新的共軛亞油酸衍生物及它的製備方法與用途的製作方法

2023-12-05 16:40:01 4

專利名稱：新的共軛亞油酸衍生物及它的製備方法與用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及化學藥物領域，屬於新的共軛亞油酸衍生物，具體涉及一種共軛亞油酸左旋肉鹼酯的新化合物，和該化合物的製備方法及用途。
背景技術：
共軛亞油酸(簡稱CLA)和左旋肉鹼(簡稱L-肉鹼)都是人體必須營養物質。左旋肉鹼在動物體內有生物活性，以天然成分存在於微生物，植物和哺乳動物組織中。L-肉鹼，又稱肉毒鹼，化學名為L-β-羥基-γ-三甲銨丁酸[(CH3)3-N+-CH2-CHOH-CH2-COO-]，是一種安全、有效的水溶性胺基酸。
L-肉鹼是二十世紀初由俄國科學家發現的。由於L-肉鹼對人體和動物安全無毒性，無刺激和誘變性，被美國FDA和世界衛生組織確定為無毒添加劑。很多生產廠家把L肉鹼作為一種重要的減肥添加劑之一。有文獻報導L-肉鹼還有減輕神經緊張、促進心血管病人康復、增強免疫力、加速蛋白質合成、促進傷口癒合、保護細胞膜的穩定性等作用。
共軛亞油酸是一系列具有共軛雙鍵的十八碳二烯酸，包括順反構型，共有十幾種同分異構體，但其分子式、分子量相同，其功效相同。天然共軛亞油主要來自瘤胃動物如牛、羊等的乳脂和肉製品中，目前，大量CLA的獲得通常採用含亞油酸較高的植物油如紅花籽油，葵花籽油等通過人工合成得到共軛亞油酸，人工合成的CLA仍是多種異構體的混合物，主要是含有順9，反11-CLA和/或反10，順12-CLA。
共軛亞油酸是一種新興的營養物質。大量研究發現CLA具有抗癌、降脂、抗動脈粥樣硬化、調節能量代謝、增強機體免疫力與促進生長發育等多種重要的生理活性，其中共軛亞油酸的減肥降脂作用尤其受到青睞。
共軛亞油酸和L-肉鹼這物質均被分別製備食品或藥品，廣泛用於保健，但只能各起各自的作用。

發明內容
本發明的目的是提供一種既具有共軛亞油酸的作用又有L-肉鹼作用的新的化合物，並提供其製備方法和用途。
為實施本發明的目的，所採取的技術方案是提供一種新的共軛亞油酸衍生物，該化合物是由共軛亞油酸和左旋肉鹼為原料製備得到的共軛亞油酸左旋肉鹼酯，化學名為R-3-十八碳二烯醯氧基-4-N，N，N-三甲銨丁酸，分子式為C25H45O4N，產品為無色或淡黃色的半固體物。
本發明所提供的新化合物，其依據在於左旋肉鹼在脂肪代謝過程中起著關鍵的作用，共軛亞油酸和左旋肉鹼存在著密切的代謝相關性，二者合用在發揮藥效活性方面表現出協同或互補的作用。作為能量底物的脂肪酸的氧化，需在線粒體內的β-區進行，脂肪酸因不能直接穿透線粒體內膜而需一種特殊的運送機制將脂醯COA運送到β-氧化降解區域----線粒體基質內。一方面，活化的中長鏈脂肪酸是由肉鹼攜帶著穿過線粒體內膜的，首先，脂肪酸由合成酶活化形成脂醯輔酶A，在膜外側的轉移酶的作用下，轉化為脂醯肉鹼而移至膜內，再經膜內的轉移酶的作用，脫去肉鹼重新轉變成脂醯輔酶A，肉鹼在這一過程中是唯一的載體；另一方面，共軛亞油酸能增加肉鹼棕櫚醯基轉移酶的活性，促進脂肪的燃燒。此外，共軛亞油酸還能通過減低脂肪的沉積、促進脂肪細胞調亡的途徑起到互補的作用。所以將共軛亞油酸和左旋肉鹼製備成一種新的化合物，在體內代謝後能發揮更好的作用。
共軛亞油酸是一系列具有共軛雙鍵的十八碳二烯酸，包括順反構型，共有十幾種同分異構體，本發明所說的共軛亞油酸可以是這系列共軛雙鍵的十八碳二烯酸同分異構體的混合物，也可以是某一較純的構型，當所用的共軛亞油酸為順9，反11-十八碳二烯酸時，所製得的產品為R-3-(順9，反11-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸，結構式為 當所用的共軛亞油酸為反10，順12-十八碳二烯酸時，所製得的產品為R-3-(反10，順12-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸，結構式為
所用共軛亞油酸中含有順9，反11-十八碳二烯酸和反10，順12-十八碳二烯酸，所製得的產品共軛亞油酸左旋肉鹼酯中含有R-3-(順9，反11-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸和R-3-(反10，順12-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸。
本發明所提供的共軛亞油酸左旋肉鹼酯有很好的穩定性，可用作防治肥胖、降血脂、降血糖、降血壓、防治骨質疏鬆的藥物或食品，並可添加一種或多種食品或藥學上可接受的常規載體製成含有共軛亞油酸左旋肉鹼酯組合物，例如添加常規的藥用輔料製成片劑、膠囊(包括緩釋和控釋製劑)、丸劑、散劑、顆粒劑等固體口服製劑；產品用量無需嚴格控制，所用量取決於症狀、患者的體重和年齡等，本發明共軛亞油酸左旋肉鹼酯的常用量可以是每日0.1～5g活性物質的較大範圍內變化，並且該劑量通常可優選每天一次或分成2-4次服用。
本發明所提供的共軛亞油酸衍生物的製備方法，是用共軛亞油酸和左旋肉鹼為原料，採用化學合成法或生物技術法製備，反應式為 所說的化學合成法按如下步驟進行(1)在氮氣保護下，將共軛亞油酸置於容器中，加入強酸或強鹼作催化劑加熱回流1～5小時，攪拌下，加入左旋肉鹼，繼續攪拌反應12～24小時，原料投料重量比共軛亞油酸∶左旋肉鹼為4∶1～8，催化劑的用量為共軛亞油酸和左旋肉鹼總重量的2-10％；(2)取上述所得的反應物料加甲醇至溶解，然後用正己烷萃取，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入蒸餾水洗滌，洗去未反應的左旋肉鹼，即得無色或淡黃色半固體的共軛亞油酸左旋肉鹼酯。
所說的生物技術法按如下步驟進行(1)在無溶劑或有機溶劑體系下，將共軛亞油酸與左旋肉鹼混合置於帶蓋的容器中，加入游離脂肪酶或固定化酶，再加入適量的緩衝液調節pH值至6～8，在30～45℃下反應，在反應1～11小時期間，加入共軛亞油酸和左旋肉鹼總重量的5～10％的分子篩，繼續保持在30～45℃反應，全反應過程為12～24h，然後，加入甲醇終止反應，過濾去掉分子篩和脂肪酶或固定化酶，原料投料重量比共軛亞油酸∶左旋肉鹼為4∶1～8，游離脂肪酶或固定化酶的用量為共軛亞油酸和左旋肉鹼總重量的2-10％；(2)取上述過濾後的甲醇層，加入正己烷萃取，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入蒸餾水洗滌，洗去未反應的左旋肉鹼，即得無色或淡黃色半固體共軛亞油酸左旋肉鹼酯。
當所用的原料共軛亞油酸為順9，反11-十八碳二烯酸，所製得的產品為R-3-(順9，反11-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸，用反10，順12-十八碳二烯酸為原料，所製得的產品為R-3-(反10，順12-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸，共軛亞油酸中含有順9，反11-十八碳二烯酸和反10，順12-十八碳二烯酸，所製得的產品共軛亞油酸左旋肉鹼酯中含有R-3-(順9，反11-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸和R-3-(反10，順12-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸。
化學法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯試驗結果如下表1表1化學法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯試驗結果

生物技術法工藝條件選擇試驗實驗結果見表2、3、4。
表2酶種類的選擇

表3酶用量對轉化率的影響

表4原料投料用量對轉化率的影響

本發明所提供的共軛亞油酸左旋肉鹼酯的用途，可用於製備治療肥胖、降血脂、降血糖、降血壓、防治骨質疏鬆的藥物或食品或用作飼料添加劑。
下面通過藥效學試驗來證實其用途試驗例1減肥、降血脂、降血糖作用1.1實驗動物健康SD大鼠30隻，雄性，體重80-100g。
1.2實驗試劑共軛亞油酸左旋肉鹼酯樣品20g分散於100mL1.5％羧甲基纖維素水溶液中，經口灌胃，餵1mL/100g體重。
1.3高脂飼料配方基礎飼料(根據美國營養協會推薦的AIN-93G配方配製而成的純合成飼料)73.8％、豬油10％、蛋黃粉10％、蔗糖％、膽固醇1％、膽鹽0.2％。
1.4實驗方法將大鼠隨機分為3組，分別為空白對照組，模型對照組，共軛亞油酸肉鹼酯組。其中空白對照組給予基礎飼料自由攝食，同時以等量1.5％羧甲基纖維素水溶液灌胃；模型對照組給予高脂飼料自由飲食，同時以等量1.5％羧甲基纖維素水溶液灌胃；共軛亞油酸肉鹼酯組給予高脂飼料自由飲食，並以1mL/100g體重灌胃。實驗45天。實驗期間記錄大鼠的給食量、剩食量以及撒食量，每周定期稱體重1次。
實驗第40天大鼠禁食12h，測定空腹血糖值，給藥後2h後除空白對照組灌胃生理鹽水外，其餘各組灌胃葡萄糖溶液1g/kg體重。給糖後30，60min和120min測定尾靜脈血糖值。
實驗結束時大鼠禁食12小時，稱體重，眼眶取血測血脂(總膽固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白膽固醇HDL-C)和血糖GLU水平，剖腹取體內脂肪墊(睪丸及腎周圍脂肪墊)並稱重，計算脂體比。
1.5試驗結果與模型對照組相比，共軛亞油酸肉鹼酯組動物體重、體脂、脂體比明顯降低，血清總膽固醇和甘油三酯明顯下降，高密度脂蛋白膽固醇有升高趨勢，結果見表6和表7。
表6共軛亞油酸肉鹼酯對大鼠體重和體脂的影響

*與模型對照組比，p＜0.05；**與模型對照組比，p＜0.01。
表7共軛亞油酸肉鹼酯對大鼠血脂的影響

*與模型對照組比，p＜0.05；**與模型對照組比，p＜0.01。
表8共軛亞油酸肉鹼酯對大鼠糖耐量的影響

*與模型組相比，p＜0.05；**與模型組相比，p＜0.01
由表8可知，共軛亞油酸肉鹼酯組能降低大鼠空腹血糖水平，且在30min時對外源性葡萄糖引起的血糖升高有抵抗作用，並且起效較快。在60min和120min時仍能抵抗外源性葡萄糖引起的血糖升高。
結論本發明的新化合物具有顯著減肥功能和降血脂降血糖作用。
試驗例2.防治骨質疏鬆作用2.1實驗動物健康雄性Balb/c小鼠20隻，體重23-27g。
2.2實驗試劑共軛亞油酸肉鹼酯樣品20g分散於100mL1.5％羧甲基纖維素水溶液中。
2.3實驗方法將大鼠按體重隨機分為2組，分別為空白對照組和共軛亞油酸肉鹼酯組。兩組均給予基礎飼料自由攝食，其中空白對照組以0.1mL/10g體重1.5％羧甲基纖維素水溶液經口灌胃；共軛亞油酸肉鹼酯組以0.1mL/10g體重受試物溶液經口灌胃，實驗14周。
實驗結束時大鼠禁食12小時，稱體重，斷頸處死動物。分離左側股骨，採用雙能X線骨密度儀測定其密度。
2.4實驗結果實驗結果見表9，由表可知，本發明新化合物能顯著降低小鼠的體重和增加小鼠的股骨密度，進一步驗證該化合物的減肥作用，同時又能增加骨質密度，防治骨質疏鬆。
表9共軛亞油酸左旋肉鹼酯對小鼠骨密度的影響

*與對照組比，p＜0.05.
本發明的有益效果1、本發明提供了一個新的化合物，共軛亞油酸肉鹼酯具有減肥、降血脂、降血糖、降血壓和防治骨質疏鬆的作用，可製備成相關的藥物或食品或用作飼料添加劑等；2、本發明所提供的化合物的製備方法工藝簡單，易實施工業化的大批量生產。


圖1.為共軛亞油酸左旋肉鹼酯的ESI-MS2.為共軛亞油酸左旋肉鹼酯的1H-NMR3.為共軛亞油酸左旋肉鹼酯的13C-NMRδ圖下面通過具體實施例和附圖進一步闡述本發明的技術方案具體實施方式
本發明具體實施例所用到的左旋肉鹼由瀋陽東宇精細化工有限公司提供，共軛亞油酸由中山市尤利卡天然藥物有限公司提供.
實施例1化學合成法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯在氮氣保護下，將共軛亞油酸2.8g置於圓底燒瓶中，加入0.44g的硫酸作催化劑，加熱回流1小時，在攪拌條件下，加入1.6g左旋肉鹼，繼續攪拌反應8小時。反應結束後加甲醇10ml溶解，然後加入5ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入10ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體3.1g，轉化率為73.4％。採用儀器分析鑑定產品的結構一、ESI-MS(質荷比m/z)的測定儀器Bruker esquire HCT質譜儀方法將共軛亞油酸左旋肉鹼酯溶於甲醇水溶液(甲醇∶水＝1∶1)配成10μg/ml的儲備液，進樣量為10μl。
結果如圖1所示，分子離子峰為[M+1]+424；二級碎片離子峰為340.8(M-C6H11+)，262.8(C18H31O+)，244.8(M-C13H24+)，188.8(C8H15NO4+)，160.8(C7H15NO3+)；上述結果表明共軛亞油酸左旋肉鹼酯的分子量為423，這與它的理論分子量423.63基本一致。
二、核磁共振法儀器MPMS XL-7 300核磁共振儀方法將共軛亞油酸左旋肉鹼酯20mg溶於CD30D-d4中，測定其氫譜和碳譜。
結果如圖2所示，1H-NMR數據為δ6.3(1H，m)；5.9(1H，m)；5.6(1H，m)；5.4(1H，m)；5.3(1H，m)；4.1-3.6(2H，m)；3.3(9H，s)；2.4(2H，t)；2.2(2H，t)；2.1(2H，m)；2.0(2H，m)；1.6(2H，m)；1.4(4H，m)；1.3(12H，m)；O.9(3H，t)。如圖3所示，13C-NMRδ數據為176.9；176.7；134.1；129.3；128.7；125.7；70.7；64.2；53.8；42.3；36.0；32.7；29.4；27.4；25.8；22.6；三、旋光性測定儀器旋光儀方法將共軛亞油酸左旋肉鹼酯溶於甲醇中，測定其旋光性。
結果共軛亞油酸左旋肉鹼酯為左旋。
上述結果表明該合成方法不會改變化合物的旋光性，是可行的。經MS和NMR證實產品的結構為共軛亞油酸左旋肉鹼酯。
實施例2化學合成法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯在氮氣保護下，將共軛亞油酸2.8g置於圓底燒瓶中，加入0.07g對甲苯磺酸催化劑，加熱回流1小時，在攪拌條件下，加入0.7g左旋肉鹼，繼續攪拌反應8小時。反應結束後加甲醇10ml溶解，然後加入5ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入10ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體0.98g，轉化率為10.4％。
實施例3化學合成法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯在氮氣保護下，將共軛亞油酸28g置於圓底燒瓶中，加入2g的硫酸催化劑，加熱回流5小時，在攪拌條件下，加入16g左旋肉鹼，繼續攪拌反應24小時，反應結束後加甲醇2ml溶解，然後加入5ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入2ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體27.4g，轉化率為65％。
實施例4化學合成法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯在氮氣保護下，將共軛亞油酸56g置於圓底燒瓶中，加入5g的硫酸催化劑，加熱回流5小時，在攪拌條件下，加入32g左旋肉鹼，繼續攪拌反應24小時，反應結束後加甲醇50ml溶解，然後加入50ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入50ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體，59.3g，轉化率為70.2％。
實施例5本發明產品I製備在氮氣保護下，將c9，t11-CLA 2.8g置於圓底燒瓶中，加入0.44g的對甲苯磺酸催化劑，加熱回流1小時，在攪拌條件下，加入1.6g左旋肉鹼，繼續攪拌反應8小時。反應結束後加甲醇10ml溶解，然後加入5ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入10ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體，2.32g，轉化率為55％。
實施例6本發明產品II製備在氮氣保護下，將t10，c12-CLA 2.8g置於圓底燒瓶中，加入0.22g的對甲苯磺酸催化劑，加熱回流1小時，在攪拌條件下，加入1.6g左旋肉鹼，繼續攪拌反應8小時。反應結束後加甲醇2ml溶解，然後加入5ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入2ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體，2.27g，轉化率為53.8％。
實施例7生物技術方法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯在無溶劑體系中，將1.6g左旋肉鹼與2.8g共軛亞油酸混合置於三角瓶中，加入88mg Amano AY 30脂肪酶，調pH至7.0，然後放入水浴搖床上振搖，水浴溫度為40℃，反應12h後，加入300mg的分子篩，繼續反應12小時結束，反應結束後加甲醇10ml溶解，然後加入5ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入10ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體，2.57g，轉化率為60.9％。產品經鑑定，結果同實施例1。
實施例8生物技術方法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯將底物1.6g左旋肉鹼與5.4g共軛亞油酸混合置於三角瓶中，加入10ml乙腈，然後再加入140mg Amano AY 30脂肪酶和調pH至6.0，然後放入水浴搖床上振搖，水浴溫度為40℃，反應12h後，加入350mg的分子篩，繼續12h至結束，反應結束後加甲醇10ml溶解，然後加入5ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入10ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體，1.94g，轉化率為45.9％。
實施例9生物技術方法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯在無溶劑體系中，將底物1.6g左旋肉鹼與3.2g共軛亞油酸混合置於三角瓶中，加入96mg Amano AYS脂肪酶和調節pH至8.0，然後放入水浴搖床上振搖，水浴溫度為40℃，反應12h後，加入300mg的分子篩，繼續反應12小時結束，加入甲醇終止反應，反應結束後加甲醇10ml溶解，然後加入5ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入10ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體，1.30g，轉化率為30.9％。
實施例10生物技術方法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯在無溶劑體系中，將底物1.6g左旋肉鹼與2.8g共軛亞油酸混合置於三角瓶中，加入88mg Amano AK脂肪酶和調pH至7.0磷酸緩衝液，然後放入水浴搖床上振搖，水浴溫度為40℃，反應12h後，加入300mg的分子篩，繼續反應12小時至結束，反應結束後加甲醇10ml溶解，然後加入5ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入10ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體，2.75g，轉化率為65％。
實施例11生物技術方法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯在無溶劑體系中，將底物1.6g左旋肉鹼與2.8g共軛亞油酸混合置於三角瓶中，加入220mg Novezym 435脂肪酶和調pH至7.0，然後放入水浴搖床上振搖，水浴溫度為45℃，反應12h後，加入300mg的分子篩，繼續反應12小時，結束，反應結束後加甲醇10ml溶解，然後加入5ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入10ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體，1.95g，轉化率為46％。
實施例12生物技術方法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯在無溶劑體系中，將底物1.6g左旋肉鹼與2.8g共軛亞油酸混合置於三角瓶中，加入100mg黑曲酶脂肪酶和調pH至7.0，然後放入水浴搖床上振搖，水浴溫度為40℃，反應12h後，加入300mg的分子篩，繼續反應12結束，反應結束後加甲醇10ml溶解，然後加入5ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入10ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體，1.52g，轉化率為36％。
實施例13生物技術方法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯在無溶劑體系中，將底物16g左旋肉鹼與28g共軛亞油酸混合置於三角瓶中，加入880mg Amano AY 30脂肪酶和調pH至7.0，然後放入水浴搖床上振搖，水浴溫度為30℃，反應12h後，加入4.4g分子篩，繼續反應12結束，反應結束後加甲醇20ml溶解，然後加入50ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入20ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體，27.9g，轉化率為66％。
實施例14生物技術方法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯在無溶劑體系中，將底物32g左旋肉鹼與56g共軛亞油酸(含順9，反11-十八碳二烯酸和反10，順12-十八碳二烯酸)，混合置於三角瓶中，加入1.76gAmano AY 30脂肪酶和調pH至7.0，然後放入水浴搖床上振搖，水浴溫度為35℃，反應12h後，加入6g的分子篩，繼續反應12小時至結束，反應結束後加甲醇40ml溶解，然後加入100ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入40ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體55.8g，產品中含有R-3-(順9，反11-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸和R-3-(反10，順12-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸。轉化率為66％。
實施例15生物技術方法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯在無溶劑體系中，將1.6g左旋肉鹼與2.8g c9，t11-共軛亞油酸混合置於三角瓶中，加入88mg Amano AY 30脂肪酶，調pH至7.0，然後放入水浴搖床上振搖，水浴溫度為40℃，反應12h後，加入300mg的分子篩，繼續反應12小時結束，反應結束後加甲醇10ml溶解，然後加入5ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入10ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體-產品I，2.57g，轉化率為60.9％。
實施例16生物技術方法製備共軛亞油酸左旋肉鹼酯在無溶劑體系中，將1.6g左旋肉鹼與2.8g t10，c12-共軛亞油酸混合置於三角瓶中，加入88mg Amano AY 30脂肪酶，調pH至7.0，然後放入水浴搖床上振搖，水浴溫度為40℃，反應12h後，加入300mg的分子篩，繼續反應12小時結束，反應結束後加甲醇10ml溶解，然後加入5ml正己烷，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入10ml蒸餾水，洗去未反應的左旋肉鹼，即可得到淡黃色半固體為產品II，2.57g，轉化率為60.9％.
實施例17共軛亞油酸左旋肉鹼酯硬膠囊物質稱量共軛亞油酸左旋肉鹼酯100g，茶多酚0.02g，羥丙纖維素1g，微晶纖維素1g，硬脂酸鎂0.5g。
把稱量好的共軛亞油酸左旋肉鹼酯，茶多酚，羥丙纖維素和微晶纖維素混合均勻，置流化床制粒機中制粒，顆粒水分小於5％，30目篩整粒，加入硬脂酸鎂，混勻後的顆粒填充膠囊即得。成人劑量3.5-4.0g/日。
實施例18共軛亞油酸左旋肉鹼酯片劑物質稱量共軛亞油酸鈣左旋肉鹼酯100g，維生素E 0.04g，澱粉100g，羥丙纖維素1g。
把稱量好的共軛亞油酸左旋肉鹼酯，維生素E，澱粉和羥丙纖維素混合均勻，以壓片機壓片，密封包裝即成。成人劑量4.0-5.0g/日。
實施例19共軛亞油酸左旋肉鹼酯薄膜包衣片劑物質稱量共軛亞油酸左旋肉鹼酯100g，茶多酚0.03g，澱粉100g，微晶纖維素2g，硬脂酸鎂0.5g。
把稱量好的共軛亞油酸左旋肉鹼酯，茶多酚，澱粉和羥丙纖維素混合均勻，按常規片劑工藝壓片制素片，再用3％HPMC(含1％鈦白粉)進行薄膜包衣，製成薄膜包衣片劑。成人劑量4.5-5.5g/日。
實施20共軛亞油酸左旋肉鹼酯散劑物質稱量共軛亞油酸左旋肉鹼酯100g，茶多酚0.01g。
把稱量好的共軛亞油酸左旋肉鹼酯，茶多酚混合均勻，粉碎至150～200目，採用防水、避光、無汙染的包裝材料進行包裝。成人劑量3.5-4.0g/日。
實施例21共軛亞油酸左旋肉鹼酯顆粒劑物質稱量共軛亞油酸左旋肉鹼酯100g，茶多酚0.04g，微晶纖維素1g。
把稱量好的共軛亞油酸左旋肉鹼酯，茶多酚和微晶纖維素混合均勻，用5％PVP乙醇液制粒，乾燥，整粒，採用防水、避光、無汙染的包裝材料進行包裝。成人劑量3.5-4.0g/日。
實施例22減肥共軛亞油酸左旋肉鹼酯奶粉物質稱量脫脂鮮牛奶10L，共軛亞油酸150ml(2.5％V/V)，共軛亞油酸左旋肉鹼酯100g(0.3％M/V)，維生素A 0.03g、維生素D0.0002g。
把稱量好的共軛亞油酸左旋肉鹼酯、維生素A、D與共軛亞油酸混合，牛奶加熱至40~45℃，把混合物加入脫脂鮮牛奶中，攪拌，在35~40Mpa壓力下均質一次。85℃短時殺菌後，以進風溫度控制在160~165℃，出風溫度控制在75~80℃左右的條件進行噴霧乾燥，採用防水、避光、無汙染的包裝材料進行包裝。成人劑量8-12g/日。
權利要求
1.一種新的共軛亞油酸衍生物，其特徵在於該化合物是由共軛亞油酸和左旋肉鹼為原料製得的共軛亞油酸左旋肉鹼酯，化學名為R-3-十八碳二烯醯氧基-4-N，N，N-三甲銨丁酸，分子式為C25H45O4N，產品為無色或淡黃色的半固體物。
2.根據權利要求1所述的共軛亞油酸衍生物，其特徵在於所述的共軛亞油酸左旋肉鹼酯中至少含有兩個同分異構體，一是R-3-(順9，反11-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸(I)，二是R-3-(反10，順12-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸(II)，其結構式如下
3.一種組合物，其特徵在於含有權利要求1所述的共軛亞油酸左旋肉鹼酯和藥學或食品上可接受的載體。
4.一種如權利要求1所述的共軛亞油酸衍生物的製備方法，其特徵在於用共軛亞油酸和左旋肉鹼為原料，共軛亞油酸和左旋肉鹼採用化學合成法或生物技術法製備，所說的化學合成法按如下步驟進行(1)在氮氣保護下，將共軛亞油酸置於容器中，加入強酸或強鹼作催化劑加熱回流1～5小時，攪拌下，加入左旋肉鹼，繼續攪拌反應12-24小時，原料投料重量比共軛亞油酸∶左旋肉鹼為4∶1～8，催化劑的用量為共軛亞油酸和左旋肉鹼總重量的2-10％；(2)取上述所得的反應物料加甲醇至溶解，然後用正己烷萃取，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入蒸餾水洗滌，洗去未反應的左旋肉鹼，即得無色或淡黃色半固體的共軛亞油酸左旋肉鹼酯；所說的生物技術法按如下步驟進行(1)在無溶劑或有機溶劑體系下，將共軛亞油酸與左旋肉鹼混合置於帶蓋的容器中，加入游離脂肪酶或固定化酶，再加入適量的緩衝液調節pH值至6～8，在30～45℃下反應，在反應1～11小時期間，加入共軛亞油酸和左旋肉鹼總重量的5～10％的分子篩，繼續保持在30～45℃反應，全反應過程為12～24h，然後，加入甲醇終止反應，過濾去掉分子篩和脂肪酶或固定化酶，原料投料重量比共軛亞油酸∶左旋肉鹼為4∶1～8，游離脂肪酶或固定化酶的用量為共軛亞油酸和左旋肉鹼總重量的2-10％；(2)取上述過濾後的甲醇層，加入正己烷萃取，洗去游離脂肪酸，取甲醇層濃縮至幹，加入蒸餾水洗滌，洗去未反應的左旋肉鹼，即得無色或淡黃色半固體共軛亞油酸左旋肉鹼酯。
5.根據權利要求4所述的共軛亞油酸衍生物的製備方法，其特徵在於所說的原料共軛亞油酸為順9，反11-十八碳二烯酸，所製得的產品為R-3-(順9，反11-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸(I)，用反10，順12-十八碳二烯酸為原料，所製得的產品為R-3-(反10，順12-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸(II)，共軛亞油酸中含有順9，反11-十八碳二烯酸和反10，順12-十八碳二烯酸，所製得的產品共軛亞油酸左旋肉鹼酯中含有R-3-(順9，反11-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸(I)和R-3-(反10，順12-十八碳二烯醯氧基)-4-N，N，N-三甲銨丁酸(II)。
6.一種如權利要求1所述的共軛亞油酸左旋肉鹼酯新化合物的用途，在於製備治療肥胖、降血脂、降血糖、降血壓、防治骨質疏鬆的藥物或食品或飼料添加劑。
全文摘要
新的共軛亞油酸衍生物及它的製備方法與用途，涉及化學藥物領域。該化合物是由共軛亞油酸和左旋肉鹼為原料，用化學合成法或生物技術法製備得到的共軛亞油酸左旋肉鹼酯，化學名為R－3－十八碳二烯醯氧基－4－N，N，N－三甲銨丁酸，分子式為C
文檔編號C07C227/00GK101066932SQ20071002837
公開日2007年11月7日 申請日期2007年6月1日 優先權日2007年6月1日
發明者楊得坡, 李珍, 梁淑明, 冀軍峰, 王冬梅, 冀紅斌, 朱龍平 申請人:中山市尤利卡天然藥物有限公司, 中山大學