所述中藥組合物膠囊中劑量 組：2g · kg_S (5)所述中藥組合物膠囊高劑量組：4g · kg、（6)空白對照組：NS20ml · kg' 除空白組和模型組給予生理鹽水之外，其他各組在造模的同時按上述劑量灌胃給藥，每天I 次，連續給藥36天。
[0048] 2. 3取材及指標測定
[0049] 2. 3. 1 取材
[0050] 小鼠於取材前進行一次脫毛，並於取材當天將所有小鼠斷頸處死，迅速取其受試 肝臟及脫毛後皮膚，各取其中的約0. 5g用於生化指標檢查。另外，分別取小鼠去毛皮膚1 塊（1.0*1. Ocm)用於皮膚黑色素細胞的病理形態學檢測。
[0051] 2. 3. 2小鼠皮膚和肝臟勻漿的製備
[0052] 稱取皮膚和肝臟各約0. 2g，分別放入裝有9倍於組織塊重的預冷生理鹽水的 小燒杯內，剪碎後用高速分散器粉碎、勻漿（肝臟2次、皮膚4次），每次5s。勻漿液以 3500r · rnirT1離心15min，取上清液進行相關指標的測定。
[0053] 2. 3. 3小鼠肝臟和皮膚指標的測定
[0054] 酪氨酸酶的測定按照Elisa試劑盒的操作要求和步驟進行測定。先進行標準曲線 的製備，後按照操作表要求加樣，加入顯色液A和B，洗板5次，後在450nm處測定吸光度，最 後計算酪氨酸含量。
[0055] SOD活力的測定按試劑盒操作要求先配製底物應用液和酶工作液，接著按照操作 表要求加樣，混勻好後，在37°C恆溫箱中孵育20分鐘，然後在450nm處酶標儀讀數，最後計 算SOD的活力。
[0056] MDA含量的測定按試劑盒要求先配製試劑二和試劑三，接著按照操作表要求加樣， 混勻後95°C水浴40分鐘，取出後流水冷卻，然後在532nm處酶標儀讀數測各管吸光度值，最 後按公式計算MDA含量。
[0057] 2. 3. 4形態學指標檢測
[0058] 取小鼠皮膚組織標本I. 0cm*l. 0cm，HE染色，光學顯微鏡下觀察皮膚病理學變化。
[0059] 黑色素細胞和黑色素顆粒的觀察採用免疫組化的方法：（1)常規脫蠟切片，脫蠟 至水化；（2) 3% H2O2:去離子水孵育5min ; (3)根據I抗對組織切片進行預處理；（4)滴加 I抗，37°C孵育Ih或4°C過夜，PBS洗3次各2分鐘；(5)滴加免疫組化二步法檢測試劑盒， 37°C孵育 30min，PBS 洗 3 次各 2min ; (6)DAB 顯色 5-10min ; (7)蒸餾水洗 10-15min ; (8)蘇 木素復染10秒鐘；(9)常規脫水、透明、封片；（10)染色結果：陽性黑素細胞呈棕色主要分 布在細胞漿與細胞膜上，細胞核被蘇木素復染呈藍色。免疫組化圖片採用Image-Pro Plus 圖像分析軟體進行分析。
[0060] 2. 3. 5統計學處理
[0061] 數據經統計軟體SPSS19. 0進行統計學處理，組間比較採用方差檢驗。
[0062] 3 結果
[0063] 3. 1所述中藥組合物對黃褐斑模型小鼠肝臟及皮膚酪氨酸酶的影響
[0064] 實驗結果顯示：模型組肝臟及皮膚中酪氨酸酶活性明顯升高，與空白對照組相比， 均具有顯著性差異（P〈〇. 05);給予不同劑量中藥組合物後肝臟及皮膚中的酪氨酸酶活性 均明顯降低，與模型組相比，具有顯著性差異（P〈〇. 01或P〈〇. 05)，其中高劑量組中藥組合 物對模型大鼠肝臟及皮膚中酪氨酸酶活性減低作用最為明顯，與模型組相比，具有顯著性 差異（P〈0. 01)，見表1。
[0065] 表1中藥組合物膠囊對黃體酮複合紫外照射致小鼠黃褐斑模型肝臟及皮膚酪氨 酸酶的影響
[0066]

【權利要求】
1. 一種包含柴胡、香附、大黃、青皮、川芎、莪朮、土鱉蟲、浙貝母、當歸、白芍和王不留行 的中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾病的藥物或保健品中的應用。
2. 根據權利要求1所述的一種中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾病的藥物 或保健品中的應用，其特徵在於所述的皮膚色素沉著疾病為黃褐斑。
3. 根據權利要求1所述的一種中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾病的藥物 或保健品中的應用，其特徵在於所述的皮膚色素沉著疾病為妊娠斑。
4. 根據權利要求1或2所述的一種中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾病的藥 物或保健品中的應用，其特徵在於，將中藥組合物製備成內服製劑。
5. 根據權利要求3所述的一種中藥組合物在製備用於防治皮膚色素沉著疾病的藥物 或保健品中的應用，其特徵在於，所述的內服製劑包括丸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液 和糖漿劑。
【文檔編號】A61K36/9066GK104436037SQ201410659297
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月18日 優先權日:2014年11月18日
【發明者】嚴燕青, 狄留慶, 許慧琴, 羅年翠, 李全, 祝倩倩 申請人:雷允上藥業有限公司