Il-21變種的製作方法

2023-04-24 16:00:26

專利名稱：Il-21變種的製作方法
技術領域：
本發明涉及IL-21的新變種，所述變種與IL-21受體的結合有所改進。
背景技術：
IL-21肽最初在WO 2000/53761中被公開，所述多肽由人類IL-21基因編碼，由該申請的SEQ ID No.2顯示。此多肽的前肽(pro-peptide )是一個具有161個胺基酸殘基的肽。為了方便起見，所述序列在本申請中再次被表示為SEQ ID No. 1。最初i人為成熟肽是由SEQ ID No, 1的胺基酸殘基33-162組成的肽；然而最近(WO 2004/112703)表明該成熟肽實際上是SEQ ID No. 2所示的胺基酸殘基30-162。 IL-21被認為可用於治療癌症，例如惡性黑素瘤。參見例如WO 2005/53761和WO 2003/103589。
雖然IL-21顯示出對於多種疾病具有治療效力，但是仍然需要具有改善的或另外的性質的IL-21變種，以滿足醫療需要，所述改進的或另外的性質例如活性、選擇性、穩定性和循環時間或生物半衰期。IL-21受體拮抗劑也被認為具有治療用途。
國際申請WO2004/112703描述了若干IL-21變種。
國際申請WO2006/111524描述了某些與IL-21受體的結合有所改進的IL-21肽。

發明內容
已發現當對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基66-98的區域的長度減少時，IL-21的活性被很大程度地保留甚至有所改善。
因此，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基66-98的區域的長度被減少。在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基77-92的區域的長度被減少。在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQ IDNo. 2中胺基酸殘基82-88的區域的長度被減少。在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基71-92的區域的長度被減少。在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基65-92的區域的長度被減少。在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基77-96的區域的長度被減少。在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基83-86的區域的長度被減少。在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中#^酸殘基83-86的區域的長度被減少。
本發明還涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基66-98的區域被一段胺基酸殘基置換，或其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基77-92的區域被一段胺基酸殘基置換，其中所述胺基酸殘基段較被置換的區域為短。
在一個實施方案中，本發明提供本發明的肽在治療中的應用。在一個實施方案中，本發明涉及含有本發明的肽的藥物組合物。在一個實施方案中，本發明提供一種治療方法，所述方法包含將治療有效量的本發明的肽給予需要該肽的患者。
在一個實施方案中，本發明涉及本發明的肽用於製備藥物的用途。在一個實施方案中，本發明涉及編碼本發明的肽的核酸構建體；涉及包含所述構建體的載體；並涉及包含所述載體的宿主細胞。在一個實施方案中，本發明涉及本發朋的肽的特異性抗體。


圖1: hlL-WT和缺失變種[83-86的劑量效應曲線。在一個報告試驗中用Baf3/hlL-21Ra細胞分析了被hlL-21 cDNA構建體轉染的HEK293FS細胞的上清液。所述曲線代表在同樣條件下進行三次的一個代表性實驗。
圖2: hIL-WT和如圖所示的缺失變種的劑量效應曲線。在一個報告試驗中用Bai3/hlL-21Ra細胞分析了被hIL-21 cDNA構建體轉染的HEK293 FS細胞的上清液。所述曲線代表在同樣條件下進行三次的一個代表性的實驗。
圖3: hIL-WT和如圖所示的缺失變種的劑量效應曲線。在一個報告試驗中用Baf3/hlL-21Ra細胞分析了被hIL-21 cDNA構建體轉染的HEK293 FS細胞的上清液。所述曲線代表在同樣條件下進行三次的一個代表性的實驗。
具體實施例方式
已發現當對應於SEQ ID No. 2中^J^酸殘基66-98的區域的長度減少時，IL-21的活性被很大程度地保留甚至有所改善。
因此，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中#^酸殘基66-98的區域的長度被減少。
除非另外說明或與上下文牴觸，術語肽包括任何合適的肽並可與術語多肽和蛋白同義；前提是讀者會認識到每種含有各個胺基酸聚合物的分子可能與顯著性差異有關，並因此形成本發明獨立的實施方案(例如， 一種肽如抗體(由多條多肽鏈構成)與例如單鏈抗體、肽免疫粘合素或單鏈免疫原性肽有顯著性差異)。因此，本文的術語肽通常應被理解為是指任何合適大小的任何合適的肽和組合物(基於胺基酸的數目和蛋白分子中連接的鏈的數目)。另外，除非另外指出或與上下文牴觸，本文所述本發明方法和組合物中提到的肽可包含非天然的胺基酸殘基和/或非L胺基酸殘基。
除非另外說明或與上下文牴觸(以及如果作為術語多肽和/或蛋白的獨立實施方案討論)，否則術語肽也包括衍生的肽分子。簡言之，除非另外說明或與上下文牴觸，在本發明的上下文中，肽的衍生物是指這樣的肽，所述肽的一個或多個氛基酸殘基被化學修飾(如烷基化、醯化、酯化或醯胺化)或連接一個或多個非胺基酸的有機和/或無機原子或分子取代基(如聚乙二醇(PEG)基團、親脂取代基(其任選地可通過間隔殘基或例如P-丙氨酸、Y-氨基丁酸(GABA)、 L/D-穀氨酸、琥珀酸等基團與所述肽的胺基酸序列相連)、螢光團、生物素、放射性核素等)，並也可為或者包含非必需胺基酸、非天然胺基酸和/或非L胺基酸的殘基(然而，應再次認識到這些衍生物自身可能^皮認作本發明的獨立特徵，且肽的含義包括這些分子是為了方便地描述本發明而並非暗示棵肽(naked p印tide )與這些衍生物之間具有任何等同性)。這些胺基酸殘基的非限制性實例包括例如2-氨基脂肪酸、3-氨基脂肪酸、p-丙氨酸、p-氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基異丁酸、3-氨基異丁酸、2-氨基庚二酸、2，4-二氨基丁酸、鎖鏈素、2，2，-氨基庚二酸、2，3-二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬醯胺、羥賴氨酸、別羥基賴氨酸、3-羥基脯氨酸、4-羥基脯氨酸、異鎖鏈素、別異亮氨酸、N-曱基甘氨酸、N-曱基異亮氨酸、6-N-曱基賴氨酸、N-甲基纈氨酸、正纈氨酸、正亮氨酸、鳥氨酸和statine卣化#^酸。
IL-21肽是指具有如下性質的任何肽，所述肽在細胞和/或生理條件下能與IL-21受體特異性結合充分長的時間，從而能誘導、促進、增強和/或以其他方式調控與該抗原相關的生理作用；所述結合可被ELISA、蛋白質印跡或本文所述和/或本領域已知的其他類似的合適蛋白結合技術檢測，和/或經過一段時間後(例如至少約15分鐘、至少約30分鐘、至少約45分鐘、至少約1小時、至少約2小時、至少約4小時、至少約6小時、至少約12小時、至少約l-24小時、至少約l-36小時、至少約1-48小時、至少約1-72小時、約一周或更長)與所述受體可檢測地結合。IL-21肽的結合例如可如實施例中所述被測定。
在一個實施方案中，本發明的IL-21肽含有與SEQ ID No. 1或SEQID No. 2具有至少80%同一性的胺基酸序列。在一個實施方案中，本發明的IL-21肽含有與SEQ ID No. 1或SEQ ID No. 2具有至少85%、例如至少90%、例如至少95%、例如至少99%同一性的#^酸序列。
術語"同 一性"如本領域所知，是指兩個或多個肽的序列之間通過比較所述序列而確定的關係。本領域中，"同一性"還指由兩個或更多M酸殘基的序列段之間匹配的數目而確定的肽之間的序列相關程度。"同一性"通過特定數學模型或電腦程式(即"算法")執行的空位(如果有的情況下)比對來測量兩個或多個序列中較短的序列的同 一 匹配百分比。相關肽的同一性可通過已知方法容易地計算出。這些方法包括但不限於在Computational Molecular Biology, Lesk， A. M.， ed.， Oxford UniversityPress, New York, 1988、 Biocomputing: Informatics and Genome Projects,Smith, D. W" ed.， Academic Press, New York, 1993、 Computer Analysis ofSequence Data, Part 1， Griffin, A. M.， and Griffin, H. G" eds" HumanaPress, New Jersey, 1994、 Sequence Analysis in Molecular Biology, vonHeinje， G, Academic Press, 1987、 Sequence Analysis Primer, Gribskov， M.and Devereux, J.， eds" M. Stockton Press, New York, 1991和Carillo et al"SIAM J. Applied Math. ^， 1073 (1988)中所述的方法。
優選的測定同一性的方法被設計使測試序列之間達到最大匹配。確定同 一性的方法在公眾可得的電腦程式中有所描述。優選的測定兩個序列
之間同一性的電腦程式方法包括GCG程序包，包括GAP(Devereux etal" Nucl. Acid. Res. ^!， 387 (1984); Genetics Computer Group, UniversityofWisconsin,Madison， Wis.)、 BLASTP、 BLASTN和FASTA (Altschul etal.， J. Mol. Biol. 2!f ， 403-410 (1990))。所述BLASTX程序乂>眾可從國家生物技術信息中心(NCBI)和其他途徑(BLAST Manual, AItschul et al，NCB/NLM/NIH Bethesda， Md. 20894; Altschul et al.，見上文)獲得。公知的Smith Waterman算法也可用於測定同一性。
例如，使用計算機算法GAP(Genetics Computer Group, University ofWisconsin, Madison, Wis.)將要測定序列同一性百分比的兩個肽進行比對以使它們對應的胺基酸達到最佳匹配(該算法所測定的"匹配跨度")。所述算法與空位開放罰分(其被計算為平均對角值的3倍；所述"平均對角值"是所用比較矩陣的對角平均值；所述"對角值"是由特定比較矩陣分配給每種最佳胺基酸匹配的分數或數目)和空位延伸罰分(其通常是空位開放罰分的1/10 )以及比較矩陣如PAM 250或BLOSUM 62結合使用。所述算法也使用標準比較矩陣(對於PAM250比較矩陣參見Dayhoff et al.，Atlas of Protein Sequence and Structure, vol. 5， supp.3 (1978); 對於BLOSUM 62比較矩陣參見Henikoff et al" Proc. Natl. Acad. Sci USA §2，10915-10919 (1992))。
肽序列比較的優選參數包括
算法Needleman et al.， J. Mol. Biol. 45， 443-453 (1970);比較矩陣BLOSUM 62， Henikoff et al" PNAS USA ^￡， 10915-10919 (1992);空位罰分12;空位長度罰分4;相似度閾值0。
GAP程序可按照上述參數使用。上述參數是使用GAP算法進行肽比較的默認參數(沒有末端空位罰分)。
在一個實施方案中，本發明的IL-21肽含有與SEQ ID No. 1或SEQID No. 2具有至少80。/o相似性的^J^酸序列。在一個實施方案中，本發明的IL-21肽含有與SEQ ID No. 1或SEQ ID No. 2具有至少85%、如至少卯％、如至少95%、如至少99%同一性的#^酸序列。
術語"相似性"是有關同一性的概念，但與"同一性"不同的是，它是指既包括同一匹配又包括保守置換匹配的序列關係。如果兩個多肽序列具有例如10/20的相同胺基酸，且剩餘的都是非保守性置換，那麼同一性和相似性百分比都是50%。如果在同一個實例中，除了前述的10個相同的胺基酸之外還有5個位置是保守置換，那麼同一性百分比仍是50%，但相似性百分比是75%(15/20)。因此，對於有保守置換的情況，兩個多肽之間的相似度會比這兩個多肽之間的同 一性百分比高。
對含有胺基酸序列SEQ ID No. 1或SEQ ID No. 2的肽的保守性修飾(以及對其編碼核酸的相應修飾)會產生與所述含有胺基酸序列SEQ IDNo. 1或SEQ ID No. 2的肽具有相似的功能和化學性質的肽。相比之下，本發明的肽與含有胺基酸序列SEQ ID No. 1或SEQ ID No. 2的肽相比，在功能和/或化學性質上的顯著改變可通過選擇胺基酸序列中的在維持以下方面的作用上明顯不同的置換而實現(a)置換區域的分子主幹的結構，例如層疊構象或螺旋構象，(b)靶位點的分子的電荷或疏水性，或(c)側鏈的體積。
例如，"保守性胺基酸置換"可包括用非天然胺基酸殘基置換天然殘基、並且對該位置的胺基酸殘基的極性或電荷幾乎沒有或沒有影響的置換。另外，多肽中的任何天然殘基都可被丙氨酸置換，這就是以前的文獻描述過的"丙氨酸掃描誘變"(例如參見討論丙氨酸掃描誘變的MacLeniian et al" Acta Physiol. Scand. Suppl.巡，55-67 (1998)和Sasakiet al" Adv. Biophys. ^， 1-24 (1998))。
本領域的技術人員可在需要胺基酸置換的時候確定所需要的胺基酸置換(無論是保守的還是非保守的)。例如，除已描述的突變以外，胺基酸置換還可用於識別本發明的肽的重要殘基，或增加或降低本文所述肽對受體的親和性。
天然殘基可基於常見的側鏈性質被分類
1) 疏水的正亮氨酸、Met、 Ala、 Val、 Leu、 lie;
2) 中性親水的Cys、 Ser、 Thr、 Asn、 Gin;
3) 酸性的Asp、 Ghi;
4) 鹼小生的His、 Lys、 Arg;
5) 影響鏈取向的殘基Gly、 Pro;和
6) 芳香性的Trp、 Tyr、 Phe。
進行上述修飾時，應考慮胺基酸的水化指數。每個胺基酸都基於它們的疏水性和電荷性質而被分配了一個水化指數異亮氨酸(+4.5);纈氨酸(+4.2);亮氨酸(+3.8);苯丙氨酸(+2.8);半胱氨^/胱氨酸(+2.5);蛋氨酸(+1.9);丙氨酸(+1.8);甘氨酸(-0.4);蘇氨酸(-0.7);絲氨酸(-0.8);色氨酸(-0.9 );酪氨酸(-1.3 );脯氨酸(-1.6);組氨酸(-3.2 );
穀氨酸(-3.5 );穀氨醯胺(-3.5);天冬氨酸(-3.5 );天冬醯胺(-3.5);
賴氨酸(-3.9);和精氨酸(-4.5 )。
胺基酸的水化指數對於蛋白交互生物功能的重要性為本領域所已知(Kyte et al.， J. Mol. Biol.， 1^2， 105-131 (1982))。已知某些胺基酸可以置
換具有相似7jC化指數或分數的其他胺基酸並仍保持相似的生物活性。基於7K化指數進行修飾時，優選用水化指數在±2之內的胺基酸進行置換，特
別優選使用水化指數在土l之內的胺基酸進行置換，尤其優選使用水化指
數在±0.5之內的M酸進行置換。
本領域還已知，基於親水性可有效地進行相似胺基酸的置換，特別是當這樣得到的生物學功能相當的蛋白或肽旨在用於(例如本發明的)免疫學實施方案時更是如此。由其相鄰胺基酸的親水性決定的蛋白最大局部平均親水性與所述蛋白的免疫原性和抗原性即與生物學性質相關。
下列為分配給胺基酸殘基的親水性數值精氨酸(+3.0);賴氨酸(，3.0);天冬氨酸(+3.0土l);穀氨酸(+3.0±1);絲氨酸(+0.3);天冬醯胺(+0.2);穀氨醯胺(+0.2);甘氨酸(O);蘇氨酸(-0.4);脯氨酸(-0.5±1);丙氨酸(-0.5);組氨酸(-0.5);半胱氨酸(-1.0);蛋氨酸(-1.3);纈氨酸(-1.5);亮氨酸(-1.8);異亮氨酸(-1.8);酪氨酸(-2.3);苯丙氨酸(-2.5);色氨酸(-3.4)。基於相似親水性數值進行修飾時，優選使用親水性數值在±2之內的胺基酸進行置換，特別優選使用親水性數值在土l之內的胺基酸進行置換，尤其優選使用親水性數值在土0.5之內的胺基酸進行置換。還可基於親水性從胺基酸一級序列中識別出表位。這些區域也被稱為"表位核心區"。
本發明的肽也可包含非天然胺基酸。
本發明的一個實施方案中，對應於SEQ ID No. 2中氛基酸殘基66-98的區域的長度被減少至少l個、如至少2個、如至少3個、如至少4個、如至少5個、如至少6個、如至少7個、如至少8個、如至少9個、如至少10個、如至少11個、如至少12個、如至少13個、如至少14個、如至少15個、如至少16個、如至少17個、如至少18個、如至少19個、如至少20個、如至少21個、如至少22個、如至少23個、如至少24個、如至少25個、如至少26個、如至少27個、如至少28個、如至少29個、如至少30個、如至少31個、如至少32個胺基酸殘基。在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo. 2中胺基酸殘基77-92的區域的長度被減少。
在一個實施方案中，對應於SEQ ID No. 2中氣基酸殘基77-92的區域的長度被減少至少1個、如至少2個、如至少3個、如至少4個、如至少5個、如至少6個、如至少7個、如至少8個、如至少9個、如至少10個、如至少11個、如至少12個、如至少13個、如至少14個氣基酸殘基。
在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo. 2中胺基酸殘基83-90的區域的長度被減少。
在一個實施方案中，對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基83-卯的區域的長度被減少至少1個、如至少2個、如至少3個、如至少4個、如至少5個、如至少6個、如至少7個胺基酸殘基。
在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo. 2中胺基酸殘基82-88的區域的長度被減少。
在一個實施方案中，對應於SEQ ID No. 2中氮基酸殘基82-88的區域的長度^皮減少至少1個、如至少2個、如至少3個、如至少4個、如至少5個胺基酸殘基。
在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo. 2中胺基酸殘基71-92的區域的長度被減少。
在一個實施方案中，對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基71-92的區域的長度被減少至少1個、如至少2個、如至少3個、如至少4個、如至少5個、如至少6個、如至少7個、如至少8個、如至少9個、如至少10個、如至少11個、如至少12個、如至少13個、如至少14個、如至少15個、如至少16個、如至少17個、如至少18個、如至少19個、如至少20個胺基酸殘基。
在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo. 2中胺基酸殘基65-92的區域的長度被減少。
本發明的一個實施方案中，對應於SEQ ID No. 2的胺基酸殘基65-92的區域的長度被減少至少1個、如至少2個、如至少3個、如至少4個、如至少5個、如至少6個、如至少7個、如至少8個、如至少9個、如至少10個、如至少11個、如至少12個、如至少13個、如至少14個、如至少15個、如至少16個、如至少17個、如至少18個、如至少19個、如至少20個、如至少21個、如至少22個、如至少23個、如至少24個、 如至少25個、如至少26個、如至少27個胺基酸殘基。
在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQID No. 2中胺基酸殘基77-96的區域的長度被減少。
在一個實施方案中，對應於SEQ ID No. 2中^^酸殘基77-96的區 域的長度被減少至少1個、如至少2個、如至少3個、如至少4個、如至 少5個、如至少6個、如至少7個、如至少8個、如至少9個、如至少 10個、如至少11個、如至少12個、如至少13個、如至少14個、如至 少15個、如至少16個、如至少17個、如至少18個、如至少19個^J^ 酸殘基。
在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQID No. 2中胺基酸殘基83-86的區域的長度被減少。
在一個實施方案中，對應於SEQ ID No. 2中^J^酸殘基83-86的區 域的長度被減少至少1個、如至少2個、如至少3個胺基酸殘基。
在一個實施方案中，本發明涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQID No. 2中胺基酸殘基83-86的區域的長度被減少。
在一個實施方案中，對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基83-86的區 域的長度被減少至少1個、如至少2個、如至少3個、如至少4個、如至 少5個胺基酸殘基。
在一個實施方案中，所述區域的長度通過使必要量的胺基酸殘基缺失 被減少。在一個實施方案中，所述被缺失的胺基酸殘基在所述區域的氨基 酸序列中並不是全部彼此相鄰的。
本發明還涉及一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘 基66-98的區域被一段胺基酸殘基所置換，或其中對應於SEQ ID No. 2 中胺基酸殘基77-92的區域被一段胺基酸殘基所置換，其中所述胺基酸殘 基段比被置換區域的長度短至少1個、如至少2個、如至少3個、如至少 4個、如至少5個、如至少6個、如至少7個、如至少8個、如至少9個、 如至少10個、如至少11個、如至少12個、如至少13個、如至少14個、 如至少15個氬基酸殘基。所述胺基酸殘基段可為IL-21來源的或非IL-21 來源的。所述段的必要特徵是比被置換區域的長度短至少1個胺基酸殘 基。所述胺基酸殘基段的精確序列並不重要，必要的是它要短於被置換區 域的長度。所述氮基酸殘基段的序列可例如為IL-21來源的或非IL-21來源的。
在一個實施方案中，所述胺基酸殘基段是IL-21來源的。在一個實施 方案中，所述胺基酸殘基段具有的序列來源自對應於SEQ ID No. 2中氨 基酸殘基66-98的區域。來源自IL-21此區域的序列可例如通過此區域的 一個或多個胺基酸殘基被其他胺基酸殘基置換而獲得。所述置換的性質並 不重要，因為重要的是所述胺基酸殘基段的長度(要短於被置換區域)。 IL-21來源的胺基酸殘基段與對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基66-98的 區域相比也可含有缺失以達到較短的長度，這些缺失可分散於整個區域或 為彼此相鄰的胺基酸殘基。
在一個實施方案中，IL-21來源的胺基酸殘基段的序列與SEQ ID No. 2中胺基酸殘基66-98的區域的胺基酸殘基的序列具有至少50%、如至少 60%、如至少70%、如至少80%、如至少85%、如至少90%、如至少 95%的同 一性或相似性。
在一個實施方案中，所述胺基酸殘基段包含至少一個對位於對應於 SEQ ID No. 2中胺基酸殘基66-98的區域中的胺基酸殘基的非保守性置 換。在一個實施方案中，所述胺基酸殘基段包含SEQIDNo.2的胺基酸 77-92的缺失。在一個實施方案中，所述胺基酸殘基段包含SEQIDNo.2 的Jl&酸83-卯的缺失。在一個實施方案中，所述胺基酸殘基段包含SEQ ID No. 2的胺基酸82-88的缺失。在一個實施方案中，所述Jl基酸殘基段 包含SEQ ID No. 2的胺基酸71-92的缺失。在一個實施方案中，所述氨 基酸殘基段包含SEQ ID No. 2的胺基酸65-92的缺失。在一個實施方案 中，所述胺基酸殘基段包含SEQ ID No. 2的胺基酸77-96的缺失。在一 個實施方案中，所述胺基酸殘基段包含SEQ ID No. 2的胺基酸83-86的 缺失。在一個實施方案中，所述胺基酸殘基段包含SEQIDNo.2的氨基 酸83-88的缺失。在一個實施方案中，所述胺基酸殘基段包含一個或多個 對應於SEQ ID No.2中胺基酸殘基66-98的區域中的非相鄰的缺失。
在一個實施方案中，IL-21來源的胺基酸殘基段的序列與SEQ ID No. 2中氣基酸殘基77-92的區域的氮基酸殘基序列具有至少50%、如至少 60%、如至少70%、如至少80%、如至少85%、如至少卯％、如至少 95%的同一性或相似性。在一個實施方案中，所述胺基酸殘基段包含至少 一個對位於對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基77-92的區域的胺基酸殘 基的非保守性置換。在一個實施方案中，所述胺基酸殘基段包含至少一個對位於對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基77-92的區域內的胺基酸殘基 的非保守性置換。在一個實施方案中，所述胺基酸殘基段包含SEQ ID No. 2的胺基酸83-卯的缺失。在一個實施方案中，所述胺基酸殘基段包含SEQ IDNo.2的胺基酸82-88的缺失。在一個實施方案中，所述胺基酸殘基段 包含SEQ ID No. 2的胺基酸83-86的缺失。在一個實施方案中，所述氨 基酸殘基段包含SEQ ID No. 2的胺基酸83-88的缺失。在一個實施方案 中，所述胺基酸殘基段包含一個或多個對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘 基77-92的區域中的非相鄰的缺失。
在一個實施方案中，所述氮基酸殘基段是非IL-21來源的。此Jl基酸 殘基段的序列可與SEQ ID No.2中相似長度的任何序列具有例如小於 50%的同一性。出於本發明的目的，所述胺基酸殘基段也可具有這樣一段 序列，該序列與SEQ ID No. 2的胺基酸殘基65-96的序列有小於50%的 同一性和/或與SEQ ID No. 2的胺基酸殘基77-92的序列有小於50%的同 一性。同樣，所述胺基酸殘基段的精確序列並不重要，重要的是它短於被 置換的區域。
在一個實施方案中，本發明涉及任何上述IL-21肽，條件是所述IL-21 肽不包含SEQIDNo. 3、 4、 5或6的序列或由SEQ ID No. 3、 4、 5或6 的序列及N末端甲硫氨酸構成的肽的序列。在一個實施方案中，本發明 涉及任何上述IL-21肽，條件是所述IL-21肽不包含SEQ ID No. 7、 8、 9 或10的序列或由SEQIDNo. 7、 8、 9或10的序列及N末端曱硫氨酸構 成的肽的序列。具有序列SEQIDNo.3、 4、 5、 6、 7、 8、 9和10的肽在 國際申請WO2004/112703被描述。
在一個實施方案中，本發明涉及任何上述IL-21肽，條件是其中所述 IL-21肽在對應於SEQ ID No. 2中Asn-68的位置上沒有置換突變。
在一個實施方案中，本發明涉及任何上述IL-21肽，條件是其中對應 於SEQ ID No. 2中Asn-68的位置上的胺基酸殘基不是Gln。
在一個實施方案中，本發明涉及任何上述IL-21肽，條件是其中所述 IL-21肽在對應於SEQ ID No. 2中Ser-80的位置上沒有置換突變。
在一個實施方案中，本發明涉及任何上述IL-21肽，條件是其中對應 於SEQ ID No. 2中Ser-80的位置上的M酸殘基不是Thr。
在一個實施方案中，本發明涉及任何上述IL-21肽，條件是其中所述 IL-21肽在對應於SEQ ID No. 2中Gln-87的位置上沒有置換突變。在一個實施方案中，本發明涉及任何上述IL-21肽，條件是其中對應 於SEQ ID No. 2中Gln-87的位置上的胺基酸殘基不是Asn。
在一個實施方案中，本發明涉及任何上述IL-21肽，條件是其中所述 IL-21肽在對應於SEQ ID No， 2中Asn-68、 Ser-80和Gln-87的位置上均 沒有置換突變。
在一個實施方案中，本發明涉及任何上述IL-21肽，條件是其中對應 於SEQ ID No. 2中Asn-68的位置上的氬基酸殘基不是Gln，對應於SEQ ID No. 2中Ser-80的位置上的胺基酸殘基不是Thr,且對應於SEQ ID No. 2中Gln-87的位置上的胺基酸殘基不是Asn。
在一個實施方案中，本發明涉及編碼本發明的肽的核酸構建體；包含 所述構建體的載體；和包含所述載體的宿主細胞。
在一個實施方案中，本發明涉及針對本發明的肽的特異性抗體。在一 個實施方案中，所述抗體不結合於具有SEQIDNo. 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9或10的胺基酸序列的多肽或任何國際申請WO2004/112703中所 述的多肽。
當肽在哺乳動物細胞如CHO細胞中表達時，N末端信號肽經常被所 謂的信號肽酶除去以產生成熟的肽。本領域熟知，要在原核細胞如大腸杆 菌(E.coli)中表達相同的異源肽，通常必須要通過本領域技術人員熟知 的重組技術在成熟肽序列上引入一個額外的N末端曱硫氨酸。因此本發 明欲包括上述具有或不具有N末端曱硫氨酸的肽。
在一個實施方案中，本發明涉及上述肽的可藥用鹽。 在本文中，術語"可藥用鹽，，用於表示對患者無害的鹽。這些鹽包括可 藥用的酸加成鹽、可藥用金屬鹽、銨鹽和烷基化銨鹽。酸加成鹽包括無機 酸鹽及有機酸鹽。合適的無機酸的代表性實例包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、 磷酸、硫酸、硝酸等。合適的有機酸的代表性實例包括曱酸、乙酸、三氯 乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯曱酸、肉桂酸、檸檬酸、富馬酸、乙醇酸、乳 酸、馬來酸、蘋果酸、丙二酸、扁桃酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水楊酸、 琥珀酸、曱磺酸、乙磺酸、酒石酸、抗壞血酸、雙羥萘酸、二亞曱基水楊 酸、乙烷二磺酸、葡萄糖酸、檸康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕櫚酸、EDTA、 乙醇酸、對氨基苯曱酸、穀氨酸、苯磺酸、對甲苯磺酸等。可藥用無機或 有機酸加成鹽的其他實例包括J. Pharm. Sci. 1977， 66， 2中列出的可藥用 鹽，所述文獻以引用的方式納入本文中。金屬鹽的實例包括鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽等。銨鹽和烷基化銨鹽的實例包括銨鹽、曱基銨鹽、二曱基銨 鹽、三曱基銨鹽、乙基銨鹽、羥乙基銨鹽、二乙基銨鹽、丁基銨鹽、四曱 基銨鹽等。
還可以通過附加一些基團來衍生本發明的肽，所述基團可造成血漿中 循環時間和/或生物半衰期的延長，或降低任何免疫原性。本領域熟知這
些效果可通過附加某些基團(如聚乙二醇(PEG);親脂性基團，如脂肪酸； 血漿蛋白，如白蛋白；或白蛋白結合部分)而獲得。本領域中的實例可參 見如WO 01/79271、 US 5,739,208和WO 03/44056。
本文所用的術語"核酸構建體"欲指cDNA、基因組DNA、合成DNA 或RNA源的任何核酸分子。術語"構建體，，欲指這樣一個核酸區段，所述
序列。所述構建體可任選地包含其他核酸區段。
編碼本發明蛋白的本發明的核酸構建體可已適當地來源於基因組或 cDNA，例如通過製備基因組或cDNA文庫和根據標準技術通過使用合成 寡核苷酸探針雜交來篩選編碼全部或部分蛋白的DNA序列而獲得(參見 Sambrook et al" Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York)。出於本發明的目的，所述編碼蛋白的DNA序列可為 人源的，即源自人類基因組DNA或cDNA文庫。特別地，所述DNA序 列可為人源的，例如來自特定人類器官或細胞類型的cDNA或源自人類 基因組DNA的基因。本發明編碼肽的核酸構建體也可通過已公知的標準 方法來合成，例如通過亞磷醯胺法或通過使用特異性引物的聚合酶鏈式反 應來合成。另外，核酸構建體可為通過標準技術將(合適的)合成的、基因 組的或cDNA來源的片段連接而製備的合成和基因組混合構建體、合成 和cDNA混合構建體或基因組和cDNA來源的混合構建體，所述各片段 對應於整個核酸構建體的各個部分。
在一個實施方案中，所述核酸構建體是DNA構建體，此術語將在下 文中使用。
在一個實施方案中，本發明涉及含有本發明DNA構建體的重組載體。 插入有本發明的DNA構建體的重組栽體可為可方便進行本領域已知的重 組DNA法的任何載體，例如表達載體。用於連接編碼本發明蛋白的DNA 序列和載體序列(包括例如啟動子和任選包括終止子和/或分泌信號序列) 的方法為本領域技術人員所熟知(參見例如Sambrook et al.， op.cit.)。導入有本發明的DNA構建體或重組載體的宿主細胞可為能夠產生本 發明蛋白的任何細胞，包括細菌、酵母、真菌和高等真核細胞，正如如本 領域所了解的那樣。再將被轉導的或轉染的宿主細胞在合適的營養培養基 上培養，培養條件使得本發明的蛋白可被表達，然後從培養物中回收產生
的蛋白。用於培養所述細胞的培養基可為任何常規的適於培養所述宿主細 胞的培養基，例如基本培養基或含有合適添加物的複合培養基。合適的培 養基可從供應商獲得或根據公開配方(例如可參見美國典型培養物保藏中 心的目錄)配製。然後可通過常規程序從培養基中回收所述細胞產生的蛋 白，所述程序包括通過離心或過濾從培養基中分離宿主細胞、用鹽如硫酸 銨沉澱上清液或濾液中的蛋白組分、根據所述蛋白類型通過各種色鐠方法 如離子交換色譜、凝膠過濾色鐠、親和色譜等進行純化。
本發明的肽可用於產生與本發明的肽特異性結合的抗體。本文所用的 "抗體"包括單克隆和多克隆抗體及其抗原結合片段如F(ab，)2和Fab片 段，其中包括遺傳工程抗體和人源化抗體。如果抗體與本發明的肽以大於 或等於l(TM"的Ka結合，則所述抗體就被認為是特異性抗體。製備抗體 的方法被7〉開於如Hurrell J.GR. (Ed.) Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications, CRC Press, Boca Raton, Florida, 1982和Sambrok， Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour, New York, 1989。
IL-21已被用於治療下列疾病病毒性疾病，如B型肝炎病毒、丙型 肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒、呼吸道合胞病毒、EB病毒、流感病毒、 巨細胞病毒、皰滲病毒引發的疾病和嚴重急性呼吸器官症候群；變應性疾 病如哮喘、變應性鼻炎或變應性皮膚病；寄生蟲病如蠕蟲感染；自身免疫 疾病如同種異體移植排斥和糖尿病；以及癌症，如結腸直腸癌、腎細胞癌、 非何杰金氏淋巴瘤、上皮癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、結腸癌和黑色 素瘤(WO 2003/103589)。對IL-21受體的拮抗已已被用於治療炎性疾病， 如自身免疫疾病、如系統性紅斑狼瘡(SLE)、類風溼性關節炎(RA)和炎性 腸病(IBD)。在一個實施方案中， 一種本發明的IL-21肽是IL-21激動劑 並可用於治療疾病，其中IL-21受體的激動被i/^為是有益的。在一個實施 方案中， 一種本發明的IL-21肽是IL-21受體拮抗劑並可用於治療疾病， 其中對IL-21受體的拮抗被認為是有益的。
本文所用的術語"治療，，或"療法"是指為戰勝病症如疾病或疾患而對患者進行的管理和照顧。該術語欲包括對患者所患特定病症的全部處理， 如給予活性化合物以緩解症狀或併發症、以延緩疾病、疾患或病症的逸艮、 以緩解或減輕症狀或併發症和/或治癒或消除疾病、疾患或病症以及預防 病症，其中"預防"應^皮理解為為了戰勝疾病、疾患或病症而對患者進^f亍的 管理和照顧，包括給予活性肽以防止症狀或併發症的發作。待治療的患者 可為哺乳動物，特別是人類，但也可包括諸如狗、貓、牛、綿羊和豬等的 動物。應當理解的是，治療和預防(防止)方案代表本發明的不同方面。 因此，在一個實施方案中，本發明提供了本發明的肽在治療中的應用。 在一個實施方案中，本發明提供本發明的肽在治療癌症中的用途，其
中所述肽是IL-21激動劑。
在本文中，"癌症"是指任何腫瘤疾患，包括細胞性疾患如肉瘤、癌瘤、 黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、乳腺癌、頭頸癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、 咽癌、喉癌、食道癌、胃癌、小腸癌、肝癌、胰腺癌、結腸癌、女性生殖 道癌、男性生殖道癌、前列腺癌、腎癌和中樞神經系統癌症。特別地，"癌 症"欲指非轉移性和轉移性腫瘤疾患，如惡性黑色素瘤、非黑色素瘤皮膚 癌、腎細胞癌、頭部和頸部癌症、內分泌系統癌症、卵巢癌、小細胞肺癌、 非小細胞肺癌、乳腺癌、食道癌、上胃腸道癌、結腸直腸癌、肝癌和膽道 癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、睪丸癌、宮頸癌、子宮內膜癌、骨骼和 軟組織肉瘤、中樞神經系統癌症、淋巴瘤、白血病和基本起源未知的癌症。
在本發明更具體的實施方案中，術語"腫瘤疾患"、"癌症"或"腫瘤生 長"是指所有形式的腫瘤細胞生長，包括嚢性腫瘤和實體腫瘤、骨骼腫瘤 和軟組織肺瘤，包括良性肺瘤和惡性腫瘤，包括肛門組織癌、膽道癌、膀 胱癌、血細胞癌、骨骼癌、繼發性骨骼癌、腸(結腸和直腸)癌、腦瘤、 繼發性腦瘤、乳腺癌、繼發性乳腺癌、類癌瘤、宮頸癌、兒童癌症、眼癌、 食道(食管)癌、頭部及頸部癌、卡波西氏肉瘤、腎癌、喉癌、急性淋巴 細胞性白血病、急性髓性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、慢性髓性白血 病、其他白血病、肝癌、繼發性肝癌、肺癌、繼發性肺癌、繼發性淋巴結 瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、黑色素瘤、間皮瘤、骨髓瘤、 卵巢癌、胰腺癌、陰莖癌、前列腺癌、皮膚癌、軟組織肉瘤、胃癌、睪丸 癌、曱狀腺癌、基本起源未知的腫瘤、陰道癌、外陰癌、子宮癌。
軟組織腫瘤包括良性神經鞘單體瘤、硬纖維瘤、成脂細胞瘤、脂肪瘤、 子宮肌瘤、透明細胞肉瘤、皮膚纖維肉瘤、尤文氏肉瘤、骨外粘液樣軟骨肉瘤、黏液性脂肪肉瘤、脂肪肉瘤、高度分化瘤、肺泡橫紋肌肉瘤和滑膜
'具體的骨骼肺瘤包括非骨化性纖維瘤、單純性骨嚢腫、內生軟骨瘤、 動脈瘤樣骨嚢腫、成骨細胞瘤、成軟骨細胞瘤、軟骨黏液樣纖維瘤、骨化 性纖維瘤和釉質瘤、巨細胞瘤、骨纖維異常增殖症、尤文氏肉瘤、嗜酸性
肉芽腫、骨肉瘤、軟骨瘤、軟骨肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤和轉移癌。
白血病是指骨髓產生的白血細胞的癌症。白血病包括但不限於四種主
要類型急性淋巴細胞性白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋 巴細胞性白血病(CLL)和慢性髓性白血病(CML)。
在一個實施方案中，所述癌症選自非轉移性和轉移性腫瘤疾患，如惡 性黑色素瘤、非黑色素瘤皮膚癌、腎細胞癌、頭部和頸部癌症、內分泌系 統癌症、卵巢癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、乳腺癌、食道癌、上胃腸 道癌、結腸直腸癌、肝癌和膽道癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、睪丸癌、 宮頸癌、子宮內膜癌、骨骼和軟組織肉瘤、中樞神經系統癌症、淋巴瘤、 白血病和基本起源未知的癌症。在一個更具體的實施方案中，所述癌症是 惡性黑色素瘤。
在一個實施方案中，本發明提供了本發明的肽作為IL-21拮抗劑用於 治療下列疾病的用途自身免疫疾病，如系統性紅斑狼瘡(SLE)、類風溼 性關節炎(RA)和炎性腸病(IBD)(包括潰瘍性結腸炎(UC)和克羅恩病 (CD))、多發性硬化症(MS)、硬皮病和1型糖尿病(T1D)和其他疾病和疾 患如PV(尋常性天皰瘡)、銀屑病、異位性皮炎、腹腔疾病、橋本曱狀 腺炎、Grave氏病(甲狀腺病)、乾燥症候群、格林一巴利症候群，肺出 血腎炎症候群、愛迪生氏病、韋格納肉芽肺、原發性膽汁硬化、硬化性膽 管炎、自身免疫性肝炎、風溼性多肌痛、雷諾氏現象、顳動脈炎、巨細胞 動脈炎、自身免疫性溶血性貧血、惡性貧血、結節性多動脈炎、白塞氏病、 原發膽汁性肝硬化、葡萄膜炎、心肌炎、風溼熱、強直性脊柱炎、血管球 性腎炎、結節病、皮肌炎、重症肌無力、多發性肌炎、斑禿和白癲風。其 他實例可見PCT申請WO 01/46420，該申請涉及IL-17治療自身免疫疾 病和/或炎性疾病的用途並給出了所述疾病的若干實例。
在一個實施方案中，本發明涉及含有本發明的肽的藥物組合物。 在一個實施方案中，本發明提供一種治療方法，所述方法包含將治療 有效量的本發明的肽給予需要該肽的患者。本文所用的肽的"治療有效量"是指足夠治癒、緩解或部分抑制給定疾 病及其併發症的臨床表現的量。足夠實現上述效果的量被定義為"治療有 效量"。針對每種目的的有效量取決於疾病或損傷的類型和嚴重程度以及 受試者的體重和總體狀態。應理解的是，可應用常規實驗通過建立一個數 值矩陣並測試矩陣中的不同點來確定合適的劑量，這屬於受過訓練的醫生 或獸醫所知的普通常識。
在一個實施方案中，本發明涉及本發明的肽用於製備藥物的用途。
在一個實施方案中，本發明涉及治療上述病毒性感染、變應性疾病、 自身免疫疾病和癌症的方法，所述方法包含將治療有效量的本發明的肽給 予需要該肽的患者。
在一個實施方案中，本發明涉及本發明的肽用於製備治療上述病毒感 染、變應性疾病、自身免疫疾病或癌症的藥物的用途。
本領域熟知治療例如癌症的方案通常包括一種以上的藥劑或治療形 式。因此，本發明的一個實施方案提供一種治療癌症的方法，所述方法包 括將治療有效量的本發明的肽和有效量的其他癌症治療藥劑聯合用藥。在
本發明中，"聯合用藥"是指在使用一種或多種其他藥物治療(i)之前(ii)同 時和/或(iii)之後給予本發明的肽。可與治療有效量的本發明的肽聯合用藥 的藥劑和療法的實例可見例如WO 2005/037306、 WO 2003103589、 WO 2005113001和PCT/US 2007/73506。
藥物組合物
本發明還提供一種包含本發明的肽的藥物組合物，其中本發明的肽的 濃度為1015 mg/ml至200 mg/ml，如10 10 mg/ml至5 mg/ml，且其中所 述製劑的pH為2.0至10.0。任選地，所述製劑還可含有一種或多種上述 其他癌症治療劑。所述製劑還可含有緩沖系統、防腐劑、張度劑、螯合劑、 穩定劑和表面活性劑。在本發明的一個實施方案中，所述藥物組合物是水 性製劑，即含水製劑。這種製劑通常是溶液或懸浮液。在本發明的一個實 施方案中，所述藥物組合物是水性溶液。術語"水性製劑"被定義為含有重 量比至少50%的水的製劑。類似的，術語"水性溶液"被定義為含有重量 比至少50。/。的水的溶液，術語"水性懸浮液"被定義為含有重量比至少 50%的水的懸浮液。在一個實施方案中，所述藥物組合物是一種凍幹製劑， 其中醫師或患者要在使用之前加入溶劑和/或稀釋劑。在一個實施方案中，所述藥物組合物是不需任何預先溶解就可使用的乾燥製劑(如冷凍乾燥或 噴霧乾燥的製劑)。
在一個實施方案中，本發明涉及一種藥物組合物，所述藥物組合物含
有本發明的肽的水溶液和緩衝液，其中所述IL-21蛋白的濃度為0.1-100 mg/ml且所述製劑的pH值為約2.0至約10.0。設計含有本發明IL-21變 種肽的本發明藥物組合物在本領域技術人員的知識範圍之內。因此，選擇 pH、使用何種緩沖液以及是否加入防腐劑、等滲劑、螯合劑、穩定劑、 表面活性劑、防止聚合形成的試劑、曱硫氨酸殘基氧化為曱硫亞碸的抑制 劑等等的確定均在所屬領域的技術人員的知識範圍之內。本發明的藥物組 合物中可能含有其他成分。這些其他成分可包括潤溼劑、乳化劑、抗氧化 劑、膨化劑、滲透壓改良劑、金屬離子、油性載體、蛋白質(如人血清白 蛋白，明膠或蛋白質)和兩性離子(如包括甜菜鹼、牛磺酸、精氨酸、甘 氨酸、賴氨酸和組氨酸的胺基酸)。當然，這些其他成分不應該對本發明 藥物組合物的整體穩定性有不利影響，且根據給藥方法和劑型及方案設計 可藥用藥物組合物在本領域技術人員的知識範圍之內。
可將含有本發明IL-21變種肽的藥物組合物給予需要此治療的患者 的多個部位，例如局部位置如皮膚和黏膜位置，不必通過吸收的位置如在 動脈、靜脈、心臟中給藥，以及需要通過吸收的位置如皮膚、皮下、肌內 或腹內。本發明藥物組合物可通過若干給藥途徑給予需要此治療的患者， 如通過舌、舌下、頰、口腔、口服、胃和小腸、鼻腔、肺(如通過細支氣 管和肺泡或它們的結合)、表皮、真皮、經皮、陰道、直腸、眼(如通過結 膜)、輸尿管和腸胃外等途徑給藥。本發明的藥物組合物可以各種劑型給 藥，所述劑型例如溶液、懸浮液、乳液、微乳液、多乳液、泡沫、藥膏、 膏劑、貼劑、油膏、片劑、包衣片劑、洗劑、膠嚢如硬明膠膠嚢和軟明膠 膠嚢、栓劑、直腸膠嚢、液滴、凝膠、噴霧劑、粉末、氣霧劑、吸入劑、 滴眼劑、眼膏、洗眼劑、陰道栓、陰道環、陰道軟膏、注射液、原位轉運 溶液如原位凝膠、原位凝結、原位沉澱、原位結晶、輸液和植入物。本發 明的藥物組合物還可通過如共價鍵、疏水相互作用和靜電相互作用化合於 或粘附於藥物載體、藥物送遞系統和更先進的藥物送遞系統，以進一步加 強本發明的肽的穩定性、增加生物利用度、增加溶解度、降低不利作用、 完成本領域技術人員熟知的時間療法以及增加患者順應性或實現上述效 果的任一組合。本發明的藥物組合物可以固體、半固體、粉末和溶液藥物組合物的形式通過如壓力定量吸入器、乾粉吸入器和噴霧器進行本發明的 肽的肺部給藥，所述設備都是本領域技術人員熟知的設備。本發明的藥物 組合物也可用於可控制、持續、延長、遲緩和緩釋給藥系統的製劑。 下列是本發明實施方案的列表。
實施方案1: 一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基 66-98的區域的長度被減少。
實施方案2:根據實施方案1的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中氨 基酸殘基66-98的區域的長度被減少至少1個胺基酸殘基。
實施方案3:根據實施方案2的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中氨 基酸殘基66-98的區域的長度被減少至少2個胺基酸殘基。
實施方案4:根據實施方案3的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中氨 基酸殘基66-98的區域的長度被減少至少3個胺基酸殘基。
實施方案5:才艮據實施方案4的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中氨 基酸殘基66-98的區域的長度被減少至少4個氮基酸殘基。
實施方案6: —種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基 77-92的區域的長度被減少。
實施方案7:根據實施方案6的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中氨 基酸殘基77-92的區域的長度被減少至少1個胺基酸殘基。
實施方案8:根據實施方案7的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中氨 基酸殘基77-92的區域的長度被減少至少2個胺基酸殘基。
實施方案9:根據實施方案8的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中氨 基酸殘基77-92的區域的長度被減少至少3個胺基酸殘基。
實施方案10:根據實施方案9的肽，其中對應於SEQIDNo.2中氨 基酸殘基77-92的區域的長度被減少至少4個胺基酸殘基。
實施方案ll: 一種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo. 2中胺基酸殘 基83-90的區域的長度被減少。
實施方案12:根據實施方案11的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中氨 基酸殘基的區域的長度被減少至少1個胺基酸殘基。
實施方案13:才艮據實施方案12的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基83-卯的區域的長度被減少至少2個胺基酸殘基。
實施方案14:才艮據實施方案13的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基83-90的區域的長度被減少至少3個胺基酸殘基。
實施方案15:才艮據實施方案14的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基83-卯的區域的長度被減少至少4個M酸殘基。
實施方案16: —種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo. 2中胺基酸殘 基82-88的區域的長度被減少。
實施方案17: 4艮據實施方案16的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基82-88的區域的長度被減少至少1個胺基酸殘基。
實施方案18: 4艮據實施方案17的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基82-88的區域的長度被減少至少2個胺基酸殘基。
實施方案19:才艮據實施方案18的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基82-88的區域的長度被減少至少3個胺基酸殘基。
實施方案20:根據實施方案19的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基82-88的區域的長度被減少至少4個胺基酸殘基。
實施方案21: —種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo. 2中胺基酸殘 基71-92的區域的長度被減少。
實施方案22:才艮據實施方案21的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基71-92的區域的長度被減少至少1個胺基酸殘基。
實施方案23:根據實施方案22的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基71-92的區域的長度被減少至少2個胺基酸殘基。
實施方案24:根據實施方案23的肽，其中SEQ ID No. 3中對應氨 基酸殘基71-92的區域的長度被減少至少3個胺基酸殘基。
實施方案25:根據實施方案24的肽，其中SEQ ID No. 4中對應氨 基酸殘基71-92的區域的長度被減少至少4個胺基酸殘基。
實施方案26: —種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo. 2中胺基酸殘 基65-92的區域的長度被減少。
實施方案27:才艮據實施方案26的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基65-92的區域的長度被減少至少1個胺基酸殘基。
實施方案28:才艮據實施方案27的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基65-92的區域的長度被減少至少2個胺基酸殘基。
實施方案29:才艮據實施方案28的肽，其中對應於SEQ ID No, 2中 胺基酸殘基65-92的區域的長度被減少至少3個胺基酸殘基。
實施方案30:才艮據實施方案29的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基65-92的區域的長度被減少至少4個胺基酸殘基。
實施方案31: —種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo. 2中胺基酸殘 基77-96的區域的長度被減少。
實施方案32:才艮據實施方案31的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基77-96的區域的長度被減少至少1個胺基酸殘基。
實施方案33:才艮據實施方案32的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基77-96的區域的長度被減少至少2個胺基酸殘基。
實施方案34:才艮據實施方案33的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基77-96的區域的長度被減少至少3個胺基酸殘基。
實施方案35:才艮據實施方案34的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基77-96的區域的長度被減少至少4個胺基酸殘基。
實施方案36: —種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo. 2中胺基酸殘 基83-86的區域的長度被減少。
實施方案37:才艮據實施方案36的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基83-86的區域的長度被減少至少1個胺基酸殘基。
實施方案38:才艮據實施方案37的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基83-88的區域的長度被減少至少2個胺基酸殘基。
實施方案39:才艮據實施方案38的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基83-86的區域的長度被減少至少3個胺基酸殘基。
實施方案40: —種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo. 2中氬基酸殘 基83-88的區域的長度被減少。
實施方案41:才艮據實施方案40的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基83-88的區域的長度被減少至少1個胺基酸殘基。
實施方案42:才艮據實施方案41的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基83-88的區域的長度被減少至少2個胺基酸殘基。
實施方案43: 4艮據實施方案42的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基83-88的區域的長度被減少至少3個氛基酸殘基。
實施方案44:才艮據實施方案43的肽，其中對應於SEQ ID No. 2中 胺基酸殘基83-88的區域的長度被減少至少4個胺基酸殘基。
實施方案45:根據實施方案l-44任一項的肽，其中所述區域的長度 通過使在所述區域中必要量的胺基酸殘基缺失而減少。
實施方案46:根據實施方案45的肽，其中所述被缺失的胺基酸殘基在所涉及區域的胺基酸序列中不是全部彼此相鄰的。
實施方案47:根據實施方案l-44任一項的肽，其中所述區域的長度 通過用一段胺基酸殘基置換所述區域而減少，其中所述胺基酸殘基段比被 置換的區域短至少1個胺基酸殘基。
實施方案48:根據實施方案47的IL-21肽，其中所述氣基酸殘基段 比被置換的區域短至少2個胺基酸殘基。
實施方案49:根據實施方案48的IL-21肽，其中所述胺基酸殘基段 比被置換的區域短至少3個胺基酸殘基。
實施方案50:根據實施方案49的IL-21肽，其中所述胺基酸殘基段 比被置換的區域短至少4個胺基酸殘基。
實施方案51:根據實施方案50的IL-21肽，其中所述胺基酸殘基段 比被置換的區域短至少5個胺基酸殘基。
實施方案52:根據實施方案51的IL-21肽，其中所述胺基酸殘基段 比被置換的區域短至少6個胺基酸殘基。
實施方案53: —種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo. 2中^J^酸殘 基66-98的區域被一段胺基酸殘基置換，其中所述胺基酸殘基段比被置換 的區域短至少一個胺基酸殘基。
實施方案54:根據實施方案53的IL-21肽，其中所述胺基酸殘基段 比被置換的區域短至少2個胺基酸殘基。
實施方案55:根據實施方案54的IL-21肽，其中所述氮基酸殘基段 比被置換的區域短至少3個胺基酸殘基。
實施方案56:根據實施方案55的IL-21肽，其中所述胺基酸殘基段 比被置換的區域短至少4個胺基酸殘基。
實施方案57:根據實施方案56的IL-21肽，其中所述胺基酸殘基段 比被置換的區域短至少5個胺基酸殘基。
實施方案58:根據實施方案57的IL-21肽，其中所述胺基酸殘基段 比被置換的區域短至少6個胺基酸殘基。
實施方案59:根據實施方案47-58任一項的IL-21肽，其中所述M 酸殘基段是IL-21來源的。
實施方案60:根據實施方案59的IL-21肽，其中所述胺基酸殘基段 來源於對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基66-98的區域內。
實施方案61: 4艮據實施方案59或60的IL-21肽，其中所述氬基酸殘基段包含至少一個對位於對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基66-98的 區域的胺基酸殘基的非保守性置換。
實施方案62:根據實施方案59-61任一項的IL-21肽，其中所述氨基 酸殘基段包含SEQ ID No. 2的胺基酸77-92的缺失。
實施方案63:根據實施方案59-61任一項的IL-21肽，其中所述M 酸殘基段包含SEQ ID No. 2的胺基酸83-卯的缺失。
實施方案64:才艮據實施方案59-61任一項的IL-21肽，其中所述M 酸殘基段包含SEQ ID No. 2的#^酸82-88的缺失。
實施方案65:才艮據實施方案59-61任一項的IL-21肽，其中所述M 酸殘基段包含SEQ ID No. 2的胺基酸71-92的缺失。
實施方案66:才艮據實施方案59-61任一項的IL-21肽，其中所述M 酸殘基段包含SEQ ID No. 2的胺基酸65-92的缺失。
實施方案67:根據實施方案59-61任一項的IL-21肽，其中所述M 酸殘基段包含SEQ ID No. 2的胺基酸77-96的缺失。
實施方案68:根據實施方案59-61任一項的IL-21肽，其中所述^J^ 酸殘基段包含SEQ ID No. 2的胺基酸83-86的缺失。
實施方案69:根據實施方案59-61任一項的IL-21肽，其中所述g 酸殘基段包含SEQ ID No. 2的胺基酸83-88的缺失。
實施方案70:才艮據實施方案59-61任一項的IL-21肽，其中所述^J^ 酸殘基段包含對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基66-98的區域中的一個
或多個非相鄰的缺失。
實施方案71:才艮據實施方案59或60的IL-21肽，所述胺基酸殘基 段包含至少一個對位於對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基77-92的區域 的胺基酸殘基的非保守性置換。
實施方案72:根據實施方案71的IL-21肽，其中所述胺基酸殘基段 包含SEQ ID No. 2的胺基酸83-卯的缺失。
實施方案73:根據實施方案71的IL-21肽，其中所述胺基酸殘基段 包含SEQ ID No. 2的胺基酸82-88的缺失。
實施方案74:根據實施方案71的IL-21肽，其中所述胺基酸殘基段 包含SEQ ID No. 2的^Jl酸83-86的缺失。
實施方案75:根據實施方案71的IL-21肽，其中所述氛基酸殘基段 包含SEQ ID No. 2的胺基酸83-88的缺失。實施方案76:根據實施方案71的IL-21肽，其中所述氬基酸殘基段 包含對應於SEQ ID No. 2中氬基酸殘基77-92的區域中的一個或多個非 相鄰的缺失。
實施方案77:根據實施方案47-58任一項的IL-21肽，其中所述氨基 酸殘基段是非IL-21來源的。
實施方案78:根據實施方案l-77任一項的IL-21肽，條件是所述肽 不包含SEQIDNo.3、 4、 5或6的序列或由SEQ ID No. 3、 4、 5或6的 序列及N末端曱硫氨酸構成的肽的序列。
實施方案79:根據實施方案1-77任一項的IL-21肽，條件是所述肽 不包含SEQIDNo.7、 8、 9或10的序列或由SEQ ID No. 7、 8、 9或10 的序列及N末端甲硫氨酸構成的肽的序列。
實施方案80:根據實施方案l-77任一項的IL-21肽，條件是所述肽 在對應於SEQ ID No. 2中Asn-68的位置上沒有置換突變。
實施方案81:根據實施方案1-77任一項的IL-21肽，條件是所述肽 在對應於SEQ ID No. 2中Asn-68的位置上不是Gln。
實施方案82:根據實施方案1-77任一項的IL-21肽，條件是所述肽 在對應於SEQ ID No. 2中Ser-80的位置上沒有置換突變。
實施方案83:根據實施方案1-77任一項的IL-21肽，條件是所述肽 在對應於SEQ ID No. 2中Ser-80的位置上不是Thr。
實施方案84:根據實施方案1-77任一項的IL-21肽，條件是所述肽 在對應於SEQ ID No. 2中Gln-87的位置上沒有置換突變。
實施方案85:根據實施方案1-77任一項的IL-21肽，條件是所述肽 在對應於SEQ ID No. 2中Gln-87的位置上不是Asn。
實施方案86:根據實施方案1-77任一項的IL-21肽，條件是所述肽 在對應於SEQ ID No. 2中Asn-68、 Ser-80和Gln-87的位置上均沒有置換 突變。
實施方案87:根據實施方案1-77任一項的IL-21肽，條件是所述肽 在對應於SEQ ID No. 2中Asn-68的位置上的氮基酸殘基不是Gln，在對 應於SEQ ID No. 2中Ser-80的位置上的胺基酸殘基不是Thr，且在對應 於SEQ ID No. 2中Gln-87的位置上的M酸殘基不是Asn。
實施方案88:才艮據實施方案l-87任一項的肽，其中在一個或多個實 施例所述試驗中所述肽的效力至少基本相似於野生型IL-21的效力。實施方案89: 4艮據實施方案l-87任一項的肽，其中在一個或多個實 施例所述試驗中所述肽的效力顯著高於野生型IL-21的效力。
實施方案90: 4艮據實施方案l-87任一項的肽，其中在一個或多個實 施例所述試驗中所述肽的效力為野生型IL-21效力的至少2倍。
實施方案91:根據實施方案l-87任一項的肽，其中在一個或多個實 施例所述試驗中所述肽的效力為野生型IL-21效力的至少5倍。
實施方案92:根據實施方案l-87任一項的肽，其中在一個或多個實 施例所述試驗中所述肽的效力大約為野生型IL-21效力的10倍。
實施方案93:用於治療的根據實施方案l-92任一項的肽。
實施方案94:根據實施方案l-92任一項的肽，其中所述肽是用於癌 症治療的IL-21受體拮抗劑。
實施方案95:根據實施方案l-92任一項的肽，其中所述肽是用於癌 症治療的IL-21受體激動劑。
實施方案96:才艮據實施方案94或95的肽，其中所述癌症選自非轉 移性和轉移性肺瘤疾患，例如惡性黑色素瘤、非黑色素瘤皮膚癌、腎細胞 癌、頭部和頸部癌症、內分泌系統癌症、卵巢癌、小細胞肺癌、非小細胞 肺癌、乳腺癌、食道癌、上胃腸道癌、結腸直腸癌、肝癌和膽道癌、胰腺 癌、前列腺癌、膀胱癌、睪丸癌、宮頸癌、子宮內膜癌、骨骼和軟組織肉 瘤、中樞神經系統癌症、淋巴瘤、白血病和基本起源未知的癌症。
實施方案97:根據實施方案96的肽，其中所述癌症是惡性黑色素瘤。
實施方案98:包含根據實施方案1-92任一項的肽的藥物組合物。
實施方案99:根據實施方案98的組合物，其中所述肽是IL-21受體 激動劑，並且所述組合物還包含一種癌症治療劑。
實施方案100: —種治療癌症的方法，所述治療包括將有效量的4艮據 實施方案1-92任一項的肽給予需要它的患者，其中所述肽是IL-21受體 激動劑，任選地與一癌症治療劑聯合用藥。
實施方案101:才艮據實施方案100的方法，其中所述癌症選自非轉移 性和轉移性腫瘤疾患，例如惡性黑色素瘤、非黑色素瘤皮膚癌、腎細胞癌、 頭部和頸部癌症、內分泌系統癌症、卵巢癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、 乳腺癌、食道癌、上胃腸道癌、結腸直腸癌、肝癌和膽道癌、胰腺癌、前 列腺癌、膀胱癌、睪丸癌、宮頸癌、子宮內膜癌、骨骼和軟組織肉瘤、中 樞神經系統癌症、淋巴瘤、白血病和基本起源未知的癌症。實施方案102:才艮據實施方案101的方法，其中所述癌症是惡性黑色
實施方案103:根據實施方案1-92任一項的肽用於製備治療癌症的 藥物的用途，其中所述肽是IL-21受體激動劑。
實施方案104:根據實施方案103的用途，其中所述癌症選自非轉移 性和轉移性肺瘤疾患，例如惡性黑色素瘤、非黑色素瘤皮膚癌、腎細胞癌、 頭部和頸部癌症、內分泌系統癌症、卵巢癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、 乳腺癌、食道癌、上胃腸道癌、結腸直腸癌、肝癌和膽道癌、胰腺癌、前 列腺癌、膀胱癌、睪丸癌、宮頸癌、子宮內膜癌、骨骼和軟組織肉瘤、中 樞神經系統癌症、淋巴瘤、白血病和基本起源未知的癌症。
實施方案105:才艮據實施方案104的用途，其中所述癌症是惡性黑色
實施方案106: 4艮據實施方案的用途，其中所述癌症選自非轉移性和 轉移性腫瘤疾患，例如惡性黑色素瘤、非黑色素瘤皮膚癌、腎細胞癌、頭 部和頸部癌症、內分泌系統癌症、卵巢癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、 乳腺癌、食道癌、上胃腸道癌、結腸直腸癌、肝癌和膽道癌、胰腺癌、前 列腺癌、膀胱癌、睪丸癌、宮頸癌、子宮內膜癌、骨骼和軟組織肉瘤、中 樞神經系統癌症、淋巴瘤、白血病和基本起源未知的癌症。
實施方案107:才艮據實施方案106的用途，其中所述癌症是惡性黑色
實施方案108:根據實施方案l-92任一項的肽，其中所述肽是用於 治療炎性疾病例如自身免疫疾病如SLE、 RA和IBD的IL-21受體拮抗 劑。
實施方案109: —種治療炎性疾病例如自身免疫疾病例如SLE、 RA 和IBD的方法，所述治療包括將有效量的根據實施方案1-92任一項的肽 給予需要該肽的患者，其中所述肽是IL-21受體拮抗劑。
實施方案110:根據實施方案l-92任一項的肽用於製備治療炎性疾病 例如自身免疫疾病例如SLE、 RA和IBD的藥物的用途，其中所述肽是 IL-21受體拮抗劑。
實施方案111:編碼根據實施方案1-92任一項的肽的核酸構建體。 實施方案112:包含根據實施方案111的核酸構建體的載體。 實施方案113:包含實施方案111的核酸構建體或實施方案112的載體的宿主。
實施方案114:針對根據實施方案l-92任一項的肽的抗體。 實施方案115:與根據實施方案1-92任一項的肽特異性結合的抗體。 實施方案116:根據實施方案112的抗體，所述抗體不與野生型IL-21 結合。
實施例
用Baf細胞測試IL-21肽與IL-21受體的結合
使用受狀態調控的螢光素酶報告系統進行細胞活性試驗，以分析 hIL-21野生型和突變蛋白。
所述試驗使用被穩定轉染以表iiA類IL-21R的鼠源Baf3細胞系和 狀態關聯的螢光素酶報告構建體。BaB細胞內源表達構成信號傳導用 IL-21受體複合物的必要組件的yC"公用鏈"。Baf3/hlL-21R報告細胞系 在刺激前置於不含IL-3的培養基中飢餓6小時。隨後刺激細胞24小時進 行劑量效應分析。
幾種IL-21肽與IL-21受體的結合示於圖1、 2和3。
IL-21肽與IL21受體的結合
編碼IL-21變種的cDNA通過瞬時表達被分析，隨後在受狀態調控的 報告系統中進行活性分析。
所述cDNA被轉染入HEK293 FreeStyle細胞中(Stengaard-Pedersen et al. N.Engl.J.Med. ^￡， 554 (2003); Invitrogen)。在轉染後48小時從不含 血清的培養基中收集上清液並用細胞生物試驗進行分析。所述試驗使用被 穩定轉染以表達人類IL-21R的鼠源Baf3細胞系和狀態關聯的螢光素酶 報告構建體。BaB細胞內源表達活性IL-21受體複合物的yC組件。 BaB/hlL-21R報告細胞系在刺激前置於不含IL-3的培養基中飢餓18小 時。隨後使用從轉染的HEK293-FS獲得的粗上清液進行劑量效應分析。 刺激持續進行4小時。
藥理學方法
下列體外方法用於研究ADCC的增強。
將表達把抗原的耙細胞與針對該靶抗原的抗體和作為效應細胞的外周血單核細胞、NK細胞、嗜中性粒細胞、巨喧細胞、單核細胞或DC共 同孵育。效應細胞可預先用IL-21孵育1-10天，或可將IL-21加入含有 效應細胞和耙細胞的培養物中。培養物或預先孵育的培養物中可包括可加 強ADCC的其他化合物。ADCC的功效可通過從靶細胞釋放的特異性 51Cr或通過LDH活性測量，如以前文獻所述(Golay et al.， Haematologica 88:1002-1012， 2003 or Liu et al" Cancer Immun 2:13， 2002或Watanabe et al.， Breast Cancer Res Treat 53:199-207， 1999)。
使用基於流式細胞術的試驗對ADCC的測定如以前文獻所述(Flieger et. al" J Immunother 23:480-486， 2000或Flieger et al" J Immunol Methods 180:1-13， 1995或Flieger et al" Hybridoma 18:63-68， 1999)。
通過兩色螢光試驗對ADCP的測定如Watanabe et al.， Breast Cancer Res Treat 53:199-207， 1999或Akewanlop et al" Cancer Res 61:4061-4065， 2001所描述。
一種測定ADCC的增強的體內方法概述如下
白血病細胞或經轉化的細胞通過靜脈內、腹膜內或皮下注射到同系動 物體內，然後用識別該白血病細胞或經轉化的細胞表達的抗原的治療性抗
體進行治療，同時使用或不使用IL-21治療。終點是腫瘤負荷和存活率。 ADCC的介入可通過使用Fc/RI阻斷抗體或FcyRI缺陷小鼠而確認。
研究對於人源目標細胞的ADCC增強的體內方法前人已有描述，可 參見Zhang et al" Blood 102:284-288， 2003或Flavell et al. Cancer Res 58:5787-5794， 1998。才艮據文獻所述的模式，將白血病細胞或經轉化的細 胞通過靜脈內、腹膜內或皮下注射到SCID小鼠體內，然後用識別該白血 病細胞或經轉化的細胞表達的抗原的治療性抗體治療，同時使用或不使用 IL-21治療。
腫瘤細胞系，如劉易斯肺癌(LLC)細胞或B16-F10黑素瘤細胞或腎細 胞癌細胞或4T1乳腺癌細胞被皮下植入至同系小鼠體內。當所述腫瘤生 長至可觸知時，用IL-21與本申請所述的其他抗癌試劑聯合用藥以治療所 述小鼠。此方法的描述見Palumbo et al. ， Cancer Res. @， 6966-6972 (2002); Bove et al" Biochem Biophys Res Commun ^￡1， 1001-1005 (2002); Wigginton et al" J Immunol巡，4467-4474 (2002)。
腫瘤細胞系，如劉易斯肺癌(LLC)細胞或B16-F10黑素瘤細胞被皮下 植入至同系小鼠體內。在l-4周後除去原發性腫瘤，並用IL-21與本申請所述的其他抗癌試劑聯合用藥以治療所述小鼠。此方法的描述見Palumbo et al.， Cancer Res. 6966-6972 (2002)。
肺瘤細胞系，如劉易斯肺癌(LLC)細胞或B16-F10黑素瘤細胞或腎 細胞癌細胞被靜脈注射至同系小鼠體內，並用IL-21與本申請所述的其他 抗癌試劑聯合用藥以治療所述小鼠。此方法的描述見Amirkhosravi et al.， Thromb.Haemost. 二， 930-936 (2002);Hosaka et al" Cancer Lett巡， 231-240 (2000); Maini et al" In vivo 12， 119-123 (2003)。
腎細胞癌細胞,皮腎內注射到同系小鼠的一個腎中。在1-4周後除去原 發性胂瘤，並用IL-21與本申請所述的其他抗癌試劑聯合用藥以治療所述 小鼠。此方法的描述見Murphy et al.， J Immunol JJ^, 2727-2733 (2003)。
權利要求
1.一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No.2中胺基酸殘基66-98的區域的長度被減少。
2. —種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中氬基酸殘基77-92的區域 的長度被減少。
3. —種IL-21肽，其中對應於SEQIDNo.2中胺基酸殘基83-卯的區域 的長度被減少。
4. 一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中^J^酸殘基82-88的區域的長度被減少。
5. —種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基71-92的區域 的長度被減少。
6. —種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基65-92的區域 的長度被減少。
7. —種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中^J^酸殘基77-96的區域 的長度被減少。
8. —種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中胺基酸殘基83-86的區域的長度被減少。
9. 一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中氛基酸殘基83-88的區域 的長度被減少。
10. 根據權利要求l-9任一項的肽，其中所述區域的長度通過用一段胺基酸殘基置換所述區域而被減少，所述胺基酸殘基段比被置換的區域短 至少1個胺基酸殘基。
11. 一種IL-21肽，其中對應於SEQ ID No. 2中Jl基酸殘基66-98的區域 被一段胺基酸殘基置換，其中所述胺基酸殘基段比被置換的區域短至 少一個胺基酸殘基。
12. 根據權利要求l-ll任一項的肽，其中所述肽是IL-21受體激動劑。
13. 根據權利要求l-ll任一項的肽，其中所述肽是IL-21受體拮抗劑。
14. 用於治療的根據權利要求1-13任一項的肽。
15. 根據權利要求1-12任一項的肽，其中所述肽是用於治療癌症的IL-21受體的激動劑。
16. 根據權利要求1-11任一項或權利要求13的肽，其中所述肽是用於治 療炎性疾病例如自身免疫疾病如SLE、 RA和IBD的IL-21受體拮抗劑。
17. —種包含根據權利要求l-16任一項的肽的藥物組合物。
18. —種治療癌症的方法，所述治療包括將有效量的根據權利要求15的 肽給予需要它的患者，任選地與一癌症治療劑聯合用藥。
19. 一種治療炎性疾病例如自身免疫疾病如SLE、 RA和IBD的方法，所 述治療包括將有效量的根據權利要求16的肽給予需要它的患者。
20. 編碼根據權利要求1-16任一項的肽的核酸構建體。
21. 包含根據權利要求20的核酸構建體的載體。
22. 包含權利要求20的核酸構建體或權利要求21的栽體的宿主。
23. 與根據權利要求l-16任一項的肽特異性結合的抗體。
全文摘要
本發明提供了其中在由胺基酸殘基65-98組成的區域中的胺基酸被缺失的IL-21變種。
文檔編號C07K16/28GK101553501SQ200780039834
公開日2009年10月7日 申請日期2007年10月26日 優先權日2006年10月26日
發明者D·馬德森, K·博登斯嘉德, S·A·約斯 申請人:諾沃-諾迪斯克有限公司