一種注射用大豆卵磷脂的製備工藝的製作方法

2024-04-09 02:22:05

專利名稱：一種注射用大豆卵磷脂的製備工藝的製作方法
技術領域：
本發明涉及從大豆磷脂中提取高純度卵磷脂，尤其涉及一種從大豆磷脂中提取一
種注射用大豆卵磷脂的製備工藝。
背景技術：
卵磷脂是構成人體生物膜的重要物質，在維持生物膜的生理活性和機體的正常代 謝方面起關鍵作用。它具有防止動脈硬化、改善神經組織、提高大腦活力的作用，被譽為"細 胞的保護神"和"血管的清道夫"。又由於卵磷脂分子中含磷酸根、膽鹼基的極性端，具有親 水性，由碳氫鍵組成的非極性端，具有親脂性，這種獨特的物化特性和生理活性使其在製藥 工業中有著十分重要的應用價值。目前，高純卵磷脂在醫藥工業中的最大用途是製備高能 量的腸外營養液——脂肪乳輸液和製成脂質體作為各種抗癌藥物的載體。隨著脂肪乳產品 市場每年以15 %的速度增長，供注射用的卵磷脂需求量也不斷增長，而我國供注射用的卵 磷脂主要依賴從歐、美等地區大量進口。因此，如何製備供注射用的卵磷脂及實現其工業化 生產是一項熱門的研究課題，具有顯著的經濟和社會意義。 卵磷脂廣泛存在於蛋黃和大豆中，儘管蛋黃中卵磷脂含量比大豆中要高，但工業 上成功從蛋黃中提取高純卵磷脂難度較大，而且成本較高。我國是世界上大豆主產國之一， 大豆油腳資源十分豐富，這些油腳如不及時處理，極易滋生微生物而造成環境汙染，若能從 大豆油腳中提取出大豆磷脂，加以利用，則可變廢為寶，製備出高附加值的大豆卵磷脂產 品。因此，與蛋黃卵磷脂相比，從大豆油腳中提取卵磷脂產品具有原料來源廣泛、價格低廉， 而且大豆卵磷脂中含有較少的膽固醇。以大豆油腳經濃縮脫水後的大豆磷脂為原料，從中 提取可供注射用的高純卵磷脂，不僅可大大降低成本，而且穩定性好，可減少進口量。
目前，卵磷脂的精製方法主要有溶劑萃取法、柱層析法和超臨界流體萃取法。採用 傳統的溶劑萃取法得到的卵磷脂產品純度低，溶劑用量大，且質量差，遠不能達到注射級要 求；超臨界流體萃取法，多採用C02作萃取劑，由於其對卵磷脂的溶解能力差，不利於對各磷 脂的分離，而且設備昂貴；柱層析法利用各組分磷脂在一定吸附劑上吸附能力的差異，通過 淋洗可使各組分磷脂得到很好的分離，並且操作簡單，設備費用低，易於工業化生產，工業 柱層析技術在石油化工高純對二甲苯生產中已得到廣泛應用。大多數文獻報導的注射用大 豆卵磷脂製備方法中，得到的卵磷脂純度只能達到80%左右，且其他一些質量指標也達不
到要求，僅適用於口服。作為供人體注射用的卵磷脂，其質量要求比較嚴格，必須符合藥用 注射劑標準，如酸值、碘值、過氧化值、重金屬含量、殘留溶劑、微生物限度等。此外，在現有 柱層析技術中，固定相多為矽膠和氧化鋁，洗脫劑為甲醇、氯仿與甲醇的混合溶劑或乙醇， 且多採用等度洗脫。這些技術雖然得到的卵磷脂純度較高，但洗脫劑用量太大，洗脫時間 長，高純卵磷脂的回收率低。此外，採用氧化鋁作固定相後不能進行再生，而且在柱層析中 會生成溶血性磷脂，影響產品質量。

發明內容
本發明的目的在於提供一種可供注射用的大豆卵磷脂製備工藝，以大豆磷脂為原 料，採用膜分離與柱色譜技術相結合的工藝製備注射用大豆卵磷脂。
本發明的技術方案為一種注射用大豆卵磷脂的製備工藝，其具體步驟如下
A.丙酮脫油將大豆磷脂與丙酮按質量比為1 : 1 20進行混合，脫油處理，得 丙酮不溶物； B.膜分離將步驟A得到的丙酮不溶物用烷烴與Q C4醇的混合溶劑進行溶解， 然後將所得溶液通過超濾膜，得到滲透液； C.吸附脫色向步驟B得到的滲透液中加入佔滲透液質量2% 30%的吸附劑， 充分攪拌吸附處理，過濾，濾液經減壓濃縮、真空乾燥後即得粗卵磷脂； D.柱色譜分離以帶有表面羥基的極性化合物為固定相，用弱極性溶劑浸泡後溼
法裝柱，稱取佔固定相質量2% 10%的步驟(:得到的粗卵磷脂，用3 10倍粗磷脂質量的
弱極性溶劑溶解後上樣，先用弱極性溶劑與強極性溶劑組成的混合溶劑進行洗脫，待腦磷
脂全部流出後，改用強極性溶劑作洗脫劑；收集液經HPLC檢測後，將純卵磷脂收集液合併； E.過濾除菌、真空濃縮將步驟D得到的純卵磷脂收集液用除菌板加濾紙過濾後，
再減壓濃縮、真空乾燥，即得注射用卵磷脂產品。 所述大豆磷脂優選為大豆濃縮磷脂或大豆粉末磷脂。
本發明所用的烷烴為正己烷或氯仿；所述的Q c;醇為乙醇、甲醇、丙醇、異丙醇、
丁醇或異丁醇中的一種；步驟B中混合溶劑中烷烴與Q (；醇的質量比為1 : 1 20;所 述的超濾膜優選為聚丙烯腈膜、聚碸膜、聚偏氟乙烯或聚醯胺膜中的一種；膜的截留分子量 為1000 25000，膜分離的壓力為0. 2 lMPa。 優選步驟C中的吸附劑為活性氧化鋁、活性炭或活性白土中的一種；優選步驟D 中的弱極性溶劑為二氯甲烷、氯仿或正己烷；強極性溶劑為甲醇或乙醇；混合溶劑中弱極 性溶劑與強極性溶劑的體積比為1 : 0.2 10;色譜柱為玻璃或不鏽鋼層析柱，長徑比為 15 45 : 1 ;固定相為帶有表面羥基的極性化合物，優選為矽膠、硅藻土或凹凸棒土中的一 種；固定相粒度為100 500目，所用固定相體積為柱體積的30% 85%;洗脫劑總體積為 固定相介質體積的3 8倍。 優選步驟A中脫油溫度為5 45°C，脫油處理次數為2 6次；步驟C中攪拌吸 附處理溫度為25 5(TC下，攪拌吸附處理時間為20 150min ;步驟D中用弱極性溶劑與 強極性溶劑組成的混合溶劑進行洗脫，流速控制在0. 6 4. 8ml/min ;改用強極性溶劑作洗 脫劑，流速控制在1. 2 15. Oml/min ;所述的步驟E中真空乾燥的溫度為20 6(TC，壓力 為0. 001 0. 02MPa，時間為6 24h。 優選步驟A中的丙酮脫油每次處理時間為30 120min。 本發明所得注射用大豆卵磷脂產品的特徵在於磷脂醯膽鹼含量^ 87%，酸值 《3，碘值90 110，溶血磷脂醯膽鹼《3. 0%， a -生育酚《6. 5%，過氧化值《10，水分 《2. 0%，游離脂肪酸《0. 5%，殘留溶劑《0. 5%，磷脂醯乙醇胺《1. 0%，重金屬《10卯m， 砷含量《2卯m， lg卵磷脂中細菌數《50個，黴菌和酵母菌《50個，大腸桿菌為0。
有益效果 (1)本發明提出的工藝將膜分離與柱色譜技術相結合，使產品純度得到了較大的提高，而且原料來源豐富，價格低廉，卵磷脂的提取率高。 (2)本發明中所有的提取與分離過程均在低溫下進行，產品質量穩定，最後經過除 菌及真空乾燥，以保證產品符合注射用標準。


附圖1為本發明的工藝流程框圖。
具體實施方式

實施例1 取大豆濃縮磷脂100g，先用300g的丙酮於4(TC下脫油處理3次，每次30min，過 濾，丙酮不溶物中加入300g的正己烷與100g的異丙醇混合溶劑使其溶解。將混合溶液在 溫度為25t:，壓力為0. 38MPa的壓力下通過截留分子量為15000的聚丙烯腈膜，得到滲透 液。向滲透液中加入6. 4g的活性氧化鋁於35t:下吸附處理60min，過濾，濾液經減壓濃縮、 真空乾燥得粗卵磷脂。經HPLC分析，粗卵磷脂中磷脂醯膽鹼含量為53. 2% 。
取120g矽膠(100 200目)用氯仿浸泡後，裝入小25mmX900mm的玻璃層析柱， 稱取4.5g粗卵磷脂用37g的氯仿溶解後上樣，先用400ml的2 : l氯仿/甲醇衝洗，流速 控制在1. 2ml/min，接著依次用氯仿/甲醇為1 : l(200ml)、l : 2 (250ml) 、1 : 3 (300ml)、 1 : 4(150ml)衝洗，流速控制在2.0ml/min，此時，腦磷脂已全部被衝洗下來。改用純甲醇 1000ml衝洗，流速控制在3. Oml/min每50ml收集一次。經HPLC檢測後，合併含純PC的 收集液，用除菌板加濾紙過濾，再經減壓濃縮、真空乾燥後得注射用的大豆卵磷脂2. 20g， 經HPLC分析，所得產品中磷脂醯膽鹼的含量為98. 7%，粗卵磷脂中磷脂醯膽鹼的提取率為 91. 9%。 產品的其他質量指標為酸值為2. 28，碘值為93，溶血磷脂醯膽鹼含量為2. 0%， a _生育酚含量為4. 7%，過氧化值為8. l，水分為1. 3%，游離脂肪酸為0. 2%，殘留溶劑為 0. 23% ，磷脂醯乙醇胺含量為0. 21 % ，重金屬為8ppm，砷含量為1. 2ppm， lg卵磷脂中細菌數 為35個，黴菌和酵母菌為42個，大腸桿菌為O，達到了注射用大豆卵磷脂的質量標準要求。
實施例2 取大豆濃縮磷脂80g，先用400g的丙酮於25t:下脫油處理2次，每次40min，過濾， 丙酮不溶物中加入300g的正己烷與80g的異丙醇混合溶劑使其溶解。將混合溶液在溫度 為35t:，壓力為0. 5MPa的壓力下通過截留分子量為10000的聚偏氟乙烯膜，得到滲透液。 向滲透液中加入2. 56g的活性白土於5(TC下吸附脫色處理40min，過濾，濾液經減壓濃縮、 真空乾燥得粗卵磷脂。經HPLC分析，粗卵磷脂中磷脂醯膽鹼含量為54.8%。
取90g硅藻土 (300 400目)用二氯甲烷浸泡後，裝入小20mmX 700mm的玻 璃層析柱，稱取3.7g粗卵磷脂用26g的二氯甲烷溶解後上樣，先用300ml的4 : 1 二氯 甲烷/甲醇衝洗，流速控制在0.9ml/min，接著依次用二氯甲烷/甲醇為2 : 1 (200ml)、 1 : l(225ml)、l : 2(200ml)、l : 4 (250ml)衝洗，流速控制在2. 4ml/min，此時，腦磷脂已 全部被衝洗下來，改用純甲醇800ml衝洗，流速控制在4ml/min，每30ml收集一次。經HPLC 檢測後，合併含純PC的收集液，用除菌板加濾紙過濾，再經減壓濃縮、真空乾燥後得注射用 的大豆卵磷脂1. 82g，經HPLC分析，所得產品中磷脂醯膽鹼的含量為99. 2% ，粗卵磷脂中磷
5脂醯膽鹼的提取率為93.8%。 產品的其他質量指標為酸值為2. 24，碘值為94，溶血磷脂醯膽鹼含量為2. 1%， a _生育酚含量為4. 5% ，過氧化值為7. 6，水分為1.3%，游離脂肪酸為0. 3% ，殘留溶劑為 0. 22%，磷脂醯乙醇胺含量為0. 23X，重金屬為7卯m，砷含量為1. 3卯m， lg卵磷脂中細菌數 為36個，黴菌和酵母菌為43個，大腸桿菌為O，符合注射用卵磷脂質量標準要求。
實施例3 取大豆濃縮磷脂50g，先用250g的丙酮於25t:下脫油處理4次，每次30min，過濾， 丙酮不溶物中加入200g的正己烷與50g的異丙醇混合溶劑使其溶解。將混合溶液在溫度 為35t:，壓力為0. 5MPa的壓力下通過截留分子量為20000的聚碸膜，得到滲透液。向滲透 液中加入1. 92g的活性炭於45t:下吸附處理處理120min，過濾，濾液經減壓濃縮、真空乾燥 得粗卵磷脂。經HPLC分析，粗卵磷脂中磷脂醯膽鹼含量為57.3X。 取80g凹凸棒土 (200 300目)用正己烷浸泡後，裝入小25mmX 600mm的玻璃層 析柱，稱取2.5g粗卵磷脂用10g的正己烷溶解後上樣，先用200ml的l : l正己烷/乙醇 衝洗，流速控制在1. lml/min，接著依次用正己烷/乙醇為2 : l(200ml)、l : 2 (250ml)、 1 : 3(200ml)、l : 5(150ml)衝洗，流速控制在2.4ml/min，此時，腦磷脂已全部被衝洗下 來，改用95%乙醇600ml衝洗，流速控制在7ml/min，每25ml收集一次。經HPLC檢測後，合 並含純PC的收集液，用除菌板加濾紙過濾，再經減壓濃縮、真空乾燥後得注射用的大豆卵 磷脂1. 32g，經HPLC分析，所得產品中磷脂醯膽鹼的含量為98. 3% ，粗卵磷脂中磷脂醯膽鹼 的提取率為90.7%。 產品的其他質量指標為酸值為2. 25，碘值為95，溶血磷脂醯膽鹼含量為2. 2%， a _生育酚含量為4. 3%，過氧化值為7. 7，水分為1. 2%，游離脂肪酸為0. 4%，殘留溶劑為 0. 23%，磷脂醯乙醇胺含量為0. 22X，重金屬為8ppm，砷含量為1. 2ppm， lg卵磷脂中細菌數 為34個，黴菌和酵母菌為42個，大腸桿菌為O，符合注射用卵磷脂質量標準要求。
權利要求
一種注射用大豆卵磷脂的製備工藝，其具體步驟如下A.丙酮脫油將大豆磷脂與丙酮按質量比為1∶1～20進行混合，脫油處理，得丙酮不溶物；B.膜分離將步驟A得到的丙酮不溶物用烷烴與C1～C4醇的混合溶劑進行溶解，然後將所得溶液通過超濾膜，得到滲透液；C.吸附脫色向步驟B得到的滲透液中加入佔滲透液質量2％～30％的吸附劑，充分攪拌吸附處理，過濾，濾液經減壓濃縮、真空乾燥後即得粗卵磷脂；D.柱色譜分離以帶有表面羥基的極性化合物為固定相，用弱極性溶劑浸泡後溼法裝柱，稱取佔固定相質量2％～10％的步驟C得到的粗卵磷脂，用3～10倍粗磷脂質量的弱極性溶劑溶解後上樣，先用弱極性溶劑與強極性溶劑組成的混合溶劑進行洗脫，待腦磷脂全部流出後，改用強極性溶劑作洗脫劑；收集液經HPLC檢測後，將純卵磷脂收集液合併；E.過濾除菌、真空濃縮將步驟D得到的純卵磷脂收集液用除菌板加濾紙過濾後，再減壓濃縮、真空乾燥，即得注射用卵磷脂產品。
2. 根據權利l所述的製備工藝，其特徵在於所述的大豆磷脂為大豆濃縮磷脂或大豆粉 末磷脂。
3. 根據權利1所述的製備工藝，其特徵在於步驟B中所用烷烴為正己烷或氯仿；所述的& Q醇為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇或異丁醇中的一種。
4. 根據權利1所述的製備工藝，其特徵在於步驟B中混合溶劑中烷烴與& C4醇的 質量比為1 : 1 20。
5. 根據權利1所述的製備工藝，其特徵在於步驟B中所述的超濾膜為聚丙烯腈膜、聚 碸膜、聚偏氟乙烯或聚醯胺膜中的一種；膜的截留分子量為1000 25000 ;膜分離的壓力為 0. 2 1. 0MPa。
6. 根據權利1所述的製備工藝，其特徵在於步驟C中所述的吸附劑為活性氧化鋁、活性 炭或活性白土中的一種。
7. 根據權利1所述的製備工藝，其特徵在於步驟D中色譜柱為玻璃或不鏽鋼層析柱， 長徑比為15 45 : 1 ;固定相為矽膠、硅藻土或凹凸棒土中的一種；固定相粒度為100 500目；所用固定相體積為柱體積的30% 85%。
8. 根據權利1所述的製備工藝，其特徵在於步驟A中脫油溫度為5 45t:，脫油處理 次數為2 6次；步驟C中攪拌吸附處理溫度為25 5(TC下，攪拌吸附處理時間為20 150min ;步驟D中用弱極性溶劑與強極性溶劑組成的混合溶劑進行洗脫，流速控制在0.6 4. 8ml/min ;改用強極性溶劑作洗脫劑，流速控制在1. 2 15. Oml/min ;所述的步驟E中真 空乾燥的溫度為20 60。C，壓力為0. 001 0. 02MPa，時間為6 24h。
9. 根據權利1所述的製備工藝，其特徵在於步驟D中弱極性溶劑為二氯甲烷、氯 仿或正己烷；強極性溶劑為甲醇或乙醇；混合溶劑中弱極性溶劑與強極性溶劑體積比為 1 : 0.2 10;洗脫劑總體積為固定相體積的3 8倍。
全文摘要
本發明涉及一種注射用大豆卵磷脂的製備工藝。以大豆磷脂為原料，先經丙酮脫油、膜分離、吸附脫色等過程獲得粗卵磷脂，然後將粗卵磷脂採用柱色譜分離、過濾除菌、減壓濃縮及真空乾燥即得注射用大豆卵磷脂。本發明採用膜分離代替傳統的溶劑萃取，操作簡單。以帶有表面羥基的極性化合物為固定相，先用弱極性溶劑與強極性溶劑組成的混合溶劑作洗脫劑進行梯度洗脫，待腦磷脂全部流出後，改用強極性溶劑為洗脫劑，不僅分離選擇性高，大大減少了洗脫劑用量，而且卵磷脂的提取率高，產品質量穩定，便於工業化大規模生產。
文檔編號C07F9/10GK101792461SQ201010105688
公開日2010年8月4日 申請日期2010年2月4日 優先權日2010年2月4日
發明者萬輝, 吳仁榮, 楊操, 管國鋒, 鬱麗薇, 高正松 申請人:南京工業大學;南京威爾化工有限公司