用駱駝乳和馬來酸羅格列酮聯合治療Ⅱ型糖尿病的製作方法
2023-05-03 17:50:46
專利名稱：用駱駝乳和馬來酸羅格列酮聯合治療Ⅱ型糖尿病的製作方法
技術領域：
本發明涉及藥物領域，尤其是治療糖尿病的藥物。
背景技術：
糖尿病是一種全身慢性代謝性疾病。主要是由於體內胰島素絕對或相對不足而導致糖、脂肪、蛋白質的代謝紊亂。現在研究證實，II型糖尿病的主要病理生理基礎是胰島素抵抗，即機體對胰島素的正常反應降低，導致血液中的胰島素水平遠遠高於正常人，這是由於病人機體內的脂代謝混亂引起的。因此目前對II型糖尿病的治療是以調節脂代謝為主，而不是單純的降糖。
當今世界隨著經濟的發達，人類壽命的延長，糖尿病的患者數量與日俱增，目前，發達國家和地區的患病率高達2％～5％，糖尿病已釀成全球性的威脅，在我國，調查表明其患病率呈逐年上升的趨勢。
曾有報導指出駱駝乳用於I型糖尿病人可以降低患者的胰島素用量，但未見駱駝乳對II型糖尿病的實驗研究。另外，目前臨床使用的各種降糖藥物在不同程度上均存在禁忌症和不良反應，長期服用還可引起繼發性失效；即便使用胰島素注射也可出現注射部位脂肪萎縮、肥大、視力模糊等副作用，這就使得它們在臨床應用中受到了很大的限制。因而，運用動物模型對駱駝乳的降糖作用進行評價與分析具有一定的研究價值和現實意義。
發明內容
本發明的目的是提供一種對治療II型糖尿病有較好療效的駱駝乳和馬來酸羅格列酮聯合的治療藥物。
本發明的組成是動物試驗有效藥物組成是馬來酸羅格列酮1-3mg/kg體重，駱駝乳1-6ml；人體臨床試驗有效藥物組成是馬來酸羅格列酮4mg，駱駝乳8ml.製備時先確定馬來酸羅格列酮的用量，然後將稱取的馬來酸羅格列酮加入到駱駝乳中形成混懸液即成。
本發明中所採用的馬來酸羅格列酮為胰島素增敏劑。
通過前期實驗研究表明，駱駝乳中的活性成分如鐵、鈣、鈉、鋅、鎂、鉀含量均高於牛乳、羊乳及人乳或與其差別不大，另外駝乳中含有較高含量的亞油酸和α-亞麻酸，兩者均屬於多不飽和脂肪酸，並且在普通食品中含量極微；文獻報導駱駝乳中含有高含量的維生素C及維生素E且含量遠遠高於牛乳。
微量元素與糖尿病的關係，國內外學者的研究表明，糖尿病病人的血清鋅、鐵的水平低於正常人，血清銅升高，這樣的結論是得到公認的。對比其他乳類，駱駝乳中微量元素成分及含量更適合於糖尿病人飲用，而且推斷其成分可能對糖尿病患者具有一定的治療效果。
同時駝乳中富含的亞油酸(LA)和α-亞麻酸(ALA)等多不飽和脂肪酸(PUFA)的保健作用早已得到公認。前者屬於n-2系列脂肪酸，後者屬於n-3系列脂肪酸。兩者是同系列多不飽和脂肪酸的前體，在體內經過一系列的碳鏈延長和脫飽和作用衍化生成其他的PUFA，其中較重要的有花生四烯酸(AA)、廿碳五烯酸(EPA)、廿二碳六烯酸(DHA)。近年的研究發現PUFA是核受體過氧化物酶增殖活化受體(PPAR)的內源性激活物。PPAR屬於甾體/甲狀腺激素受體超家族，是一種核轉錄因子的一部分，它可以與DNA結合併刺激某些基因的轉錄。活化的PPAR可以與特異的DNA片段結合，發揮其轉錄調節作用。一方面，活化的PPAR-γ可以激活一些由胰島素通過特殊轉錄因子調節的基因，增強其轉錄活性；另一方面，活化的PPAR-γ可以與一些原本由胰島素應答片段覆蓋的位點相互作用，抑制其活性；另外，PPAR-γ還可以誘導一些基因的表達，而其表達產物恰好為胰島素作用的靶蛋白，例如葡萄糖轉運蛋白。由此認為，駱駝乳中的PUFA可以在轉錄水平上增強胰島素的作用。
本實驗選取得對照藥物羅格列酮屬於噻唑唍二酮類藥物(TZD)，是一種胰島素增敏劑。能糾正胰島素抵抗狀態，降低空腹血糖及改善糖耐量，在血糖下降的同時，空腹血漿胰島素和甘油三酯水平下降，而不引起低血糖。現已發現TZD類藥物的增敏機制與胰島素受體的早期磷酸化產物關係很小，而與核受體過氧化物酶增殖活化受體(PPAR)關係密切。由於藥物的作用機制與駱駝乳中PUFA相似，兩種因素具有協同作用。
本發明具有以下有益效果1、療效顯著，在降血糖、血脂、胰島素方面比單獨使用馬來酸羅格列酮療效更好，如單獨使用駱駝乳其降低血糖、血脂和胰島素方面的作用與馬來酸羅格列酮的作用相同。
2、患者經濟負擔低，使用方便。
3、有利於牧區的經濟開發，是駱駝乳進一步開發利用的有效途徑。
具體實施例方式
現通過下述實施情況對本發明作進一步說明。
1、本發明的動物試驗本研究採用高脂飼料法製備糖尿病動物模型，對駱駝乳的降血糖作用進行初步研究，為以後的開發利用提供實驗依據。
1.1評價品與陽性藥駱駝奶，馬來酸羅格列酮(4mg/片，葛蘭素史克公司，產品批號06070106)
1.2實驗動物選用健康6周齡wister雌性大鼠60隻，體質量180-200g(購自蘭州大學實驗動物中心，動物合格證號甘醫動字14-006)。自由進食飲水，晝夜節律12小時.飲用新鮮自來水，每日衝洗水瓶，換水。飼料應用標準普通飼料(與大鼠同時購自蘭州大學實驗動物中心，總熱能16.17×10KJ/Kg)和高脂飼料(自製)。每三天換墊料。
1.3動物造模採用高脂飼料法製造糖尿病模型，預計飼養6周後造模成功，採血測空腹血糖及空腹胰島素。選取血糖值高於正常對照組均數加標準差的造模組大鼠作為實驗組。
1.3.1高脂飼料的製作飼料配方如下在1000克大鼠普通標準飼料中加入150克食鹽、50克白糖、2000克豬油、400克麻油、2000克花生、900克雞蛋，即脂肪提供熱量的59％、蛋白質提供熱量的21％、碳水化合物提供熱量的20％，與普通標準飼料為等熱量飼料。
預實驗製作2.5千克高脂飼料，投食觀察大鼠進食量的變化以確認飼料的適口性。經實驗確定配方後，每周製作5千克高脂飼料並消毒、分裝，以確保飼料中的營養素及功效成分無損失及大鼠食用的安全性。
1.3.2動物編號與分組大鼠編號後按照隨機數字表法隨機分為正常對照組(10隻)和造模組(50隻).
1.3.3實驗動物指標測定大鼠斷尾取血，測定空腹血糖、血甘油三酯、血總膽固醇、血漿胰島素水平。1.3.3.1空腹血糖葡萄糖氧化酶法。
試劑上海申能-德賽公司提供。
儀器HITACHI 7170s型全自動生化分析儀。
1.3.3.2空腹血甘油三酯氧化酶法。
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1.3.3.3血總膽固醇酶法。
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1.3.3.4空腹血胰島素放射免疫法。
試劑北京科美東雅生物技術有限公司提供。
儀器FT-630G微機多探頭γ計數器(北京核儀器廠)KDC-2044低速冷凍離心機(科大創新有限公司中佳分公司)1.4治療實驗1.4.1動物分組將造模成功的大鼠按照隨機數字表法分為四組病例對照組(8隻)、對照藥物組(8隻)、聯合治療組(8隻)、駝乳治療組(8隻)。
分組情況如下空白對照組(A)10、17、21、26、33、38、42、47、49、55號。
病例對照組(B)1、16、22、35、36、41、50、59號。
對照藥物組(C)11、13、28、40、46、52、53、58號。
聯合治療組(D)7、19、23、25、29、43、51、54號。
駝乳治療組(E)9、12、14、27、34、39、48、56號。
1.4.2駱駝奶的處理駱駝奶分裝為4ml/管經巴氏滅菌後存放於-20℃冰箱，臨用時取出復溶。
1.4.3陽性藥懸液的製備馬來酸羅格列酮研碎後密封保存，臨用前電子秤精確稱量(每周按照體重調整用藥量)。分別以蒸餾水、駝乳4ml配製成混懸液。
1.4.4實驗方法每日於早8:30取駱駝乳64ml室溫放置至溶解。精確稱取馬來酸羅格列酮(每周按照體重調整用藥量)16份裝於16支一次性塑料試管中，分別以蒸餾水、駝乳4ml配製成混懸液(每種八份)；另取18隻試管，每管4ml蒸餾水；8隻試管，每管4ml駱駝乳。每日早9:00-10:00開始灌胃。病例對照組每日給予四毫升蒸餾水灌胃，對照藥物組每日給予羅格列酮1-3mg/kg(混懸於1-6ml蒸餾水)灌胃，聯合治療組每日給予羅格列酮1-3mg/kg(混懸於1-6ml駝乳)灌胃，駝乳組每日給予駝乳4ml灌胃。
1.4.5檢測指標(1)體質量每周稱量大鼠體質量。
(2)空腹血糖採用葡萄糖氧化酶法。
(3)空腹胰島素採用放射免疫法。
(4)血脂採用酶法。
1.5結果1.5.1大鼠體質量由表1可知採用高脂飼料法造模至第五周空白組與造模組即出現大鼠體質量的顯著性差異。
由表2-3可知三個治療組治療至第十三周空白組與造模組大鼠體質量的顯著性差異即消失。
表1 大鼠體質量稱量結果
注與空白對照組比較#p＜0.001表2 大鼠體質量稱量結果
注與空白對照組比較#p＜0.05表3 大鼠體質量稱量結果
注與空白對照組比較#p＜0.051.5.2造模指標由表4可見，造模組大鼠的空腹血糖、血總膽固醇、空腹血胰島素均與對照組出現顯著性差異。
表4 造模後血糖、血脂、胰島素測定結果
注與空白對照組比較#p＜0.001，*p＞0.051.5.3實驗末血液指標各組大鼠進行實驗後血液指標測定結果見表5.病例對照組與空白對照組各項指標均有顯著性差異。空腹血糖結果對照藥物組、聯合治療組、駝乳治療組與空白對照組比較均無顯著性差異；與病例對照組比較有顯著性差異。血甘油三酯結果對照藥物組、聯合治療組、駝乳治療組與空白對照組比較均無顯著性差異；對照藥物組、聯合治療組與病例對照組有顯著性差異；其中聯合治療組與對照藥物組比較有顯著性差異。血總膽固醇結果對照藥物組、聯合治療組、駝乳治療組與空白對照組比較均無顯著性差異；與病例對照組比較有顯著性差異；其中聯合治療組與對照藥物組比較有顯著性差異。空腹血胰島素結果對照藥物組、聯合治療組、駝乳治療組與空白對照組比較均無顯著性差異；與病例對照組比較有顯著性差異；其中聯合治療組與對照藥物組比較有顯著性差異。
表5 實驗末血糖、血脂、胰島素測定結果
注與空白對照組比較#p＜0.001，*p＞0.05，″p＜0.05。與病例對照組比較※p＜0.001，§p＜0.05。與對照藥物組比較p＜0.05採用高脂飼料法製造糖尿病大鼠模型，由中期及最終血糖指標可見此方法造模成功率高並且模型穩定。
本實驗採用高脂飼料法製造糖尿病大鼠模型並給予治療。通過實驗可見駱駝奶對糖尿病大鼠有良好的治療效果，尤其是與藥物聯合治療是可以更加有效的改善雪剛油三酯和總膽固醇水平，提示其不僅在調節糖代謝及胰島素利用方面具有明顯作用而且在調節機體的脂肪代謝方面具有作用。由於駱駝奶本身具有的營養及藥理作用，以及其天然、無毒副作用等優點，我們認為它駱駝奶具有極大的開發和利用價值。
2、駱駝奶治療II型糖尿病臨床試驗2.1、實驗分組選臨床診斷為II型糖尿病病人15人，隨機分為三組駱駝奶治療組、馬來酸羅格列酮治療組、駱駝奶和馬來酸羅格列酮聯合治療組。治療前空腹測病人血糖、血脂、胰島素。結果如下表6 病例組血糖、血脂、胰島素測定結果
2.2駱駝奶的處理駱駝奶分裝為4ml/管經巴氏滅菌後存放於-20℃冰箱，臨用時取出復溶。
2.3實驗方法駱駝奶治療組每日於早8:30飲用駱駝乳8ml；馬來酸羅格列酮治療組、每日於早8:30服用馬來酸羅格列酮4mg；聯合治療組每日8:30給予羅格列酮4mg，駱駝乳8ml。治療四周後觀察病人臨床症狀，空腹檢測病人血糖、血脂、胰島素。
2.4結果治療四周後觀察病人身體狀況均有所改善，飲水量明顯減少。實驗後血液指標測定結果見表7。空腹血糖結果對照藥物組、聯合治療組、駝乳治療組與治療前比較有顯著性差異。血甘油三酯結果對照藥物組、聯合治療組、駝乳治療組與正常數值比較均無顯著性差異；對照藥物組、聯合治療組駱駝乳治療組與治療前有顯著性差異；其中聯合治療組與對照藥物組比較有顯著性差異。血總膽固醇結果對照藥物組、聯合治療組、駝乳治療組與正常數值比較均無顯著性差異；與治療前比較有顯著性差異；其中聯合治療組與對照藥物組比較有顯著性差異。空腹血胰島素結果對照藥物組、聯合治療組、駝乳治療組與正常數值比較均無顯著性差異；與治療前比較有顯著性差異；其中聯合治療組與對照藥物組比較有顯著性差異。
表7 治療四周後血糖、血脂、胰島素測定結果
注與病例治療前對照組比較※p＜0.001，§p＜0.05。與對照藥物組比較p＜0.052.5討論每天單獨飲用8ml駱駝乳或服用4mg馬來酸羅格列酮在降低血糖、血脂、胰島素，具有相同功效。駱駝乳和馬來酸羅格列酮兩種藥物聯用，在降血糖、血脂、胰島素方面比單獨使用任何一種療效顯著，尤其在降低血胰島素方面。
由此推斷，單獨使用駱駝乳時在降糖和調節脂肪代謝的作用與馬來酸羅格列酮的作用相同，而聯合藥物組在降糖的同時具有較明顯的脂肪代謝調節作用，較單用藥物治療效果更好。
權利要求
1.用駱駝乳和馬來酸羅格列酮聯合治療II型糖尿病，其特徵為動物試驗有效藥物組成是馬來酸羅格列酮1-3mg/kg體重，駱駝乳1-6ml，人體臨床試驗有效藥物組成是馬來酸羅格列酮4mg，駱駝乳8ml，製備時將馬來酸羅格列酮加入到駱駝乳中形成混懸液即成。
全文摘要
本發明為用駱駝乳和馬來酸羅格列酮聯合治療II型糖尿病，涉及藥物領域，曾有報導駱駝乳對I型糖尿病人可以降低患者的胰島素用量，但未見駱駝乳對II型糖尿病的研究，本發明試驗表明如單獨飲用駱駝乳其降低血糖、血脂和胰島素方面的作用與馬來酸羅格列酮的作用相同，如將馬來酸羅格列酮4mg和駱駝乳8ml混合後每日一次給患者飲用，經四周後在降低血糖、血脂、血胰島素方面比單獨使用馬來酸羅格列酮療效更好，並具有患者使用方便、經濟負擔低，並有利於牧區經濟開發的有益效果。
文檔編號A61P3/10GK101015566SQ20071008649
公開日2007年8月15日 申請日期2007年3月13日 優先權日2007年3月13日
發明者王曙陽, 梁劍平, 宋楠楠, 邵伍軍, 魏恆, 華蘭英 申請人:甘肅省華龍農業開發總公司