由紅景天和葛根素製成的藥用組合物的製作方法

2023-04-24 15:45:51 2

專利名稱：由紅景天和葛根素製成的藥用組合物的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥技術領域，涉及一種由紅景天和葛根素製成的藥用組合物，以及含有該藥物組合物的製劑及其製備方法。
背景技術：
心腦血管疾病包括冠心病、心絞痛、心肌梗塞，瘀血型肺心病，缺血性腦病、腦血栓、高血壓、高血脂等。這些疾病的主要發病原因是動脈硬化造成管腔狹窄、管道阻塞，從而導致腦供血不足，才引起頭沉、頭暈、頭痛、胸悶等症狀，嚴重者可導致腦中風及心肌梗塞的發生。心肌梗塞是指在冠狀動脈病變的基礎上，冠狀動脈的血流中斷，使相應的心肌出現嚴重而持久地急性缺血，最終導致心肌的缺血性壞死。心肌梗塞的原因，多數是冠狀動脈粥樣硬化斑塊或在此基礎上血栓形成，造成血管管腔堵塞所致，屬冠心病的嚴重類型。心腦缺血後影響能量代謝，繼髮乳酸堆積、鈣超載、自由基損傷等多種變化。多靶點逆轉或改善這些變化，提高綜合療效是藥物治療的重要目標。
紅景天為景天科Crassulaceae紅景天屬Rhodiola L.植物，為多年生草本或亞灌木植物，主要分布在前蘇聯地區以及我國東北、華北、西北及西南等高寒地區。我國紅景天資源豐富，種類眾多，約有73種，目前研究較多的景天科紅景天屬植物，具體選自玫瑰紅景天Rhodiola rosea，大花紅景天Rhodiolacrendata，稜葉紅景天Rhodiola henryi，高山紅景天Rhodiola sachlinensis，長鞭紅景天Rhodiolafasskisa，菱葉紅景天Rhodiola henryi，狹葉紅景天Rhodiola kirilowii，喜馬紅景天Rhodiolahimalensis，聖地紅景天Rhodiola saera，裂紅紅景天Rhodiola quadtifida，雲南紅景天Rhodiolayunnanensis，大紫紅景天Rhodiola atropupurea，互生紅景天Rhodiola alterna，帕米爾紅景天Rhodiolapantiro。《神農本草經》中紅景天被列為藥中上品，無毒，多服久服不傷人，有「輕身益氣」之功效。近年來，為綜合利用紅景天屬藥用植物資源，開展了廣泛的研究。現代研究表明，紅景天具有顯著的抗疲勞、抗衰老、抗輻射、抗缺氧、抗高溫和寒冷、抗輻射傷害、降血糖與血脂、調節免疫與血壓等作用；近年的研究結果表明紅景天在心腦血管疾病的防治方面亦具有獨特的作用紅景天可以降低心肌耗氧量和耗氧指數，拮抗心率失常，劑量增大還能降低冠狀動脈阻力，但是對冠脈血流量無顯著影響，並且還具有一定的降低血壓和減慢心跳速率的作用，還可以抑制血小板聚集和抗體外血栓形成；對心肌缺氧引起的心肌損傷者和腦血管阻塞引起的腦缺氧者有著良好的治療保護作用。現代化學成分研究顯示，紅景天的主要有效成分是紅景天苷和酪醇。紅景天苷結構式如下所示。
紅景天苷葛根素系由豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的乾燥根中提取，分離得到的8-β-D-葡萄吡喃糖-4′，7-二羥基異黃酮。結構式如下所示。已收載入國家藥典2000年版2002年增補本二部(新增)第1冊77頁，其中規定含C21H20O9不得少於97.0％。葛根素目前已有多家生產上市。葛根素在心血管系統具有增加心肌血流量，改善心肌供應，降低血小板聚集及血液粘度，改變心肌細胞自律性，延長不應期，使失常的心率得到改善等重要作用。廣泛用於冠心病、肺心病、腦梗塞等治療。
葛根素現代藥理及藥效學研究表明葛根素在治療心腦血管疾病方面有較好的功效，近來的研究表明紅景天在心血管方面也有潛在的應用價值。目前已有單一有效成分葛根素注射液上市。但利用紅景天及葛根素的相互作用，配伍組方治療心腦血管疾病的藥物，還未見報導。

發明內容為了滿足臨床需要，更好的治療心腦血管疾病，本發明提供了一種新的藥物組合物及其製備方法和應用，其特徵在於包括紅景天或紅景天提取物和葛根素。
本發明藥物組分的用量是經過發明人進行大量摸索總結得山的，各組分用量在下述重量份數範圍內都具有較好療效。其重量份數為紅景天300～1800份或相應重量份提取製得的紅景天提取物、葛根素30～500份，優選為紅景天500～1500份或相應重量份提取製得的紅景天提取物、葛根素50～300份，最佳份數為紅景天1000份或相應重量份提取製得的紅景天提取物、葛根素150份。
以上組成，若以克為單位，可以製成100～1000次用量的製劑，如作為注射劑，可製成500～1000支，每次用量1～10支。如作為片劑，可製成1000片，每次服用1～10片。
以上組成是按重量份作為配比的，如大規模生產可以以千克為單位，或以噸為單位，小規模生產也可以以克為單位。
以上重量份數對於特殊病人，可以相應調整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
紅景天可以通過水提醇沉、醇提乙酸鉛沉澱分離、乙醇滲漉、醇提後石油醚萃、醇提後正丁醇萃、醇浸後微波破壁、醇浸後絮凝、醇提殼聚糖吸附製備，例如可利用中國專利申請CN1534040A，王威等(中草藥，1999，30(11)824～826)的方法獲得。本發明提供了一種紅景天的優選製備工藝，如下取紅景天藥材，粉碎成粗粉，用70％乙醇提取三次每次1小時，第一次加醇10倍量，第二、三次分別為8、8倍量。濾過，合併提取液，回收乙醇至每5ml含1g生藥材，用2倍量石油醚脫脂後，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮至稠膏狀，噴霧乾燥，得紅景天提取物(供口服用)。
通過本工藝製備的紅景天提取物中紅景天苷的含量不低於3％；得率為10～20％。
將上述紅景天提取物用適量水溶解後，加於已事先處理好的大孔樹脂，依次用水液、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇洗脫，洗脫速度為10ml/min。減壓回收乙醇至相對密度為1.03～1.06(60℃)，噴霧乾燥，得紅景天提取物(供注射或口服用)。
通過本工藝製備的紅景天提取物中紅景天苷的含量不低於10％；得率為1～5％。
本發明的另一目的在於提供一種治療心腦血管疾病的藥物組合物。尤其適用於治療心肌梗死、冠心病、心絞痛、缺血性腦病、腦血栓等。
該組合物可以加一種或多種藥學上可接受的載體，以口服、鼻吸入或腸胃外給藥的方式施用於患者。用於口服時，可將其製成常規的固體製劑，如片劑、膠囊、軟膠囊、分散片、口服液、顆粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、緩釋片、緩釋膠囊、控釋片、控釋膠囊，製成液體製劑如水或油懸浮劑或其它液體製劑如糖漿等；用於腸胃外給藥時，可將其製成注射用的溶液、水或油懸浮劑等，如水針、凍乾粉針、無菌粉針、輸液等。本組合物優選的劑型是注射劑或口服製劑。
本發明的藥物組合物可採用現有製藥領域中的常規方法生產，需要的時候可以添加各種藥學上可接受的載體。所述的載體包括藥學領域常規的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、溼潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
本發明在製成注射劑時，為了增加其溶解度，可以加入吐溫-80等增溶劑。輸液中可以加入用於調節滲透壓的等滲調節劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸納、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本發明經過藥理學和藥效動物實驗研究結果證明，以紅景大與葛根素為組合物製成的藥物，可顯著改善腦循環，減輕腦缺血再灌注損傷，而發揮腦保護作用，改善大鼠的血流動力學各項指標，降低心肌耗氧量和耗氧指數，降低冠狀動脈阻力，顯著抗血小板聚集，顯著降低試驗性犬腦缺血重量。本發明試驗研究結果證明，紅景天與葛根素合併用藥呈協同作用，藥效明顯增強。
本發明的優點在於根據中醫方劑理論提供一種治療心腦血管疾病的新的中藥複方，並對紅景天和葛根素的相互作用和配伍組方進行了研究。並對紅景天進行了提取、精製製得紅景天提取物，用紅景天提取物和葛根素直接投料，避免了提取時造成的藥物損失和由於原藥材質量差異造成的不同產品質量差異較大的缺點，使藥品純度更高，雜質少，安全性更高，且不同批次藥品間質量差異小，藥品質量更均勻穩定，且使用方便，能夠更好的服務臨床。採用紅景天提取物與葛根素合併用藥後，經藥理學研究證明兩藥協同增效，療效顯著，明顯優於單用紅景天或葛根素，且用藥劑量減少，具有廣闊的應用前景。
下列試驗例進一步說明本發明試驗例1 紅景天的製備工藝紅景天提取工藝取紅景天藥材粉碎成粗粉，用70％乙醇提取三次每次1小時，第一次加醇10倍量，第二、三次分別為8、8倍量。濾過，合併提取液，回收乙醇至每5ml含1g生藥材，用2倍量石油醚脫脂後，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮至稠膏狀，噴霧乾燥，即得紅景天粗提物。
乙醇濃度、加醇量、提取時間和提取次數對提取結果的影響較大，因此以紅景天苷含量為指標，用正交試驗法考察四種因素對提取結果的影響。因素及水平設計見表1。
表1 紅景天醇提工藝考察因素水平表
試驗方法 稱取紅景天100g，共9份，按表2各列號的要求提取，合併提取液，濾過，濾液濃縮並定容至1000ml，備用。
紅景天苷含量測定色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-水(15∶85)為流動相，檢測波長為275nm。理論板數按紅景天苷峰計算應不低於1500。
對照品溶液的製備 精密稱取紅景天苷對照品，加甲醇製成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的製備 精密吸取上述樣品液各20ml，水浴上蒸乾後，殘渣加甲醇溶解，移至10ml量瓶，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。結果見表2。
結果 由下表可知提取次數和乙醇濃度是影響紅景天提取的主要因素，提取時間和加醇量對其影響不大，結合工業生產，確定紅景天提取工藝為A2B2C1D3，即取紅景天，加70％乙醇提取三次，每次1小時，第一次加醇10倍量，第二次、第三次各加醇8倍量。
表2 紅景天醇提工藝考察正交試驗表
紅景天精製工藝將上述得到的紅景天粗提物用適量水溶解後，加於已事先處理好的大孔樹脂，依次用水液、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇洗脫，洗脫速度為10ml/min。減壓回收乙醇至相對密度為1.03～1.06(60℃)，噴霧乾燥，得紅景天提取物。
紅景天提取物鑑別試驗取本品0.1g，加甲醇10ml，超聲處理30min，搖勻，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取紅景天藥材1g，同法製成對照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各5ul，分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，置碘蒸氣中燻。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
紅景天提取物含量測定試驗紅景天苷的含量測定色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-水(15∶85)為流動相，檢測波長為275nm。理論板數按紅景天苷峰計算應不低於1500。
對照品溶液的製備 精密稱取紅景天苷對照品，加甲醇製成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的製備 精密稱取本品0.1g，研勻，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。
按照上述精製工藝製得三批紅景天提取物，紅景天苷含量和得率見表3。由結果可以看出，通過本工藝製得的紅景天提取物中紅景天苷含量不低於10％，得率為1～5％。
表3 紅景天提取物的含量測定結果和得率
以下試驗例來進一步闡述本發明所述藥物的有益效果，這些試驗例包括本發明藥物組合物的藥效學試驗，本發明藥物組合物以下簡稱組合物。
試驗例2 本發明組合物合併用藥藥效的研究試驗動物 Wistar大鼠，雄性，體重200～220g，130隻，每組10隻，隨機分為13組。
供試品 紅景天組紅景天注射液，自製葛根素組葛根素注射液，自製組合物注射液(不同配比)組，9組，自製試驗方法 將大鼠隨機分為13組生理鹽水對照組；模型組；紅景天注射液組；葛根素注射液組；組合物各配比注射液組如下表4所示。各藥物均以生理鹽水稀釋至所需濃度，尾靜脈注射給藥。
大鼠試驗性心肌梗死模型動物戊巴比妥腹腔注射麻醉(45mg/kg)仰位固定。氣管插管，在胸骨左側作2cm的縱切口，近胸骨側剪斷第3、第4肋軟骨，打開胸腔後，連接人工呼吸機(通氣量2ml/100g，50次/min)。剪開心包膜，暴露心臟，冠狀動脈左前降支根部穿線以備結紮，記錄標準II導聯心電圖，穩定10分鐘，結紮冠狀動脈左前降支，關閉胸腔。用針筒吸出動物喉部分泌物，使動物恢復自主呼吸。結紮冠狀動脈15min後，靜脈給藥。結紮冠狀動脈4小時後，摘取心臟，在結紮線以下橫切5片，進行氯化硝基四氮唑藍(N-BT)染色，計算心肌梗死區面積佔心室及心臟面積的百分比，並進行統計學處理(t檢驗)。結果見表4。
試驗結果與結論 模型組與生理鹽水組相比有顯著差異，說明造模成功(p＜0.05)。各給藥組都具有明顯的抗心肌缺血作用(p＜0.05和p＜0.01)，其中紅景天與葛根素配伍的各個配比的作用優於單用紅景天或葛根素(p＜0.05)，提示兩藥配伍有協同增效作用，其中紅景天為1000份、葛根素為150份時療效更為顯著。
表4 組合物對大鼠實驗性心肌梗塞範圍的影響(x±s)
注*p＜0.05，**p＜0.01，與模型組相比；#p＜0.05，與紅景天或葛根素組相比；p＜0.05，模型組與生理鹽水組相比。
試驗例3 本發明組合物對兔心肌缺血再灌注損傷保護作用的研究受試動物 家兔，120隻，體重2.2～2.5kg，80隻，隨機分為7組。
供試品 假手術對照組腦缺血再灌注組紅景天組紅景天注射液，自製葛根素組葛根素注射液，自製組合物組紅景天與葛根素分別為1g、150mg，分為低、中、高3個劑量組，自製試驗方法 將家兔隨機分為缺血再灌注組(I/R組)、組合物注射液低、中、高3個劑量治療組、紅景天注射液治療組、葛根素注射液治療組和假手術對照組(SOC組)。(1)缺血再灌注組(I/R組)12隻，用25％的氨基甲酸乙脂溶液1g/kg體重耳緣靜脈麻醉，頸部正中切口分離氣管插入氣管套管，暴露兩側頸總動脈，以動脈夾兩側夾閉20min，造成腦缺血，松夾分別再灌注1h、6h和12h，三個時間點各4隻。分別在松夾10min後，耳緣靜脈推注生理鹽水5ml/kg體重。(2)組合物注射液治療組每一配比的組合物注射液為一大組，共三大組，每大組12隻，手術方法同I/R組，三個時間點各4隻，分別在松夾10min後，耳緣靜脈推注組合物注射液30mg/kg。(3)紅景天注射液治療組12隻，手術方法同I/R組，三個時間點各4隻，分別在松夾10min後，耳緣靜脈推注紅景天注射液30mg/kg。(4)葛根素注射液治療組12隻，手術方法同I/R組，三個時間點各4隻，分別在松夾10min後，耳緣靜脈推注葛根素注射液30mg/kg。(5)假手術對照組(SOC組)8隻，動物僅行麻醉和動脈分離術而不夾閉，1h後處死。上述各組實驗結束後即斷頭，在冰浴中剝出大腦，冰盤上解剖出雙側海馬區組織，用錫紙包裹放在4℃冰箱中儲存，備用。應用pH酸度計檢測海馬組織PLA2的活性；採用乾濕重法、TTC染色法測定皮層腦組織含水量、梗死面積；光鏡下觀察腦組織病理變化。
試驗結果 (1)對海馬組織PLA2活性的影響I/R組再灌注1h、6h和12h後，海馬組織PLA2活性較SOC明顯增高(p＜0.01)，且隨灌注時間延長，PLA2活性呈遞減趨勢，但各時間點間比較差異不顯著(p＞0.05)；各個配比的組合物注射液治療組(1h、6h、12h)PLA2活性明顯降低，與SOC組和I/R各相應時間點比較具有顯著性差異(p＜0.01，p＜0.001)，且隨再灌時間延長，PLA2活性逐漸向正常水平恢復；紅景天注射液治療組和葛根素注射液治療組(1h、6h、12h)PLA2活性降低，與SOC組和I/R各相應時間點比較具有明顯差異(p＜0.05，p＜0.01)。(2)對皮層組織含水量(％)和梗死面積(％)的影響I/R組各時間點腦含水量均增高；各個配比的組合物注射液治療組各時間點腦水含量與I/R組相比明顯減輕(p＜0.001)，腦梗死面積與I/R組相比明顯縮小(p＜0.01)；紅景天注射液治療組和葛根素注射液治療組各時間點腦水含量與I/R組相比均減輕(p＜0.01)，腦梗死面積與I/R組相比均縮小(p＜0.05，p＜0.01)。(3)腦組織病理改變SOC組無梗死灶，神經元結構形態正常，無間質水腫；I/R組有梗死灶，梗死灶周神經元腫脹，細胞輪廓不清，間質水腫明顯；各個配比的組合物注射液治療組、紅景天注射液治療組、葛根素注射液治療組梗死灶面積均縮小，梗死灶周神經元腫脹不明顯，間質水腫明顯減輕；組合物注射液治療組作用更明顯。
試驗結論 上述試驗結果表明，組合物注射液、紅景天注射液、葛根素注射液均可通過降低PLA2活性，改善腦循環，減輕腦缺血再灌注損傷，而發揮腦保護作用。各個配比的組合物注射液在各項指標中均高於紅景天注射液和葛根素注射液單獨用藥的效果，提示兩藥具有協同增效作用。
試驗例4 本發明組合物抗血小板聚集作用試驗動物 Wistar大鼠，雄性，體重200～220g，60隻，每組10隻，隨機分為6組。
供試品 生理鹽水對照組氯化鈉注射液，山東華信製藥有限公司紅景天組紅景天注射液，自製葛根素組葛根素注射液，自製組合物組紅景天與葛根素處方量分別為1g、150mg，分為低、中、高3個劑量組，自製。
試驗方法 將大鼠隨機分為6組，每組10隻，分別為生理鹽水對照組；紅景天注射液組；葛根素注射液組；組合物組，分為低、中、高3個劑量組。各組動物給藥，每日一次，連續給藥7天，末次給藥後1小時，動物麻醉後自腹主動脈取血，抗凝劑採用3.28％枸櫞酸鈉，與血液以1∶9比例混合。將抗凝全血在20℃條件下1500r·min-1離心5min獲得富血小板血漿(PPR)。留取定量PPR後，將剩餘PPR再次以3000r·min1離心10min，獲得自身對照貧富血小板血漿(PPP)。以PPP調節PPR濃度，使各PPR濃度相同。將PPR在37℃的恆溫孔中預熱後，加入ADP(終濃度為3μmol·L-1)引起血小板聚集，記錄最大聚集率。結果見表5。
表5 抗血小板聚集作用(X±SD)
注*p＜0.05，與生理鹽水對照組相比；**p＜0.01，與紅景天組或葛根素組相比試驗結果與結論 由上表結果可知各給藥組都能明顯抑制血小板聚集，其中組合物的作用最強(p＜0.01)，明顯優於紅景天和葛根素(p＜0.05)單獨給藥，且與組合物的給藥劑量有關，給藥劑量20mg/kg時作用最優。提示紅景天與葛根素有協同增效的作用。
試驗例5 本發明組合物對大鼠血液流變學的影響試驗試驗動物 Wistar大鼠，體重為200～220g，共70隻，隨機分為7組，每組10隻。
供試品 生理鹽水對照組氯化鈉注射液，山東華信製藥有限公司紅景天組紅景天注射液，自製葛根素組葛根素注射液，自製組合物組紅景天與葛根素分別為1g、150mg，分為低、中、高三個劑量組，自製；試驗方法 將大鼠隨機分為7組，每組10隻，分別為生理鹽水對照組、血瘀模型組、紅景天注射液組、葛根素注射液組、組合物注射液低劑量組、組合物注射液中劑量組、組合物注射液高劑量組。每日1次，連續尾靜脈注射給藥7d，末次給藥後30min，除對照組用0.9％NS外，其餘各組均皮下注射0.1％腎上腺素(0.9mg/kg)，30min後將大鼠放入冰水中冷浴8min，間隔2h後再注射等量腎上腺素，製備血瘀模型。腹主動脈取血5ml，肝素抗凝，測定10S-1、40S1、200S1全血粘度、血漿比粘度、紅細胞壓積。實驗室溫度控制在(20±1)℃。結果見表6。
試驗結果與結論 試驗結果表明與生理鹽水組比較，血瘀模型組低、中、高切率的全血粘度、血漿比粘度、纖維蛋白原、紅細胞壓積均明顯升高(p＜0.01)，說明模型可靠。與模型組比較，紅景天注射液組、葛根素注射液組、組合物注射液組均能明顯改善血液流變學指標，且組合物注射液中、高劑量組(p＜0.01)療效優於紅景天注射液組和葛根素注射液組單獨給藥(p＜0.05)，提示兩藥有協同作用。
表6 對急性血瘀模型大鼠血液流變學的影響
注與生理鹽水組比較#p＜0.01；與模型組比較*p＜0.05，與模型組比較**p＜0.01試驗例6 本發明組合物對實驗性犬腦缺血的影響試驗動物 雜種犬，30隻，體重在11.0～13.0公斤，分為6組，每組5隻。
供試品 生理鹽水對照組氯化鈉注射液，山東華信製藥有限公司紅景天組紅景天注射液，自製葛根素組葛根素注射液，自製組合物組紅景天與葛根素分別為1g、150mg，分為低、中、高3個劑量組，自製試驗方法 取30隻雜種犬，隨機分為6組，每組5隻，雌雄兼用，分別為生理鹽水對照組；紅景天組；葛根素組；組合物組，分為低、中、高3個劑量組。犬大腦中動脈結紮所致腦缺血模型的製作取犬腹腔注射3％戊巴比妥鈉1.0ml/kg(30mg/kg)麻醉，固定犬於手術臺上，然後在犬右外眼角與右耳根部1/2處(中點)，用電刀切開皮膚，分離肌肉，用手術專用顱骨鑽鑽開顱骨，以咬骨鉗擴大顱骨孔，切開硬腦膜，找到大腦中動脈。先用多譜勒超聲血流探測儀測定大腦中動脈血流速度，然後立即將大腦中動脈結紮造成腦缺血。大腦中動脈結紮6小時後，分離雙側頸總動脈並夾閉之，即刻從右側頸總動脈夾閉處的遠心端灌注20ml龍膽紫飽和溶液對腦組織進行染色，然後處死動物，開顱取出腦組織，稱全腦重，遂切下未染色的腦組織(即缺血區腦組織)稱重，求出其佔全腦重量的百分率，並進行病理組織學檢查，以判斷其是否屬於腦缺血性損傷，結果見表7。
表7 組合物對實驗性犬腦缺血的影響(X±SD)
注*p＜0.05，**p＜0.01，與生理鹽水對照組相比試驗結果與結論 試驗結果表明，各給藥組都能不同程度的降低犬大腦中動脈結紮後的腦組織缺血區重量，其中組合物組的作用最強(p＜0.01)，且與組合物的用量有關，給藥劑量20mg/kg時作用最優。提示兩藥協同增效。
試驗例7 本發明組合物注射液安全性試驗1、過敏性試驗受試藥物 組合物注射液紅景天與葛根素分別為1g、150mg，自製陰性對照 氯化鈉注射液，山東華信製藥有限公司。
陽性對照藥 5％卵白蛋白生理鹽水溶液(自製)。
受試動物 豚鼠，18隻，體重280～310g，雌雄兼用，隨機分為供試藥組、陰性對照和陽性對照三組，每大組6隻。
給藥劑量 致敏劑量0.5ml/只；致敏次數隔日腹腔注射1次，連續3次；攻擊劑量1ml/只，靜脈注射。
試驗方法 按上述分組分別給豚鼠隔日腹腔注射上述藥液0.5ml，共注射三次。然後將每大組豚鼠再分成兩小組，每小組3隻。第一小組豚鼠於第一次致敏後14天，第二小組於第一次致敏後21天進行抗原攻擊，每隻豚鼠均靜脈注射上述藥液1ml。觀察並記錄攻擊後15min內豚鼠的表現。
試驗結果及結論 供試藥組和陰性對照藥組豚鼠均未發現過敏反應，而卵白蛋白組產生過敏反應並死亡。表明，組合物注射液無致敏作用。
2、溶血性試驗受試藥物 組合物注射液紅景天與葛根素分別為1g、150mg，自製受試動物 雄性家兔，1隻，體重2.4kg。
試驗方法 製備2％紅細胞生理鹽水混懸液備用。取潔淨試管7支，編號並排列在試管架上，按下表順序操作，混勻後置37℃水浴中溫育，觀察記錄0.5、1、2、3、4h的結果。
試驗結果及結論 供試品0.1～0.5ml各管在0.5、1、2、3、4h均未出現溶血和紅細胞凝集現象。表明，組合物注射液無溶血性。
3、血管刺激性試驗受試藥物 組合物注射液紅景天與葛根素分別為1g、150mg，自製對照藥物 氯化鈉注射液，山東華信製藥有限公司。
受試動物 家兔，體重2.1～2.3kg，雌雄兼用。
給藥劑量 家兔靜滴給藥劑量為20ml/kg。
試驗方法 取健康家兔6隻，隨機分為供試藥組和0.9％氯化鈉注射液對照組，每組3隻，劑量均為20ml/kg。給藥前將兔置固定箱中，於耳緣靜脈按上述分組分別滴注供試藥和0.9％氯化鈉注射液，滴速為1ml/min(20滴/min)，觀察給藥後24h注射局部有無充血、水腫、出血、壞死。連續給藥3天，於末次給藥後24h在遠離注射部位1cm的向心端取兔耳用10％福馬林固定，做病理學檢查。
試驗結果及結論 肉眼觀察及病理檢查表明，給藥組與對照組無明顯差別，用藥部位的血管及周圍組織均未見充血、水腫、出血、壞死，病理檢查無異常。表明，組合物注射液靜脈靜滴對血管無刺激性。
試驗例8 本發明組合物注射液穩定性試驗供試品 組合物注射液紅景天與葛根素分別為1g、150mg，自製考察項目 性狀、pH值、澄明度、有關物質、標示含量；並在加速試驗6個月和長期試驗期末增加無菌和熱原檢查。
1、影響因素試驗強光照射試驗 取供試品，置照度為4500Lx的光照箱內放置10天。
高溫試驗 取供試品，分別置於40℃、60℃條件下放置10天。
低溫試驗 取供試品，在4℃冰箱中放置10天。
上述試驗，分別於第5、10天取樣測定。比較性狀後測試各項指標，並將結果與0天比較。
結果 光照4500Lx、高溫60℃條件下放置10天，除有關物質略有升高，標示含量略有下降外，其它各項指標均無明顯變化。高溫40℃、低溫4℃條件下放置10天，各項指標無明顯變化。
2、加速試驗方法 置溫度40℃±2℃、相對溼度75％±5％的條件下放置6個月。在試驗期間分別於第1個月、2個月、3個月、6個月末取樣，比較外觀後，測試各項指標，將結果與0個月比較；並在6個月末增加無菌和熱原檢查。
結果 溫度40℃±2℃、相對溼度75％±5％的條件下放置6個月，除有關物質略有增加外，標示含量略有下降外，其它各項指標均無明顯變化，加速試驗6個月末，熱原、無菌檢查均符合規定。
3、長期試驗方法 置溫度25℃±2℃、相對溼度60％±10％的條件下放置18個月。分別於第3個月、6個月、9個月、12個月、18個月，比較外觀後，測試各項指標，將結果與0個月比較；並在18個月末增加無菌和熱原檢查。
結果 溫度25℃±2℃、相對溼度60％±10％的條件下放置18個月，各項指標均無明顯變化，長期試驗18個月末，熱原、無菌檢查均符合規定。
綜上所述，藥效學試驗證明本發明提供的紅景天和葛根素組合物具有協同增效作用，明顯優於紅景天、葛根素單獨給藥的藥效。對組合物注射液進行的特殊安全性試驗結果表明，本發明提供的組合物注射劑無致敏性、或溶血性、或血管刺激性；進行的穩定性試驗結果表明，本發明提供的紅景天與葛根素製成的注射劑的各項指標均比較穩定，可以用於放大生產。
具體實施方式以下通過實施例來進一步闡述本發明藥物組合物的製備方法。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實施例。凡基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。以下實施例中各劑型製備工藝中的輔料可以用藥學上可接受的輔料替換，或者減少、增加。
以下實施例6～11中用到的紅景天提取物是通過實施例1製備的；以下實施例3～5中用到的紅景天提取物都是通過實施例2製備的。
實施例1 紅景天提取物的製備取紅景天藥材20kg，粉碎成粗粉，用70％乙醇提取三次每次1小時，第一次加醇10倍量，第二、三次分別為8、8倍量。濾過，合併提取液，回收乙醇至每5ml含1g生藥材，用2倍量石油醚脫脂後，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮至稠膏狀，噴霧乾燥，製得紅景天提取物3.07kg，得率13.36％；紅景天苷的含量為5.67％。
實施例2 紅景天提取物的精製取實施例1中得到的紅景天提取物1.4kg用適量水溶解後，加於已事先處理好的大孔樹脂，依次用水液、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇洗脫，洗脫速度為10ml/min。減壓回收乙醇至相對密度為1.03～1.06(60℃)，噴霧乾燥，製得紅景天提取物0.25kg，得率為2.76％；紅景天苷的含量為18.43％。
實施例3 本發明組合物粉針劑的製備處方葛根素150g紅景天提取物 27.6g(相當於紅景天藥材1000g)聚山梨酯80100g甘露醇400g無菌注射用水 加至4000ml共製備1000支製備工藝1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進行無菌處理。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將聚山梨酯80製成20％的水溶液，將葛根素加入加熱攪拌溶解完全，紅景天提取物加入配液量20％的無菌注射用水溶解完全。甘露醇加配液量40％的無菌注射用水加熱攪拌溶解完全，合併上述溶液，補加無菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經砂濾棒過濾脫炭。測定並調節溶液的PH值。
6)經0.22um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗。
8)分裝於抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍幹機中冷凍乾燥。預凍-45℃5小時，低溫真空乾燥-45℃～0℃20小時，然後升溫至25℃真空乾燥3小時。
9)凍乾結束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫。
處方葛根素150g紅景天提取物 27.6g(相當於紅景天藥材1000g)丙二醇700ml注射用水 加至1000ml共製備1000支製備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水衝洗。
2)紅景天提取物加入配液量20％的注射用水溶解完全，葛根素加入丙二醇加熱攪拌溶解完全。
3)合併上述溶液，補加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經砂濾棒過濾脫炭。測定並調節溶液的PH值。
6)經0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗。
8)將溶液熔封於玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍溶液中檢漏。
11)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實施例5 本發明組合物輸液的製備氯化鈉輸液處方
葛根素150g紅景天提取物 27.6g(相當於紅景天藥材1000g)聚山梨酯80100g氯化鈉900g注射用水 加至100000ml共製備1000瓶製備工藝1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水衝洗。
2)將聚山梨酯80配製成20％的水溶液，將葛根素加入加熱攪拌溶解完全，紅景天提取物加入配液量20％的注射用水溶解完全。將氯化鈉用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合併上述溶液，補加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經砂濾棒過濾脫炭。測定並調節溶液的PH值。
6)經0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗。
8)灌裝於100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
葡萄糖輸液處方葛根素150g紅景天提取物 27.6g(相當於紅景天藥材1000g)聚山梨酯80100g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共製備1000瓶製備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水衝洗。
2)將聚山梨酯80配製成20％的水溶液，將葛根素加入加熱攪拌溶解完全，紅景天提取物加入配液量20％的注射用水溶解完全。將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合併上述溶液，補加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經砂濾棒過濾脫炭。測定並調節溶液的PH值。
6)經0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗。
8)灌裝於100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實施例6 本發明組合物片劑的製備處方葛根素150g紅景天提取物 133.6g(相當於紅景天藥材1000g)澱粉 120.0g微晶纖維素40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 3.0g羧甲澱粉鈉6.0g共製備1000片製備工藝1)將葛根素和紅景天提取物粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶於水中製成2％的水溶液備用。
4)將葛根素、紅景天提取物、澱粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，製成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘乾。
7)乾燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲澱粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗。
9)按照化驗確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫。
實施例7 本發明組合物膠囊的製備處方葛根素150g紅景天提取物 133.6g(相當於紅景天藥材1000g)澱粉 60.0g微晶纖維素20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1.6g共製備1000粒製備工藝
1)將葛根素和紅景天提取物粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶於水中製成2％的水溶液備用。
4)將葛根素、紅景天提取物、澱粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，製成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘乾。
7)乾燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗。
9)按照化驗確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫。
實施例8 本發明組合物滴丸劑的製備處方葛根素150g紅景天提取物 133.6g(相當於紅景天藥材1000g)聚乙二醇6000 600g製備工藝1)聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融。
2)全部熔融後加入葛根素和紅景天提取物。
3)攪拌溶解，60目篩過濾。
4)保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中製成丸。
實施例9 本發明組合物軟膠囊的製備處方葛根素150g紅景天提取物 133.6g(相當於紅景天藥材1000g)大豆油1000.0g大豆磷脂 500g蜂蠟 500g共製備1000粒製備工藝1)處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷。
2)加入葛根素、紅景天提取物研勻，壓製成軟膠囊即可。
實施例10 本發明組合物顆粒的製備處方葛根素150g紅景天提取物 133.6g(相當於紅景天藥材1000g)糖粉 1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共製備1000袋製備工藝1)將蔗糖粉碎過100目篩備用。將葛根素和紅景天提取物粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將葛根素、紅景天提取物與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，製成適宜軟材，4)過20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘乾。
6)幹顆粒過18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫。
實施例11本發明組合物口服液的製備處方葛根素150g紅景天提取物 133.6g(相當於紅景天藥材1000g)丙二醇3000ml苯甲酸鈉 15g甜菊甙10g水加至10000ml共製備1000支製備工藝1)取配液量20％的注射用水，加入處方量的紅景天提取物，加熱攪拌溶解完全。將葛根素加丙二醇加熱攪拌溶解完全。
2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合併上述溶液，補加水至全量。
4)過0.8um的微孔濾膜過濾。
5)半成品化驗。
6)灌裝。成品全檢，包裝入庫。
權利要求
1.一種治療心腦血管疾病的藥物組合物，其特徵在於該組合物是由紅景天或紅景天提取物及葛根素製成的。
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於其重量份數為紅景天300～1800份或相應重量份提取製得的紅景天提取物、葛根素30～500份。
3.根據權利要求2所述的藥物組合物，其特徵在於其重量份數為紅景天500～1500份或相應重量份提取製得的紅景天提取物、葛根素50～300份。
4.根據權利要求3所述的藥物組合物，其特徵在於其重量份數為紅景天1000份或相應重量份提取製得的紅景天提取物、葛根素150份。
5.根據權利要求1～4所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於包括以下步驟a.取紅景天藥材，粉碎成粗粉，用乙醇提取，濾過，合併濾液，回收乙醇得濃縮液；b.將濃縮液脫脂，再用水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮至稠膏狀，噴霧乾燥，得紅景天提取物；c.將紅景天提取物、葛根素與藥物可接受的載體混合，製成製劑。
6.根據權利要求5所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於，步驟b得到的紅景天提取物中紅景天苷的含量不低於3％。
7.根據權利要求5所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於，步驟b得到的紅景天提取物還可以進一步精製，步驟為將紅景天提取物用水溶解後，加於已事先處理好的大孔樹脂，依次用水液和不同濃度的醇洗脫，減壓回收乙醇，噴霧乾燥，得紅景天提取物。
8.根據權利要求1～4所述的任一藥物組合物，其特徵在於該組合物可以製成任何一種臨床上或藥學上可接受的劑型。
9.根據權利要求8所述的藥物組合物，其特徵在於臨床上或藥學上可接受的劑型為注射劑。
10.根據權利要求9所述的藥物組合物，其中紅景天提取物中紅景天苷的含量不低於10％。
全文摘要
本發明屬於醫藥技術領域，公開了一種由紅景天或紅景天提取物及葛根素製備的治療心腦血管疾病的藥物組合物，以及含有該藥物組合物的製劑及其製備方法，其重量份數為紅景天300～1800份或相應重量份提取製得的紅景天提取物、葛根素30～500份，優選為紅景天500～1500份或相應重量份提取製得的紅景天提取物、葛根素50～300份，最佳份數為紅景天1000份或相應重量份提取製得的紅景天提取物、葛根素150份。該組合物可製成臨床或藥學上可接受的劑型，優選注射劑。該組合物具有協同增效作用，穩定性好。
文檔編號A61P9/00GK1931214SQ20051004459
公開日2007年3月21日 申請日期2005年9月14日 優先權日2005年9月14日
發明者蔡軍 申請人:蔡軍