激肽釋放酶抑制劑的製作方法

2023-05-14 09:25:06

專利名稱：激肽釋放酶抑制劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一系列新的化合物，它們是酶血漿激肽釋放酶的選擇性抑制劑，涉及包含這些抑制劑的藥物組合物，以及這種組合物在治療人類疾病中的應用。
背景酶血漿激肽釋放酶，按分類也稱為EC.3.4.21.34，是胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶家族的成員，該家族還包括組織激肽釋放酶、凝血酶、胰蛋白酶和纖溶酶。在血漿中它以無活性的酶原存在，並被因子XIIa所激活。該酶具有廣譜的活性。血漿激肽釋放酶通過切斷Lys-Arg和Arg-Ser鍵從大分子量的激肽原釋放出血管作用的緩激肽。同樣的肽也可在中性白細胞彈性蛋白酶存在下從低分子量的激肽原釋放。它還能夠激活尿激酶原和纖溶酶原，還認為它參與了從凝乳酶原到血管緊張肽原酶的轉化。血漿激肽釋放酶是體內的血液凝結級聯反應的必需組分，雖然它的作用不涉及緩激肽的釋放或酶催化的斷裂。高分子量的激肽原是血漿激肽釋放酶的優選的底物，對於在該級聯反應中的激活作用是必需的(K.D.Bhoola等，Pharm.Rev.，1992，44，1-80)。
血漿激肽釋放酶的生理作用看來是從激肽原的蛋白水解斷裂以釋放激肽或其它底物如生長因子前體產生的。激肽如緩激肽是發炎的強力介體。此外，它們還影響細胞功能，如血壓、局部血流、葡萄糖運輸和細胞增殖。這些細胞活動通過二級信使(如血小板激活因子、白三烯、前列腺素、P物質、乙醯膽鹼和去甲腎上腺素)的釋放來調節。
有幾個小組已經公開了血漿激肽釋放酶的合成的抑制劑。這些包括精氨酸酮亞甲基衍生物(WO92/04371和D.M.Evans等，Immunopharmacology，1996，32，115-116)、去甲胍基丁胺和胍基丁胺衍生物(WO 95/07291，WO 94/29335)、苯脒衍生物(J.Sturzbecher等，Brazilian J.Med.Biol.Res.，1994，27，1929-1934)、硼酸衍生物(US 5187157)和氨基甲基環己醯基衍生物(N.Teno等，Chem.Pharm.Bull.，1993，41，1079-1090)。氨基甲基環己醯基衍生物在小鼠的膠原蛋白誘導的關節炎模型中(Y.Fujimora等，Agents Actions，1993，39，42-48)以及在大鼠的內毒素誘導的播散性的血管內凝結(DIC)中(S.Okamoto等，Agents Actions(增補本)，1992，38(第一部分)，198-205)表現出活性。硼酸衍生物在炎性腸病模型(A.Stadnicki等，Digestive Diseases and Sciences，1996，41，912-920和FASEB，1998，12，325-333)中是有活性的。
關於胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶的其它成員的選擇性還是一個重要的爭議。顯示弱血漿激肽釋放酶活性的組織激肽釋放酶的抑制劑過去也已經有報導(M.Szelke等，Brazilian J.Med.Biol.Res.，1994，27，1935和D.M.Evans等，Immunopharmacology，1996，32，117)，但仍存在對能選擇性地抑制血漿激肽釋放酶而不抑制組織激肽釋放酶的化合物的需求。
發明簡述本發明涉及一系列醯基氨基哌啶-1-甲脒(acylaminopiperidine-1-carboxamidine)，它們是血漿激肽釋放酶的抑制劑。這些化合物顯示對血漿激肽釋放酶的良好的選擇性，並在炎性腸病、關節炎、炎症、敗血性休克、低血壓、癌症、成年人呼吸窘迫綜合症、播散性血管內凝結、心肺旁路外科和手術後出血的治療中有潛在的應用。本發明還涉及該抑制劑的藥物組合物，涉及該抑制劑的藥物組合物，涉及該組合物作為治療籍的應用以及涉及用該組合物的治療方法。
發明詳述本發明的第一方面包含通式1的一系列新的4-(二肽基氨基)-哌啶-甲脒。
在通式1中，R1代表選自下列基團的基團氫原子(H)、低級烷基、式R4-CO的基團、式R4-O2CCH2的基團、式R5-OCO的基團和式R5-SO2的基團。R2代表選自下列基團的基團低級烷基、環烷基、或(C5-C12)環烷基烷基(它們可任選地被烷基或烷氧基取代)、芳烷基(它可任選地被最多三個選自F、Cl、Br、I、OH、低級烷基、O-(低級烷基)、O-苄基、NH2、NO2、NH-醯基、CN和CF3的基團所取代)、芳烷基氧甲基(它可任選地被最多三個選自F、Cl、Br、OH和O-(低級烷基)的基團所取代)。或者，R1和R2一起構成鄰-亞二甲苯基(o-C6H4(CH2)2)。該亞二甲苯基的芳環可任選地被選自F、Cl、Br、OH、低級烷基和O-(低級烷基)的基團所取代。
R3代表選自H、OH和O-(低級烷基)的基團。
R4代表選自H、低級烷基和苯基的基團。
R5代表選自低級烷基、苯基和苄基的基團。
在本發明的內容中，術語「烷基」和「低級烷基」可交換使用，表示具有1-8個碳原子的線形和分支的飽和烴基，如甲基、乙基、異丙基、叔丁基、新戊基和異辛基。
術語「環烷基」表示具有3-12個碳原子的單環或多環的飽和烴基，如環丙基、環己基、二環[4.4.0]癸基(即十氫萘基)和金剛烷基。
術語「環烷基烷基」表示帶有環烷基作為取代基的烷基，如環己基甲基和1-(環戊基)乙基。當帶有限制性說明時，如(Ca-Cb)-環烷基烷基，則代表該環烷基部分具有a-b個碳原子。
術語「烷氧基」表示O-(烷基)基團。
術語「醯基」表示甲醯基(H-CO)和烷基-CO基團。
術語「芳烷基」表示帶有芳基作為取代基的烷基，如苄基和1-萘基甲基。術語「芳基」包括苯基、萘基、呋喃基、噻吩基、吡咯基和吡啶基。
術語「芳烷基氧甲基」表示芳烷基-OCH2基團。
本發明化合物都具有胍官能團因此能與酸形成加成鹽。只要這些酸是藥學上可接受的，這些鹽就在本發明的範圍之內。合適的酸的例子包括乙酸、三氟乙酸、富馬酸、蘋果酸、檸檬酸、苯甲酸、苯磺酸、鹽酸、硫酸和磷酸。本發明的某些化合物具有酸官能團，因此能與鹼金屬和鹼土金屬形成鹽。同樣，只要這些是藥學上可接受的，它們就都包括在本發明的範圍內。這些鹽的例子包括鈉、鉀和鈣鹽。
本發化合物都具有至少兩個立構中心(不對稱碳原子)，因此能以光學異構體存在，如對映體、非對映體和端基異構體。所有這些異構體都包括在本發明的範圍內。這些異構體的混合物，包括(但不限於)外消旋混合物也包括在本發明的範圍內。
在一個優選的實施方案中，本發明包含通式1的化合物，其中R1選自H、低級烷基和R4-O2CCH2。
在另一個優選的實施方案中，本發明包含通式1的化合物，其中R2選自(C6-C10)環烷基烷基、任選地被最多三個選自F、Cl、Br、OH、低級烷基和O-(低級烷基)的基團所取代的苄基、任選地被最多三個選自F、Cl、Br、OH、低級烷基和O-(低級烷基)的基團所取代的苯乙基和任選地被最多三個選自F、Cl、Br、OH、低級烷基和O-(低級烷基)的基團所取代的苄氧基甲基。更優選R2選自環己基甲基、十氫萘-2-基甲基、苄基、4-氟苄基、4-氯苄基、4-羥基苄基、4-(低級烷基)氧苄基、α-羥基苄基、α-甲氧基苄基、苯乙基和苄氧基甲基。
在另一個優選的實施方案中，本發明包含通式1的化合物，其中的絕對立體化學如通式1A所表示。更優選地，絕對立體化學如通式1B所表示。
在另一個優選的實施方案中，本發明包含的化合物選自(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-羧甲基氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(3」-(4-乙氧基苯基)-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)-(丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-羧甲基氨基-3」-環己基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(3」-環己基-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-苯基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-羧甲基氨基-3」-苯基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；
(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-(甲氧基羰基甲基氨基)-3」-苯基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-十氫萘-2-基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-羧甲基氨基-3」-十氫萘-2-基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(3」-十氫萘-2-基-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-環己基丙醯基氨基)-3』-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(2」-羧甲基氨基-3」-環己基丙醯基氨基)-3』-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(3」-環己基-2」-(甲氧基羰基甲基氨基丙醯基氨基)-3』-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-甲氧基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(2」-羧甲基氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-甲氧基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；和(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(3」-(4-乙氧基苯基)-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)-丙醯基氨基)-3』-甲氧基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒。
本發明的化合物可通過本領域公知的方法製備，特別是那些用在肽化學領域的方法。有用的起始材料是4-氨基-1-苄基哌啶(2)。用叔丁氧基羰基(Boc)保護伯胺得到3，氫解得到哌啶衍生物4。它可用異硫脲衍生物5處理產生甲脒基哌啶衍生物6，其中的胺和胍官能團是用不同的保護基保護的。
甲脒基哌啶衍生物6然後可選擇性地脫保護，與N-保護的胺基酸7偶合，得到中間體8。
中間體8產生最終產物的反應在某些程度上取決於R1的性質。當R1是R5-OCO時，合成可方便地通過中間體9進行。
當R1是H、R4-CO、R4-O2CCH2、或R5-SO2時，反應可方便地通過中間體10和11進行。
胍官能團的脫保護給出通式1的化合物，其中R1是H。在胍脫保護之前將伯胺衍生化給出R1的其它實施方案的方法。
中間體12、13和14然後脫保護，產生相應的通式1的化合物。
當R1是烷基，或當R1和R2一起形成亞二甲苯基時，合成可方便地通過中間體15進行。
然後兩個脫保護步驟給出通式1的化合物。
本發明化合物是強力的和選擇性的血漿激肽釋放酶的抑制劑。因此它們可用來治療那些血漿激肽釋放酶的過度活性是致病因子的疾病。一般，為了在這樣的治療中使用，化合物需要經過配方來給予病人。藥物配方可以是固體的或液體的，如藥片、膠囊、溶液或懸浮液。製備這些配方的方法是製藥行業所公知的。
組合物要在護理醫生的監督下給予病人。
實施例使用以下的縮寫AcOH 乙酸
Boc-Dcha-OHN-(叔丁氧基羰基)-3-環己基-D-丙氨酸Boc-Dtyr(Et)-OHN-(叔丁氧基羰基)-O-乙基-D-酪氨酸Boc-Phe-ONSu N-(叔丁氧基羰基)-苯丙氨酸琥珀醯亞氨酸酯DMF二甲基甲醯胺H-thPse-OH 蘇式-3-苯基絲氨酸Mplc 中壓液相色譜TFA三氟乙酸「Celite」是Celite公司的註冊商標「Vydac」是W.R.Grace Co.的註冊商標實施例1(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽 1A.1-苄基-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶4-氨基-1-苄基哌啶(3.2g，16.8mmol)溶解在二氯甲烷(100mL)中。加入二碳酸二叔丁酯(3.7g，17.0mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(1.9g，19mmol)。混合物室溫攪拌18小時，真空除去溶劑，殘渣中加入乙酸乙酯(150mL)。該溶液用0.3M KHSO4(2×30mL)、飽和NaHCO3(2×30mL)、水(2×30mL)和鹽水(1×30mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，真空蒸發，給出黃色油，用矽膠快速色譜純化(洗脫液70％氯仿，30％環己烷)，給出黃色固體，鑑定為1-苄基-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶(4.9g，18.9mmol，100％)。
1B.4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶1-苄基-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶(4.9g，18.9mmol)溶解在乙醇(100mL)中。該溶液用10％Pd/C在60psi氫化。室溫18小時後，混合物Celite過濾，殘渣用乙醇(100mL)洗滌。合併的濾液真空蒸發，給出白色固體，鑑定為.4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶(2.3g，7.1mmol，51％)。
1C.N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-1-甲脒4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶(1.5g，7.5mmol)溶解在乙醇(100mL)中。加入N，N』-二(苄氧基羰基)-S-甲基異硫脲(3.1g，8.7mmol)和氧化汞(1.9g，8.8mmol)。混合物在40℃攪拌4小時，然後濾出固體，用乙醇(50mL)洗滌。合併的濾液真空蒸發，給出無色油，用矽膠快速色譜純化，得到無色油，鑑定為N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-1-甲脒(3.3g，6.6mmol，87％)。
1D.(2』S)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(叔丁氧基羰基氨基)-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-1-甲脒(3.1g，6.1mmol)溶解在4M HCl/二噁烷(70mL)中。室溫30分鐘後，真空蒸發溶劑，殘渣溶解在二氯甲烷(60mL)中。將該溶液冷卻到0℃，加入Boc-Phe-ONSu(2.2g，6.1mmol)，pH用N-甲基嗎啉調節到9。混合物室溫攪拌4小時，真空蒸發溶劑，殘渣溶解在乙酸乙酯(200mL)中。該溶液用0.3M KHSO4(2×30mL)、飽和NaHCO3(2×30mL)、水(2×30mL)和鹽水(1×30mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，真空蒸發，給出白色固體，用矽膠快速色譜純化(洗脫液70％氯仿，30％環己烷)，給出白色固體，鑑定為(2』S)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(叔丁氧基羰基氨基)-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(3.56g，5.4mmol，89％)。
1E.(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(2』S)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(叔丁氧羰基基氨基)-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(2.5g，3.85mmol)溶解在4M HCl/二噁烷(70mL)中。室溫30分鐘後，溶劑真空蒸發，殘渣溶解在二氯甲烷/DMF(9∶1，50mL)中。該溶液冷卻到0℃，加入Boc-DTyr(Et)-OH(1.2g，3.84mmol)接著加入1-羥基苯並三唑水合物(680mg，5.0mmol)和水溶性碳二亞胺(1.0g，5.0mmoL)。15分鐘後，用N-甲基嗎啉將pH調節到8。混合物室溫攪拌18小時。然後真空蒸發溶劑，殘渣溶解在氯仿(200mL)中。該溶液用0.3M KHSO4(2×30mL)、飽和NaHCO3(2×30mL)、水(2×30mL)和鹽水(1×30mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，真空蒸發，給出白色固體，用矽膠快速色譜純化(洗脫液85％氯仿，15％環己烷)，給出白色固體，鑑定為(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(2.47g，3.2mmol，65％)。
1F.(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽
(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(2.1g，2.7mmol)溶解在4MHCl/二噁烷(50mL)中。室溫30分鐘後，真空蒸發溶劑，殘渣溶解在乙酸/水(95∶5，50mL)中。該溶液用10％Pd/C氫化。室溫2小時後，混合物用Celite過濾，殘渣用乙酸/水(9∶1，30mL)洗滌。合併的濾液真空蒸發，殘渣用mplc在Vydac C18(15-25μ)，MeCN/H2O/TFA純化，給出白色固體鑑定為H-DTyr(Et)-Phe-4-氨基-1-咪基哌啶三氟乙酸鹽(1.12g)。[M+H]+＝480.6。
實施例2(2』S，2」R)-4-(2』-(3」-環己基-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒 2A.(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-(環己基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(2』S)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(叔丁氧基羰基氨基)-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(從實施例1D，1.9g，2.99mmol)溶解在4M HCl/二噁烷(70mL)中。室溫30分鐘後，溶劑真空蒸發，殘渣溶解在二氯甲烷/DMF(9∶1，50mL)中。
該溶液冷卻到0℃，加入Boc-DCha-OH(900mg，3.3mmol)接著加入1-羥基苯並三唑水合物(820mg，6.1mmol)和水溶性碳二亞胺(730mg，3.6mmoL)。15分鐘後，用N-甲基嗎啉將pH調節到8。混合物室溫攪拌18小時。然後真空蒸發溶劑，殘渣溶解在氯仿(200mL)中。該溶液用0.3M KHSO4(2×30mL)、飽和NaHCO3(2×30mL)、水(2×30mL)和鹽水(1×30mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，真空蒸發，給出白色固體，用矽膠快速色譜純化(洗脫液90％氯仿，10％環己烷)，給出白色固體，鑑定為(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-(環己基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(1.73g，2.14mmol，72％)。
2B.(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(3」-環己基-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-(環己基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(1.73g，2.14mmol)溶解在4M HCl/二噁烷(50mL)中。室溫30分鐘後，溶劑真空蒸發，殘渣溶解在乙腈(100mL)中。加入溴代乙酸甲酯(400mg，2.6mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(440mg，4.4mmol)。混合物在60℃攪拌5小時，然後真空蒸發溶劑，殘渣溶解在乙酸乙酯(200mlL)中。。該溶液用0.3M KHSO4(2×30mL)、飽和NaHCO3(2×30mL)、水(2×30mL)和鹽水(1×30mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，真空蒸發，給出白色固體，用矽膠快速色譜純化(洗脫液90％氯仿，10％環己烷)，給出白色固體，鑑定為(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(3」-環己基-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(1.65g，2.11mmol，98％)。
2C.(2』S，2」R)-4-(2』-(3」-環己基-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(3」-環己基-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(1.62g，2.11mmol)溶解在乙酸/水(95∶5，50mL)中。該溶液用10％Pd/C氫化。室溫2小時後，混合物用Celite過濾，殘渣用乙酸/水(9∶1，30mL)洗滌。合併的濾液真空蒸發，殘渣用mplc在VydacC18(15-25μ)，MeCN/H2O/TFA純化，給出白色固體鑑定為.(2』S，2」R)-4-(2』-(3」-環己基-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽(570mg)。+＝515。
實施例3(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-(羧甲基氨基)-3」-環己基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽
3A.(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(羧甲基氨基)-3」-環己基-丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(3」-環己基-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(從實施例2B，1.62g，2.1mmol)溶解在四氫呋喃(50mL)中。加入1M氫氧化鋰(3mL，3mmol)。18小時後，溶劑真空蒸發，殘渣用乙酸乙酯(150mL)溶解，用1M檸檬酸(1×30mL)、水(2×30mL)和鹽水(1×30mL)洗滌，硫酸鈉乾燥，真空蒸發，給出白色固體，鑑定為(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(羧甲基氨基)-3」-環己基-丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(11.62g，2.11mmol，100％)。
3B.(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-(羧甲基氨基)-3」-環己基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(羧甲基氨基)-3」-環己基-丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(1.62g，2.11mmol)溶解在乙酸/水(95∶5，50mL)中。該溶液用10％Pd/C氫化。室溫2小時後，混合物用Celite過濾，殘渣用乙酸/水(9∶1，30mL)洗滌。合併的濾液真空蒸發，殘渣用mplc在Vydac C18(15-25μ)，MeCN/H2O/TFA純化，給出白色固體鑑定為(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-(羧甲基氨基)-3」-環己基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽(570mg)。+＝501實施例4(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-(苯甲醯基氨基-3」-(4-乙氧基苯基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽 4A.(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-(苯甲醯基氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)-N，N』-二(苄氧基羰基)哌啶-1-甲脒
(2』S，2」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(從實施例1F，100mg，0.12mmol)溶解在4MHCl/二噁烷(20mL)中。室溫30分鐘後，溶劑真空蒸發，殘渣溶解在二氯甲烷(20mL)中。溶液冷卻到0℃，加入苯甲醯氯(19.7mg，0.141mmol)和三乙胺(36mg，0.36mmol)。混合物室溫攪拌18小時，真空蒸發溶劑，殘渣溶解在乙酸乙酯(70mL)中，用0.3M KHSO4(2×20mL)，飽和NaHCO3(2×20mL)，水(2×20mL)和鹽水(1×20mL)洗滌，硫酸鈉乾燥，真空蒸發，給出白色固體，用矽膠快速色譜純化(洗脫液85％氯仿，15％環己烷)，給出白色固體，鑑定為(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-(苯甲醯基氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)-N，N』-二(苄氧基羰基)哌啶-1-甲脒(65mg，0.072mmol，60％)。
4B.(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-(苯甲醯基氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-(苯甲醯基氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)-N，N』-二(苄氧基羰基)哌啶-1-甲脒(65mg，0.072mmol)溶解在乙酸/水(95∶5，25mL)中。該溶液用10％Pd/C氫化。室溫1小時後，混合物用Celite過濾，殘渣用乙酸/水(9∶1，20mL)洗滌。合併的濾液真空蒸發，殘渣用mplc在VydacC18(15-25μ)，MeCN/H2O/TFA純化，給出白色固體鑑定為(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-(苯甲醯基氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽(44mg)。+＝585實施例5(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-羥基-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽 5A.(2S，3R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-羥基-3-苯基丙酸
H-thPse-OH(J.Biol.Chem.，1953，204，323)(1.4g，7.73mmol)溶解在二噁烷(75mL)中。加入氫氧化鈉(820mg，9.6mmol)在水(75mL)中的溶液，接著加入二碳酸二叔丁酯(2.1g，9.6mmol)。混合物室溫攪拌18小時，然後真空蒸發除去二噁烷，殘渣用乙醚(1×100ml)洗滌，用1M HCl酸化到pH4，用氯仿(3×100mL)萃取。合併的萃取物用水(1×50mL)和鹽水(1×50mL)洗滌，硫酸鈉乾燥，真空蒸發給出白色固體，鑑定為(2S，3R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-羥基-3-苯基丙酸(1.6g，5.7mmol，74％)。
5B.(2』S，3R』)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶-1-甲脒(從實施例1C，2.3g，4.5mmol)溶解在4M HCl/二噁烷(70mL)中。室溫30分鐘後，溶劑真空蒸發，殘渣溶解在CH2Cl2/DMF(9∶1，50mL)中。溶液冷卻到0℃，加入(2S，3R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-羥基-3-苯基丙酸(1.6g，5.6mmol)，接著加入1-羥基苯並三唑水合物(1.1g，8.1mmol)和水溶性碳二亞胺(1.4g，75.0mmol)。15分鐘後，用N-甲基嗎啉將pH調節到8。混合物在室溫攪拌18小時，然後真空蒸發溶劑，殘渣溶解在乙酸乙酯(200mlL)中。該溶液用0.3M KHSO4(2×30mL)、飽和NaHCO3(2×30mL)、水(2×30mL)和鹽水(1×30mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，真空蒸發，給出白色固體，用矽膠快速色譜純化(洗脫液50％乙酸乙酯，50％石油醚)，給出白色固體，鑑定為(2』S，3R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(1.1g，1.6mmol，36％)。
5C.(2』S，2」R，3」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(2』S，3』R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(叔丁氧基羰基氨基)-3』-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(1.1g，1.6mmol)溶解在4M HCl/二噁烷(70mL)中。室溫30分鐘後，溶劑真空蒸發，殘渣溶解在CH2Cl2/DMF(9∶1，50mL)中。溶液冷卻到0℃，加入Boc-Dtyr(Et)-OH(620mg，2.0mmol)，接著加入1-羥基苯並三唑水合物(270mg，2.0mmol)和水溶性碳二亞胺(420mg，2.1mmol)。15分鐘後，用N-甲基嗎啉將pH調節到8。混合物在室溫攪拌18小時，然後真空蒸發溶劑，殘渣溶解在乙酸乙酯(200mlL)中。該溶液用0.3M KHSO4(2×30mL)、飽和NaHCO3(2×30mL)、水(2×30mL)和鹽水(1×30mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，真空蒸發，給出白色固體，用矽膠快速色譜純化(洗脫液60％乙酸乙酯，40％石油醚)，給出白色固體，鑑定為(2』S，2」R，3」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(1.2g，1.3mmol，80％)。
5D.(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-羥基-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽(2』S，2」R，3」R)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(1.2g，1.3mmol)溶解在4MHCl/二噁烷(50mL)中。室溫30分鐘後，溶劑真空蒸發，殘渣溶解在乙酸/水(95∶5，50mL)中。該溶液用10％Pd/C氫化。室溫2小時後，混合物用Celite過濾，殘渣用乙酸/水(9∶1，30mL)洗滌。合併的濾液真空蒸發，殘渣用mplc在VydacC18(15-25μ)，MeCN/H2O/TFA純化，給出白色固體鑑定為(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-羥基-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽(540mg)。＝497.0實施例6(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-甲氧基-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽 6A.(2』SR，3』RS)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(2』SR，3』RS)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒按照實施例5相同的方法製備，但是用外消旋的H-thPse-OH為原料。
6B.(2』SR，3』RS)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-甲氧基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(2』SR，3』RS)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(180mg，0.27mmol)溶解在CH2Cl2(30mL)中。加入碘甲烷(190mg，1.3mmol)和氧化銀(132mg，0.8mmol)。60℃ 18小時後，過濾混合物，濾液真空蒸發，得到褐色油，用矽膠快速色譜純化(洗脫液50％乙酸乙酯，50％石油醚)，給出白色固體，鑑定為(2』SR，3』RS)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-甲氧基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(112mg，0.16mmol，61％)。
6C.(2』SR，2』R，3』RS)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基-3』-甲氧基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(2』SR，3』RS)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-甲氧基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(112mg，0.16mmol)溶解在4M HCl/二噁烷(20mL)中。室溫30分鐘後，溶劑真空蒸發，殘渣溶解在CH2Cl2(30mL)中。溶液冷卻到0℃，加入Boc-Dtyr(Et)-OH(50mg，0.16mmol)，接著加入PyBrop(76g，0.16mmol)。用N，N-二異丙基胺將pH調節到9。混合物在室溫攪拌18小時，然後真空蒸發溶劑，殘渣溶解在乙酸乙酯(70mL)中。該溶液用0.3M KHSO4(2×20mL)、飽和NaHCO3(2×20mL)、水(2×20mL)和鹽水(1×20mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，真空蒸發，給出白色固體，用矽膠快速色譜純化(洗脫液65％氯仿，15％己烷)，給出白色固體，鑑定為(2』SR，2』R，3』RS)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基-3』-甲氧基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(108mg，0.12mmol，75％)。
6D.(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-甲氧基-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽(2』SR，2』R，3』RS)-N，N』-二(苄氧基羰基)-4-(2』-(2」-(叔丁氧基羰基氨基)-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基-3』-甲氧基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒(108mg，0.12mmol)溶解在4MHCl/二噁烷(20mL)中。室溫30分鐘後，溶劑真空蒸發，殘渣溶解在乙酸/水(95∶5，20mL)中。該溶液用10％Pd/C氫化。室溫2小時後，混合物用Celite過濾，殘渣用乙酸/水(9∶1，30mL)洗滌。合併的濾液真空蒸發，殘渣用mplc在Vydac C18(15-25μ)，MeCN/H2O/TFA純化，給出白色固體鑑定為(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-甲氧基-3』-苯基-丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒三氟乙酸鹽(18mg)。＝511.3用類似的方法製備以下的化合物。
實施例7-17 實施例18-52
實施例53-54
實施例55-58
實施例59測定對血漿激肽釋放酶的抑制常數Ki用標準方法(見Johansen等，Int.J.Tiss.Reac.1986，8，185；shori等，Biochem.Pharmacol.，1992，43，1209；Sturzebecher等，Biol.Chem.Hoppe-Seyler，1992，373，1025)測定血漿激肽釋放酶活性的體外抑制作用。人血漿激肽釋放酶(Callbiochem)在37℃與三個不同濃度的生色底物S-2302(Chromogenix AB)和各種濃度的試驗化合物共同培養。殘留的酶活性(反應的初速度)通過測量在405nm處光吸收的改變來測定，試驗化合物的抑制常數Ki從Dixon曲線確定(Dixon，Biochem.J.，1953，55，170)。典型的結果列在下表中。
實施例60酶選擇性的測定選出的化合物按照實施例59的方法用適當的酶和生色底物(Chromogenix AB)進一步篩選對其它胰蛋白酶樣的蛋白酶的抑制活性。代表性的結果列在下表中。選擇性按下式計算選擇性＝(對試驗酶的Ki)/(對血漿激肽釋放酶的Ki)
權利要求
1.通式1的化合物，或其藥學上可接受的鹽 其中，R1選自H、低級烷基、R4-CO、R4-O2CCH2、R5-OCO和R5-SO2；R2選自低級烷基、任選地被烷基或烷氧基取代的環烷基、任選地被烷基或烷氧基取代的(C5-C12)環烷基烷基、任選地被最多三個選自F、Cl、Br、I、OH、低級烷基、O-(低級烷基)、O-苄基、NH2、NO2、NH-醯基、CN和CF3的基團所取代的芳烷基、任選地被最多三個選自F、Cl、Br、OH、低級烷基和O-(低級烷基)的基團所取代的芳烷基氧甲基；或者，R1和R2一起構成任選地在芳環上被選自F、Cl、Br、OH、低級烷基和O-(低級烷基)的基團所取代的鄰-亞二甲苯基；R3選自H、OH和O-(低級烷基)；R4選自H、低級烷基和苯基；以及R5選自低級烷基、苯基和苄基。
2.如權利要求1所述的化合物，其中R1選自H、低級烷基和R4-O2CCH2。
3.如權利要求1和2所述的化合物，其中R2選自(C6-C10)環烷基甲基、任選地被最多三個選自F、Cl、Br、OH、低級烷基和O-(低級烷基)的基團所取代的苄基、任選地被最多三個選自F、Cl、Br、OH、低級烷基、O-(低級烷基)的基團所取代的苯乙基和任選地被最多三個選自F、Cl、Br、OH、低級烷基和O-(低級烷基)的基團所取代的苄氧基甲基。
4.如權利要求1-3中任一項所述的化合物，其中R2選自環己基甲基、十氫萘-2-基甲基、苄基、4-氟苄基、4-氯苄基、4-羥基苄基、4-(低級烷基)氧苄基、α-羥基苄基、α-甲氧基苄基、苯乙基和苄氧基甲基。
5.如權利要求1-4中任一項所述的化合物，其中絕對立體化學如通式1A所描述
6.如權利要求1-5中任一項所述的化合物，其中絕對立體化學如通式1B所描述
7.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，所述化合物選自(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-羧甲基氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基-氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(3」-(4-乙氧基苯基)-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)-丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-環己基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-羧甲基氨基-3」-環己基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(3」-環己基-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-苯基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-羧甲基氨基-3」-苯基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-(甲氧基羰基甲基氨基)-3」-苯基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-十氫萘-2-基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(2」羧甲基氨基-3」-十氫萘-2-基丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R)-4-(2』-(3」-十氫萘-2-基-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)丙醯基氨基)-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-環己基丙醯基氨基)-3』-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(2」-羧甲基氨基-3」-環己基丙醯基氨基)-3』-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(3」環己基-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)-丙醯基氨基)-3』-羥基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(2」-氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-甲氧基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(2」-羧甲基氨基-3」-(4-乙氧基苯基)丙醯基氨基)-3』-甲氧基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；和(2』S，2」R，3』R)-4-(2』-(3」(4-乙氧基苯基)-2」-(甲氧基羰基甲基氨基)-丙醯基氨基)-3』-甲氧基-3』-苯基丙醯基氨基)哌啶-1-甲脒；或其藥學上可接受的鹽。
8.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含權利要求1-7中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽。
9.一種治療以血漿激肽釋放酶的過度活性為致病因子的疾病的方法，所述方法包含給予需要治療的患者藥學活性量的通式1的化合物，或其藥學上可接受的鹽， 其中R1選自H、低級烷基、R4-CO、R4-O2CCH2、R5-OCO和R5-SO2；R2選自低級烷基、任選地被烷基或烷氧基取代的環烷基、任選地被烷基或烷氧基取代的(C5-C12)環烷基烷基、任選地被最多三個選自F、Cl、Br、I、OH、低級烷基、O-(低級烷基)、O-苄基、NH2、NO2、NH-醯基、CN和CF3的基團所取代的芳烷基、任選地被最多三個選自F、Cl、Br、OH、低級烷基和O-(低級烷基)的基團所取代的芳烷基氧甲基；或者，R1和R2一起構成任選地在芳環上被選自F、Cl、Br、OH、低級烷基和O-(低級烷基)的基團所取代的鄰-亞二甲苯基；R3選自H、OH和O-(低級烷基)；R4選自H、低級烷基和苯基；以及R5選自低級烷基、苯基和苄基。
10.如權利要求9所述的方法用於治療炎性腸病、關節炎、炎症、敗血性休克、低血壓、癌症、成年人呼吸窘迫綜合症、播散性血管內凝結、心肺旁路外科和手術後出血。
11.如權利要求1-7中任一項所述的化合物在製造用於治療人或動物疾病的藥物中的應用。
12.如權利要求8所述的藥物組合物用於治療以血漿激肽釋放酶的過度活性為致病因子的疾病。
全文摘要
通式1的化合物，或其藥學上可接受的鹽其中，R
文檔編號A61P7/04GK1639186SQ03805401
公開日2005年7月13日 申請日期2003年3月4日 優先權日2002年3月8日
發明者D·M·伊文斯 申請人:凡林有限公司