預防和治療病毒感染後的繼發感染的製作方法

2023-05-24 20:14:41

專利名稱：預防和治療病毒感染後的繼發感染的製作方法
技術領域：
本發明涉及預防和治療病毒感染後的繼發感染，特別是在嬰兒和幼兒中。
背景技術：
呼吸道感染是非常普遍的，特別是在嬰兒和幼兒中。例如，在生命的第一年中，嬰 兒通常經歷3至6次此類感染。此類感染通常是由細菌引起的，並且常常跟隨病毒感染，例 如流感。呼吸道細菌感染的實例包括肺炎、鼻竇炎和中耳炎。頻繁的呼吸道感染常常伴隨著急性中耳炎。這是中耳感染，其中通過口腔連接中 耳腔和外部環境的咽鼓管發炎，然後堵塞中耳中入侵的細菌。中耳腔也發炎並且聚積液體， 導致壓力升高，其使得患者遭受疼痛，因為不能如健康個體那樣通過咽鼓管來平衡中耳和 外部環境之間的壓力。在嚴重的情況下，鼓膜可能受壓破裂，使得感染的液體到達內耳。這 是一個潛在的危險情形，如果不治療的話，其可以導致永久性的聽力損傷。50%的兒童在生命的第一年中至少一次急性中耳炎發作，並且35%的兒童在1至 3歲之間復發急性中耳炎。相反，這可能導致稱為膠耳的病症的發生，其中在感染髮作之間 液體沒有完全從中耳排出。如果該病症確定，可能需要外科手術。急性中耳炎似乎與鼻咽腔固有微生物群中通常發現的致病菌的活性相關。按數量 來說，最重要的病原體是肺炎鏈球菌(Str印tococcuspneumoniae) (35%的病例)、不可分 型的流感嗜血菌(Haemophilusinfluenzae) (30%的病例)和黏膜炎莫拉氏菌(Moraxella catarrhalisMlO^的病例)。對於這個原因，急性中耳炎通常是通過施用抗生素(特別是 在嬰兒中)來治療的。事實上，在嬰兒期開處抗生素用於治療中耳炎的頻率高於任何其它 疾病。這不可避免地導致通常開處的抗生素對中耳炎相關的菌株產生抗性。例如，至少20% 的肺炎鏈球菌株對青黴素類和頭孢菌素類具有抗性。類似地，至少30%的流感嗜血菌株和 大多數黏膜炎莫拉氏菌株已經發生對抗生素的抗性。處方的這種頻率至少部分是由於嬰兒 和幼兒遭受中耳炎所經歷的疼痛，他們對此的反應是延長痛哭，從而父母和其它看護人員 急於緩減他們的痛哭。因此顯然需要替代方法，用於降低嬰兒和幼兒中該疼痛且可能嚴重 的病症的發病率。已經提出了多種替代治療。例如，WO 97/17089中建議應用所謂的免疫乳製劑，用 於預防中耳炎。該製劑包含從牛初乳中獲得的抗耳炎的IgG型免疫球蛋白，以補充被動免 疫防禦。為了預防/治療中耳炎還提出了多種菌株。在最近的臨床試驗中，將抑制α溶血 性鏈球菌群噴入患有急性中耳炎的兒童的鼻中。所用的菌株是緩症鏈球菌(Streptococcus mitis)、血鏈球菌(Streptococcus sanguis)禾口口 腔鏈球菌(Streptococcus oralis)。 以該方法治療的兒童很少發作急性中耳炎(Roos等人，Effect of recolonisation with"interfering alpha streptococci"onrecurrences of acute and secretory otitis media in children :randomisedplacebo controlled trial (『『幹擾 α 鏈球菌群，，的再 移植化對兒童急性和分泌性中耳炎復發的效果隨機化安慰劑可控的試驗)，BMJ 322 210-212)。但是，在該試驗中所用的菌株也被鑑別為涉及病症例如心內膜炎和肺部感染的人病原體。WO 2004/072272建議在預防和治療中耳炎中應用特別的唾液鏈球菌株 (Streptococcus salivarius)。該菌株被確定為產生細菌素的非致病菌株。其可以鼻內施 用、通過口腔吸入或者以錠劑或膠囊劑的形式施用。該菌株優選在用抗生素或其它抗微生 物劑初治後施用。同樣地，細菌感染也可能跟隨其它病毒感染。綜上所述，可以看出需要用於預防病毒感染(例如流感)後的繼發感染的有效方 法，該方法不依賴應用抗生素並且該方法可以方便且安全施用。發明概述本發明人驚訝地發現共同施用唾液酸化的(sialylated)寡糖和N-乙醯基-乳糖 胺和/或含N-乙醯基-乳糖胺的寡糖在預防病毒感染(例如流感)後的繼發感染中特別 有效。因此，第一方面，本發明提供了合成的營養組合物，其適用於預防以神經氨酸酶 活性為特徵的病毒感染後的繼發感染，所述的營養組合物包含唾液酸化的寡糖和N-乙醯 基_乳糖胺和/或含N-乙醯基-乳糖胺的寡糖。第二方面，本發明提供了唾液酸化的寡糖和N-乙醯基-乳糖胺和/或含N-乙醯 基-乳糖胺的寡糖在製備合成的營養組合物中的用途，所述的營養組合物用於預防以神經 氨酸酶活性為特徵的病毒感染後的繼發感染。本發明還提供了用於預防以神經氨酸酶活性為特徵的病毒感染後的繼發感染的 方法，該方法包括給需要的個體施用治療量的合成的營養組合物，所述的營養組合物包含 唾液酸化的寡糖和N-乙醯基-乳糖胺和/或含N-乙醯基-乳糖胺的寡糖。無需結合理論，發明人認為上述寡糖組合在預防流感後的繼發感染中的功效例如 可能是中斷病毒和細菌性病原體作用間的協同的結果。特別的是，已知流感病毒在宿主上 皮細胞中的成功複製取決於病毒顆粒表面的神經氨酸酶的作用，其通過裂解將顆粒與宿主 細胞結合的唾液酸殘基，使得新複製的病毒顆粒從宿主細胞中游離出來。事實上，對於流感 最常開處的藥物是神經氨酸酶抑制劑。另外，公認的是產生的脫唾液酸的上皮細胞表面特 別易受致病菌的粘附，從而導致繼發感染。通過提供過量的唾液酸化的寡糖，病毒神經氨酸 酶的功效可以降低，從而減少脫唾液酸的上皮細胞表面的比例，同時提供過量的中性寡糖， 其模擬優選的致病菌上皮結合位點。發明詳述在本申請中，下列術語具有如下含義「嬰兒」指的是年齡小於12個月的兒童；「嬰兒配方」指的是為在生命期的第一個4至6個月期間的嬰兒的特別營養用途而 設計的並且通過其本身能滿足該類人的營養需求的食品；「第二階段配方」指的是為年齡超過4個月的嬰兒的特別營養用途而設計的並且構 成該類人的日趨多樣的飲食中的主要液體成分的食品；「成長乳」指的是適合幼兒特別營養需求的基於飲料的乳；「致病菌株」指的是鑑別的人病原體的菌株；「預防病毒感染後的繼發感染」指的是預防或減少病毒感染後致病菌的繼發感染的風險或減輕其嚴重性；「合成的營養組合物」指的是非天然存在的營養組合物；「幼兒」指的是年齡在1至6歲之間的兒童。除非另外說明，所有的百分數是按重量計算的。適合的唾液酸化的寡糖包括3」唾液醯基乳糖和6』唾液醯基乳糖。優選3』唾液醯 基乳糖和6』唾液醯基乳糖都存在。3』唾液醯基-乳糖和6』唾液醯基-乳糖可以通過色譜 法或過濾技術從天然來源(例如動物乳)中分離。可選擇的是，它們可以通過生物技術應用 特別的唾液酸轉移酶製備，或者通過基於酶的發酵技術(重組的或天然的酶)或者通過微 生物發酵技術。在後一個實例中，微生物或者可以表達它們天然的酶和底物或者可以被改 造以產生各自的底物和酶。可以應用單個的微生物培養物或混合的培養物。唾液醯基-寡 糖的形成可以通過受體底物開始，從任何聚合度(DP)啟動(從DP = 1向前啟動)。可選 擇的是，唾液醯基乳糖可以通過化學合成產生，由乳糖和游離的N』乙醯基神經氨酸(唾液 酸)開始。唾液醯基乳糖還可以例如從日本的Kyowa Hakko Kogyo商購獲得。除了唾液酸化的寡糖之外，本發明組合物還包含N-乙醯基_乳糖胺和/或含N-乙 醯基-乳糖胺的寡糖。適合的含N-乙醯基-乳糖胺的寡糖包括乳-N-四糖(LNT)和乳-N-新 四糖(LNnT)。LNT和LNnT可以通過將糖單元從供體部分酶轉移至受體部分來化學合成，應 用例如美國專利第5，288，637號中描述的糖基轉移酶。可選擇的是，LNT和LNnT可以通過 游離或結合至寡糖(乳果糖)上的酮_己糖(例如果糖)化學轉化為N-乙醯基己糖胺或 含 N-乙醯基己糖胺的寡糖來製備，如 Wrodnigg，T.M. ；Stutz,A. Ε. (1999) Angew. Chem. Int. Ed. 38 827-828中描述的。然後將以這種方法產生的N-乙醯基乳糖胺轉移至乳糖，作為受 體部分。 寡糖可以在相同的組合物中施用或者可以依次施用。可以根據本發明來預防的繼發感染包括呼吸道感染(例如肺炎、鼻竇炎和中耳 炎)以及胃腸道感染。本發明特別適用於預防嬰兒和幼兒中流感後的呼吸道的繼發感染， 例如中耳炎。如果該年齡組被考慮，組合物優選是營養組合物，其作為液體食用。其可以是營養 完全配方，例如嬰兒配方、第二階段配方或成長乳。可選擇的是，對於嬰兒和幼兒目標組的 較大者，組合物可以例如是果汁飲料或其它冷凍的或可穩定貯存的飲料或湯。本發明的營養組合物優選包含0. 05至2g的唾液酸化的寡糖/IOOg營養組合物 (以乾重計算)，更優選0. 1至2g和0. 1至3g的N-乙醯基-乳糖胺或含N-乙醯基-乳糖 胺乳糖的寡糖/IOOg營養組合物(以乾重計算)。如果組合物包含3』唾液醯基乳糖和6』唾液醯基乳糖，這兩種化合物優選以5 1 至1 2(3』唾液醯基乳糖6』唾液醯基乳糖)之間的比例存在。本發明的營養組合物優選進一步包含至少一種量為0. 3至10%的益生元。益生元 是不可消化的食物成分，其通過選擇性地刺激結腸中一種或有限數量的細菌的生長和/或 活性來有益地影響宿主，從而改善宿主健康。此類成分是不可消化的，這意味著它們不會在 胃或小腸中被分解和吸收，從而完整到達結腸，在那它們通過有益細菌選擇性地發酵。益生 元的實例包括某些寡糖，例如果寡糖(FOS)和半乳寡糖(GOS)。可以應用益生元的組合，例 如90%的GOS和10%的短鏈果寡糖(例如以商標Rafti丨ose 銷售的產品)或 ο%的菊糖(例如以商標Raftiline ·銷售的產品)。特別優選的益生元組合是70%的短鏈果寡糖 和30%的菊糖。本發明的組合物還可以包含至少一種益生菌株。益生菌株是對宿主健康或幸福 具有有益效果的微生物細胞製劑或微生物細胞組分。適合的益生菌株包括從芬蘭Valio Oy可獲得的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)ATCC 53103 (商標為LGG)、鼠李糖 乳桿菌 CGMCC 1. 3724、類乾酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei) CNCM 1-2116、BioGaia A. B以商標Reuteri銷售的路氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)株、紐西蘭BLIS技術有 限公司以名稱K12銷售的唾液鏈球菌DSM 13084、特別是丹麥ChristianHansen公司以商 標 Bbl2 銷售的乳雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis) CNCMI-3446、日本 Morinaga 乳品工 業有限公司以商標BB536銷售的長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)ATCC BAA-999、 Danisco以商標Bb_03銷售的短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)株、Morinagii以商標 M-16V銷售的短雙歧桿菌株、Procter & Gamble公司以商標Bifantis銷售的嬰兒雙歧桿菌 (Bifidobacterium infantis)株和 Institut Rosell(Lallemand)以商標 R0070 銷售的短 雙歧桿菌株，其量在10e3至10el2cfu/g粉末之間，更優選在10e7至10el2cfu/g粉末之間。合成的營養組合物優選是嬰兒配方。本發明嬰兒配方的通用組合物現在通過實例來描述。該配方包含蛋白質來源。如 果必需胺基酸含量的最小需求得以滿足並且良好生長得到保證，相信蛋白質的類型對於本 發明不是至關重要的。因此，可以應用以乳清、酪蛋白以及它們的混合物為基礎的蛋白質來 源，以及以大豆為基礎的蛋白質來源。至於所關注的乳清蛋白，蛋白質來源可以以酸乳清或 甜乳清或它們的混合物為基礎，並且可以包括所需比例的α-乳清蛋白和乳球蛋白。蛋白質可以是完整的或水解的或完整和水解的蛋白質的混合物。預期提供部分水 解的蛋白質(水解度在2至20%之間)，例如對於相信存在發生牛奶過敏性的風險的嬰兒。 如果需要水解的蛋白質，水解過程可以如預期的和本領域已知的那樣進行。例如，乳清蛋白 水解物可以通過一步或多步酶水解乳清級分來製備。如果作為原料所用的乳清級分基本上 不含乳糖，發現蛋白質在水解過程中經受更少的賴氨酸阻斷(blockage)。這使得賴氨酸阻 斷程度從約15%重量的總賴氨酸減少至小於約10%重量的賴氨酸；例如約7%重量的賴氨 酸，其大大改善了蛋白質來源的營養質量。本發明的嬰兒配方包含碳水化合物來源。儘管優選的碳水化合物來源是乳糖，但 是可以應用嬰兒配方中常規存在的任何碳水化合物來源，例如乳糖、蔗糖、麥芽糖糊精、澱 粉以及它們的混合物。碳水化合物來源優選貢獻配方總能量的35至65%。本發明的嬰兒配方包含脂質來源。脂質來源可以是適合嬰兒配方應用的任何脂 質或脂肪。脂肪來源優選包括棕櫚油精、高油的葵花子油和高油的紅花油。還可以添加必 需脂肪酸亞油酸和α -亞麻酸，以及少量含大量形成的花生四烯酸和二十二碳六烯酸的油 類，例如魚油或微生物油類。總之，脂肪含量優選例如貢獻配方總能量的30至55%。脂肪 來源優選具有η-6與η-3脂肪酸的比例為約5 1至約15 1，例如約8 1至約10 1。嬰兒配方還將包含營養顯著量的日常飲食中必需的所有維生素和礦物質。對於某 些維生素和礦物質，已經確定了最小需求量。嬰兒配方中任選存在的礦物質、維生素和其它 營養素的實例包括維生素Α、維生素Bi、維生素Β2、維生素Β6、維生素Β12、維生素Ε、維生素 K、維生素C、維生素D、葉酸、肌醇、煙酸、生物素、泛酸、膽鹼、鈣、磷、碘、鐵、鎂、銅、鋅、錳、氯
6化物、鉀、鈉、硒、鉻、鉬、牛磺酸和L-肉鹼。礦物質通常以鹽形式添加。特別的礦物質和其 它維生素的存在及量將取決於特定的嬰兒群而不同。如果需要，嬰兒配方可以包含乳化劑和穩定劑，例如大豆卵磷脂、檸檬酸單和而甘
油酯等。嬰兒配方可以任選包含其它可以具有有益效果的物質，例如乳鐵蛋白、核苷酸、核苷等。最後，配方將包含總量在0. 05至2g唾液醯基乳糖/IOOg配方的3』唾液醯基乳糖 和6』唾液醯基乳糖，以及量在0. 1至3g LNnT/100g配方的LNnT。3』唾液醯基乳糖6』 唾液醯基乳糖的比例在51至12之間。配方可以以任何適合的方法製備。例如，其可以通過將蛋白質、碳水化合物來源和 脂肪來源以適合的比例一起混合來製備。如果應用，乳化劑可以包括在這一步。維生素和 礦物質可以在這一步添加，但是通常是在後面添加的，以避免熱降解。可以將任何親脂的維 生素、乳化劑等在混合前溶於脂肪來源中。然後可以用水(優選經過反滲透的水)混合，以 形成液體混合物。水溫方便地為約50°C至約80°C，以有助於成分的分散。可以應用商購可 獲得的液化劑(Iiquefier)形成液體混合物。如果終產物是液體形式，則在該階段添加唾 液酸化的寡糖和N-乙醯基-乳糖胺和/或含N-乙醯基-乳糖胺的寡糖。如果終產物是粉 末，如果需要，同樣可以在該階段添加寡糖。然後將液體混合物均化，例如分兩個階段。然後可以將液體混合物熱處理以減少細菌載量，例如通過快速將液體混合物加熱 至溫度範圍為約80°C至約150°C達約5秒至約5分鐘。這可以通過蒸汽注射、高壓滅菌器 或通過熱交換器(例如板式熱交換器)來完成。然後，可以將液體混合物冷卻至約60°C至約85°C，例如通過快速冷卻。然後可以 再將液體混合物均化，例如分兩個階段，第一個階段在約IOMPa至約30MPa，並且第二個階 段在約2MPa至約lOMPa。然後可以將均化的混合物進一步冷卻，以添加任何熱敏感的組分， 例如維生素和礦物質。均化的混合物的PH和固體含量方便地在這一步調節。將均化的混合物轉移至適合的乾燥裝置(例如噴霧乾燥器或冷凍乾燥器)中並且 轉化為粉末。該粉末應當具有小於約15%重量的含溼量。唾液酸化的寡糖和N-乙醯基-乳 糖胺和/或含N-乙醯基-乳糖胺的寡糖可以在這一步通過與益生菌株(如果應用)一起 乾燥混合添加。如果優選液體產物，則可以將均化的混合物滅菌，然後無菌地填充至適合的容器 中，或者可以先填充至容器中然後滅菌。在另一個實施方案中，合成的營養組合物可以是添加物，其包含足以在個體中獲 得預期效果的量的唾液酸化的寡糖和N-乙醯基-乳糖胺和/或含N-乙醯基-乳糖胺的寡 糖。這種施用形式更適合較大的兒童和成人。唾液酸化的寡糖的日劑量優選從0.1至2g， 並且N-乙醯基-乳糖胺和/或含N-乙醯基-乳糖胺的寡糖的日劑量優選從0. 1至3g。添 加物中包含的寡糖的量將取決於添加物如何施用而相應地選擇。例如，如果添加物每天施 用兩次，則每個添加物可以包含0. 05至Ig唾液酸化的寡糖和0. 05至1. 5g N-乙醯基-乳 糖胺和/或含N-乙醯基-乳糖胺的寡糖。該添加物可以是例如片劑、膠囊劑、軟錠劑或液 體形式。添加物可以進一步包含保護性的水狀膠質(例如膠、蛋白質、改良澱粉)、粘合齊U、 成膜劑、包囊劑/材料、壁/殼材料、基質化合物、包衣、乳化劑、表面活性劑、增溶劑(油類、脂肪類、蠟類、卵磷酯類等)、吸附劑、載體、填充劑、共同化合物、分散劑、潤溼劑、加工助 劑(溶劑)、助流劑、掩味劑、增重劑、成凝膠劑和凝膠形成劑。添加物還可以包含常規的藥 物添加劑和佐劑、賦形劑和稀釋劑，包括但不限於水、任何來源的明膠、植物膠、木質素磺酸 鹽、滑石粉、糖、澱粉、阿拉伯膠、植物油、聚亞烷基二醇、矯味劑、防腐劑、穩定劑、乳化劑、緩 衝劑、潤滑劑、著色劑、潤溼劑、填充劑等。根據政府機構(例如USRDA)推薦，添加物可以進一步包含適合於口服或腸內施用 的有機或無機載體物質以及維生素、礦物質痕量元素和其它微量營養物。實施例1本發明的嬰兒配方組合物的實施例如下所示。該組合物僅通過舉例說明的方式給 出ο
權利要求
合成的營養組合物，其適用於預防以神經氨酸酶活性為特徵的病毒感染後的繼發感染，所述的營養組合物包含唾液酸化的寡糖和N 乙醯基 乳糖胺和/或含N 乙醯基 乳糖胺的寡糖。
2.權利要求1的組合物，其中唾液酸化的寡糖選自3』唾液醯基乳糖和6』唾液醯基乳糖。
3.權利要求2的組合物，其包含3』唾液醯基乳糖和6』唾液醯基乳糖。
4.權利要求3的組合物，其中3』唾液醯基乳糖和6』唾液醯基乳糖的比例在5 1至 1 2之間。
5.前述權利要求中任意一項的組合物，其中含N-乙醯基-乳糖胺的寡糖選自乳-N-四 糖和乳-N-新四糖。
6.前述權利要求中任意一項的組合物，其進一步包含益生菌株。
7.前述權利要求中任意一項的組合物，其是嬰兒配方、第二階段配方或成長乳。
8.權利要求7的組合物，其包含0.05至2g的唾液酸化的寡糖/IOOg組合物。
9.權利要求7或8的組合物，其包含0.1至3g的N-乙醯基-乳糖胺和/或含N-乙醯 基-乳糖胺的寡糖/IOOg組合物。
10.權利要求7至9中任意一項的組合物，其進一步包含至少一種量為佔組合物重量的 0.3至10%的益生元。
11.權利要求1至6中任意一項的組合物，其是添加物並且其每單位劑量包含0.1至 2g的唾液酸化的寡糖和0. 1至3g的N-乙醯基-乳糖胺和/或含N-乙醯基-乳糖胺的寡 糖。
12.權利要求1至11中任意一項的組合物在製備用於預防以神經氨酸酶活性為特徵的 病毒感染後的繼發感染的藥物或治療性營養組合物中的用途。
13.權利要求12的用途，其中以神經氨酸酶活性為特徵的病毒感染是流感。
14.權利要求13的用途，其中繼發感染是呼吸道感染。
15.權利要求12或13的用途，其中繼發感染是中耳炎。
全文摘要
本發明涉及合成的營養組合物，其適用於預防以神經氨酸酶活性為特徵的病毒感染後的繼發感染，所述的營養組合物包含唾液酸化寡糖和N-乙醯基-乳糖胺和/或含N-乙醯基-乳糖胺的寡糖。本發明進一步涉及該組合物在預防繼發感染例如中耳炎中的用途。
文檔編號A61K31/726GK101909615SQ200880123509
公開日2010年12月8日 申請日期2008年11月5日 優先權日2007年11月8日
發明者M-C·菲紹, N·斯普倫格 申請人:雀巢產品技術援助有限公司