治療性蛋白抑制劑綜合症的cd154阻斷治療的製作方法

2023-04-28 02:33:46 2

專利名稱：治療性蛋白抑制劑綜合症的cd154阻斷治療的製作方法
技術領域：
本發明總的涉及抑制不需要的免疫反應、具體地抑制逆適應性T-淋巴細胞介導的免疫反應。本發明具體地涉及預防、治療、抑制或逆轉對外源施用蛋白或其它生物治療試劑的免疫學抑制。
背景技術：
血友病A是X連鎖的遺傳缺陷疾病，它影響著每10,000生命中的一個或兩個男性個體。患血友病A的病人在內源凝血因子VIII(FVIII)中有部分或完全的功能缺陷，並且必須接受純化或重組FVIII替代治療。Lusher等(1993)，328 N.Engl.Med.453-459。15％患血友病A的病人對其FVIII替代治療發生高效價抗體反應(即＞10BU/mL)。這些個體稱為「高反應者」(McMillan等(1988)，71血液344-348。稱為FVIII抑制劑的這些抗體通過與施用的內源FVIII結合阻斷了FVIII替代治療試劑的功能(生物活性)。此逆適應性體液免疫反應使得高反應者中流血症狀的治療成為難題。較輕的流血症狀(如hamarthroses)常常用活化的凝血酶原複合物濃縮物(如Autoplex或FEIBA，FVIII抑制劑阻斷活性)成功地得到治療，但嚴重流血難以用這些藥劑控制[Brettler(1996)，9臨床血液學319-329]。大多數高反應者在接受隨後FVIII輸注前有低水平的FVIII抑制抗體，FVIII輸注刺激(加強)阻斷抗體的產生。因此，在高反應者病人中抑制抗體的再誘導是可預防的[Brettler(1996)，9臨床血液學319-329]。用FVIII預防已證明減少了血友病人中關節內出血和慢性關節病的得病機率[Liesner等(1996)Br.J.Haematol.92，973-978。然而，因為高反應者中FVIII特異的體液免疫反應，這些個體不能接受使用FVIII的預防治療。
對FVIII有可誘導的、強有力的免疫反應的高反應者常常在治療方案中用非常高劑量的FVIII常規輸注治療，此治療方案設計以誘導對外源FVIII治療的耐受性[Brettler(1996)，9臨床血液學319-329]。在某些病例中，將免疫調節劑[糖皮質激素、環磷醯胺、靜脈內免疫球蛋白(IVIg)]加到耐受性治療方案中。耐受性治療在50-80％高反應者個體中有效。Mariani等(1994)，72 Thromb.Haemostasis 155-158。每個病人這樣的治療費用為200,000美元到將近一百萬美元。因為在耐受性誘導過程(常持續3-8個月)中FVIII輸注在高反應者中誘導非常高水平的抑制劑，所以這些個體如果的確有流血也不能用FVIII治療[Bretter(1996)，9臨床血液學319-329]。
成功的耐受性誘導之後，病人常常維持預防性FVIII輸注每周二至三次[Bretter(1996)，9臨床血液學319-329]。用這些方法誘導耐受性的機理仍不清楚，但是可能涉及抗獨特型抗體的誘導(Gilles等(1996)97臨床研究雜誌1382-1388)或者產生FVIII抑制抗體的B細胞克隆的直接抑制。另外，IVIg製品含有針對FVIII抑制劑的抗獨特型抗體，這可以解釋在某些高反應者中此治療的效力[Sultan等(1991)，91美國醫學雜誌5A-35S-5A-39S)]。在必須使用FVIII治療流血的非常嚴重和威脅生命的病例中，可以通過在抗Ig或蛋白A柱上進行體外免疫吸附來除去FVIII抑制劑[Knobl等(1995)，74 Thromb.Haemostasis 1035-1038；Gjorstrup等(1991)，61 Vox Sang 244-250]。這些方法耗費時間並且導致血清免疫球蛋白(Ig)總水平50％-75％的降低[Knobl等(1995)，74Thromb.Haemostasis 1035-1038]，由此潛在增加了感染的危險。
蛋白替代治療的相似併發症也在其它天先性或獲得性蛋白缺陷病包括其它凝血因子、血或血漿蛋白、生長因子等缺陷的治療中遇到。而且，類似併發症也已在其它臨床治療中遇到，例如在治療上施用內源稀少或隔離的蛋白的重組合成對應物時就會遇到。例如，類似併發症已在涉及重組細胞因子、淋巴因子或酶的施用的治療中遇到。一個例子是施用促血細胞生成素(EPO)治療盆血。另一例子是施用幹擾素β(IFNβ)治療多發性硬化(MS)。還有一例子是施用人生長激素用於治療以加速生長。在治療上施用微生物蛋白時，例如當施用鏈激酶治療中風或其它類型血管阻塞時，也遇到類似併發症。
因此，需要改進的或更有效的用於最小化或抑制與外源施用蛋白結合或阻斷外源施用蛋白治療活性的抑制抗體發生的免疫抑制或免疫調節治療。特別地，需要無須泛T細胞免疫抑制的治療法，即不使受治療者對惡性腫瘤或機會性感染易感的治療法。更應指出的是，需要逆轉或抑制阻止對需要其的病人施予所需蛋白治療的抑制劑綜合症。
發明概述本發明的一個目的是提供減輕逆適應性T細胞反應而不需要泛T細胞免疫抑制的免疫調節劑。另一目的是提供減輕對所需外源蛋白治療的逆適應性體液免疫反應嚴重性的免疫調節劑。另一目的是提供延遲對所需外源蛋白治療的逆適應性體液免疫反應發生的免疫調節劑。另一目的是提供抑制或逆轉對所需外源蛋白治療的逆適應性體液免疫反應的免疫調節劑。進一步的目的是提供阻斷共刺激信號、特別是免疫球蛋白合成的共刺激信號向活化T細胞傳遞的免疫調節劑。具體的目的是提供CD40:CD154結合阻斷劑如CD154阻斷劑用於治療，尤其是用於減輕、延緩對所需外源蛋白治療試劑如FVIII的逆適應性抑制抗體反應的發生或逆轉其的治療。
本發明在於發現使用CD40:CD154結合阻斷劑如CD154阻斷劑可減輕、減弱、抑制、防止、延緩或逆轉對蛋白抗原的逆適應性抑制抗體反應而無須廣泛抑制受治療者的免疫系統。更精確地，本發明在於發現使用CD154阻斷劑可減輕、減弱、抑制、防止、延緩或逆轉不利的抑制體液免疫，此免疫阻斷施用給個體以替代或改進內源缺陷型蛋白，例如凝血因子如FVIII的蛋白治療的生物活性。
因此本發明提供用於外源蛋白抑制劑綜合症的免疫調節治療的方法和組合物。第一種方法減輕或減弱外源蛋白抑制劑綜合症的嚴重性。第二種方法抑制綜合症的不利影響。第三種方法防止綜合症的發生。第四種方法延遲綜合症的發生。第五種方法抑制綜合症的發展。第六種方法逆轉綜合症。所有前面的方法包括用CD40:CD154結合阻斷劑[是指任何阻斷CD40配體(即CD40L，也稱為CD154或5c8抗原，並且有時在本領域中稱為gp39)與其反受治療者或相關受治療者(本文為CD40)結合的試劑治療移植受治療者。優選地，結合阻斷劑是CD154(CD40L)阻斷劑，即任何與CD154結合併阻止或幹擾其與反受治療者(例如CD40)結合的試劑]治療患外源蛋白抑制劑綜合症(是指逆適應性體液免疫反應)或有此危險的受治療者。CD154阻斷劑的實例是單克隆抗體(MAb)，具體地是在美國專利5,474,771中公開的具有5c8 MAb抗原特異性結合特徵的單克隆抗體，在此引用該文獻作為參考。
如上所述，可以實施本發明以減輕或減弱針對用於替代或改進缺陷性天然(內源)蛋白的生物活性的外源蛋白產生的綜合症。也可以實施本發明以減輕或減弱針對其它外源蛋白，包括任何用於治療目的外源蛋白的抑制劑綜合症。例如，可以實施本發明以防止、逆轉或抑制針對任何重組合成蛋白治療、尤其具有與天然功能性稀少蛋白或天然隔離於特定身體結構或區室中如骨髓、淋巴結或中央神經系統的天然蛋白的抑制反應。相似地，可以實施本發明以防止、逆轉或抑制對瞬間表達或僅對特定環境刺激反應或在發育過程的特定點表達的天然蛋白重組形式的抑制反應。因此，可以實施本發明以減輕或減弱針對生長激素、創傷癒合因子(如組織再生因子或分化因子)、細胞因子或淋巴因子(如集落刺激因子、幹細胞因子、幹擾素或白細胞介素)、酶(如葡糖腦苷脂酶)、凝血因子(如凝血酶、凝血酶原、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI或因子XII)或其它血漿成分(如白蛋白、組織血纖維蛋白溶酶原激活劑)的抑制劑反應。另外，可以實施本發明以減輕或減弱針對外源蛋白、尤其用於治療目的(如血管阻塞的治療)的細菌蛋白(如鏈激酶)的抑制劑反應。本發明實施針對的目標是人。具體地，可以實施本發明以減輕或減弱血友病人中的凝血因子抑制劑綜合症。
本發明前述和其它目的、特徵和優勢以及本發明本身將從下面優選實施方案的描述中得到更充分的理解。
發明詳述
T細胞活化和依賴其的免疫學過程既需要T細胞受治療者(TCR)介導的信號又需要同時傳送的共刺激信號。重要的共刺激信號通過CD40與抗原呈遞細胞的結合傳遞，例如B細胞通過T細胞上的CD40L(CD154)傳遞。人類CD40是成熟B細胞以及巨噬細胞和活化內皮細胞上表達的50kD細胞表面蛋白。CD40屬於與編程性細胞死亡有關的一類受治療者，包括Fas/CD95和腫瘤壞死因子(TNF)α受治療者。人CD154(CD40L)是具有與瞬間表達的TNFα的同源性的32KD II型膜糖蛋白，主要在活化T細胞上瞬間表達。已經證明CD40:CD154結合是所有T細胞依賴性抗體反應所必需的。特別地，CD40:CD154結合提供抗編程性細胞死亡和/或淋巴因子刺激的信號。
在發現人類X-連鎖的hyper-IgM綜合症(X-HIGM)是由功能性CD154的遺傳缺陷所導致的表型時，CD40:CD154結合在促進T細胞依賴性生物學反應方面的重要性得到更充分地理解。患者具有正常或高IgM水平，但不能產生IgG，IgA或IgE抗體，並且患有復發的、有時嚴重的細菌及寄生蟲感染以及有增加的淋巴瘤和腹部癌症的得病機率。類似表型在非人類動物中觀察到，其導致編碼CD154的基因成為零合基因(敲除動物)。CD154無效合子的B細胞可以在無CD40:CD154結合時產生IgM，但不能進行同型轉換或在親和成熟後正常存活。在組織學上，淋巴結生發中心不能正常發育，並且記憶B細胞缺乏或發育不足。在功能上，這些缺陷導致次級(成熟)抗體反應的嚴重減少或缺失。也觀察到細胞免疫性的缺陷，表現為增加的細菌和寄生蟲的感染機率。許多細胞介導的缺陷可通過施用IL-12或IFN-γ加以逆轉。這些觀察結果證實了這樣的觀點，即正常的CD40:CD154結合促進I型T-輔助細胞免疫學反應的形成。
用蛋白抗原阻斷免疫過程中的CD40:CD154相互作用可以特異地阻斷小鼠中對抗原的抗體反應[Foy等(1993)，178實驗醫學雜誌1567-1576]。例如，抗CD154抗體可以在膠原蛋白誘導的關節炎中阻斷抗膠原抗體的誘導[Durie等(1993)，261科學1328-1330]。抗CD154抗體可以降低患自發狼瘡的小鼠中抗dsDNA和抗核小體的自身抗體[Mohan等(1995)，154免疫學雜誌1470-1480]。另外，抗CD154抗體可以減輕患實驗性自身免疫腦脊髓炎(EAE)的小鼠中(MS模型)的症狀。也有報導在移植-宿主疾病、氯化汞誘導的腎小球性腎炎和炎性腸疾病的齧齒動物模型中得到相似結果。
因此，CD40:CD154阻斷可以提供強有力的治療以減輕或減緩不需要的體液免疫反應，具體地自身免疫疾病環境中的免疫反應或者實際上靶抗原是具治療價值的蛋白而其價值被逆適應性免疫反應阻礙的情況。然而，儘管有大量有希望的結果的報導，但是在誘導的逆適應性免疫疾病(如自身免疫)齧齒動物模型中進行的研究與在實際疾病環境或尤其在大型動物臨床前模型系統(如靈長類)中測試的結果很少相關。
在此公開的是在認為可預測治療外源蛋白抑制劑綜合症的治療效力的臨床前模型中估評優選的CD154阻斷劑即具有MAb 5c8抗原特異性結合特性的人化MAb(Lederman等，實驗醫學雜誌1751091-1101，1992)的效應的方法。具體地，本模型包括減輕或減弱對凝血因子(如FVIII)和淋巴因子(如IFNβ)特異的生物抑制體液反應的CD154阻斷治療。這些模型可以適於通過常規操作以用於評估CD154阻斷治療減輕或減弱針對任何具有治療價值的蛋白產生的抑制體液免疫的效力。
下面的討論描述並且舉例說明可以實施本發明以及提供原理上證據研究結果的各種內容和條件，包括本發明的特定實施方案。
受治療者本發明可用於治療或預防需要或正在接受蛋白替代治療，實際上任何蛋白治療的哺乳動物。因此，受治療者患外源蛋白抑制劑綜合症或有發生外源蛋白抑制劑綜合症的危險。例如，用外源FVIII治療的血友病人正處於變為「高反應者」的高度危險之中，之後FVIII失去了其預期的抑制流血症狀的效應。因此，本發明特別適用於血友病人。測定血友病人是否已發生針對治療性施用的FVIII的抑制反應和/或變為高反應者的方法眾所周知。見例如血液學臨床和實驗實踐，第二卷，Bick編，Mosby-Year Book，Inc.，Publ.(1993)，1544-1548頁。優選地，受治療的哺乳動物是靈長類動物，更優選地高等靈長類動物，最優選地人類。在其它實施方案中，受治療者可以是患外源蛋白抑制劑綜合症或有發生外源蛋白抑制劑綜合症危險的另一哺乳動物，特別是具有商業重要性的哺乳動物或寵物或其它有價值動物如瀕危物種的成員。因此，受治療者也包括但不限於綿羊、馬、牛、山羊、豬、狗、貓、兔、豚鼠、倉鼠、沙鼠、大鼠和小鼠。
CD40:CD154結合阻斷劑的實例用於實施本發明的治療化合物包括任何阻斷細胞表面CD40(例如位於B細胞上)與例如活化T細胞表面上表達的CD40L(CD154)相互作用的化合物。應該特別注意的CD40:CD154結合阻斷劑化合物如CD154阻斷劑包括單克隆抗體和多克隆抗體(MAbs)以及抗體衍生物如嵌合分子、人化分子、具有降低效應物功能的分子、雙特異性分子和抗體的偶聯物。在優選的實施方案中，抗體具有與MAb 5c8基本上相同的抗原特異性結合特徵，如美國專利5,474,771中所述，在此引用其公開內容作為參考。在目前高度優選的實施方案中，抗體是人化的5c8(hu5c8)。其它已知的抗CD154的抗體包括抗體ImxM90、ImxM91和ImxM92(由Immunex Corp.，Seattle WA公開)、商業上可從Ancell得到的抗-CD40L mAb(克隆24-31，目錄號353-020，Bayport，MN)和商業上可從Genzyme得到的抗-CD40L mAb(Cambridge，MA，目錄號80-3703-01)。同樣商業上可以得到的有來自PharMingen的抗-CD40L mAb(San Diego，目錄號33580D)。許多其他抗-CD40L抗體也得到製備和鑑定(參見，例如Bristol-Myers Squibb的WO96/23071，在此引用其說明書作為參考)。
本發明也包括使用從上述或等價MAb衍生或加工得來的CD154阻斷劑如完整Fab片段、F(ab』)2化合物、VH區、Fv區、單鏈抗體(參見，例如WO 96/23071)、多肽、多肽融合構建體、CD40融合體(如CD40Ig，如在Hollenbaugh等，免疫學方法1881-7，1995中所述，在此引用作為參考)和小分子化合物如小的半肽化合物或非肽化合物，所有這些均能夠阻斷或阻止CD40:CD154結合。設計、篩選和優化小分子的方法在1996年6月21日提交的PCT/US96/10664中提供，在此引用其說明書作為參考。
因此，本發明可以使用用標準重組DNA技術製備MAb衍生的CD154阻斷劑(Winter和Milstein，自然349293-99，1991)。一類這樣的CD154阻斷劑是通過將編碼具有目的特異性的非人哺乳動物如小鼠或大鼠抗體的抗原結合區的核酸與編碼人免疫球蛋白(Ig)恆定區的核酸連接構建的嵌合抗體或融合抗體(Cabilly等，美國專利No.4,816,567；Morrison等，美國國家科學院院報816851-55，1984)。從這樣的構建體表達的嵌合抗體用於人類治療或預防時一般具有比嵌合體來源的非人抗體更低的免疫原性。另一類這樣的CD154阻斷劑是重組的「人化」或「靈長類化」的抗體。人化或靈長類化抗體是經遺傳加工從具有目的特異性的非人類哺乳動物抗體衍生的抗體，其中用編碼來自人或靈長類動物Ig輕鏈或重鏈相應區域的胺基酸的密碼子替換編碼抗原結合不需要的胺基酸的部分或所有密碼子。即它們是主要包含人免疫球蛋白序列的嵌合體，其中插入了負責特異性抗原結合的區域(參見，例如PCT專利申請WO94/04679)。人化抗體在體內具有比嵌合抗體更低的免疫原性。目前，具有與MAb5c8(本文中HC15c8)基本上相同的抗原特異性的人化MAb對於實施本發明是優選的。
用於本發明的另一類MAb衍生的CD154阻斷劑包括可以在非人動物如其中已整合一種或多種人類免疫球蛋白轉基因的轉基因動物中製備的人類抗體。這樣的動物可以用作用於製備雜交瘤的脾細胞的來源，如U.S.5,569,825中所述。
任何前述MAb之一的抗體片段和MAb衍生的治療試劑也可用於本發明。單價抗體包括與第二種重鏈的Fc(或主幹)區域結合的重鏈/輕鏈二聚體。「Fab區」是指那些與包含重鏈Y分支部分的序列大致相同或相似或在整體上與輕鏈大致相同或相似並且已表明整體上(集合體)表現抗體活性的鏈部分。Fab蛋白包括一條重鏈和一條輕鏈的集合體(常稱為Fab』)以及對應於抗體Y 2個分支片段的四聚體(常稱為F(ab)2)，無論上述任何形式是共價或非共價集合體，只要集合體能選擇性與特定抗原或抗原家族反應即可。
此外，可用標準重組DNA技術通過改變抗原結合位點附近的胺基酸殘基雜改變重組抗體與其抗原的結合親和性。可根據分子模型通過誘變來增加人化抗體的抗原結合親和性(Queen等，美國國家科學院院報8610029-33，1989；PCT專利申請WO 94/04679)。根據靶組織類型或預想的特定治療方案增加或減小抗體對CD154的親和性可能是有利的。這可用噬菌體展示技術來進行(參見，例如Winter等，免疫學年鑑12433-455，1994和Schier等，分子生物學雜誌.25528-43，1996，在此引用作為參考)。例如，為了半預防性治療，用恆定水平的具有減小的對CD154的親和性的抗體治療患者是有利的。同樣，具有增加的對CD154的親和性的抗體對於短期治療可能是有利的。
給藥途徑用於本發明的CD40:CD154結合阻斷劑，包括CD154阻斷劑可以用醫學上可接受的任何方式給藥。根據具體情況，局部或系統給藥可能是理想的。優選地，藥劑通過胃腸外途徑如通過靜脈內、動脈內、皮下、肌肉內、眼眶內、心室內、腹膜內、被膜下、顱內、脊髓內或鼻內注射、輸注或吸入給藥。藥劑也可通過在供體組織移植之前或之後將輸入泵或者可生物相容或可生物降解的緩釋移植物植入受治療者宿主來給藥。選擇性地，本發明的某些化合物或其製品可適於口腔或腸道給藥。本發明還有一些化合物將適於體表給藥。
在進一步的實施方案中，通過施用編碼阻斷劑的載體或其它可表達的遺傳物質將CD40:CD154結合阻斷劑間接提供給受治療者。將遺傳物質導入受治療者的細胞或組織並在其中表達，由此在原位產生阻斷劑。例如，適當的核酸構建體將包含編碼一種或多種MAb 5c8免疫球蛋白(Ig)鏈的序列，如U.S.專利5,574,771中公開的。其它適當的構建體將包含編碼嵌合或人化版本的MAb 5c8 Ig鏈或其抗原結合片段。其它適當構建體將包含編碼部分或全部其它CD154特異性MAb的序列。將構建體系統或局部地運送到例如鄰近表達胰島素組織移植部位的位點。
選擇性地，將編碼阻斷劑的載體或其它遺傳物質導入適當的分離細胞種群中以製備產生阻斷劑的宿主細胞。然後將這些宿主細胞局部或系統地移植或輸注給受治療者以提供CD40:CD154結合阻斷劑的原位產生。適當宿主細胞包括培養細胞如永生化細胞以及從受治療者獲得的細胞(例如外周血或淋巴結細胞如天然殺傷(NK)細胞)。
製劑一般來說，將用於實施本發明的化合物懸浮、溶解或分散於藥學上可接受的載體或賦形劑中。得到的治療組合物對受治療者的體內平衡，特別是電解液平衡沒有負面影響。因此，載體實例包括正常的生理鹽水(0.15M NaCl，pH7.0到7.4)。另一載體實例包括50mM磷酸鈉，100mM氯化鈉。許多其它可接受的載體在本領域內眾所周知並且描述於例如雷明頓藥物科學，Gennaro編，Mack出版公司，1990。可接受的載體可包括可生物相容的、惰性或可生物吸附的鹽、緩衝劑、寡糖或多糖、聚合物、粘性增強劑、防腐劑等。
配製用於實施本發明的任何CD40:CD154結合阻斷劑如CD154阻斷劑以運送藥學上有效的或治療上有效的量或劑量，即足以對受治療者產生可檢測到的、優選醫學上有利的效應的量。醫學上有利的效應將包括防止、延緩或減輕受治療者醫療狀態的惡化或可檢測到地改進其醫療狀態。例如，對所需外源蛋白治療特異的抑制抗體的效價可以得到抑制或降低。因此，本發明治療化合物如CD154阻斷劑的有效量是可檢測到地恢復蛋白治療的治療效果的任何量。有效量是使受治療者基本上不產生引起抑制劑綜合症的逆適應性抗體的量。
治療劑量和頻率用於完成本發明任何特定化合物給藥的劑量和頻率在本領域普通醫生如外科醫生的技術和臨床判斷能力之內。基本劑量和施用方案通過臨床前和臨床試驗加以確定，試驗包括廣泛但常規的研究以測定所需化合物的有效、例如最佳給藥參數。即使在完成這些建議之後，臨床醫生通常將根據各種因素如受治療者年齡、醫療狀態、體重、性別和與其它藥物的共同治療針對不同受治療者宿主改變這些劑量。測定用於本發明的每種CD40:CD154結合阻斷劑的有效劑量和給藥方案是藥物和醫學領域技術人員的日常事務。給藥量和療程應該足以在受治療者健康狀態的一個或多個指標中產生臨床上有利的改變。療程和劑量方案的實例列於這裡包括的證據-原理研究中。
為了舉例說明抗CD154化合物的劑量因素，給出下面關於抗CD154 mAb施用策略的實例。給藥量可容易地針對其它類型的抗CD154化合物加以調整。一般地，應該考慮約0.05-50mg/kg受治療者體重的單一劑量，1-20mg/kg範圍的劑量最常用。為了在病人無症狀時開始CD154阻斷治療或對急性疾病進行緊急治療，MAb的有效劑量範圍是約1mg/kg體重到約20mg/kg體重，每天施用或間隔約2到5天，維持約三周時間。通過此後以約0.1mg/Kg體重到約20mg/kg體重劑量的間歇給藥維持治療。為維持目的，劑量間隔從約1周變化到約3個月。目前，1月的劑量間隔是優選的。
如果需要，可以連續或與常規免疫抑制劑結合實施CD154阻斷治療。為了謹慎，常規免疫抑制劑(如皮質類固醇或鈣調磷酸酶抑制劑)可以由醫生在CD154阻斷治療的任何時間點一起施用。選擇性地，CD154阻斷MAb可以與常規藥物偶聯。這可以有利地允許常規藥劑以少於常規劑量的量施用，例如當該藥劑作為單一治療施用時少於常規劑量的約50％。因此，應該避免了許多與該藥劑有關的副作用發生。因此，根據本發明，CD154阻斷MAb可以與靶向B細胞的其它藥劑一起使用如抗CD19、抗CD28或抗CD20抗體(未偶聯或放射標記的)、IL-14拮抗劑、LJP394(LaJolla藥物受治療者阻斷劑)、IR-1116(Takeda小分子)和抗Ig獨特型的單克隆抗體。選擇性地，這些組合可能包括T細胞/B細胞靶向藥劑如CTLA4Ig、IL-2拮抗劑、IL-4拮抗劑、IL-6拮抗劑、受治療者拮抗劑、抗CD80/CD86的單克隆抗體、TNF、LFAl/ICAM拮抗劑、VLA4/VCAM拮抗劑、brequinar和IL-2毒素偶聯物(例如DAB)、脫氫可的松、抗CD3 MAb(OKT3)、mycophenolate mofetil(MMF)、環磷醯胺以及其它免疫抑制如鈣調磷酸酶信號阻斷劑，包括但不限於tacrolimus(FK506)。這些組合也可包括T細胞靶向藥劑如CD4拮抗劑、CD2拮抗劑和IL-12。
為了維持移植物的整合或者在抑制移植排斥急性事件之後的時期內，如果必要，單獨或與常規抗排斥藥劑結合施用維持劑量的抗CD40L抗體。隨後，可以降低給藥的劑量或頻率或同時降低這二者。在無移植排斥體症出現時，治療可以停止，但注意監測移植排斥的體症。在其它情況下，根據普通醫生的判定，例如可以以4周或更長間隔施行不定期治療。然而，根據疾病症狀的任何復發，受治療者宿主可能需要長期的間歇治療。
用於評估CD40:CD154阻斷劑治療方案的臨床前模式系統用於測試CD40:CD154阻斷化合物(例如，抗-CD40L化合物或CD154阻斷劑，如具有MAb 5c8特異性的MAb)效率的目前優選模式系統實例如下所述。在每個系統中，可以進行常規改變或調整以按照需要修飾公開的技術從而在動物模型中評估任何目的CD40:CD154阻斷化合物對蛋白抑制效價情況的影響。一些修飾的例子在下面簡述中提及；然而，一些其它適當修飾對熟練人員是明顯的，並且也考慮在內。
血友病A的敲除小鼠模型最近，美國紅十字會的研究者已建立了產生天然鼠FVIII無效合子(「敲除」)的小鼠育種群體[Bi等(1995)，10 Nature Genetic 119]。這些小鼠表現人血友病A的所有相關病理學症狀。而且，小鼠模型精確地模擬了這些疾病病理學症狀的病因學具生物學活性的、天然的FVIII的遺傳或先天性缺乏。已報導以相當於傳統FVIII替代治療的方式施用的人FVIII的大劑量給藥在小鼠中引發FVIII抑制劑抗體的產生[Quian等，(1996)，88血液656a(增刊)]。其它施用方式，具體地藉助編碼功能性FVIII的腺病毒載體的整合的組成型替代目前看來使蛋白治療處於免疫原性更低的環境中[Connely等(1998)，91血液3273-3281]。
CD154阻斷劑如抗鼠CD154在上述血友病小鼠群體中對「高反應者」發生的影響可以基本上按下述得到評估抗原(FVIII)可以在實驗日0和14以大劑量(如0.2μg)注射。在實驗日54或附近，抽取血樣並使用常規ELISA技術分析FVIII抑制抗體的存在。之後，可以例如在實驗日55和/或57或附近，給測試群體(如5隻或更多動物；可以安排相似數目的動物作為一個或多個適當對照群體)提供適當劑量的抗鼠CD154(如腹膜內或靜脈內250μg)。可以在實驗日56或附近給予FVIII的攻擊劑量。之後，可以在適當實驗日抽取血樣並分析以監測測試群體中抑制抗體對FVIII的繼發性反應的發生、抑制或逆轉。例如，可以在實驗日74、81和96提取血樣。除了測試群體中動物間的一些個體差異，預期CD154阻斷治療將顯著地阻斷或抑制對FVIII的繼發性體液免疫。
SCIB-hu嵌合小鼠模型最初由Mosier等(1988)，335自然256-259報導的嵌合小鼠模型是以通過移植正常人外周血白細胞(PBL)產生穩定小鼠-人嵌合體來免疫學治療(功能重建)嚴重複合免疫缺陷(SCID)小鼠為基礎的。此系統已用於對人淋巴細胞體內行為和動態相互作用的大量研究。重要的是，此系統已用於研究CD40:CD154阻斷劑對正常人淋巴細胞對鼠紅細胞(用作模式抗原)的反應的影響[Chen等(1995)，155免疫學雜誌2833-2840。在此研究中表明抗CD40和CD154 MAb下調人總體Ig合成。
此模型系統使得可以評估抗-人CD154如Hu5c8體內對人T細胞的影響，可使用任何目的蛋白作為測試抗原。在一個適當修飾方案中，可以通過移植來自血友病受治療者如高反應者的人PBL來製備SCID-hu小鼠嵌合體。當然，此方法可以採用來自任何患外源蛋白抑制劑綜合症的病人的PBL進行。在從血友病高反應者製備SCID-hu小鼠的病例中，適當數目(例如2-5或更多)小鼠可以按下述分成研究組A組(hu5c8和FVIII)；B組(hu5c8單獨)；C組(FVIII單獨)；D組(只有載體)；E組(對照Ig和FVIII)；F組(對照Ig單獨)。所示的測試項和/或對照在移植時與hu PBL混合併在實驗日2和/或4腹膜內提供。隨後FVIII抑制反應的動力學可以通過標準技術(ELISA)、使用幾周時期內在適當間隔抽取的血監測。預期用hu5c8處理可阻斷或消除對FVIII的繼發性體液免疫。
非人靈長類動物模型AVONEX(IFNβ)模型將彌猴或cynomologus猴按下述分成適當研究組，例如每組2-4隻動物1組[對照抗原(HAS)；50μg/kg以及hu5c8，5mg/kg]，2組(載體和Hu5c8，5mg/kg)，3組(AVONEX，50μg/Kg和hu5cB，5mg/kg)，4組(AVONEX，50μg/kg以及hu5c8，5mg/kg)，5組(載體和hu5c8，5mg/kg)。1，2和3組在實驗日1開始並在此後大約每隔一日或二日接受hu5c8。4和5組在實驗17開始並在此後大約每隔一日或二日接受hu5c8。所有AVONEX在實驗日3或附近開始接受AVONEX q.o.d。AVONEX抑制抗體的發生和動力學使用常規ELISA技術監測。預期用hu5c8處理的或未處理的AVONEX組之間有明顯差異。具體地，預期用hu5c8預處理可基本上阻斷或消除AVONEX抑制抗體的發生。預期用hu5cB延遲處理可基本上抑制或逆轉對AVONEX的繼發性體液免疫的發展。
上述模型可以經常規改變以適於評估hu5c8或另一CD154阻斷劑對針對其它模式抗原包括外源蛋白治療的初發和/或繼發性抑制反應的影響。例如可以對此方法和劑量水平進行常規的適當修飾以評估提供CD154阻斷治療的預防或治療方案的靈長類動物中FVIII或另一凝血因子的情況。
等價物本發明可以體現在其它特定形式中而不背離本發明精神或基本特徵。因此，應當認為前述實施方案是在此公開的本發明所有方面的舉例說明而不是對其進行限定。因此本發明的範圍通過附屬的權利要求而不是前面的描述來說明，並且認為在這些權利要求含義和相同範圍內的所有改變也應當包括在本發明範圍之內。
本發明還在以下編號的段落中得到說明。
1.一種減輕外源蛋白抑制劑綜合症嚴重性的方法，包括給患此綜合症或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結合阻斷劑的步驟。
2.一種抑制外源蛋白抑制劑綜合症不利影響的方法，包括給患此綜合症或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結合阻斷劑的步驟。
3.一種防止外源蛋白抑制劑綜合症發展的方法，包括給患此綜合症或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結合阻斷劑的步驟。
4.一種延遲外源蛋白抑制劑綜合症發生的方法，包括給患此綜合症或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結合阻斷劑的步驟。
5.一種抑制外源蛋白抑制劑綜合症發展的方法，包括給患此綜合症或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結合阻斷劑的步驟。
6.一種逆轉外源蛋白抑制劑綜合症的方法，包括向患此綜合症或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結合阻斷劑。
7.一種維持外源蛋白治療活性的方法，包括向患此綜合症或有此危險的受治療者施用有效量CD40:CD154結合阻斷劑。
8.一種恢復外源蛋白治療活性的方法，包括向用所述外源蛋白治療並對其產生免疫反應的受治療者施用有效量CD40:CD154結合阻斷劑。
9.根據段落1、2、3、4、5、6、7或8所述的方法，其中CD40:CD154結合阻斷劑是CD154(CD40L)阻斷劑。
10.根據段落9所述的方法，其中CD154阻斷劑是單克隆抗體。
11.根據段落10所述的方法，其中單克隆抗體具有ATCC保藏號HB10916產生的5c8抗體的抗原特異性結合特徵。
12.根據段落1、2、3、4、5、6、7或8所述的方法，其中施用外源蛋白以替代內源缺陷型蛋白。
13.根據段落1、2、3、4、5、6、7或8所述的方法，其中外源蛋白具有與相應內源蛋白基本相同的一級結構並且從帶有編碼所述外源蛋白的可表達重組核酸的分離宿主細胞得到製備。
14.根據段落1、2、3、4、5、6、7或8所述的方法，其中外源蛋白是細菌來源的蛋白。
15.根據段落12所述的方法，其中外源蛋白是凝血因子。
16.根據段落15所述的方法，其中凝血因子是因子VIII或因子IX。
17.根據段落13所述的方法，其中外源蛋白是生長激素、創傷癒合因子、生長因子、細胞因子、淋巴因子、酶、凝血因子或血漿成分。
18.根據段落14所述的方法，其中外源蛋白是鏈激酶。
19.根據段落1、2、3、4、5或8所述的方法，其中受治療者是人。
20.根據段落19所述的方法，其中是人是血友病患者。
權利要求
1.CD40CD154結合阻斷劑的用途，用於製備在患此綜合症或有此危險的受治療者中減輕外源蛋白抑制劑綜合症嚴重性的藥物。
2.CD40CD154結合阻斷劑的用途，用於在患此綜合症或有此危險的受治療者中抑制外源蛋白抑制劑綜合症不利影響的藥物。
3.CD40CD154結合阻斷劑的用途，用於製備在患此綜合症或有此危險的受治療者中防止外源蛋白抑制劑綜合症發展的藥物。
4.CD40CD154結合阻斷劑的用途，用於製備在患此綜合症或有此危險的受治療者中延遲外源蛋白抑制劑綜合症發生的藥物。
5.CD40CD154結合阻斷劑的用途，用於製備在患此綜合症或有此危險的受治療者中抑制外源蛋白抑制劑綜合症發展的藥物。
6.CD40CD154結合阻斷劑的用途，用於製備在患此綜合症或有此危險的受治療者中逆轉外源蛋白抑制劑綜合症的藥物。
7.CD40CD154結合阻斷劑的用途，用於製備在用所述外源蛋白治療的受治療者中維持外源蛋白治療活性的藥物。
8.CD40CD154結合阻斷劑的用途，用於製備在用所述外源蛋白治療並對其產生免疫反應的受治療者中恢復外源蛋白治療活性的藥物。
9.根據權利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的用途，其中CD40CD154結合阻斷劑是(a)CD154(CD40L)阻斷劑；或(b)單克隆抗體；或(c)具有ATCC保藏號HB 10916產生的5c8抗體的抗原特異性結合特徵的單克隆抗體。
10.根據權利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的用途，其中外源蛋白是(a)內源缺陷性蛋白的代用品；或(b)具有與相應內源蛋白基本相同的一級結構的蛋白；或(c)從帶有編碼所述外源蛋白的可表達重組核酸的分離宿主細胞得到製備的蛋白；或(d)細菌來源的蛋白；或(e)凝血因子，包括因子VIII或因子IX；或(f)生長激素、創傷癒合因子、生長因子、細胞因子、淋巴因子、酶、凝血因子或血漿成分；或(g)鏈激酶。
11.根據權利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的用途，其中受治療者是人。
12.根據權利要求11所述的用途，其中人是血友病患者。
全文摘要
本發明提供減輕或減緩、抑制、防止外源蛋白抑制劑綜合症的發生或逆轉外源蛋白抑制劑綜合症的方法和組合物，外源蛋白抑制劑綜合症以凝血因子(如因子VIII)抑制劑綜合症為例。所述方法使用CD40CD154結合阻斷劑如CD154阻斷劑來減輕或改進針對具有治療價值的外源蛋白的逆適應性生物抑制體液免疫。
文檔編號A61K38/19GK1651071SQ20041009786
公開日2005年8月10日 申請日期1998年6月19日 優先權日1997年6月20日
發明者B·阿戴爾曼 申請人:拜奧根Idec麻薩諸塞公司