製備醋酸亮丙瑞林的方法、產品及用途的製作方法

2023-05-05 16:07:21

專利名稱：製備醋酸亮丙瑞林的方法、產品及用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種製備醋酸亮丙瑞林的方法，屬於醫藥領域。
背景技術：
醋酸亮丙瑞林(LeuproreIin Acetate)，屬於原料藥，是人工合成的促黃體生成釋放激素(LH-RH)的高活性衍生物，廣泛用於治療早熟、子宮內膜異位症、子宮肌瘤或絕經前乳腺癌等女性患者和前列腺癌等男性患者。目前國內亮丙瑞林粗品的合成多採用Fmoc(芴甲氧羰醯基)保護方法，雖然該方法合成效率較高，反應周期短，但是由於過程中需要採用大量的六氫吡啶、三氟乙酸、乙硫醇和苯酚等毒性非常大的脫保護試劑，對環境汙染很大，同時對產品的安全性有較大的風險。而在亮丙瑞林的純化過程中，雖然國內基本上都使用C18液相色譜柱層析填料進行純化，但目前的工藝中多採用三氟乙酸-乙腈-水的緩衝體系進行純化，該方法收率偏低，同時在產品中帶入了三氟乙酸等毒性較大的試劑；同時由於將亮丙瑞林粗品直接進行 C18層析，填料的使用壽命非常短。

發明內容
除非另外指出，本文中基團「 —」為聚苯乙烯樹脂，基團「Boc」為叔丁氧羰醯基， 基團「But」為叔丁基；基團「Tos」為對甲苯磺醯基；基團「DCCI」為二環己基碳二亞胺；基團「HOBt」為1-羥基苯駢三唑；基團「 iftOH」為異丙醇，基團「ftx)」為脯氨酸，基團「Arg」 為精氨酸，基團「Leu」為亮氨酸，基團「Tyr」為酪氨酸，基團「Ser」為絲氨酸，基團「Trp」色氨酸，基團「His」為組氨酸，基團「pGlu」為焦穀氨酸。本發明的一個目的是提供一種製備醋酸亮丙瑞林的方法，相比現有生產工藝，該方法能夠獲得更高純度和收率的醋酸亮丙瑞林。本發明的另一個目的是提供根據所述方法製備的醋酸亮丙瑞林產品。本發明的另一個目的是提供所述醋酸亮丙瑞林產品在製備用於治療早熟、子宮內膜異位症、子宮肌瘤或絕經前乳腺癌等女性患者和/或前列腺癌的藥物中的應用。針對以上發明目的，本發明提供以下技術方案一方面，本發明提供一種製備醋酸亮丙瑞林的方法，包括以下步驟1)製備Boc-Pro- MfBoc-Pro的甲醇溶液，加入到Cs2CO3的水溶液中，得到 Boc-Pro-Cs溶液，濃縮，蒸去溶劑，得固體物，加入甲醇並減壓蒸乾，減壓乾燥至恆重，將得到的Boc-Pro-Cs加入無水DMF( 二甲基甲醯胺)溶劑中，加熱，待Boc-Pro-Cs溶解後倒入 Cl-CH2- 樹脂中，攪拌，反應完成後過濾，並洗滌樹脂，烘乾，真空乾燥得Boc-Pro- ；2)固相接肽通過準備原料、接二肽、接三肽、接四肽、接五肽、接六肽、接七肽、接八肽和接九肽的步驟，得到亮丙瑞林九肽樹脂，其中，接二肽到接九肽的步驟均包括去保護基、洗滌、中和、再洗滌、接肽和檢測游離氨；
3)胺解通過乙基胺從上述亮丙瑞林九肽樹脂上解離亮丙瑞林，得到亮丙瑞林粗4) HPLC純化經HPLC製備柱純化得到醋酸亮丙瑞林中間純化品；5)濃縮；6)過濾、凍幹。進一步，所述步驟1)包括將質量濃度為15 17%的Boc-Pro的甲醇溶液，加入到質量濃度為15 17%的Cs2CO3的水溶液中，得到pH值為7. O 7. 5的Boc-Pro-Cs溶液，在40 50°C水浴中減壓濃縮，蒸去溶劑，得固體物，加入甲醇並減壓蒸乾，在以I32O5為乾燥劑的乾燥器內減壓乾燥至恆重，將得到的乾燥的Boc-Pro-Cs加入無水DMF溶劑中，力口熱至40 50°C，待Boc-Pro-Cs溶解後倒入Cl-CH2- 樹脂中，其中，Cl-CH2- 樹脂的用量為乾燥的Boc-Pro重量的2. 5 3倍，40 50°C恆溫攪拌反應40 48小時，反應完成後過濾，並洗滌樹脂，在45 50°C的烘箱中烘12 16h，在以P2O5為乾燥劑的乾燥器內真空乾燥至恆重，得到Boc-Pro- 。更進一步，步驟1)中，所述加入甲醇並減壓蒸乾需要進行不少於兩次，甲醇的每次用量為200 300ml。所述無水DMF溶劑在溶解Boc-Pro-Cs後，還可以再用其蕩洗燒瓶， 併入樹脂中，溶解和蕩洗燒瓶共用去800 1000ml。所述洗滌樹脂包括用無水DMF洗滌樹脂3次，每次用400 600ml，再用純化水洗滌至無Cl—反應，最後用無水乙醇洗滌4次， 用甲醇洗2次，無水乙醇和甲醇每次用量均為400 600ml。進一步，步驟2)中，所述準備原料包括將600重量份的Boc-Pro- ，以無水 CH2Cl2洗滌2 3次，每次用1500 1800ml，攪拌3 5min，抽乾。進一步，步驟2)中，接二肽到接七肽時，所述去保護基包括將準備的原料加入 800 IOOOml濃度為9 ION的HCl/iPrOH溶液和800 IOOOmlCH2Cl2混合液中，攪拌 50 60min，抽乾；接八肽和接九肽時，所述去保護基包括將接七肽後所得物加入800 1000ml濃度為9 10N的HCl/iPrOH溶液、750 900ml的CH2Cl2和50 IOOrnl的巰基乙醇混合液中，振搖50 60min，抽乾；接二肽到接九肽時，所述洗滌包括將去保護基所得物用CH2Cl2洗滌3次，每次用1500 1800ml，抽乾，再用1500 1800ml的DMF洗滌1次，抽乾；接二肽到接九肽時，所述中和包括將洗滌所得物加入三乙胺/CH2Cl2溶液洗滌3次，每次用1500 1800ml，每次攪拌2min，其中，三乙胺與CH2Cl2的體積比為5/95，抽乾；接二肽到接九肽時，所述再洗滌包括將中和所得物用1500 1800ml的DMF洗滌1次，抽乾，再用 CH2Cl2洗滌5 6次，每次用1500 1800ml，至呈中性，抽乾；接二肽到接九肽時，所述接肽包括將接肽原料用1500 1800ml無水DMF溶解，倒入Boc-Pro- 樹脂中，密塞瓶口，攪拌15 18h，抽乾溶劑，以CH2Cl2洗滌3次，無水乙醇洗滌4次，DMF洗滌2次，CH2Cl2洗滌 3次，上述每種溶劑每次用量均為1500 1800ml，抽乾；接二肽到接九肽時，所述檢測游離氨基為用Kaiser試劑檢測。更進一步，所述接肽原料以重量份計包括，接二肽原料為Boc-Arg · HCl247. 5，HOBt139. 9,DCCI213. 21 ；接三肽原料為
Boc-Leu · H2O225. 0，HOBt139. 9,DCCI213. 21 ；接四肽原料為Boc-D-Leu207. 8，HOBt139.9，DCCI213. 21 ；接五肽原料為Boc-Tyr253. 98，HOBt139. 9,DCCI213. 21 ；接六肽原料為
But丨235. 26， Boc-SerHOBt139. 9,DCCI213. 21 ；接七肽原料為Boc-Trp273. 6，HOBt139. 9,DCCI213. 21 ；接八肽原料為
Tos\360， Boc-HisHOBt139. 9,DCCI213. 21 ；接九肽原料為pGlu115.5，HOBt139.9DCCI213.21。進一步，步驟2~)中，所述接九肽完成後，將所得物用CH2Cl2洗滌3次，無水乙醇洗滌4次，DMF洗滌2次，CH2Cl2洗滌3次，甲醇洗滌4次，上述每種溶劑每次用量均為1500 1800ml，抽乾，然後在40 50°C烘箱中乾燥5小時以上，再置於以P2O5為乾燥劑的乾燥器中乾燥至恆重，得亮丙瑞林九肽樹脂。進一步，所述步驟幻胺解包括將乾燥的亮丙瑞林九肽樹脂加入無水甲醇中，通入乙基胺，密閉，室溫下振搖20 M小時，抽去多餘的乙基胺，過濾，過濾後的樹脂用甲醇洗滌，減壓濃縮至幹，成泡沫狀，得濃縮物I ；將濃縮物I以甲醇溶解，再以丙酮沉澱，過濾， 濾餅用醋酸溶解，減壓濃縮至幹，加甲醇溶解再濃縮至幹，成泡沫狀，得濃縮物II ；將濃縮物II，以甲醇溶解，再以丙酮沉澱，過濾，濾餅用丙酮、乙醚洗滌，抽乾，真空乾燥，得亮丙瑞林粗品。
進一步，所述步驟4) HPLC純化包括將亮丙瑞林粗品用乙酸鈉溶液溶解，過濾，調節電導率，經色譜柱上樣，上樣完畢後用乙酸鈉緩衝液洗滌至吸光值穩定，再用乙酸鈉緩衝液進行洗脫，出峰時開始收集洗脫液，至吸光值不再變化時停止收集；收集的洗脫液經膜過濾後，經HPLC製備柱上樣，進行梯度洗脫，收集主峰溶液，即得醋酸亮丙瑞林中間純化品。進一步，所述步驟幻濃縮包括醋酸亮丙瑞林中間純化品用注射用水稀釋後再吸附到HPLC製備柱上，用醋酸銨溶液洗滌，用乙酸/乙腈溶液洗滌，最後用乙酸/乙腈溶液洗脫，收集有吸收值的部分，減壓濃縮，得到醋酸亮丙瑞林濃縮物。進一步，所述步驟6)過濾、凍幹包括將醋酸亮丙瑞林濃縮物送入潔淨區，配製成溶液，濾膜過濾，濾液用冷凍乾燥機進行冷凍乾燥，得醋酸亮丙瑞林凍幹製品。另一方面，本發明提供一種根據上述方法製備的醋酸亮丙瑞林產品。另一方面，本發明提供上述醋酸亮丙瑞林產品在製備用於治療早熟、子宮內膜異位症、子宮肌瘤或絕經前乳腺癌等女性患者和/或前列腺癌的藥物中的應用。本發明提供的製備醋酸亮丙瑞林的方法及產品，其有益效果為本發明提供的製備方法中，使用了 Boc保護方法進行合成亮丙瑞林粗品，過程中使用了 HCl/異丙醇作為脫保護試劑，避免了對環境造成較大的汙染，同時提高了產品的安全性。在接下來純化亮丙瑞林粗品的過程中，首先將亮丙瑞林粗品進行一步離子交換層析， 然後再進行C18柱的HPLC純化；增加的一步離子交換層析，不但沒有降低產品的收率，反而保護了 C18柱層析填料；同時製備過程中使用乙酸-乙腈-水的緩衝體系，使HPLC的收率達到95%以上，而且大大增加了產品的安全性。本發明製備方法得到的醋酸亮丙瑞林的粗品收率為15% 25%，粗品轉化為中間純化品的收率為85 95%，中間純化品轉化為成品的收率高達95 100%


以下，結合附圖來詳細說明本發明的實施例，具體地，圖1為製備醋酸亮丙瑞林的方法的工藝流程圖，其中，圖IA為由原料合成亮丙瑞林粗品的工藝流程圖，圖IB為由亮丙瑞林粗品合成醋酸亮丙瑞林成品的工藝流程圖。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡明本發明，而不是為了限制本發明的範圍。實施例11.製備 Boc-Pro-②在3L三口燒瓶內稱取103. 2g的Boc-Pro，溶於600ml甲醇中。在IL三口燒瓶內稱取101. 4g的Cs2CO3溶於600mlH20中，緩緩加入上述Boc-Pro溶液中，得到無色透明的 Boc-Pro-Cs溶液，其pH值為7. O 7.5 ；在40°C水浴中水泵減壓濃縮，蒸去溶劑，得固體物； 加入甲醇250ml，減壓蒸乾，再次加入甲醇250ml減壓蒸乾，在以I32O5為乾燥劑的乾燥器內減壓乾燥至恆重，得160 185g乾燥的Boc-Pro-Cs。稱取樹脂Cl-CH2- 300g置於3L三角燒瓶中；將上述Boc-Pro-Cs加入無水DMF 溶劑中，加熱至40°C，待Boc-Pro-Cs溶解後倒入樹脂中，再以無水DMF蕩洗三口燒瓶，併入樹脂中，共用IOOOml無水DMF ；50°C恆溫攪拌反應48小時；反應完成後用2號砂芯漏鬥過濾，樹脂用無水DMF洗滌3次(每次用500ml)，再用純化水洗滌至無Cl_反應(AgNO3試劑檢測)，最後用無水乙醇洗滌4次，用甲醇洗2次(無水乙醇和甲醇每次用量均為500ml)。 在45 50°C的烘箱中烘12 16h，，再置於以P2O5為乾燥劑的乾燥器中真空乾燥至恆重， 得 300 360g 的 Boc-Pro-②。2.固相接肽2. 1準備原料稱取相當於300mmol (通過樹脂重量和取代量計算)重量的Boc-Pro- ，置於 5000ml反應瓶中，以無水CH2Cl2洗滌2 3次(每次用1800ml)，每次攪拌5min，抽乾。2. 2 接二肽 Boc-Arg-Pro- (1)去保護基將步驟2. 1中的原料加入900ml濃度為9 ION的HCl/iPrOH溶液和900mlCH2Cl2混合液中，攪拌60min，抽乾。(2)洗滌上步中所得物用CH2Cl2洗滌3次(每次用1800ml)，抽乾；再用1800ml 的DMF洗滌1次，抽乾。(3)中和上步中所得物加入三乙胺/CH2Cl2溶液(5/95的體積比)中，洗滌3次 (每次用1800ml)，每次攪拌2min，抽乾。(4)再洗滌上步中所得物用1800ml的DMF洗滌1次，抽乾；再用CH2Cl2洗滌5 6次(每次用1800ml)至呈中性，抽乾。(7)接肽將 247. 5g(即 900mmol) Boc-Arg · HCl,139. 9g(即 1035mmol) HOBt 禾口 213. 21g(即1035mmol)DCCI分別用無水DMF溶解(共用無水DMF約1800ml)，然後倒入 Boc-Pro- 樹脂中，密塞瓶口，攪拌12 16h，之後，抽乾溶劑，以CH2Cl2洗滌3次，無水乙醇洗滌4次，DMF洗滌2次，CH2Cl2洗滌3次(上述每種溶劑每次用量均為1800ml)，抽乾。(8)檢測游離氨基整個接肽過程應確保胺基酸次序正確無誤，在保護胺基酸單體質量的先決條件下，保證脫保護基完全和接肽完全是控制質量的關鍵；為保證接肽完全， 需採用足夠量單體接肽，並在每次洗滌後均需用Kaiser試劑檢測是否接肽完全，以保證接肽質量；每克樹脂含5 μ mol氨基時即能顯輕微的藍色(檢出靈敏度5 μ mol/940 μ mol < 1%)，具體測試方法為取約2_3mg樹脂置於小試管中，加入Kaiser試劑A、B、C各一滴，於水浴中加熱至 100°C，應無藍色出現；若有藍色出現或樹脂顯藍色，則按前述接肽方法再補接1.5倍量的保護胺基酸單體，振搖池，洗滌後再次檢測，其中，試劑A為20g苯酚溶於5ml乙醇中，試劑 B為5mgKCN溶於35mlH20，用吡啶稀釋至100ml，試劑C為1. 5g茚三酮溶於30ml乙醇中。2. 3 接三肽 Boc-Leu-Arg-Pro- 步驟2. 2接二肽後所得物經去保護基-洗滌-中和-再洗滌後，進行接肽和檢測游離氨基，其中，去保護基、洗滌、中和、再洗滌、接肽和檢測游離氨基的方法均與步驟2. 2接二肽中的上述方法相同，所不同的是，當前步驟中接肽使用的原料為Boc-Leu · H2O225. Og (艮口 900mmol)HOBt139. 9g (即 1035mmol)DCCI213. 21g(即 1035mmol)。2· 4 接四月太 Boc-D-Leu-Leu-Arg-Pro-
步驟2. 3接三肽後所得物經去保護基-洗滌-中和-再洗滌後，進行接肽和檢測游離氨基，其中，去保護基、洗滌、中和、再洗滌、接肽和檢測游離氨基的方法均與步驟2. 2接二肽中的上述方法相同，所不同的是，當前步驟中接肽使用的原料為Boc-D-Leu207. 8g(艮口 900mmol)HOBt139. 9g (即 1035mmol)DCCI213. 21g(即 1035mmol)。2. 5 接五肽 Boc-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro- 步驟2. 4接四肽後所得物經去保護基-洗滌-中和-再洗滌後，進行接肽和檢測游離氨基，其中，去保護基、洗滌、中和、再洗滌、接肽和檢測游離氨基的方法均與步驟2. 2接二肽中的上述方法相同，所不同的是，當前步驟中接肽使用的原料為Boc-Tyr253. 98g(即 900mmol)HOBt139. 9g (即 1035mmol)DCCI213. 21g(即 1035mmol)。
But2. 6 接六肽 I
Boc-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro- 步驟2. 5接五肽後所得物經去保護基-洗滌-中和-再洗滌後，進行接肽和檢測游離氨基，其中，去保護基、洗滌、中和、再洗滌、接肽和檢測游離氨基的方法均與步驟2. 2接二肽中的上述方法相同，所不同的是，當前步驟中接肽使用的原料為
ButI235. ^g (即 900mmol) Boc-SerHOBt139. 9g (即 1035mmol)DCCI213. 21g(即 1035mmol)。2. 7 接七肽 Boc-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro- 步驟2. 6接六肽後所得物經去保護基-洗滌-中和-再洗滌後，進行接肽和檢測游離氨基，其中，去保護基、洗滌、中和、再洗滌、接肽和檢測游離氨基的方法均與步驟2. 2接二肽中的上述方法相同，所不同的是，當前步驟中接肽使用的原料為Boc-Trp273. 6g(艮口 900mmol)HOBt139. 9g (即 1035mmol)DCCI213. 21g(即 1035mmol)。
Tos2.8 接八肽 It cτ τ Λ
Boc-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro- 步驟2. 7接七肽後所得物經去保護基-洗滌-中和-再洗滌後，進行接肽和檢測游離氨基，其中，去保護基的方法為將接七肽後所得物加入900ml濃度為9-10N的HCl/iPrOH 溶液、810ml的CH2Cl2和90ml的巰基乙醇混合液中，振搖60min，抽乾；洗滌、中和、再洗滌、 接肽和檢測游離氨基的方法均與步驟2. 2接二肽中的上述方法相同，所不同的是，當前步驟中接肽使用的原料為
TosI360g (即 900mmol) Boc-HisHOBt139. 9g (即 1035mmol)
10
DCCI213. 21g (即 10;35mmol)。2.9 接九肽 pGlu—Hi s-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro- 步驟2. 8接八肽後所得物經去保護基-洗滌-中和-再洗滌後，進行接肽和檢測游離氨基，其中，去保護基的方法與步驟2. 8接八肽中的上述方法相同；洗滌、中和、再洗滌、 接肽和檢測游離氨基的方法均與步驟2. 2接二肽中的上述方法相同，所不同的是，當前步驟中接肽使用的原料為pGlu115. 5g (即 900mmol)HOBt139. 9g (即 10;35mmol)DCCI213. 21g(即 1035mmol)。將接九肽後所得物用CH2Cl2洗滌3次，無水乙醇洗滌4次，DMF洗滌2次，CH2Cl2洗滌3次，甲醇洗滌4次(上述每種溶劑每次用量均為1800ml)，抽乾，然後在50°C烘箱中乾燥5小時以上，再置於以P2O5為乾燥劑的乾燥器中乾燥至恆重，得亮丙瑞林九肽樹脂，樹脂增重為300 360g (樹脂理論增重為0. 3 X (1067-101) = 289. 8g)。3.胺解(將亮丙瑞林從樹脂上解離)將上述乾燥的亮丙瑞林九肽樹脂置於12L裂解瓶(抽氣口應先嚴密封閉)中，力口入3360ml無水甲醇，各通入約5000ml乙基胺，密閉，於室溫下振搖M小時之後，抽去多餘的乙基胺，合併後過濾，過濾後的樹脂用甲醇洗滌4次(每次用1000ml)，濾洗液在40 45°C下減壓濃縮至幹，加甲醇溶解再減壓濃縮至幹，如此反覆三次，成泡沫狀，得濃縮物I。將濃縮物I稱重，以5倍體積的甲醇溶解，再以50倍體積的丙酮沉澱，過濾，濾餅用5倍體積的50% (體積比)的醋酸溶解，40 45°C下減壓濃縮至幹，加甲醇溶解再濃縮至幹，如此反覆至少三次，至成泡沫狀，得濃縮物II。將濃縮物II稱重，以10倍體積的甲醇溶解，再以50倍體積的丙酮沉澱，過濾，濾餅用丙酮洗滌1次，乙醚洗滌3次(上述每種溶劑每次用量均為250ml)，抽乾，真空乾燥，得亮丙瑞林粗品；濾液可回收利用，用丙酮洗滌1次，乙醚洗滌3次(上述每種溶劑每次用量均為250ml)，抽乾，真空乾燥，得亮丙瑞林粗品並回收。4. HPLC 純化將上述亮丙瑞林粗品用pH值為6. 0、濃度為0. 05mol/L的乙酸鈉溶液溶解，雙層濾紙過濾，調節電導率與PH值為6. 0、濃度為0. 05mol/L的乙酸鈉溶液基本一致後，經pH值為6. 0、濃度為0. 05mol/L的乙酸鈉緩衝液平衡後的CM-kphadex G25柱(柱體積200ml) 上樣，上樣完畢後用PH值為6.0、濃度為0.05mol/L的乙酸鈉緩衝液洗滌至吸光值(λ為 280nm,靈敏度為0. 01)穩定，再用pH值為6. 0、濃度為0. 5mol/L的乙酸鈉緩衝液進行洗脫， 出峰時開始收集洗脫液，至吸光值不再變化時停止收集。收集的洗脫液經HPLC分析純度為 95% (純度應彡70%),並計算含量為0. 64mg/ml (含量應彡0. 2mg/ml)。收集的洗脫液經0. 45 μ m膜過濾後，經5cm的反相C_18液相色譜柱(即HPLC製備柱)上樣，用溶劑A(含0.5% (體積比)乙酸和5% (體積比)乙腈的溶液)和溶劑B(含 0.5% (體積比)乙酸和80% (體積比)乙腈的溶液)進行梯度洗脫，收集主峰溶液，主峰溶液合併即得醋酸亮丙瑞林中間純化品，經HPLC檢測，純度達到99. 5%，和薄層色譜法檢測雜質含量小於0.5%。5.濃縮
醋酸亮丙瑞林中間純化品用1 2倍注射用水稀釋後再吸附到HPLC製備柱上，用溶劑C (0. lmol/L醋酸銨溶液)洗滌30min，用溶劑A洗滌60min，最後用溶劑D (含0. 5 % (體積比)乙酸和40% (體積比)乙腈的溶液)洗脫，收集有吸收值的部分，經40 45°C 減壓濃縮去除殘留有機溶劑和注射用水。6.過濾、凍幹將上述濃縮物送入10000級(局部100級)潔淨區，用注射用水配製成8 % 10% (重量比)的溶液，用0.22 μ m濾膜過濾，濾液用冷凍乾燥機進行冷凍乾燥，預凍溫度彡-:35°C，乾燥溫度30°C 40°C，真空度彡30Pa，保溫時間6 8h，得凍幹製品。7.分裝、入庫將上述凍幹製品分裝於玻璃藥瓶中，同時取樣送檢，加蓋密封后，貼上注有品名、 批號、重量、生產日期、有效期、操作人和覆核人的標籤，遮光、密閉保存，待化驗合格，辦理入庫手續。8.醋酸亮丙瑞林質量標準(1)依據QS-PRF-004. 01(2)性狀本品為白色或類白色粉末；無臭，有引溼性。本品在水、醋酸中易溶，在甲醇中略溶。比旋度為-38.0° -42.0°。吸收係數為53 56。(3)鑑別HPLC色譜圖中，供試品峰的的保留時間應與對照品峰的保留時間一致。TCL薄層色譜中，供試品所顯主斑點的顏色和位置應與對照品的主斑點相同。(4)檢查溶液澄清度與顏色應符合規定。含醋酸量為4. 7 9.0%。胺基酸比值應符合以下規定穀氨酸0. 85 1. 1 ；脯氨酸0. 85 1. 1 ；亮氨酸 1. 80 2. 2 ；組氨酸0. 85 1. 1 ；精氨酸0. 85 1. 1 ；酪氨酸0. 85 1. 1 ；且絲氨酸應被檢測出，其它胺基酸除色氨酸外均不得檢出。有關物質應符合規定。殘留溶劑應符合以下規定含乙醚不得超過0. 5 %，丙酮不得超過0. 5 %，甲醇不得超過0.3%，乙醇不得超過0.5%，二氯甲烷不得超過0. 06 %，乙腈不得超過0. 041 %，N， N』 - 二甲基甲醯胺不得超過0. 088%。水分不得超過5.0%。細菌內毒素應小於16. 7EU/mg醋酸亮丙瑞林(以無水、無醋酸物計算)。無菌應符合規定。可見異物檢查應符合規定。9.產品收率粗品收率15% 25%粗品一中間純化品收率85 % 95 %
12
中間純化品一成品收率95% 100%(計算公式收率=(實際產量/理論產量)X100% )10.物料消耗和生產設備本實施例中消耗的物料和所使用主要生產設備分別列於表1、和表2中。表1實施例1中物料消耗
權利要求
1.一種製備醋酸亮丙瑞林的方法，其包括以下步驟1)製備Boc-Pro- 將Boc-Pro的甲醇溶液，加入到Cs2CO3的水溶液中，得到 Boc-Pro-Cs溶液，濃縮，蒸去溶劑，得固體物，加入甲醇並減壓蒸乾，減壓乾燥至恆重，將得到的Boc-Pro-Cs加入無水DMF溶劑中，加熱，待Boc-Pro-Cs溶解後倒入Cl-CH2-②樹脂中， 攪拌，反應完成後過濾，並洗滌樹脂，烘乾，真空乾燥得Boc-Pro- ；2)固相接肽通過準備原料、接二肽、接三肽、接四肽、接五肽、接六肽、接七肽、接八肽和接九肽的步驟，得到亮丙瑞林九肽樹脂，其中，接二肽到接九肽的步驟均包括去保護基、 洗滌、中和、再洗滌、接肽和檢測游離氨；3)胺解通過乙基胺從上述亮丙瑞林九肽樹脂上解離亮丙瑞林，得到亮丙瑞林粗品。4)HPLC純化經HPLC製備柱純化得到醋酸亮丙瑞林中間純化品；5)濃縮；6)過濾、凍幹。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述步驟1)包括將質量濃度為15 17%的Boc-Pro的甲醇溶液，加入到質量濃度為15 17%的Cs2CO3的水溶液中，得到pH 值為7. O 7. 5的Boc-Pro-Cs溶液，在40 50°C水浴中減壓濃縮，蒸去溶劑，得固體物， 加入甲醇並減壓蒸乾，在以P2O5為乾燥劑的乾燥器內減壓乾燥至恆重，將得到的乾燥的 Boc-Pro-Cs加入無水DMF溶劑中，加熱至40 50°C，待Boc-Pro-Cs溶解後倒入Cl-CH2- 樹脂中，其中，Cl-CH2- 樹脂的用量為乾燥的Boc-Pro重量的2. 5 3倍，40 50°C恆溫攪拌反應40 48小時，反應完成後過濾，並洗滌樹脂，在45 50°C的烘箱中烘12 16h， 在以P2O5為乾燥劑的乾燥器中真空乾燥至恆重，得到Boc-Pro- 。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特徵在於步驟1)中，所述加入甲醇並減壓蒸乾需要進行不少於兩次。
4.根據權利要求1或2所述的方法，其特徵在於，步驟1)中，所述洗滌樹脂包括用無水DMF洗滌樹脂，再用純化水洗滌至無Cl—反應，最後用無水乙醇和甲醇分別洗滌。
5.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，步驟幻中，所述準備原料包括將600重量份的Boc-Pro- ，以無水CH2Cl2洗滌，攪拌，抽乾。
6.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，步驟幻中，接二肽到接七肽時，所述去保護基包括將準備的原料加入濃度為9 ION的HCl/iPrOH溶液和CH2Cl2混合液中，攪拌， 抽乾，優選地，HCl/iPrOH溶液與CH2Cl2的體積比為1:1;接八肽和接九肽時，所述去保護基包括將接七肽後所得物加入濃度為9 ION的 HCl/iPrOH溶液、CH2Cl2和巰基乙醇混合液中，振搖，抽乾，優選地，HCl/iPrOH溶液、CH2Cl2 與巰基乙醇的體積比為10 9 1 ；接二肽到接九肽時，所述洗滌包括將去保護基所得物用CH2Cl2洗滌，抽乾，再用DMF， 抽乾；接二肽到接九肽時，所述中和包括將洗滌所得物加入三乙胺/CH2Cl2溶液洗滌，攪拌 2min，抽乾，優選地，三乙胺與CH2Cl2的體積比為5/95 ；接二肽到接九肽時，所述再洗滌包括將中和所得物用DMF洗滌，抽乾，再用CH2Cl2洗滌至呈中性，抽乾；接二肽到接九肽時，所述接肽包括將接肽原料用無水DMF溶解，倒入Boc-Pro- 樹脂中，密塞瓶口，攪拌，抽乾溶劑，以CH2Cl2、無水乙醇、DMF分別洗滌，再用CH2Cl2洗滌，抽乾； 接二肽到接九肽時，所述檢測游離氨基為用Kaiser試劑檢測。
7.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於，所述接肽原料以重量份計包括，接二肽原料為Boc-Arg · HCl247.5，HOBt139.9,DCCI213.21;接三肽原料為 Boc-Leu · H2O225. 0，HOBt139.9,DCCI213.21;接四肽原料為 Boc-D-Leu207.8，HOBt139.9,DCCI213.21;接五肽原料為 Boc-Tyr253.98，HOBt139.9,DCCI213.21;接六肽原料為 ButI235. 26,Boc-SerHOBt139.9,DCCI213.21;接七肽原料為 Boc-Trp273.6，HOBt139.9,DCCI213.21;接八肽原料為 TosI360，Boc-HisHOBt139.9,DCCI213.21;接九肽原料為 pGlu115.5,HOBt139.9DCCI213.21。
8.根據權利要求1或7所述的方法，其特徵在於步驟幻中，所述接九肽完成後，將所得物用CH2Cl2、無水乙醇、DMF分別洗滌，再用CH2C12、甲醇洗滌，抽乾，然後在40 50°C烘箱中乾燥不少於5小時，再置於以P2O5為乾燥劑的乾燥器中乾燥至恆重，得亮丙瑞林九肽樹脂。
9.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述步驟3)胺解包括將乾燥的亮丙瑞林九肽樹脂加入無水甲醇中，通入乙基胺，密閉，室溫下振搖，抽去多餘的乙基胺，過濾，過濾後的樹脂用甲醇洗滌，減壓濃縮至幹，成泡沫狀，得濃縮物I ；將濃縮物I以甲醇溶解，再以丙酮沉澱，過濾，濾餅用醋酸溶解，減壓濃縮至幹，加甲醇溶解再濃縮至幹，成泡沫狀，得濃縮物II ；將濃縮物II，以甲醇溶解，再以丙酮沉澱，過濾，濾餅用丙酮、乙醚洗滌，抽乾，真空乾燥，得亮丙瑞林粗品。
10.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述步驟4)HPLC純化包括將亮丙瑞林粗品用乙酸鈉溶液溶解，過濾，調節電導率，經色譜柱上樣，上樣完畢後用乙酸鈉緩衝液洗滌至吸光值穩定，再用乙酸鈉緩衝液進行洗脫，出峰時開始收集洗脫液，至吸光值不再變化時停止收集；收集的洗脫液經膜過濾後，經HPLC製備柱上樣，進行梯度洗脫，收集主峰溶液，即得醋酸亮丙瑞林中間純化品。
11.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述步驟幻濃縮包括醋酸亮丙瑞林中間純化品用注射用水稀釋後再吸附到HPLC製備柱上，用醋酸銨溶液洗滌，用乙酸/乙腈溶液洗滌，最後用乙酸/乙腈溶液洗脫，收集有吸收值的部分，減壓濃縮，得到醋酸亮丙瑞林濃縮物。
12.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述步驟6)過濾、凍幹包括將醋酸亮丙瑞林濃縮物送入潔淨區，配製成溶液，濾膜過濾，濾液用冷凍乾燥機進行冷凍乾燥，得醋酸亮丙瑞林凍幹製品。
13.根據權利要求1-12任一項所述的方法製備的醋酸亮丙瑞林產品。
14.根據權利要求13的醋酸亮丙瑞林產品在製備用於治療早熟、子宮內膜異位症、子宮肌瘤或絕經前乳腺癌等女性患者和/或前列腺癌的藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供一種製備醋酸亮丙瑞林的方法，其步驟包括製備Boc-Pro--固相接肽-胺解-HPLC純化-濃縮-過濾凍幹，其中，固相接肽為通過準備原料、接二肽、接三肽、接四肽、接五肽、接六肽、接七肽、接八肽和接九肽的步驟，得到亮丙瑞林九肽樹脂。通過本發明提供的製備方法能夠獲得更高純度和收率的醋酸亮丙瑞林，且製備過程對環境汙染較少，產品安全性較高。
文檔編號A61P5/24GK102464702SQ20101061091
公開日2012年5月23日 申請日期2010年12月23日 優先權日2010年12月23日
發明者萬龍巖, 王林鵬, 程元亨, 籍曉濤, 肖建國, 謝振東 申請人:上海麗珠製藥有限公司