檢測人DPP‑4的測定法的製作方法

2023-05-09 02:05:42 3

對電子提交的序列表的引用

與本申請一起提交的以ascii文本文件(名稱dpp4-100p1_sequence_listing.txt；大小：26,741位元組；和創建日期：2014年12月15日)電子提交的序列表的內容通過引用以其整體結合到本文中。

發明背景

二肽基肽酶iv(dpp-4)(也稱為cd26或腺苷脫氨酶結合蛋白)為脯氨醯寡肽酶家族中的ii型跨膜絲氨酸蛋白酶，其催化來自在第2位具有脯氨酸或丙氨酸的多肽的n端的n端二肽的水解(酶學委員會(ec)號3.4.14.5(brenda|iubmb))。許多趨化因子和肽激素，包括glp-1、glp-2、胃抑制性多肽(gip)、垂體腺苷酸環化酶激活多肽(pacap)和神經肽y被dpp-4切割和滅活。參見，例如，yarona.,naiderf.crit.rev.biochem.mol.biol.28,31–81(1993);mentleinr.regulpept.85(1):9-24(1999)。因此，dpp-4通過其抑制趨化因子和肽激素的能力調節葡萄糖代謝、食慾和疼痛調節。

除了作為調節性蛋白酶的作用，dpp-4還結合若干分子並誘導胞內信號轉導。具體地，dpp-4通過結合至包括腺苷脫氨酶(ada)在內的若干配體誘導t細胞共刺激/增殖和淋巴細胞-上皮細胞粘附。參見，例如，gines等人,biochem.j.361:203-209(2002)。還已經報導dpp-4增強t-細胞成熟和遷移、細胞因子分泌、抗體產生、b細胞的免疫球蛋白同種型轉換，和細胞毒性t細胞活化。ohnuma等人frontbiosci.13:2299-310(2008)。

dpp-4為110kda的糖蛋白，由位於染色體2(2q24.3)上的基因編碼(abbott等人immunogenetics.40(5):331-8(1994))，作為由776個胺基酸組成的同型二聚體起作用。每一單體由兩個結構域組成：α/β水解酶結構域和8-片β-螺旋槳結構域。dpp-4在幾種組織中廣泛表達，包括肝、肺、腎、上皮細胞和淋巴細胞。heike等人clinexpimmunol.74:431–434(1988)；gorrell等人scandjimmunol.54:249–264(2001)。當t細胞活化時，dpp-4表達在靜止t細胞上上調。還已經觀察到dpp-4的可溶、活性形式，包含大部分的胞外結構域(殘基39-766)，其包括關鍵催化結構域。ikushimah等人cellimmunol.215(1):106-10(2002)。

dpp-4基因敲除小鼠顯示改善的對口服葡萄糖負荷的葡萄糖耐受性、增加的胰島素和glp-1活性、對飲食誘導的肥胖的抗性和高脂飲食之後增加的胰島素敏感性。marguet等人,procnatlacadsciusa.97(12):6874-9(2000);conarello等人,procnatlacadsciusa.100(11):6825-30(2003)。除了其在代謝病症和血糖控制中的作用，dpp-4還牽涉控制免疫功能、細胞遷移、病毒進入細胞、癌症轉移和炎症。參見，例如，aytac等人,currdrugtargetsimmuneendocrmetaboldisord4(1):11-8(2004)。

最近，dpp-4表達經報導高度受白細胞介素-13(il-13)誘導。參見，例如，zhang等人,amjrespircritcaremed189:a4875(2014);shiobara等人,amjrespircritcaremed189:a4239(2014);brightling等人,amjrespircritcaremed189:a6670(2014);2014年1月27日提交的美國臨時申請號61/931,878，和2014年5月9日提交的美國臨時申請號61/990,932，對於所有目的其各自通過引用以其整體結合到本文中。il-13為114個胺基酸的細胞因子，未修飾的分子量大約12kda。mckenzie,a.n.等人jimmunol,1993.150:5436-44;minty,a.等人nature,1993.362:248-50。il-13水平已經顯示在許多疾病或病症中與疾病嚴重性相關聯，包括，但不限於，哮喘、慢性阻塞性肺病、特發性肺纖維化和特應性皮炎。例如，在過敏性炎症的哮喘和齧齒動物模型中，提高的il-13水平已經報導與疾病嚴重性相關聯(參見美國專利申請公開號2012-0052060，2012年3月1日出版，並通過引用以其整體結合到本文中)。

慢性阻塞性肺病(copd)包括具有不同程度慢性支氣管炎、小氣道疾病和肺氣腫的患者群體，特徵在於進行性不可逆肺功能下降，其對當前基於哮喘的療法響應差。zheng等人(jclininvest,2000.106:1081-93)證明在小鼠肺中il-13的過表達引起肺氣腫、提高的粘液產生和炎症，反映人copd的方面。因此跡象為il-13在copd的發病機制中發揮重要作用，特別是在具有哮喘樣特徵的患者中。

il-13也可在炎症性腸疾病的發病機制中發揮作用，並且已經與纖維化病況例如特發性肺纖維化(ipf)聯繫在一起。參見，例如，jovani,m.,等人currdrugtargets.2013.12:1444-52;和rafii,r.,等人jthoracdis.2013.1:48-73。

特應性皮炎是一種常見的慢性炎症性皮膚病，其常常與其它特應性病症例如過敏性鼻炎和哮喘相關(bieber,newenglandjournalofmedicine,2008,358:1483-1494)。il-13mrna的上調已經在亞急性和慢性特應性皮炎損傷中觀察到(tazawa等人,arch.dermatol.res.,2004,295:459-464;purwar等人,j.invest.derm.,2006,126,1043–1051;oh等人,jimmunol.,2011,186:7232-42)。

提高的dpp-4水平已經在哮喘、copd和ad患者中觀察到(參見，例如，美國臨時申請號61/931,878，2014年1月27日提交；和美國臨時申請號61/990,932，2014年5月9日提交，各自通過引用以其整體結合到本文中)。另外，在涉及哮喘患者的2b期臨床研究中，在用il-13抗體拮抗劑(tralokinumab)治療的患者中高血清dpp-4水平預測提高的響應率，將dpp-4鑑定為il-13介導的疾病或病症，包括il-13介導的肺疾病或病症(例如，哮喘、ipf或copd)或il-13介導的慢性炎症性皮膚疾病或病症(例如，特應性皮炎)的預測性生物標誌。參見brightling等人,amjrespircritcaremed189:a6670(2014)；和美國臨時申請號61/931,878，2014年1月27日提交；和美國臨時申請號61/990,932，2014年5月9日提交，其各自通過引用以其整體結合到本文中。因此，儘管已知增加的dpp-4水平與某些il-13介導的疾病或病症相關聯並且已知dpp-4血清水平預測患者對抗il-13療法的響應，但仍存在對測量患者(包括，但不限於，患有il-13介導的疾病或病症的患者)中dpp-4的量和/或測定dpp-4水平變化的特異和靈敏的測定的需求。儘管存在市售可得的可用於測量患者血清dpp-4水平的試劑，但這些市售可得的試劑或試劑盒依賴於多克隆抗體，其不僅由於批次間差異引入測定變異，並且/或者不是非常靈敏。因此，仍存在對特異和靈敏的抗體、試劑和/或免疫測定的需求，以測量患者中dpp-4的量和/或測定dpp-4水平變化。

發明概述

本公開內容提供抗二肽基肽酶-4(dpp-4)抗體，其可用在，例如，診斷測定中以測定受試者的dpp-4水平。本公開內容的示例性的抗dpp-4抗體包括：(1)小鼠單克隆抗體m3b7.6，由在用於專利程序目的的關於微生物保藏的國際識別的布達佩斯條約的規定下於2015年1月8日保藏在美國典型培養物保藏中心(americantypeculturecollection)(atcc),10801universityboulevard,manassas,va.20110-2209並分配atcc登錄號pta-121870的雜交瘤產生；(2)小鼠單克隆抗體m5b7.7，由在用於專利程序目的的關於微生物保藏的國際識別的布達佩斯條約的規定下於2015年1月8日保藏在美國典型培養物保藏中心(americantypeculturecollection)(atcc),10801universityboulevard,manassas,va.20110-2209並分配atcc登錄號pta-121871的雜交瘤產生；(3)大鼠單克隆抗體r11a2.15，由在用於專利程序目的的關於微生物保藏的國際識別的布達佩斯條約的規定下於2015年1月8日保藏在美國典型培養物保藏中心(americantypeculturecollection)(atcc),10801universityboulevard,manassas,va.20110-2209並分配atcc登錄號pta-121872的雜交瘤產生；和(4)大鼠單克隆抗體r11a9.11，由在用於專利程序目的的關於微生物保藏的國際識別的布達佩斯條約的規定下於2015年1月8日保藏在美國典型培養物保藏中心(americantypeculturecollection)(atcc),10801universityboulevard,manassas,va.20110-2209並分配atcc登錄號pta-121873的雜交瘤產生。

在某些方面，本公開內容提供分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物，或兩種或更多種這樣的抗體，其中所述一種或多種抗體競爭性抑制(1)從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6，(2)從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7，(3)從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15，或(4)從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11，或其任何組合的結合和/或結合與其相同的dpp-4表位。

在某些方面，本公開內容提供結合dpp-4的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物，其包含具有三個重鏈互補決定區(cdrs)vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的重鏈可變結構域(vh)，和具有三個輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的輕鏈可變結構域(vl)，其中分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的cdrs相同。

在某些方面，本公開內容提供的抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物可包含與從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的vh和vl相同的vh和vl。

在某些方面，本公開內容提供如上所述的抗原結合抗體片段。在某些方面，所述抗體片段可為fab片段、fab'片段、f(ab')2片段、fv片段或單鏈抗體分子。

本公開內容進一步提供在保藏號121870下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號121871下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號121872下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號121873下保藏在atcc的雜交瘤和/或其組合。在某些方面，本公開內容提供產抗體的細胞培養物，其包括在保藏號121870下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號121871下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號121872下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號121873下保藏在atcc的雜交瘤和/或其組合。在另一個方面，本公開內容提供由如本文所提供的雜交瘤或如本文所提供的產抗體的細胞培養物產生的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在某些方面，本公開內容所提供的抗體或其片段、變體或衍生物，或由本公開內容所提供的雜交瘤或細胞培養物產生的抗體，或其片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15或r11a9.11)，進一步包含與其融合的異源多肽。例如，在某些方面，所述異源多肽為穩定多肽、標籤、標記或其組合。

在某些方面，本公開內容提供的抗體或其片段、變體或衍生物，或由本公開內容所提供的雜交瘤或細胞培養物產生的抗體，或其片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15或r11a9.11)，綴合至異源部分。在某些方面，所述異源部分包括以下一種或多種：肽、蛋白、酶、脂質、異源抗體或其片段、可檢測標記或聚乙二醇(peg)。在某些方面，異源部分為，例如，生物素或釕螯合物。

本公開內容進一步提供包含如本公開內容所提供的抗體或其片段、變體或衍生物，和/或由本公開內容所提供的雜交瘤或細胞培養物產生的抗體，或其片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15或r11a9.11)的組合物。在某些方面，所述組合物包含至少兩種這樣的抗體的組合。

在另一個方面，本公開內容提供分離的多核苷酸，其包含編碼如本文所提供的抗體或其亞基、片段、變體或衍生物，或由本公開內容所提供的雜交瘤或細胞培養物所產生的抗體或其片段，或其亞基、片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15或r11a9.11)的核酸分子。本公開內容進一步提供包含如所提供的多核苷酸的載體。

在某些方面，本公開內容提供包含兩種或更多種編碼如本公開內容所提供的抗體或其片段、變體或衍生物，或由本公開內容所提供的雜交瘤或細胞培養物產生的抗體或其片段，或其片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15或r11a9.11)的核酸分子的組合物。在某些方面，所述兩種或更多種核酸分子位於同一載體中。本公開內容進一步提供包含位於同一載體中的如所提供的兩種或更多種核酸分子的載體。在某些方面，兩種或更多種核酸分子位於至少兩個單獨的載體中。本公開內容進一步提供所述兩個單獨的載體。

本公開內容進一步提供分離的宿主細胞，其包含提供的載體，或兩個或更多個提供的載體。本公開內容進一步提供製備如本公開內容所提供的抗dpp-4抗體或其亞基、片段、變體或衍生物，或由本公開內容所提供的雜交瘤或細胞培養物產生的抗體，或其亞基、片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和/或r11a9.11)的方法，其中所述方法包括(a)培養所提供的宿主細胞，和(b)回收抗體、其亞基、片段或衍生物。

在另一個方面，本公開內容提供用於測量樣品中的dpp-4水平的試劑盒，其中所述試劑盒包含如本公開內容所提供的抗體或其片段、變體或衍生物，或由本公開內容所提供的雜交瘤或細胞培養物產生的抗體，或其片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15或r11a9.11)。在某些方面，所述試劑盒包含至少兩種這樣的抗體或其片段、變體或衍生物。試劑盒可進一步包含固體支持物和/或檢測試劑。在某些方面，至少兩種抗體或其片段、變體或衍生物的一個可為捕獲抗體或其片段、變體或衍生物，並且至少兩種抗體或其片段、變體或衍生物的一個可為檢測抗體或其片段、變體或衍生物。在某些方面，檢測抗體可包含可檢測標記，例如，可檢測標記可為生物素，並且試劑盒可包含檢測試劑例如鏈黴親和素-辣根過氧化物酶(hrp)綴合物和hrp的比色底物，或可檢測標記可為釕螯合物。在某些方面：

捕獲抗體可為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體可為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體可為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體可為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體可為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體可為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體可為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體可為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體可為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體可為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體可為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體可為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體可為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體可為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物；和/或

捕獲抗體可為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體可為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物。

本公開內容進一步提供用於檢測一個或多個樣品中的dpp-4水平的免疫測定，其中所述免疫測定包括使用至少兩種抗dpp-4抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物，其中一種抗dpp-4抗體可為競爭性抑制從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7的結合和/或結合與其相同的dpp-4表位的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物；並且其中一種抗dpp-4抗體包括競爭性抑制從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的結合和/或結合與其相同的dpp-4表位的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在某些方面，所述免疫測定包括使用至少兩種抗dpp-4抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物，其中一種抗dpp-4抗體可為包含具有三個重鏈cdrsvhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的vh和具有三個輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的vl的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物，其中所述分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7的cdrs相同；並且其中兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種可為包含具有三個重鏈cdrsvhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的vh和具有三個輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的vl的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物，其中所述分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的cdrs相同。

在某些方面，免疫測定包括使用至少兩種抗dpp-4抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物，其中兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種可為包含與從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7的vh和vl相同的vh和vl的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物；並且其中兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種可為包含與從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的vh和vl相同的vh和vl的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在某些方面，免疫測定可為夾心免疫測定，其包括使用附著在固體支持物上的第一個抗dpp-4「捕獲」抗體或其抗原結合片段，和第二個抗dpp-4「檢測」抗體或其抗原結合片段(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和/或r11a9.11)。例如，免疫測定可包括將捕獲抗體或其抗原結合片段附著到固體支持物；在足以允許dpp-4(如果樣品中存在的話)結合捕獲抗體或其抗原結合片段的條件下施加檢驗樣品或對照樣品；在足以允許結合已經結合到捕獲抗體或其抗原結合片段的dpp-4的條件下施加檢測抗體或其抗原結合片段；和測量結合到dpp-4的檢測抗體或其抗原結合片段的量。在某些方面，檢測抗體可包含可檢測標記，例如，可檢測標記可為生物素，並且試劑盒可包含檢測試劑例如鏈黴親和素-辣根過氧化物酶(hrp)綴合物和hrp的比色底物，或可檢測標記可為釕螯合物。

在某些方面，免疫測定可包括使用捕獲抗體和檢測抗體，其中：

捕獲抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物；和/或

捕獲抗體為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在某些方面，本公開內容提供測量從受試者獲得的樣品中的dpp-4的量的方法，其中所述方法包括使用提供的免疫測定或試劑盒，和/或所提供的抗體或其片段、變體或衍生物，或兩種或更多種這樣的抗體(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和/或r11a9.11)的組合測定樣品。在某些方面，樣品可為全血、血清、血漿、唾液、尿液、痰、支氣管肺泡灌洗液、肺上皮細胞或鼻息肉或皮膚的一種或多種。在某些方面，受試者具有選自以下的疾病或病況：il-13-介導的疾病或病症、肺疾病或病症和慢性炎症性皮膚疾病或病症。例如，疾病或病況可為哮喘、特應性哮喘、未經皮質類固醇治療的哮喘(corticosteroidnaiveasthma)、慢性哮喘、皮質類固醇抵抗性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、抽菸引起的哮喘、不受皮質類固醇控制的哮喘、特發性肺纖維化(ipf)、慢性阻塞性肺病(copd)、潰瘍性結腸炎(uc)、特應性皮炎(ad)、過敏性鼻炎、慢性鼻竇炎、皮膚纖維化、過敏性接觸性皮炎、溼疹和/或銀屑病。在某些方面，樣品可從受試者獲得並且可提交用於測量樣品中的dpp-4水平。在某些方面，受試者可為哮喘患者，並且從患者獲取的樣品可為血清。

附圖簡述

圖1：用於rimms方案的引流淋巴結注射位點。對人dpp-4特異的小鼠和大鼠單克隆抗體使用多個位點重複免疫(rimms)方案(kilpatrick,k.,等人,hybridoma16:381-389(2009))產生。簡言之，兩隻wistar大鼠分別在第0、2、5、7、9和13天用30、15、7、3、3和3µgcd26免疫，至如圖1中所示的引流淋巴結位點a、b和c。小鼠免疫按照相同的時間表，但在每一時間點用一半的抗原量。

圖2a-d：抗dpp-4小鼠和大鼠抗體對人dpp-4特異，如使用直接結合elisa所顯示的。針對人dpp-4(r-dpp-4-his)(a)或人gp130-his(b)的直接結合elisa使用來自用人dpp-4免疫的兩隻大鼠(r9472和r9473)的免疫前(左側)或第13天檢驗-出血(右側)血清。第13天的大鼠血清特異性結合人dpp-4，而使用免疫前的血清未觀察到特異性結合。針對人dpp-4(r-dpp-4-his)(c)或人gp130-his(d)的直接結合elisa使用來自用人dpp-4免疫的5隻小鼠(ms9447、ms9448、ms9449、ms9450和ms9451)的免疫前(左側)或第13天檢驗-出血(右側)血清。第13天的小鼠血清特異性結合人dpp-4，而使用免疫前的血清未觀察到特異性結合。

圖3a-b：在免疫測定中使用m3b7.6抗體(a)或m5b7.7(b)作為捕獲抗體檢測人dpp-4。a.在夾心elisa測定中，將dpp-4加入pbs或1%正常人血清(nhs)中，使用m3b7.6作為捕獲抗體，r11a2.15、r11a9.11或對照抗體r222113(r&dsystemscatalogno.mab1180)作為檢測抗體。在夾心elisa測定中，m3b7.6+r11a2.15或m3b7.6+r11a9.11在測量人dpp-4中提供最好的靈敏度。b.在夾心elisa測定中，將dpp-4加入pbs或1%正常人血清(nhs)中，使用m5b7.7作為捕獲抗體，r11a2.15、r11a9.11或對照抗體r222113(r&dsystemscatalogno.mab1180)作為檢測抗體。在夾心elisa測定中，m5b7.7+r11a2.15或m5b7.7+r11a9.11在測量人dpp-4中提供最好的靈敏度。這些結果，結合圖2中報告的結果，證明抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11檢測內源和重組人dpp-4二者。另外，與檢測dpp-4的抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11相比，市售可得的抗體(r222113)在這些免疫測定中未能檢測到dpp-4。

圖4a-e：小鼠單克隆抗體m3b7.6和m5b7.7互相競爭，而大鼠單克隆抗體r11a2.15和r11a9.11互相競爭。a.用於測定如圖4b-e中所示的m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11的相對結合特異性和競爭概況的octet測定的示意圖。簡言之，首先將檢驗抗體生物素化，然後在鏈黴親和素生物傳感器上在200μl中以20μg/ml的濃度捕獲5min。生物傳感器然後用200μlpbs緩衝液洗滌1min，然後用10μg/ml重組人dpp-4孵育5min，並用200μlpbs緩衝液洗滌1min。將競爭抗體與檢驗抗體以1:1比率和各自20μg/ml的終濃度混合併以200μl裝載到生物傳感器上5min。顯示額外結合檢驗抗體的競爭抗體被認為具有不同表位。否則其被認為是共享相同表位。b.使用m3b7.6(a)作為檢驗抗體的octet測定結果。m5b7.7(b)顯示與m3b7.6(a)相同的結合概況，而r11a2.15(c)和r11a9.11(d)顯示與m3b7.6(a)不同的結合概況。基於這些結果，抗體m3b7.6和m5b7.7共享相同或重疊的表位。c.使用m5b7.7(b)作為檢驗抗體的octet測定結果。m3b7.6(a)顯示與m5b7.7(b)相同的結合概況，而r11a2.15(c)和r11a9.11(d)顯示與m5b7.7(b)不同的結合概況。基於這些結果，抗體m5b7.7和m3b7.6共享相同或重疊的表位。d.使用r11a2.15(c)作為檢驗抗體的octet測定結果。r11a9.11(d)顯示與r11a2.15(c)相同的結合概況，而m3b7.6(a)和m5b7.7(b)顯示與r11a2.15(c)不同的結合概況。基於這些結果，抗體r11a2.15和r11a9.11共享相同或重疊的表位。e.使用r11a9.11(d)作為檢驗抗體的octet測定結果。r11a2.15(c)顯示與r11a9.11(d)相同的結合概況，而m3b7.6(a)和m5b7.7(b)顯示與r11a9.11(d)不同的結合概況。基於這些結果，抗體r11a9.11和r11a2.15共享相同或重疊的表位。

發明詳述

本公開內容提供抗dpp-4單克隆抗體、包含一種或多種這些抗體的測定試劑盒，和使用一種或多種這些抗體用於檢測和測量獲自人類患者的樣品中的dpp-4水平的穩健、靈敏和特異的免疫測定。

在本說明書和所附的權利要求中，單數形式「a」、「an」和「the」包括複數，除非上下文另有清楚指示。術語「a」(或「an」)，以及術語「一個或多個」和「至少一個」在本文中可互換使用。

此外，本文中所使用的「和/或」理解為兩個指定特徵或組分各自的具體公開內容，具有或不具有另一特徵或組分。因此，如在本文中在短語例如「a和/或b」中使用的，術語「和/或」意在包括「a和b」、「a或b」、「a」(單獨的)和「b」(單獨的)。同樣，如在短語例如「a、b和/c」中使用的，術語「和/或」意在涵蓋每一下列方面：a、b和c；a、b或c；a或c；a或b；b或c；a和c；a和b；b和c；a(單獨的)；b(單獨的)和c(單獨的)。

無論哪一方面在本文中用語言「包括」描述，也提供以「由……組成」和/或「基本由……組成」描述的其它類似方面。

如貫穿說明書和權利要求與數值相連使用的，術語「約」表示本領域技術人員熟悉和可接受的準確度區間。一般而言，這樣的準確度區間為±10%。

除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語具有與本公開內容相關領域普通技術人員所通常理解的相同的含義。例如，concisedictionaryofbiomedicineandmolecularbiology(生物醫學和分子生物學簡明詞典),juo,pei-show,第2版,2002,crcpress;thedictionaryofcellandmolecularbiology(細胞和分子生物學詞典),第3版,1999,academicpress;和oxforddictionaryofbiochemistryandmolecularbiology(生物化學和分子生物學牛津詞典),2000年修訂,oxforduniversitypress,為技術人員提供本公開內容中使用的許多術語的通用詞典。

單位、前綴和符號以其systèmeinternationaldeunites(si)接受的形式表示。數值範圍包括定義範圍的數字。除非另有說明，胺基酸序列從左至右以氨基至羧基定向書寫。本文提供的標題並非對公開內容各方面的限制，其可作為整體參考說明書。相應地，緊接下面定義的術語通過以其整體參考說明書更完整定義。

「分離」的物質、組合物、實體和/或物質、組合物或實體的任何組合，或其任何語法變體，例如，分離的生物學材料，為不在其天然環境中的物質。不需要特定的純化水平。例如，分離抗體為不在其天然或自然環境中產生或不位於其天然或自然環境中的抗體。重組產生的生物學材料被認為是如本文所公開的分離的，在非天然細胞例如雜交瘤中產生的材料同樣如此。物質，例如，生物學材料，如果已經通過任何合適的技術分離、分級或部分或基本上純化，也認為是「分離的」。在某些方面，分離的物質，例如，分離的生物學材料，可為「非天然存在的」。

如本文所使用的，術語「非天然存在的」物質、組合物、實體和/或物質、組合物或實體的任何組合，或其任何語法變體是一種條件術語，其明確排除，但僅排除，本領域普通技術人員很好地理解為「天然存在的」或由法官或行政機構例如美國專利商標局(unitedstatespatentandtrademarkoffice)或司法機構確定或解釋為在任何時間或可能在任何時間「天然存在」的物質、組合物、實體和/或物質、組合物或實體的任何組合的那些形式。例如，術語「非天然存在的抗體」明確排除天然存在的那些抗體，例如，將會天然存在於暴露於正常抗原刺激環境的小鼠的免疫系統中的抗體，或由行政機構，例如美國專利商標局，或司法機構，例如聯邦法院，最終確定為「天然存在的」抗體。

「多核苷酸」或「核酸」，如本文中可互換使用的，指任何長度的核苷酸聚合物，並且包括dna和rna。核苷酸可為脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修飾的核苷酸或鹼基，和/或其類似物，或可由dna或rna聚合酶引入聚合物中的任何底物。多核苷酸可包含修飾的核苷酸，例如，甲基化的核苷酸和其類似物。前述描述適用於本文提及的所有多核苷酸，包括rna和dna。

如本文所使用的術語「表達」指基因產生生化物質，例如本文所提供的轉運體分子的過程。該過程包括基因在細胞中功能存在的任何表現，包括，但不限於，基因敲減以及瞬時表達和穩定表達二者。其包括但不限於基因轉錄為一個或多個mrnas，和這樣的mrnas翻譯為一個或多個多肽。如果終產物為生化物質，表達包括產生該生化物質或任何前體。

「表達產物」可為核酸，例如基因轉錄產生的信使rna，或多肽。本文所描述的表達產物進一步包括具有轉錄後修飾例如多腺苷酸化的核酸，或具有翻譯後修飾例如甲基化、糖基化、添加脂質、與其它蛋白亞基締合、蛋白水解切割等的多肽。

術語「載體」或「表達載體」在本文中用於指用作媒介以引入宿主細胞和在宿主細胞中表達目的表達產物的載體。如本領域技術人員所已知的，這樣的載體可容易地選自質粒、噬菌體、病毒和反轉錄病毒。一般而言，載體可包含選擇標誌、適當的限制位點以幫助克隆特定核酸和進入真核或原核細胞和/或在真核或原核細胞中複製的能力。載體的實例包括，但不限於，病毒載體、裸露dna或rna表達載體、質粒、粘粒或噬菌體載體、與陽離子縮合劑締合的dna或rna表達載體、包裹在脂質體中的dna或rna表達載體，和某些真核細胞，例如生產細胞。

術語「宿主細胞」指內含使用重組dna技術構建的並且編碼至少一個表達產物的載體的細胞。在描述從重組宿主分離表達產物的過程中，除非另有清楚說明，術語「細胞」和「細胞培養物」可互換使用，指表達產物的源，即從「細胞」回收表達產物意指從離心下來的全細胞回收，或從包含培養基和懸浮細胞二者的細胞培養物回收。

術語「多肽」、「肽」和「蛋白質」在本文中可互換使用，指任何長度的胺基酸聚合物。聚合物可為線性或分支的，其可包含修飾的胺基酸，並且非胺基酸可使其中斷。該術語還涵蓋已經天然或幹預修飾的胺基酸聚合物；例如，二硫鍵形成、糖基化、脂質化、乙醯化、磷酸化或任何其它操作或修飾，例如與標記元件綴合。定義中還包括，例如，包含一個或多個胺基酸類似物(包括，例如，非天然胺基酸等)以及本領域已知的其它修飾的多肽。應理解，由於本公開內容的多肽基於抗體，在某些實施方案中，多肽可作為單鏈或締合鏈存在。

如本文所使用的術語「dpp-4」指由dpp-4基因(cdna:seqidno:7)編碼的二肽基肽酶iv蛋白(ec3.4.14.5;uniprot:p27487(膜結合形式：seqidno:5；可溶形式：seqidno:6))。dpp-4也稱為dpp-iv、腺苷脫氨酶複合蛋白2或cd26(分化簇26)。dpp-4與吸引素、fap、dpp8和dpp9有關。dpp-4為高度保守的多功能ii型跨膜糖蛋白，其存在於循環中(血漿)和幾種細胞類型表面上，包括上皮、內皮和淋巴細胞。dpp-4為絲氨酸蛋白酶家族的部分，牽涉t細胞共刺激、趨化因子生物學、ii型糖尿病和腫瘤生物學(zhong等人,atherosclerosis2013;226:305-314)。dpp-4的內源底物包括廣泛不同的含脯氨酸肽，例如生長因子、趨化因子、神經肽和血管活性肽(gorrell,m.,clin.sci.108,277-292,2005;mcintosh,c.h.s.,等人int.j.biochem.cellbiol.38,860-872,2006)。giovannini-chami提示了dpp-4在炎症性呼吸疾病如哮喘中的作用(giovannini-chami等人,europeanrespiratoryjournal.2012may;39(5):1197-205)，其發現具有塵蟎過敏性鼻炎的兒童的鼻上皮中提高的dpp-4轉錄(和其它th2標記基因)與不受控的哮喘相關。術語dpp-4也包括其片段、變體(例如，本領域已知的k1r、v7i、s437i、t557i、d663e變體)和衍生物(例如，dpp-4蛋白的糖基化或無糖基化蛋白形式，或該蛋白的其它化學修飾形式)。

術語「水平」或「量」，例如，如在「dpp-4水平」或「dpp-4的量」中，指使用用於檢測生物樣品中dpp-4(蛋白表達)的存在或表達的分析方法做出的測量，其指示生物樣品中dpp-4的或dpp-4對應的存在、不存在、絕對量或濃度、相對量或濃度、滴度、表達水平、測量水平的比率等。「值」或「水平」的準確性質取決於用以檢測dpp-4的具體分析方法(例如，如本文中所提供的免疫測定)的具體設計和元件。參見，例如，u.s.2010/00221752。

如本文關於dpp-4所使用的，術語「提高的dpp-4」、「高dpp-4」、「提高的dpp-4水平」或「高dpp-4水平」指比正常水平或範圍高的生物樣品(例如，血清)中的水平。dpp-4的正常水平或範圍根據標準實踐定義。因此，可將在特定生物樣品中測量的水平與相似正常樣品中測定的水平或水平範圍比較。當dpp-4在檢驗樣品中以比正常樣品中更高的水平或範圍存在時，dpp-4的水平稱為提高的。

如本文所使用的，術語「抗體」(或其片段、變體或衍生物)指在b細胞產生的典型抗體的背景下，至少能夠結合抗原的最小抗體部分，例如，至少重鏈的可變結構域(vh)和輕鏈的可變結構域(vl)。脊椎動物系統中基本的抗體結構已相對較好地理解。參見，例如，harlow等人,antibodies:alaboratorymanual(抗體：實驗室手冊),(coldspringharborlaboratorypress,第2版.1988)。除非另外指出，抗體「片段」、「變體」或「衍生物」指抗原結合「片段」、「變體」或「衍生物」。

當關於如本文所公開的抗體時，術語「片段」、「變體」、「衍生物」和「類似物」可包括保留參考抗體的至少一些活性，例如抗原結合活性，但結構上不同的任何抗體。抗體的片段包括，例如，fab、fab'和f(ab')2、fd、fvs、單鏈fvs(scfv)、單鏈抗體、二硫鍵連接的fvs(sdfv)片段。變體包括如上所述的片段，並且還包括由於胺基酸置換、缺失或插入引起的具有改變的胺基酸序列(例如，在可變結構域中)的抗體。變體可自發發生或有意構建。有意構建的變體可使用本領域已知的突變技術產生。變體抗體可包括保守或非保守胺基酸置換、缺失或插入。變化僅受抗體保留參考抗體功能的約束限制，例如，與參考抗體結合相同表位，或競爭性抑制參考抗體。衍生物為已經改變以便呈現天然抗體上不存在的額外特徵的抗體。實例包括包含抗體的抗原結合結構域的融合蛋白或綴合的抗體。「衍生的」抗體可還包含通過功能側基反應化學衍生的一個或多個胺基酸。「衍生物」還包括包含一個或多個標準或合成的20種標準胺基酸的胺基酸衍生物的那些抗體。例如，4-羥脯氨酸可置換脯氨酸；5-羥賴氨酸可置換賴氨酸，3-甲基組氨酸可置換組氨酸；高絲氨酸可置換絲氨酸；和鳥氨酸可置換賴氨酸。

輕鏈和重鏈二者均分為結構和功能同源區。術語「恆定」和「可變」功能上使用。在這方面，將會理解輕鏈(vl)和重鏈(vh)部分二者的可變結構域決定抗原識別和特異性。相反，輕鏈(cl)和重鏈(ch1、ch2或ch3)的恆定結構域賦予重要的生物學性質，例如分泌、經胎盤遷移、fc受體結合、互補結合等。

如上文所指示的，可變區允許結合分子選擇性識別和特異性結合抗原上的表位。即，抗體的vl結構域和vh結構域，或互補決定區(cdrs)子集，聯合形成定義三維抗原結合位點的可變區。該四元結合分子結構形成在y的每一臂的末端存在的抗原結合位點。更具體地，抗原結合位點由每一vh和vl鏈上的三個cdrs定義。

在抗體中，每一抗原結合結構域中存在的6個「互補決定區」或「cdrs」為短的非連續的胺基酸序列，隨著抗體在水性環境中呈現其三維構象，其特別定位以形成抗原結合結構域。抗原結合結構域中的剩餘胺基酸，稱為「框架」區，顯示更少的分子間可變性。框架區主要採用β摺疊構象並且cdrs形成環，其連接β摺疊結構，並且在一些情況下形成β摺疊結構的一部分。因此，框架區作用於形成提供通過鏈間非共價相互作用以正確定向放置cdrs的支架。通過放置的cdrs形成的抗原結合結構域定義與免疫反應性抗原上的表位互補的表面。該互補表面促進抗體與其同源表位的非共價結合。對於任何給定的重鏈或輕鏈可變區，本領域普通技術人員可容易地鑑定分別包含cdrs和框架區的胺基酸，因為其已被精確定義(參見，"sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(免疫相關蛋白序列),"kabat,e.,等人,u.s.departmentofhealthandhumanservices,(1983);以及chothia和lesk,j.mol.biol.,196:901-917(1987)，通過引用以其整體結合到本文中)。

在其中術語的兩個或更多個定義在本領域中使用和/或接受的情況下，如本文所使用的術語的定義意在包括所有這樣的含義，除非明確說明相反。一個具體實例為使用術語「互補決定區」(「cdr」)描述重鏈和輕鏈多肽二者的可變區中存在的非連續抗原結合位點。該特定區域已經由kabat等人,u.s.dept.ofhealthandhumanservices,"sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(免疫相關蛋白序列)"(1983)和由chothia等人,j.mol.biol.196:901-917(1987)描述，其通過引用結合到本文中，其中該定義包括當相互比較時胺基酸殘基的重疊或子集。雖然如此，任一定義指抗體或其變體的cdr的應用意在在如本文所定義和使用的術語的範圍中。

抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物包括，但不限於，多克隆、單克隆、人、人源化或嵌合抗體，單鏈抗體，表位結合片段，例如fab、fab'和f(ab')2，fd、fvs、單鏈fvs(scfv)、單鏈抗體、二硫鍵連接的fvs(sdfv)、包含vl或vh結構域的片段、fab表達文庫產生的片段。scfv分子為本領域所已知並且在，例如，美國專利5,892,019中描述。本公開內容涵蓋的免疫球蛋白或抗體分子可為任何類型(例如，igg、ige、igm、igd、iga和igy)、種類(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)或亞類的免疫球蛋白分子。

「特異性結合」一般指抗體或其片段、變體或衍生物經由其抗原結合結構域結合表位，並且結合需要抗原結合結構域和表位之間的一些互補性。根據該定義，當經由其抗原結合結構域結合表位比結合隨機不相關的表位更容易時，抗體被稱為「特異性結合」表位。

如果抗體或其片段、變體或衍生物優先結合表位至其在某種程度上阻斷參考抗體或抗原結合片段與表位結合的程度，那麼稱其為競爭性抑制參考抗體或抗原結合片段與給定表位結合。競爭性抑制可通過本領域已知的任何方法測定，例如，競爭elisa測定。結合分子可稱為競爭性抑制參考抗體或抗原結合片段與給定表位結合至少90%、至少80%、至少70%、至少60%或至少50%。

本文所公開的抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物可依據其識別或特異性結合的抗原的表位或部分，例如靶多糖描述或定義。例如，與本公開內容中提供的抗體的抗原結合結構域特異性相互作用的人dpp-4的部分為「表位」。

如本文所使用的，術語「il-13介導的疾病或病症」指在具有病症的受試者中異常il-13水平(單獨或與其它介質一起)引起、惡化、相關或延長的任何病理學。il-13介導的疾病或病症的非限制性實例包括哮喘、特發性肺纖維化(ipf)、慢性阻塞性肺病(copd)、潰瘍性結腸炎(uc)、特應性皮炎(ad)、過敏性鼻炎或慢性鼻竇炎。

如本文所使用的，術語「肺疾病或病症」指至少部分影響肺或呼吸系統的任何病理學。非限制性實例包括哮喘、特應性哮喘、未經皮質類固醇治療的哮喘、慢性哮喘、皮質類固醇抵抗性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、抽菸引起的哮喘、不受皮質類固醇控制的哮喘、ipf、copd、過敏性鼻炎或慢性鼻竇炎。在某些方面，肺疾病或病症為il-13介導的。

如本文所使用的，術語「慢性炎症性皮膚疾病或病症」指至少部分影響皮膚的任何病理學。非限制性實例包括特應性皮炎、皮膚纖維化、過敏性接觸性皮炎、溼疹或銀屑病。在某些方面，慢性炎症性皮膚疾病或病症為il-13介導的。

術語「哮喘」指作為可逆的氣道阻塞和/或支氣管高反應性存在的疾病，在一些情況下與潛在的炎症有關。哮喘的實例包括過敏性哮喘、特應性哮喘、未經皮質類固醇治療的哮喘、慢性哮喘、皮質類固醇抵抗性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、抽菸引起的哮喘、不受皮質類固醇控制的哮喘和如，例如，expertpanelreport3:guidelinesforthediagnosisandmanagementofasthma,nationalasthmaeducationandpreventionprogram(2007)("naeppguidelines")(通過引用以其整體結合到本文中)中所提及的其它哮喘。

如本文所使用的術語「copd」指慢性阻塞性肺病。術語「copd」包括兩種主要病況：肺氣腫和慢性阻塞性支氣管炎。

術語「特發性肺纖維化」(ipf)指以肺的進展性瘢痕或纖維化為特徵的疾病。其為特定類型的間質性肺病，其中肺泡逐漸被纖維組織替代。伴隨ipf，進展性瘢痕形成導致正常薄和柔韌的組織增厚和變得堅硬，使得肺更難擴張，防止氧容易地進入血流。參見，例如，am.j.respir.crit.caremed.2000.161:646-664。

術語「潰瘍性結腸炎」(uc)指影響結腸直腸的胃腸(gi)道的炎症性病症，包括特徵性潰瘍或開放性潰瘍。uc為間歇性疾病，具有惡化的症狀周期和相對無症狀的周期。活動疾病的症狀包括長期(數周)持續的混有血液的恆定腹瀉、體重減輕、從gi道慢性失血、貧血、腹痛和輕微不適至痛苦的腸運動或伴隨腸運動的痛苦的腹部絞痛。參見，例如，danese,等人nengljmed.2011365(18):1713-25。

如本文所使用的，術語「特應性皮炎」指慢性炎症性、復發性、非接觸傳染的和發癢的皮膚病症，其常常與其它特應性疾病例如過敏性鼻炎和哮喘相關(bieber,newenglandjournalofmedicine,2008,358:1483-1494)。術語「特應性皮炎」等於「神經性皮炎」、「特應性溼疹」或「內源性溼疹」。特異性皮炎的具體形式，從其發生的位置或從其出現或從引起其的應激因素得名，根據本公開內容也被術語「特應性皮炎」包括。這些包括，但不限於，屈側性溼疹(eczemaflexurarum)、eczemamulluscatum、eczemaverrucatum、種痘後溼疹、eczemadyskoides、dyshydroticeczema、微生物性溼疹、錢幣狀溼疹、seborrhobiceczema和其它形式的溼疹；口周皮炎和眶周皮炎。如本文所使用的，術語特應性皮炎還包括頻繁發生的細菌二次感染(例如由於例如金黃色葡萄球菌感染引起的那些)、膿皮病例如接觸性膿皰病及其衍生病，以及毛囊性須瘡或病毒二次感染。il-13牽涉疾病的發病機制並且是重要的體內誘導物。參見，例如，oh等人,j.immunol.186:7232-42(2011);tazawa等人,arch.dermatol.res.295:459-464(2004);metwally等人egyptj.immunol.11:171-7(2004)。

如本文所使用的術語「受試者」或「患者」指任何受試者，特別是哺乳動物受試者，包括任何人類或非人動物。術語「非人動物」包括所有脊椎動物，例如，哺乳動物和非哺乳動物，例如，非人靈長類、綿羊、狗、貓、馬、牛、熊、雞、兩棲類和爬行類等。

在本公開內容的一些方面，受試者為幼稚受試者。幼稚受試者為尚未給予治療，例如治療劑的受試者。在一些方面，幼稚受試者在診斷為具有il-13-介導的疾病或病症，例如哮喘、ifp、copd、ad或uc之前尚未用治療劑治療。在另一個方面，受試者在診斷為具有il-13-介導的疾病或病症之前已經接受治療和/或一個或多個劑量的治療劑(例如，能夠調整與il-13-介導的疾病或病症、肺疾病或病症、慢性炎症性皮膚疾病或病症或炎症性腸疾病或病症有關的炎性應答的治療劑)。

如本文所使用的，術語「il-13拮抗劑」指可影響il-13在體外或體內的表達、活性或半衰期，或具有il-13-介導的疾病或病症的受試者中il-13引起或惡化的症狀、病理學或後遺症的任何藥劑。il-13拮抗劑可為如下定義的任何「治療劑」，其可直接或間接抑制、減少或中和il-13活性，抑制或減少il-13表達、減少il-13半衰期，或可防止由於il-13引起的症狀的惡化。在某些方面，il-13拮抗劑為抗il-13單克隆抗體，例如，tralokinumab(seqidnos3和4)，或2012年3月1日出版的美國專利申請公開號2012-0052060(通過引用以其整體結合到本文中)中描述的其它抗il-13單克隆抗體。在其它方面，il-13拮抗劑包括，但不限於：(a)抗人il-13抗體，例如，來金珠單抗(lebrikizumab)(seqidnos1和2)(milr1444a/rg3637,roche/genentech)、abt-308(abbott)、gsk679586(glaxosmithkline)或qax576(novartis)；(b)抗人il-13rαl抗體，例如，merckmk6105；(c)il-13-毒素綴合物，例如il-13-pe38qqr(neopharm,inc.)；(d)il-4突變蛋白aerovant™(aerovance,inc.)；(e)抗il-4rα抗體例如dupilumab/regn668(regeneron)；(f)定向於il-4rα的雙鏈寡核苷酸例如air645(isis)；或(g)il-4/il-13雙特異性抗體例如gsk2434735(glaxosmithkline)。

如本文所使用的術語「治療劑」指給予受試者以產生期需的，通常有益的效果的任何治療活性物質。術語治療劑包括，例如，典型的低分子量治療劑，通常稱為小分子藥物，和生物製品，包括但不限於：抗體或其活性片段、肽、脂質、蛋白藥物、蛋白綴合物藥物、酶、寡核苷酸、核酶、遺傳物質、朊病毒、病毒、細菌和真核細胞。治療劑也可為前藥，當給予受試者時其代謝為期需的治療活性物質。在一些方面，治療劑為預防劑。另外，治療劑可為藥學上配製的。治療劑也可為放射性同位素或通過一些其它形式的能量例如光或超聲能量，或通過可全身給予的其它循環分子活化的藥劑。

如本文所使用的術語「樣品」包括從受試者獲得的任何生物學流體或組織，例如全血、血清、肌肉、唾液。樣品包括任何生物學流體或組織，例如全血、血清、肌肉、唾液、尿液、滑液、骨髓、腦脊液、鼻分泌物、痰、羊水、支氣管肺泡灌洗液、肺組織、外周血單核細胞、總白血細胞、淋巴結細胞、脾細胞、扁桃體細胞或皮膚。在一些特定方面，樣品為血液或其級分、肌肉、皮膚或其組合。樣品可通過本領域已知的任何手段獲得。

為了應用本公開內容的方法和系統，來自患者的樣品可在任何時間獲得。在一些情況下，連續的樣品可在治療開始後或治療停止後從患者獲得。樣品可，例如，由醫療提供者(例如，醫生)或醫療福利提供者要求，通過相同或不同的醫療提供者(例如，護士、醫院)或臨床實驗室獲得和/或處理，並且處理後，結果可轉發到又一個醫療提供者、醫療福利提供者或患者。相似地，測量/測定一個或多個分數、分數之間比較、評估分數和治療決定可由一個或多個醫療提供者、醫療福利提供者和/或臨床實驗室進行。

如本文所使用的，術語「醫療提供者」指直接交互和管理活受試者，例如人類患者的個體或機構。醫療提供者的非限制性實例包括醫生、護士、技術人員、治療者、藥劑師、諮詢者、替代醫學實踐者、醫療設施、醫生辦公室、醫院、急診室、診所、急診中心、替代醫學門診/設施和提供與全部或任何部分患者健康狀態有關的一般和/或專門治療、評估、維護、療法、藥物和/或勸告(包括但不限於一般藥物、專門藥物、手術和/或任何其它類型的治療、評估、維護、療法、藥物和/或勸告)的任何其它實體。

如本文所使用的，術語「臨床實驗室」指用於檢查或處理從活受試者例如人類來源的材料的設施。處理的非限制性實例包括為了提供信息，例如為診斷、預防或治療活受試者例如人類任何疾病或損傷，或評估活受試者例如人類的健康的目的，從人體來源的材料的生物學、生物化學、血清學、化學、免疫血液學、血液學、生物物理學、細胞學、病理學、遺傳學或其它檢查。這些檢查還可包括收集或另外獲得樣品、準備、測定、測量或另外描述活受試者例如人類體內或從活受試者例如人類的身體獲得的樣品中各種物質的存在或不存在的程序。

如本文所使用的，術語「醫療福利提供者」包括提供、呈現、提供、全部或部分支付或另外關於給予患者一種或多種醫療福利、福利計劃、健康保險和/或醫療費用帳戶程序的個體當事人、機構或組。

在一些方面，醫療提供者可管理或指示另一個醫療提供者給予或使用任何本文公開的免疫測定或試劑盒以測量dpp-4。醫療提供者可實現或指示另一個醫療提供者或患者進行下列行動：獲得樣品、處理樣品、提交樣品、接收樣品、轉移樣品、分析或測量樣品、定量樣品、提供分析/測量/定量樣品後獲得的結果、接收分析/測量/定量樣品後獲得的結果、比較/評分分析/測量/定量一個或多個樣品後獲得的結果、從一個或多個樣品提供比較/分數、從一個或多個樣品獲得比較/分數、給予治療(例如治療il-13-介導的疾病或病症例如哮喘、ipf、copd、ad或uc的治療劑)、開始給予治療、停止給予治療、繼續給予治療、臨時中斷給予治療、增加給予的治療劑的量、減少給予的治療劑的量、繼續給予一定量的治療劑、增加給予治療劑的頻率、減少給予治療劑的頻率、在一種治療劑上維持相同的給劑頻率、用至少另一種治療或治療劑替代治療或治療劑、組合治療或治療劑與至少另一種治療或額外的治療劑。

在一些方面，醫療福利提供者可授權或拒絕，例如，獲得樣品、處理樣品、提交樣品、接收樣品、轉移樣品、分析或測量樣品、定量樣品、提供分析/測量/定量樣品後獲得的結果、轉移分析/測量/定量樣品後獲得的結果、比較/評分分析/測量/定量一個或多個樣品後獲得的結果、轉移來自一個或多個樣品的比較/分數、給予治療或治療劑、開始給予治療或治療劑、停止給予治療或治療劑、繼續給予治療或治療劑、臨時中斷給予治療或治療劑、增加給予的治療劑的量、減少給予的治療劑的量、繼續給予一定量的治療劑、增加給予治療劑的頻率、減少給予治療劑的頻率、在一種治療劑上維持相同的給劑頻率、用至少另一種治療或治療劑替代治療或治療劑，或組合治療或治療劑與至少另一種治療或額外的治療劑。

另外，醫療福利提供者可，例如，授權或拒絕治療處方、授權或拒絕治療覆蓋、授權或拒絕償付治療費用、決定或拒絕治療資格等。

在一些方面，臨床實驗室可，例如，收集或獲得樣品、處理樣品、提交樣品、接收樣品、轉移樣品、分析或測量樣品、定量樣品、提供分析/測量/定量樣品後獲得的結果、接收分析/測量/定量樣品後獲得的結果、比較/評分分析/測量/定量一個或多個樣品後獲得的結果、從一個或多個樣品提供比較/分數、從一個或多個樣品獲得比較/分數，或其它相關活動。

dpp-4作為生物標誌

提高的dpp-4水平已經在哮喘、copd和ad患者中觀察到(參見，例如，美國臨時申請號61/931,878，2014年1月27日提交；和美國臨時申請號61/990,932，2014年5月9日提交，各自通過引用以其整體結合到本文中)。另外，在哮喘患者的2b期臨床研究中，在用il-13抗體拮抗劑(tralokinumab)治療的患者中高血清dpp-4水平預測提高的響應率，將dpp-4鑑定為il-13介導的疾病或病症包括il-13介導的肺疾病或病症(例如，哮喘、ipf或copd)或il-13介導的慢性炎症性皮膚疾病或病症(例如，特應性皮炎)的預測性生物標誌。參見brightling等人,amjrespircritcaremed189:a6670(2014);和美國臨時申請號61/931,878，2014年1月27日提交；和美國臨時申請號61/990,932，2014年5月9日提交，其各自通過引用以其整體結合到本文中。

因此，在具有哮喘、ipf、copd、ad和uc，以及其它炎症性疾病、肺部疾病或病症或慢性炎症性皮膚疾病或病症的患者中，提高的dpp-4水平可用於鑑定可獲益於特定治療，包括但不限於中和il-13活性的治療的那些患者。提供了可用於測量患者的dpp-4水平的抗dpp-4抗體和使用本文公開的抗dpp-4抗體的免疫測定和試劑盒。

抗dpp-4抗體

本公開內容提供分離的抗dpp-4抗體和其抗原結合片段。在某些方面，本文提供的抗dpp-4抗體和抗原結合片段可結合人dpp-4。

具體地，本公開內容提供結合人dpp-4的兩種小鼠單克隆抗體和兩種大鼠單克隆抗體。這些抗體通過標準雜交瘤技術產生，並且產生這些抗體的雜交瘤已經在2015年1月8日在布達佩斯條約下保藏於美國典型培養物保藏中心,manassas,va。小鼠抗dpp-4抗體在本文中稱為m3b7.6和m5b7.7，大鼠抗dpp-4抗體在本文中稱為r11a2.15和r11a9.11。還提供這些抗體的抗原結合片段、變體和/或衍生物。還提供在其結合相同表位或其能夠競爭性抑制m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11中的一個或多個方面與這些抗體相關的抗體。小鼠單克隆抗體m3b7.6從在保藏號pta-121870下保藏在美國典型培養物保藏中心,manassas,va(atcc)的雜交瘤產生，小鼠單克隆抗體m5b7.7從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生，大鼠單克隆抗體r11a2.15從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生，和大鼠單克隆抗體r11a9.11從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生。

在某些方面，提供分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物，其中抗體與從在保藏號pta-121870下保藏在美國典型培養物保藏中心(atcc)的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11結合相同dpp-4表位。

在某些方面，提供分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物，其中抗體競爭性抑制從在保藏號pta-121870下保藏在美國典型培養物保藏中心(atcc)的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11結合dpp-4，例如，人dpp-4。例如，單克隆抗體m3b7.6和m5b7.7能夠相互競爭性抑制結合人dpp-4，單克隆抗體r11a9.11和r11a2.15能夠相互競爭性抑制結合人dpp-4。

在某些方面，提供分離的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物，其中抗體包含具有三個重鏈互補決定區(cdrs)vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的重鏈可變結構域(vh)和具有三個輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的輕鏈可變結構域(vl)，其中分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號pta-121870下保藏在美國典型培養物保藏中心(atcc)的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的cdrs相同。

在某些方面，提供分離的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物，其中抗體包含與從在保藏號pta-121870下保藏在美國典型培養物保藏中心(atcc)的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的vh和vl相同的vh和vl。

當從一個或多個保藏的雜交瘤獲得一種或多種抗體時，本領域普通技術人員可分離、克隆和測序表達的抗體，以確定vh、vl和cdr區域，而無過度實驗。

在某些方面，提供雜交瘤，其中雜交瘤包括在保藏號121870下保藏在美國典型培養物保藏中心(atcc)的雜交瘤、在保藏號121871下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號121872下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號121873下保藏在atcc的雜交瘤或其組合。

在某些方面，提供產抗體的細胞培養物，其中所述細胞培養物可用於表達如本文所提供的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物。在某些方面，細胞培養物包括在保藏號121870下保藏在美國典型培養物保藏中心(atcc)的雜交瘤、在保藏號121871下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號121872下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號121873下保藏在atcc的雜交瘤，或其組合。

本公開內容所提供的任何抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物可進一步包含額外的多肽，例如，信號肽以定向分泌。另外，本公開內容提供的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物可為，例如，融合多肽、fab片段、scfvs或其它衍生物，如本文所描述。

在某些方面，本公開內容所提供的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物可為融合蛋白的部分，即，抗體或其抗原結合片段可與異源多肽融合。術語「異源多肽」在本文中用於指從與抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物不同的實體衍生的多肽。在非限制性實例中，與抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物融合的「異源多肽」可衍生自相同物種的非免疫球蛋白多肽，或免疫球蛋白或非免疫球蛋白異源多肽。在一些方面，異源多肽可為，例如，穩定多肽、標籤、標記或其組合。

在某些方面，本公開內容提供的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物可包含異源胺基酸序列或與抗體天然不關聯的一個或多個其它部分(例如，肽、蛋白、酶、脂質、異源抗體或其片段、變體或衍生物、可檢測標記、聚乙二醇(peg)或兩個或更多個任何所述試劑的組合)。在進一步的方面，本公開內容提供的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物可包含可檢測標記，其選自酶、螢光標記、化學發光標記、生物發光標記、放射性標記或兩種或更多種任何所述可檢測標記的組合。在某些方面，可檢測標記為生物素，其可與綴合至，例如，酶，例如，辣根過氧化物酶(hrp)的鏈黴親和素相互作用。在某些方面，可檢測標記為釕螯合物，其可在暴露於電流時發光。其它可檢測的標記為本領域普通技術人員所熟知。

本文還提供包含一種或多種如上文所指出的抗dpp-4抗體或其片段的組合物。在某些方面，組合物包含「捕獲」抗體和「檢測」抗體，如本文它處所述。如本文所提供的組合物包括但不限於緩衝液、載體和防腐劑。防腐劑、穩定劑、緩衝液、抗氧化劑和/或其它添加劑可包括緩衝液例如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機酸；抗氧化劑，例如抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑例如十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六甲雙銨；苯扎氯銨；苄索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；烷基對羥基苯甲酸酯類，例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環己醇；3'-戊醇和間甲酚；低分子量多肽；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；胺基酸，例如甘氨酸、穀氨醯胺、天冬醯胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它糖類包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，例如edta；糖類，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽反離子，例如鈉；金屬絡合物(例如zn-蛋白質絡合物)和/或非離子表面活性劑，例如tween™、pluronic™或聚乙二醇(peg)。本文所提供的組合物可在單一的小瓶或容器中混合，或可在兩個或更多個小瓶或容器中或作為試劑盒的部分提供，如本文它處所述。

多核苷酸

本公開提供編碼本文所提供的任何抗dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的多核苷酸。在某些方面提供分離的多核苷酸或包含兩種或更多種多核苷酸的多核苷酸組合物，其單獨或共同編碼本文所提供的抗dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物。

在某些方面，本公開提供分離的多核苷酸，其包含編碼抗dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的核酸，其中抗體包含具有三個重鏈互補決定區(cdrs)vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的重鏈可變結構域(vh)和具有三個輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的輕鏈可變結構域(vl)，其中分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號pta-121870下保藏在美國典藏培養物保藏中心(atcc)的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.7、從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的cdrs相同。

本公開還提供包含編碼抗-dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的核酸的分離的多核苷酸，其中抗體包含與從在保藏號pta-121870下保藏在美國典藏培養物保藏中心(atcc)的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.7、從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的vh和vl相同的vh和vl。

本公開進一步提供包含兩種或更多種單獨或共同編碼本文所提供的抗-dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的多核苷酸的組合物。

在某些方面，提供一種載體或兩種或更多種載體，以幫助本文所提供的抗-dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的展示、篩選、分離、克隆和/或表達。在某些方面，一種或多種載體為表達載體。

在某些方面，多核苷酸組合物的兩個或更多個核酸分子可位於相同的載體中。在某些方面，多核苷酸組合物的兩個或更多個核酸分子可位於至少兩個單獨的載體中。

表達載體用於表達編碼本文所提供的抗dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的分離的多核苷酸。重組表達載體為可複製的dna構建體，其具有編碼轉運體分子的多肽鏈的合成的或cdna衍生的dna片段，與從哺乳動物、微生物、病毒或昆蟲基因衍生的合適的轉錄或翻譯調節元件操作性連接。轉錄單元一般包括以下序列的裝配：(1)在基因表達中具有調節作用的一個或多個遺傳元件，例如，轉錄啟動子或增強子，(2)結構或編碼序列，其轉錄為mrna並翻譯為蛋白，和(3)適當的轉錄和翻譯起始和終止序列，如下文詳細描述的。這樣的調節元件可包括操縱子序列以控制轉錄。可額外地併入通常由複製起點賦予的在宿主中複製的能力，和幫助識別轉化子的選擇基因。

在某些方面提供分離的多核苷酸或包含兩個或更多個分離的多核苷酸的組合物，包括與啟動子操作性連接的核酸分子，或與兩個或更多個啟動子操作性連接的兩個或更多個核酸分子，其中啟動子可為相同的或不同的。

當核酸區域彼此功能相關時，其為「操作性連接的」。例如，如果其作為參與多肽分泌的前體表達，信號肽的dna(分泌前導序列)與多肽的dna操作性連接；如果其控制序列的轉錄，啟動子與編碼序列操作性連接；或如果其放置為允許翻譯，核糖體結合位點與編碼序列操作性連接。

表達控制序列和表達載體的選擇取決於宿主的選擇。廣泛不同的表達宿主/載體組合可使用。用於真核宿主的有用的表達載體包括，例如，包含來自sv40、牛乳頭瘤病毒、腺病毒和巨細胞病毒的表達控制序列的載體。用於細菌宿主的有用的表達載體包括已知的細菌質粒，例如來自大腸桿菌的質粒，包括pcr1、pbr322、pmb9和其衍生物，較寬宿主範圍質粒，例如m13和絲狀單鏈dna噬菌體。

在某些方面提供包含如本文所提供的多核苷酸的分離的宿主細胞。在某些方面提供包含本文提供的多核苷酸組合物的兩個或更多個多核苷酸的一種或多種分離的宿主細胞。

合適的用於表達本文所提供的轉運體分子的宿主細胞包括在適當的啟動子控制下的原核生物、酵母、昆蟲或更高等的真核細胞。原核生物包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如大腸桿菌或芽孢桿菌。更高等的真核細胞包括如下所述的已建立的哺乳動物來源的細胞系。也可採用無細胞翻譯系統。關於蛋白質生產，包括抗體生產的方法的額外信息可見於例如美國專利出版號2008/0187954、美國專利號6,413,746和6,660,501以及國際專利出版號wo04009823，其各自通過引用以其整體結合到本文中。

各種哺乳動物或昆蟲細胞培養系統也可用於表達本文提供的抗dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物。合適的哺乳動物宿主細胞系的實例包括hek-293和hek-293t、gluzman(cell23:175,1981)描述的猴腎細胞cos-7系，或其它細胞系，包括，例如，l細胞、c127、3t3、中國倉鼠卵巢(cho)、ns0、hela和bhk細胞系。哺乳動物表達載體可包含非轉錄元件例如複製起點、與待表達基因操作性連接的合適的啟動子和增強子和其它5'或3'側翼非轉錄序列，和5'或3'非翻譯序列，例如核糖體結合位點、多腺苷酸化位點、剪接供體和受體位點和轉錄終止序列。用於在昆蟲細胞中產生異源蛋白的杆狀病毒系統由luckow和summers,biotechnology6:47(1988)綜述。

本文提供的宿主細胞可在製造本文所提供的抗dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的方法中使用，其中所述方法包括(a)培養宿主細胞和(b)從宿主細胞分離表達的抗體、片段或亞基。

用於檢測dpp-4水平的測定

本公開內容提供測量從受試者獲得的樣品中的dpp-4水平的方法，包括使用利用至少一種，例如，至少兩種識別人dpp-4上的不同表位的抗dpp-4抗體或其抗原結合片段的免疫測定測定樣品。用於該方法的示例性抗體包括以下一種或多種：從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11，和/或其抗原結合片段、變體或衍生物，如本文所描述的。

所述方法涉及使用特異和靈敏的用於檢測從受試者獲得的樣品中的dpp-4的免疫測定。樣品在利用至少一種，例如，至少兩種本文提供的抗dpp-4抗體的免疫測定中測定，所述抗體例如，從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11，和/或其抗原結合片段、變體或衍生物，如本文所描述的。

例如，本公開內容提供測量從受試者獲得的樣品中的dpp-4水平的方法，包括在利用至少一種，例如，至少兩種識別人dpp-4上的不同表位的抗dpp-4抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物的免疫測定中測定樣品。在一個方面，至少兩種抗dpp-4抗體的一種包括與從在保藏號pta-121870下保藏在美國典型培養物保藏中心(atcc)的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7結合相同dpp-4表位的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且至少兩種抗dpp-4抗體的一種包括與從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11結合相同dpp-4表位的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在另一個方面，至少兩種抗dpp-4抗體的一種包括競爭性抑制從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6和/或從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7結合dpp-4的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物；並且至少兩種抗dpp-4抗體的一種包括競爭性抑制從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11結合dpp-4的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在另一個方面，兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種為包含具有三個重鏈互補決定區(cdrs)vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的重鏈可變結構域(vh)和具有三個輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的輕鏈可變結構域(vl)的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物，其中分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6和/或從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7的cdrs相同；並且兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種為包含具有三個重鏈互補決定區(cdrs)vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的重鏈可變結構域(vh)和具有三個輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的輕鏈可變結構域(vl)的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物，其中分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的cdrs相同。

在另一個方面，兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種為包含與從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6和/或從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7的vh和vl相同的vh和vl的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物；並且兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種為包含與從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的vh和vl相同的vh和vl的分離抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物。

任何這些抗體或其片段可與一個或多個異源多肽融合，例如，穩定多肽、標籤、標記或其組合，或可綴合到異源部分，例如，肽、蛋白、酶、脂質、異源抗體或其片段、可檢測標記、聚乙二醇(peg)或兩種或更多種任何所述試劑的組合。在某些方面，抗體包含可檢測標記例如生物素或釕螯合物。其它可檢測標記為本領域普通技術人員所熟知，並且包含在本公開內容中。

在某些方面，免疫測定包括夾心免疫測定，例如，酶聯免疫吸附測定(elisa)或夾心電化學發光(ecl)測定，其中將第一種抗dpp-4「捕獲」抗體或其抗原結合片段附著到固體支持物，讓來自樣品的抗原或標準品與捕獲抗體結合，然後加入第二種抗dpp-4「檢測」抗體或其抗原結合片段，並通過酶促反應、電化學發光反應、放射性或其它檢測方法檢測。

在某些方面，免疫測定包括以下：首先，讓捕獲抗體或其片段、變體或衍生物結合到固體支持物，例如，多孔板或本領域普通技術人員已知的其它測定裝置。讓捕獲抗體附著一段時間，例如，過夜，然後去除未結合的抗體。然後可將板洗滌以去除任何未結合的捕獲抗體。然後可將板用封閉溶液處理以讓非特異性蛋白結合固體支持物的任何未結合區域。典型的封閉溶液包括不相關的蛋白，例如，脫脂奶粉或血清白蛋白。然後可將板再次洗滌以去除任何未結合的封閉溶液。接著，將疑似包含dpp-4的樣品加入板。樣品通常連續稀釋並一式兩份或一式三份鋪板。包含標準量的dpp-4或其合適片段的對照和不同陰性對照也包括在內。讓抗原結合捕獲抗體一段時間，例如，室溫1小時。孵育之後，然後可將板洗滌以去除任何未結合的抗原。

接著，加入檢測抗體。檢測抗體通常為結合與捕獲抗體不同的dpp-4表位的抗dpp-4抗體。檢測抗體可為標記的或未標記的。當檢測抗體未標記時，標記的二抗可用於檢測，如本領域普通技術人員所熟知的。檢測抗體可用酶，例如，辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酶直接標記，或可用將會允許酶結合的標籤標記。例如，檢測抗體可綴合生物素，並且酶在後續步驟中通過允許酶綴合的鏈黴親和素結合生物素標籤連接。或者檢測抗體可綴合化學發光、螢光或電化學發光標籤。後者的實例為釕螯合物。孵育之後，然後可將板洗滌以去除任何未結合的檢測抗體。

檢測抗體的檢測通過基於使用的檢測抗體類型而不同的方法完成。如果檢測抗體用生物素標記，則加入酶綴合的鏈黴親和素，洗去未結合的鏈黴親和素，並加入底物，底物提供可，例如，在分光光度計上閱讀的比色反應。如果檢測抗體綴合釕螯合物，板經受電流，並測量光發射。

在某些方面，所述方法直接測量患者樣品中的dpp-4水平，其中絕對水平通過在使用，例如，純化的全長dpp-4或dpp-4片段的標準曲線上標繪免疫測定結果計算。檢測到的來自檢測抗體的信號然後可基於板上包括的各個標準品和對照定量。通過在標準曲線上標繪結果，檢驗樣品中dpp-4的絕對水平或量可，例如，以ng/ml或pgdpp-4/ml蛋白計算。

在本文所提供的免疫測定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物。在本文所提供的免疫測定和方法的某些方面，檢測抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的免疫測定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物。在本文所提供的免疫測定和方法的某些方面，檢測抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的免疫測定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物。在本文所提供的免疫測定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的免疫測定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物。在本文所提供的免疫測定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的免疫測定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物。在本文所提供的免疫測定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的免疫測定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物。在本文所提供的免疫測定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物。

多種不同的受試者樣品可用在本文所呈現的方法中。樣品的示例性的非限制實例包括以下一種或多種：全血、血清、血漿、唾液、痰、鼻息肉、鼻粘液、支氣管肺泡灌洗液、皮膚細胞或肺組織，例如，肺上皮細胞。在特定方面，樣品為血清樣品、皮膚細胞或肺組織。

在具體的方面，本文所公開的方法包括告知受試者dpp-4測定和/或至少部分基於dpp-4水平的診斷的結果。患者可口頭、書面和/或電子告知。診斷也可記錄在患者的醫療記錄上。

術語「醫療記錄」或「患者醫療記錄」指患者的檢查和/或治療報告，其通常包括下列一個或多個：患者的醫療歷史和投訴、醫生的身體發現、診斷檢驗和程序的結果，和以及患者用藥和治療程序。醫療記錄通常由一個或多個醫生和/或醫生助理做出，並且其為書寫的、抄寫的或以其它方式記錄的記錄和/或需要醫療護理的各種疾病或損傷和/或接種和/或過敏和/或治療和/或預後的歷史，和/或關於患者、兄弟姐妹和/或職業的常見健康信息。在一些情況下，記錄可由醫生在診斷病況中回顧。

醫療記錄可為紙質形式和/或可維持在計算機可讀介質上。醫療記錄可由實驗室、醫生辦公室、醫院、健康護理維護組織、保險公司和/或個人醫療記錄網站維持。在一些方面，至少部分基於dpp-4水平的診斷記錄在醫療警報物品上，例如卡、佩戴品和/或射頻識別(rfid)標籤。如本文所使用的，術語「佩戴品」指可佩戴在受試者身體上的任何物品，包括，但不限於，標籤、腕帶、項圈、臂帶和頭帶。

在某些方面，所述方法可需要命令和/或進行一個或多個額外的測定。例如，如果dpp-4水平經測定在正常範圍內(即，未提高)，dpp-4測定可重複以排除假陰性結果，和/或一個或多個額外的dpp-4測定可進行以監測受試者的狀態。如果dpp-4水平經測定提高，重複dpp-4測定以排除假陽性結果可為期需的。

dpp-4檢測方法、測定和試劑盒

本公開內容提供方法、測定和試劑盒幫助測定或分析樣品中的dpp-4水平或dpp-4的量。在一些方面，本文所公開的方法、測定和試劑盒由醫療提供者、醫療福利提供者或臨床實驗室進行或使用，以測定來自受試者的樣品中的dpp-4水平或dpp-4的量。

在某些方面，免疫測定在從受試者獲得的樣品上由治療患者的醫護專業人員進行，例如，使用如本文所述的免疫測定，其配製為「護理點(pointofcare)」診斷試劑盒。在一些方面，樣品從患者獲得並且提交至，例如，臨床實驗室，按照醫護專業人員的指令，例如，使用如本文所述的免疫測定測量樣品中的dpp-4水平。

在某些方面，具有或疑似具有il-13-介導的疾病或病症的患者經診斷患有肺疾病或病症、炎症性腸疾病或病症或慢性炎症性皮膚病況。在某些方面，具有或疑似具有il-13介導的病理學的疾病或病症為哮喘、特發性肺纖維化(ipf)、慢性阻塞性肺病(copd)、潰瘍性結腸炎(uc)、特應性皮炎、過敏性鼻炎或慢性鼻竇炎。

本公開內容還提供在本文所公開的免疫測定的實踐中使用的試劑盒。這樣的試劑盒可包括容器，各自具有方法中利用的一種或多種不同試劑(例如，以濃縮的形式)，包括，例如，一種或多種抗dpp-4抗體。一種或多種抗dpp-4抗體，例如，捕獲抗體可已經附著在固體支持物上提供，並且一種或多種抗體，例如，檢測抗體可已經綴合到可檢測標記例如生物素或釕螯合物提供。試劑盒可還提供用於偶聯可檢測標記與抗體的試劑(以及標記本身)、緩衝液和/或支持本文所提供測定的實踐的試劑和設備。在某些方面，提供結合檢測抗體的標記的二抗。本公開內容提供的試劑盒可進一步包含合適的容器、板和實踐本文所提供的測定必需的任何其它試劑或材料。

用於測量樣品中的dpp-4水平的試劑盒可包含一種或多種本文提供的抗dpp-4抗體或其片段，例如，從在保藏號pta-121870下保藏在美國典型培養物保藏中心(atcc)的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11，和/或其抗原結合片段，變體或衍生物，或相關抗體或其抗原結合片段，同樣如本文所描述的。

在某些方面，如本文所提供的試劑盒包含兩種分離抗體或其抗原結合片段，捕獲抗體和檢測抗體。在某些方面捕獲抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物。在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物。在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物。在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結合片段、變體或衍生物。在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結合片段、變體或衍生物，並且檢測抗體為如從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結合片段、變體或衍生物。

在某些方面，檢測抗體被可檢測地標記。在某些方面，可檢測標記為生物素並且檢測試劑包括鏈黴親和素-辣根過氧化物酶(hrp)綴合物和hrp的比色底物。在某些方面可檢測標記為釕螯合物。如本文別處所描述的其它抗體、標記和試劑也可用在如本文所提供的試劑盒中。

在某些方面，本公開內容提供用於檢測一個或多個樣品中的dpp-4水平的免疫測定，包括使用至少一種，例如，至少兩種抗dpp-4抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物，例如，如本文所描述的從在保藏號pta-121870下保藏在美國典型培養物保藏中心(atcc)的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產生的大鼠單克隆抗體r11a9.11，或其抗原結合片段、變體或衍生物，或相關抗體或其抗原結合片段，同樣如本文所描述的。

在某些方面，本文所提供的免疫測定為夾心免疫測定，例如，elisa測定或ecl測定，包括附著在固體支持物上的第一個抗dpp-4「捕獲」抗體或其抗原結合片段，和第二個抗dpp-4「檢測」抗體或其抗原結合片段。免疫測定通過本文提供的方法或本領域普通技術人員所熟知和理解的方法進行。在一個方面，免疫測定包括將捕獲抗體或其片段、變體或衍生物附著到固體支持物；施加檢驗樣品或對照樣品，允許dpp-4(如果存在於樣品中的話)結合捕獲抗體或其片段、變體或衍生物；施加檢測抗體或其片段、變體或衍生物，其可結合已經結合至捕獲抗體或其片段、變體或衍生物的dpp-4；和測量結合至dpp-4的檢測抗體或其片段、變體或衍生物的量。在某些方面，測定可進一步包括洗滌步驟、封閉步驟和孵育步驟。

在某些方面，檢測抗體或其片段、變體或衍生物進一步包含可檢測標記，例如生物素或釕螯合物。

本公開內容的方面可通過參考下列非限制性實施例進一步定義，其詳細描述本公開內容某些抗體的製備和使用本公開內容的抗體的方法。對本領域技術人員將會顯而易見的是，對材料和方法二者的許多修飾可實踐而不脫離本公開內容的範圍。

實施例

實施例1：對人hpp-4特異的大鼠和小鼠單克隆抗體的產生和表徵

對人dpp-4特異的小鼠和大鼠單克隆抗體通過下列方法產生。將動物使用多個位點重複免疫(rimms)方案(kilpatrick,k.,等人,hybridoma16:381-389(2009))免疫。簡言之，5隻balb/c小鼠和2隻wistar大鼠(所有均為4-6周齡)在6個背側位點皮下注射混合完全弗氏佐劑(sigma)的r-人dpp4-his(r&dsystemscatalogno.1180)(第一輪，接著不完全弗氏佐劑用於後續免疫)，並在每一給劑日期在6個腹部位點皮下注射混合titermax(sigma)佐劑的抗原。總共，每一動物在12個位點接受注射，如圖1中所示。檢驗出血在第13天收集，並且出血前和免疫的血清二者通過直接結合elisa使用結合至elisa板的dpp-4(r-dpp-4-his,r&dsystems目錄號1180)和陰性對照糖蛋白130(r-gp130-his)檢驗。將高結合elisa板的孔在4℃用50µl2μg/mlr-人dpp-4-his或gp130-his/pbs包被過夜。然後將板用200µl/孔洗滌緩衝液(pbs/0.1%tween-20®)洗滌3次。洗滌之後，將150µl/孔封閉緩衝液(pbs/3%脫脂奶粉/0.1%tween-20®)加入每一孔，並將板室溫孵育1h。然後如上面提到的，將板洗滌3次。

將前-和檢驗-血清在pbs,ph7.2緩衝液中連續稀釋，從最初的1:100稀釋度至最終的稀釋度1:218,600。將50µl每一稀釋的樣品加入板並室溫孵育1h。將板如上面提到的洗滌3次。洗滌之後，將50µl檢測抗體加入每一孔。對於小鼠組，使用在pbs中1:8000稀釋的驢抗小鼠(h+l):hrp(jacksonimmunoresearch,catalogno.715-035-151)。對於大鼠組，使用在pbs中1:8000的驢抗大鼠(h+l):hrp(jacksonimmunoresearch,catalogno.715-035-153)。將板室溫孵育1h。然後將板洗滌3次，並加入預熱至室溫的50µl/孔的tmb底物(kpl,catalogno.52-00-04)。將板在黑暗中室溫孵育10min，將50µl終止溶液(1mhcl)加入每一孔中。將板在分光光度計上在λ=450nm處讀數。

對dpp-4的出血前和免疫血清抗體滴度在圖2中顯示。在第16和19天，從顯示穩健血清滴度的大鼠和小鼠收集淋巴結，雜交瘤如下產生。在第19天，從動物收集淋巴結，從淋巴組織提取淋巴細胞並通過70µm細胞過濾器過濾。抗原特異性b細胞通過使用macs、鏈黴親和素微珠(miltenyibioteccatalog#130-048-101)使用製造商建議的方案分離。然後將dpp-4特異性b細胞與骨髓瘤p3x/63ag8.653細胞以1:1比率按照peg(roche)融合方法融合。將融合的細胞以2.5x104b細胞/孔的密度接種在添加1xhat的雜交瘤生長培養基(ex-cell610+10%hi-fbs+1%青黴素-鏈黴素+1xbm-condimedh1雜交瘤克隆補充物)中。融合後7天，將包含hat的培養基替換為添加1xht的生長培養基。

將雜交瘤上清液篩查結合人dpp-4的抗體，並選擇四個產生雜交瘤的抗體用於進一步研究：小鼠單克隆抗體m3b7.6(igg1/κ)、小鼠單克隆抗體m5b7.7(igg1/κ)、大鼠單克隆抗體r11a2.15(igg2a/κ)和大鼠單克隆抗體r11a9.11(igg2a/κ)。表達這4個單克隆抗體的雜交瘤細胞系在2015年1月8日在保藏號pta-121870(m3b7.6)、保藏號pta-121871(m5b7.7)、保藏號pta-121872(r11a2.15)和保藏號pta-121873(r11a9.11)下在布達佩斯條約下保藏在美國典型培養物保藏中心(atcc)。

實施例2：夾心elisa測定以檢測dpp-4

材料和方法

a.具有hrp檢測系統的dpp-4夾心elisa方案

基於hrp的夾心elisa測定如下進行。具體細節例如抗dpp-4捕獲抗體、待檢驗樣品和抗dpp-4檢測抗體在各個實施例中對具體實驗指出。對標準elisa方案的變更為本領域普通技術人員所熟知，並且可根據本公開內容使用。

將高結合elisa板用抗dpp-4捕獲mab，例如，m3b7.6或m5b7.7(在pbs中5μg/ml;50µl/孔)包被，並在4℃孵育過夜。將板用200µl/孔洗滌緩衝液(pbs/0.1%tween-20®)洗滌3次。洗滌之後，將150µl/孔封閉緩衝液(pbs/3%脫脂奶粉/0.1%tween-20®)加入每一孔，並將板室溫孵育1h。然後如上面所提到的將板洗滌3次。

對於標準曲線，將dpp-4標準品(例如，從r&dsystemscatalog#1180-se可得的標準品)在pbs,ph7.2緩衝液或1%正常人血清中連續稀釋，例如，從500ng/ml2倍稀釋至0.49ng/ml。將50微升(50µl)每一標準品或稀釋的樣品加入板，並將板室溫孵育1h。再次，如上面所提到的將板洗滌3次。洗滌之後，將50µl檢測mabr11a2.15、r11a9.11或222113.11(2µg/ml)加入每一孔，並將板室溫孵育1h。再次，如上面提到的將板洗滌3次。洗滌之後，將在pbs中1:8,000稀釋的50µl驢抗大鼠(h+l)-hrp綴合物(jacksonimmunoresearchcatalog#712-035-153)加入每一孔，並將板室溫孵育1h。再次，如上面提到的將板洗滌3次。洗滌之後，加入預熱至室溫的50µl/孔tmb底物(kpl,catalogno.52-00-04)，將板在黑暗中室溫孵育10min，並將50µltmb終止溶液(1mhcl)加入每一孔。最後將板在分光光度計上在λ=450nm處讀數。

結果

使用小鼠m3b7.6和m5b7.7作為捕獲抗體的結果分別在圖3a和圖3b中顯示。兩種小鼠和兩種大鼠mabs(mabr11a2.15或r11a9.11)形成4對不同的用於人cd26的檢測劑，其具有相似的檢測下限(llod)並在夾心elisa測定測量人dpp-4中提供高靈敏度。相反，市售可得的大鼠mab(r222113)(來自r&dsystems的人dppiv/cd26mab(克隆222113)、大鼠igg2a目錄號mab1180)檢測到較少的人cd26並且當與兩種小鼠mabsm3b7.6和m5b7.7配對時在夾心elisa測定測量人dpp-4中明顯不太靈敏。參見圖3a-b。這些結果證明與市售可得的大鼠抗體r222113相比，本文提供的抗體(m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11)在免疫測定檢測人cd26方面優越。另外，本文提供的抗體(m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11)檢測內源和重組人cd26二者，使其可用作診斷試劑。

如圖3中所示，m3b7.6+r11a2.15、m3b7.6+r11a9.11、m5b7.7+r11a2.15和/或m5b7.7+r11a9.11在夾心elisa測定中有效測量人dpp-4。另外，無論選擇哪一對，研究中dpp-4的血清濃度在1-2µg/ml之間。

實施例3：使用octet的抗dpp-4mab表位框並(binning)

四種抗dpp-4抗體(m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11)的表位框並通過octet進行。將檢驗抗體生物素化並以20μg/ml的濃度和以200μl/孔在鏈黴親和素生物傳感器上捕獲5min，然後用200μlpbs緩衝液洗滌1min。然後將生物傳感器用10μg/ml重組人dpp-4孵育5min並用200μlpbs緩衝液洗滌1min。將競爭抗體以1:1比率與檢驗抗體以終濃度20μg/ml混合，並在200μl中與生物傳感器一起孵育5min。

測定的示意圖在圖4a中示出，以四種不同抗體(m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11)作為檢驗抗體的結果分別在圖4b-e中示出。結果證明小鼠單克隆抗體m3b7.6和m5b7.7互相競爭，並且大鼠單克隆抗體r11a2.15和r11a9.11互相競爭。小鼠抗體不與大鼠抗體競爭，因此不共享表位。基於該數據，我們得出結論兩種小鼠抗體(m3b7.6和m5b7.7)共享相同或重疊的表位，而兩種大鼠抗體(r11a2.15和r11a9.11)共享表位或重疊表位，並且表位與小鼠抗體共享的表位不同。

前文對具體方面的描述將會完全揭示本公開內容的一般特徵，以致他人在無過度實驗下可通過應用本領域技術內的知識容易地為不同應用修飾和/或改編這樣的具體方面，而不脫離本公開內容的一般概念。因此，基於本文呈現的教導和指南，這樣的改編和修飾意在落入所公開方面的相等物的含義和範圍內。應理解本文中的短語和術語是為了說明的目的，而非限制，以致本說明書的術語或短語應由技術人員按照教導和指南解釋。

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