一種茯苓皮有效成分的提取方法及其提取物的製作方法

2023-04-28 18:43:11 1

一種茯苓皮有效成分的提取方法及其提取物的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種茯苓皮有效成分的提取方法，包括：將茯苓皮用鹽酸衝洗，水洗至中性，晾乾；將茯苓皮用乙醇回流提取，提取液回收乙醇至幹；將乾物質用水溶解，加入正丁醇和乙酸乙酯的混合物萃取，有機相回收溶劑至幹，得粗品；粗品用乙醇溶解，配成溶液，所得溶液上中性氧化鋁層析柱，然後用乙醇和乙酸乙酯的混合物進行洗脫，收集洗脫液；向洗脫液中加入活性炭，過濾，濾液濃縮、靜置、過濾、乾燥，得有效成分。本發明提取方法穩定、提取效率高，大大提高了提取物的收率和有效成分的含量，所得提取物中3β-羥基-羊毛甾7,9（11），24-三烯-21-酸和去氫依布裡酸含量較大，提取物具有降血糖、降血脂的作用，具有較好的應用前景。
【專利說明】一種茯苓皮有效成分的提取方法及其提取物
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種茯苓皮中有效成分的提取方法及所得提取物，具體涉及一種3 β -羥基-羊毛留7，9( 11 )，24-三烯-21-酸和去氫依布裡酸含量較大的茯苓皮有效成分的提取方法及所得提取物，屬於中藥提取【技術領域】。
【背景技術】
[0002]獲茶為多孔菌科真菌Poria cocos ( Schw.) Wolf的乾燥菌核的外皮,異名「茶皮」(《四川中藥志》)，性味「甘淡，平」，功用「利水，消腫」，主治「水腫、腹脹」。茯苓皮主要化學成分有茯苓多糖、三萜、樹膠、蛋白質、留醇和脂肪酸等，現代研究結果表明茯苓中三萜類化學成分具有抗腫瘤、抗炎、免疫調節等活性。
[0003]目前，國內外對茯苓中有效成分的提取有一定研究，已從中提取了三萜類化合物、總皂苷、茯苓多糖、黃酮類化合物等有效成分。相對的，從茯苓皮中提取有效成分的研究較少，茯苓皮中含有比較豐富的三萜類化合物，專利201210168614.1公開了一種茯苓皮提取物及其在製備利尿作用藥物中的應用，方案是:茯苓皮用乙醇滲漉、然後用乙酸乙酯萃取、然後上矽膠柱用石油醚-乙酸乙酯洗脫、濃縮得提取物。所得提取物具有保鈉排鉀的作用，可用於利尿。專利201210235819.7公開了一種茯苓皮提取物及其在治療慢性腎衰竭藥物中的應用，方案為:將茯苓皮用乙醇提取、然後用乙酸乙酯萃取，得提取物。提取物對慢性腎衰竭有一定療效。
[0004]因茯苓皮中含有多種有效成份，因此採用不同的方法所得的有效成分及其含量不盡相同，所表現出來的治療作用也不盡相同。

【發明內容】

`[0005]本發明針對現有技術中存在的不足，提供了一種茯苓皮有效成分的提取方法，該方法所得有效成分中3 β -羥基-羊毛留7，9 (11)，24-三烯-21-酸和去氫依布裡酸含量較大，收率較高。
[0006]本發明還提供了採用上述方法所得的茯苓皮提取物。
[0007]本發明技術方案如下:
一種茯苓皮有效成分的提取方法，其特徵是，包括以下步驟:
(1)將茯苓皮用1.0-2.0wt%的鹽酸衝洗,然後用水衝洗至中性，晾乾；
(2)將步驟(1)處理過的茯苓皮用70-95體積％的乙醇溶液回流提取2次，合併提取液，提取液回收乙醇至幹；
(3)將步驟(2)的乾物質用水溶解，加入正丁醇和乙酸乙酯的混合物萃取，有機相回收溶劑至幹，得粗品；
(4)粗品用乙醇溶解，配成溶液，所得溶液上中性氧化鋁層析柱，然後用乙醇和乙酸乙酯的混合物進行洗脫，收集洗脫液；
(5)向洗脫液中加入活性炭，加熱至沸騰並保持30min，趁熱過濾，用乙醇洗滌活性炭，合併濾液及洗液，濃縮至原體積的1/3，靜置沉澱、過濾、乾燥，得有效成分。
[0008]上述步驟(2)中，茯苓皮與乙醇溶液的用量關係為1:5-20 (g/ml)。
[0009]上述步驟(2)中，每次提取時間為0.5-3.5h。
[0010]上述步驟(2)中，優選用70體積％的乙醇提取茯苓皮，茯苓皮與乙醇溶液的用量關係為1:10 (g/ml),每次提取時間為0.5 ho
[0011]上述步驟(3)中，正丁醇:乙酸乙酯的體積比為5-10:1.5，優選7:1.5。
[0012]上述步驟(3)中，水:正丁醇和乙酸乙酯的混合物的體積比為1:1.5-2。
[0013]上述步驟(4)中，粗品用其100-120質量倍的乙醇溶解，配成溶液。
[0014]上述步驟(4)中，中性氧化鋁的質量為粗品的15-20倍。
[0015]上述步驟(4)中，乙醇和乙酸乙酯的體積比為2:3-7，優選為2:5。
[0016]上述步驟(4)中，乙醇和乙酸乙酯的混合物的用量為氧化鋁的1.5-3倍，優選為2倍。
[0017]上述步驟(5)中，活性炭用量為粗品質量的2-3%。
[0018]採用上述方法獲得的茯苓皮提取物也應受到保護，提取物中有效成分主要為3 β -羥基-羊毛留7,9 (11)，24-三烯-21-酸和去氫依布裡酸，兩者含量在50%以上。
[0019]本發明提取方法穩定、提取效率聞，大大提聞了提取物的收率和有效成分的含量，所得提取物中3 β -羥基-羊毛留7，9 (11`)，24-三烯-21-酸和去氫依布裡酸含量較大，提取物具有降血糖、降血脂的作用，具有較好的應用前景。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1為實施例1茯苓皮提取物的色譜圖。
[0021]圖2為3β-羥基-羊毛甾7，9 (11)，24-三烯-21-酸的色譜圖。
[0022]圖3為去氫依布裡酸的色譜圖。
【具體實施方式】
[0023]下面對本發明進行進一步的闡述。
[0024]實施例1
茯苓皮提取方法如下:
1、取5kg茯苓皮，用1.5wt%的鹽酸衝洗一次，然後用水將酸衝洗乾淨，至中性後晾乾；
2、將晾乾後的5kg茯苓皮用70體積％的乙醇溶液回流提取2次，乙醇溶液的用量為50L，每次提取時間為0.5 h，合併提取液，減壓回收乙醇至幹，得乾物質；
3、將步驟2的乾物質用500ml的水溶散，然後加入750ml正丁醇和乙酸乙酯的混合物(正丁醇:乙酸乙酯體積比=7:1.5)進行萃取，取有機相，回收溶劑至幹，得粗品203g ；
4、粗品用20.5L乙醇溶解，配成溶液，取粗品18質量倍的中性氧化鋁，裝層析柱，將上述粗品溶液加入層析柱中，使溶液通過層析柱，然後用兩體積倍氧化鋁的乙醇和乙酸乙酯(乙醇:乙酸乙酯體積比=2:5)的混合物進行洗脫，收集洗脫液；
5、向洗脫液中加入6.1g的活性炭，加熱至沸騰，保持微沸30分鐘，趁熱過濾，用乙醇洗滌活性炭，合併濾液及洗液，濃縮至原體積的1/3，靜置沉澱、過濾、60°C乾燥，得茯苓皮提取物150g。計算提取物收率=提取物質量/茯苓皮質量=150/5000=3%。[0025]對提取物中羥基-羊毛留7，9 (11)，24-三烯-21-酸和去氫依布裡酸的含量進行測定，方法如下:
1、儀器及試藥=Waters高效液相色譜系統，Water600泵，996 二極體陣列檢測器，M32色譜工作站，Lichrospher-C18柱,200 X 4.6mm, 5 μ (江蘇漢邦科技有限公司產品)。
[0026]2、藥物:乙腈(色譜純級)，3β-羥基-羊毛甾7，9 (11 )，24-三烯_21_酸和去氫依布裡酸(山東省中藥新型製劑中心製備，含量均達98.0%以上)。
[0027]3、檢測條件:流動相:乙腈:0.5%乙酸水(80:20)，檢測波長242nm。
[0028]4、對照品溶液的製備
精密稱取3 β -羥基-7，9 (11 )，24-三烯-21-酸對照品，置10 mL容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，製成228 μ g -mr1的對照品溶液；精密稱取去氫依布裡酸對照品，置10 mL容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，製成130 μ g.mL—1的對照品溶液。
[0029]5、供試品溶液的製備
取茯苓皮提取物約40 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μ m的微孔濾膜過濾，取續濾液，即得。
[0030]6、測定方法
精密吸取上述對照品溶液及供試品溶液各10 μ L，分別注入液相色譜儀中，得到提取物和對照品的色譜圖1-3。
[0031]根據峰面積計算`，3β-羥基-羊毛甾7，9 (11)，24-三烯-21-酸含量為30.61%，去氫依布裡酸含量為32.52%，兩種物質共計63.23%。
[0032]實施例2 茯苓皮提取方法如下:
1、取5kg茯苓皮，用1.0wt%的鹽酸衝洗一次，然後用水將酸衝洗乾淨，至中性後晾乾；
2、將晾乾後的5kg茯苓皮用80體積％的乙醇溶液回流提取2次，乙醇溶液的用量為75L，每次提取時間為2h，合併提取液，減壓回收乙醇至幹，得乾物質；
3、將步驟2的乾物質用500ml的水溶散，然後加入1000ml正丁醇和乙酸乙酯的混合物(正丁醇:乙酸乙酯體積比=5:1.5)進行萃取，取有機相，回收溶劑至幹，得粗品186g;
4、粗品用19L乙醇溶解，配成溶液，取粗品15質量倍的中性氧化鋁，裝層析柱，將上述粗品溶液加入層析柱中，使溶液通過層析柱，然後用1.5體積倍氧化鋁的乙醇和乙酸乙酯(乙醇:乙酸乙酯體積比=2:3)的混合物進行洗脫，收集洗脫液；
5、向洗脫液中加入3.Sg的活性炭，加熱至沸騰，保持微沸30分鐘，趁熱過濾，用乙醇洗滌活性炭，合併濾液及洗液，濃縮至原體積的1/3，靜置沉澱、過濾、60°C乾燥，得茯苓皮提取物 123g。
[0033]採用高效液相色譜法測得提取物中3 β -羥基-羊毛甾7，9(11)和24-三烯-21-酸含量共計55.24%。
[0034]實施例3 茯苓皮提取方法如下:
1、取5kg茯苓皮，用2.0wt%的鹽酸衝洗一次，然後用水將酸衝洗乾淨，至中性後晾乾；
2、將晾乾後的5kg茯苓皮用95體積％的乙醇溶液回流提取2次，乙醇溶液的用量為25L，每次提取時間為3h，合併提取液，減壓回收乙醇至幹，得乾物質；3、將步驟2的乾物質用500ml的水溶散，然後加入800ml正丁醇和乙酸乙酯的混合物(正丁醇:乙酸乙酯體積比=10:1.5)進行萃取，取有機相，回收溶劑至幹，得粗品183g ；
4、粗品用22L乙醇溶解，配成溶液，取粗品20質量倍的中性氧化鋁，裝層析柱，將上述粗品溶液加入層析柱中，使溶液通過層析柱，然後用3體積倍氧化鋁的乙醇和乙酸乙酯(乙醇:乙酸乙酯體積比=7:5)的混合物進行洗脫，收集洗脫液；
5、向洗脫液中加入5.5g的活性炭，加熱至沸騰，保持微沸30分鐘，趁熱過濾，用乙醇洗滌活性炭，合併濾液及洗液，濃縮至原體積的1/3，靜置沉澱、過濾、60°C乾燥，得茯苓皮提取物 122g。
[0035]採用高效液相色譜法測得提取物中3 β -羥基-羊毛甾7，9(11)和24-三烯-21-酸含量共計53.57%。
[0036]下面以實施例1所得提取物為例，對提取物降血糖、降血脂作用進行研究。
[0037]、實驗動物
健康雄性昆明種小鼠,體重24~26g ;清潔級Wistar大鼠，體重180~220g。
[0038]、儀器與試劑
總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒:北京北化精細化學有限責任公司臨床試劑分廠生產。
[0039]四氧嘧啶:香港FARCO公司生產。
[0040]血糖測定儀:英國寶靈曼公司生產。
[0041]半自動生化分析儀:上海第三分析儀器廠生產
3、實驗方法
3.1對糖尿病小鼠血糖的影響
3.1.1糖尿病模型小鼠:採用尾靜脈注射四氧嘧啶(動物禁食24h後給藥，劑量為45mg / kgbw)的方法建立糖尿病動物模型。將尾靜脈注射四氧嘧啶7d後空腹(禁食3h)血糖值大於IOmmol / L的小鼠作為本試驗的糖尿病模型小鼠。
[0042]3.1.2試驗劑量與動物分組:根據糖尿病模型小鼠的血糖值將其隨機分為四組，其中I個模型對照組，3個提取物劑量組(劑量分別為1.5,2.5,3.5g / kgbw)。每組均12隻小鼠。
[0043]3.1.3空腹血糖的測定:上述各劑量組動物連續給予提取物30d (模型對照組給蒸餾水)後，眼內眥取血測全血空腹血糖值(禁食3h)。
[0044]對實驗性高血脂大鼠血脂的影響
3.2.1採用大鼠脂代謝紊亂模型法進行試驗。以基礎飼料餵飼大鼠觀察5d後，空腹取尾血，酶法測定血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，根據TC水平將動物隨機分為4組:高脂對照組，三個提取物組(劑量分別為1.5,2.5,3.5g /kgbw)。提取物用蒸餾水按所需濃度配製。自正式試驗開始，各組動物換用高脂飼料，提取物組灌胃給予不同劑量的提取物，高脂對照組灌胃給予同體積的蒸餾水，灌胃量按1.0ml / 100gbw計算，每日一次，連續40d後，空腹取尾血測定上述各項血脂指標。
[0045]3.2.2動物飼料
基礎飼料:正常顆粒飼料。
[0046]高脂飼料(wt%):基礎飼料79%，膽固醇1%,豬油10%，新鮮蛋黃液10%。[0047]、數據處理
採用t檢驗和方差分析進行統計學處理。
[0048]、結果與分析
5.1提取物對糖尿病模型小鼠空腹血糖的影響
各組糖尿病模型小鼠在接觸提取物前(即試驗前)的平均空腹血糖值均無明顯差別(p>0.05);而在連續經口給予提取物30d(模型對照組給蒸餾水)後(即試驗後)，其平均空腹血糖值及平均空腹血糖降低值均發生了一定的變化。結果見表1。
表1提取種!對糠覺病模型小I空腹血.錆值(mmoW；)的影_
【權利要求】
1.一種茯苓皮有效成分的提取方法，其特徵是，包括以下步驟: (1)將茯苓皮用1.0-2.0wt%的鹽酸衝洗,然後用水衝洗至中性，晾乾； (2)將步驟(1)處理過的茯苓皮用70-95體積％的乙醇溶液回流提取2次，合併提取液，提取液回收乙醇至幹； (3)將步驟(2)的乾物質用水溶解，加入正丁醇和乙酸乙酯的混合物萃取，有機相回收溶劑至幹，得粗品； (4)粗品用乙醇溶解，配成溶液，所得溶液上中性氧化鋁層析柱，然後用乙醇和乙酸乙酯的混合物進行洗脫，收集洗脫液； (5)向洗脫液中加入活性炭，加熱至沸騰並保持30min，趁熱過濾，用乙醇洗滌活性炭，合併濾液及洗液，濃縮至原體積的1/3，靜置沉澱、過濾、乾燥，得有效成分。
2.根據權利要求1所述的提取方法，其特徵是:步驟(2)中，茯苓皮與乙醇溶液的用量關係為 1:5-20 (g/ml)。
3.根據權利要求1所述的提取方法，其特徵是:步驟(2)中，每次提取時間為0.5-3.5h0
4.根據權利要求1所述的提取方法，其特徵是:步驟(2)中，用70體積％的乙醇提取茯苓皮，茯苓皮與乙醇溶液的用量關係為1:10 (g/ml)，每次提取時間為0.5 h。
5.根據權利要求1所述的提取方法，其特徵是:步驟(3)中，正丁醇:乙酸乙酯的體積比為5-10:1.5，優選7:1.5 ； 7jC:正丁醇和乙酸乙酯的混合物的體積比為1:1.5_2。
6.根據權利要求1所述的提取方法，其特徵是:步驟(4)中，粗品用其100-120質量倍的乙醇溶解，配成溶液；中性氧化鋁的質量為粗品的15-20倍。
7.根據權利要求1所述的提取方法，其特徵是:步驟(4)中，乙醇和乙酸乙酯的體積比為2:3-7，優選為2:5 ;乙醇和乙酸乙酯的混合物的用量為氧化鋁的1.5-3倍，優選為2倍。
8.根據權利要求1所述的提取方法，其特徵是:步驟(5)中，活性炭用量為粗品質量的2-3% ο
9.根據權利要求1所述的提取方法，其特徵是:所得有效成分中主要包括3β-羥基-羊毛甾7,9 (11)，24-三烯-21-酸和去氫依布裡酸，兩者含量在50%以上。
10.採用權利要求1-9中任一項所述的茯苓皮有效成分的提取方法提取所得的茯苓皮提取物。
【文檔編號】A61P3/06GK103550265SQ201310547949
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月8日 優先權日:2013年11月8日
【發明者】閆雪生, 孫丹丹, 於蓓蓓, 趙許傑, 韓媛媛 申請人:山東省中醫藥研究院