作為治療性化合物的新型EP4激動劑的製作方法
2023-05-04 06:45:51 1
本申請是要求2014年6月6日提交的題為「作為治療性化合物的新型EP4激動劑(Novel EP4Agonists As Therapeutic Compounds)」，案號是19451PROV(AP)的美國臨時申請62/009,028的權益的非臨時申請，所述美國臨時申請以引用的方式整體併入本文，並且用作本申請的優先權和/或權益要求的基礎。
領域
本發明涉及用於治療病症的化合物和方法，並且具體來說涉及EP4受體的激動劑和拮抗劑。
背景
前列腺素類EP4受體是一種G蛋白偶聯受體，其介導前列腺素E2(PGE2)的作用，並且特徵在於在與其它前列腺素類受體相比時具有最長細胞內C末端環。EP4受體是前列腺素E2受體的四種受體亞型中的一種。一般來說，EP4受體偶聯至G蛋白，並且介導環狀單磷酸腺苷(「cAMP」)濃度升高，但它們也參與其它路徑。EP4受體的表達受各種生理性和病理生理性過程控制，因為這些受體參與排卵和受精，誘導骨形成，T細胞因子信號傳導，預防炎症性腸病，促進朗格漢斯(Langerhans)細胞遷移和成熟，並且在膠原誘導的關節炎的模型中介導關節炎症，以及其它過程。
以引用的方式明確併入本文的美國專利號6,552,067教導前列腺素EP4選擇性激動劑用於治療哺乳動物中表現出低骨質量的疾患的用途和治療所述疾患的方法，所述疾患特別是骨質疏鬆、虛弱、骨質疏鬆性骨折、骨缺損、兒童期特發性骨損失、牙槽骨損失、下頜骨損失、骨折、截骨、與牙周炎相關的骨損失、或假體向內生長。
以引用的方式明確併入本文的美國專利號6,586,468教導前列腺素EP4激動劑可用於預防和/或治療自體免疫病症，諸如肌萎縮性側索硬化、多發性硬化症、舍格倫氏症候群(Sjoegren′s syndrome)、關節炎、類風溼性關節炎、全身性紅斑狼瘡、移植後移植物排斥、哮喘、骨形成異常、神經細胞死亡、肺病、肝病、急性肝炎、腎炎、腎機能不全、高血壓、心肌缺血、全身性炎症症候群、由燒傷誘發的疼痛、敗血症、噬血細胞症候群、巨噬細胞活化症候群、斯蒂爾氏病(Still′s disease)、川崎病(Kawasaki disease)、灼傷、全身性肉芽腫、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病(Crohn′s disease)、透析時高細胞因子血症以及多器官衰竭和休克。
炎症性腸病構成一組特徵在於大腸和小腸炎症的疾病，並且顯現諸如腹瀉、疼痛和體重減輕的症狀。Kabashima和同事教導「EP4起保持黏膜完整性，抑制先天免疫性，並且下調CD4+T細胞增殖和活化的作用。這些研究結果不僅闡明NSAID對IBD的機理，而且也指示EP4選擇性激動劑在預防和治療IBD方面的治療潛力。」(Kabashima等，The Journal of Clinical Investigation，2002年4月，第9卷，883-893)。
EP4受體介導各種其它疾病，諸如食道潰瘍、酒精性胃病、十二指腸潰瘍、非類固醇消炎藥物誘發的胃腸病和腸缺血。需要用於治療或預防此類疾病的新方法。
概述
本發明部分地涉及EP4激動劑和拮抗劑以及它們治療多種與EP4受體的活性相關的病理性疾患的用途。
在本發明的一個實施方案中，提供具有以下結構的化合物：
或其藥學上可接受的鹽或非對映異構體或對映異構體，其中：
n＝0、1、2、3或4
m＝0或1
X是環烷環或環烯環上零個(意味著完全不存在)或一個或兩個取代基，所述取代基選自由以下組成的組：H、低級烷基(例如C1-C6)、羥基烷基、芳基、滷素、環烯、CF3、C(O)R、COCF3、SO2N(R)2、SO2NH2、NO2和CN；
A選自由以下組成的組：CH＝CH、CH2CH2、C(O)NH、C(O)NCH3、NHC(O)、CH2O、CH2N(H)、CH2S、OCH2、N(H)CH2和SCH2；
B選自由以下組成的組：亞芳基和亞雜芳基、CH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、OCH2、OCH2CH2和CH2OCH2；
E選自由以下組成的組：CO2R2、CH2OR2、CONR2R3或四唑-5-基；
Ar選自由以下組成的組：未取代或單取代、二取代或三取代的芳基和雜芳基，所述取代基選自由以下組成的組：低級烷基、羥基烷基、芳基、滷素、OR3、CF3、C(O)R、COCF3、SO2N(R)2、SO2NH2、NO2和CN；
R是C1-C6烷基；
R2選自由以下組成的組：H、羥基烷基、C1-C6烷基、苯基或聯苯基；
R3選自由以下組成的組：H、C(O)R5、SO2R5、C1-C6烷基；並且
R5是C1-C6烷基、包括三氟甲基的滷代烷基、芳基或雜芳基。
本發明的另一實施方案包括具有以下結構的化合物：
或其藥學上可接受的鹽或非對映異構體或對映異構體，其中：
n＝0、1、2、3或4；
m＝0或1；
A選自由以下組成的組：CH＝CH、CH2CH2、C(O)NH、C(O)NCH3NHC(O)、CH2O、CH2N(H)、CH2S、OCH2、N(H)CH2和SCH2；
B選自由以下組成的組：亞芳基、亞雜芳基、CH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、OCH2、OCH2CH2和CH2OCH2；
E選自由以下組成的組：CO2R2、CH2OR2、CONR2R3或四唑-5-基；
Ar選自由以下組成的組：未取代或單取代、二取代或三取代的芳基和雜芳基，所述取代基選自由以下組成的組：低級烷基、羥基烷基、芳基、滷素、OR3、CF3、C(O)R、COCF3、SO2N(R)2、SO2NH2、NO2和CN；
R是C1-C6烷基；
R2選自由以下組成的組：H、羥基烷基、C1-C6烷基、苯基或聯苯基；並且
R3選自由以下組成的組：H、C(O)R5、SO2R5、C1-C6烷基。
本發明的另一實施方案包括具有以下結構的化合物：
或其藥學上可接受的鹽或非對映異構體或對映異構體，其中：
虛線是單鍵或雙鍵；
Y是H或CH3；
X是環烷環或環烯環上零個(意味著完全不存在)、一個或兩個取代基，所述取代基選自由以下組成的組：H、C1-C6烷基、羥基烷基、芳基、滷素、環烯、OR、CF3、C(O)R、COCF3、SO2N(R)2、SO2NH2、NO2和CN；
n選自由以下組成的組：0、1、2、3或4；
R是C1-C6烷基；
R2選自由以下組成的組：H、羥基烷基、C1-C6烷基、苯基或聯苯基；
R3選自由以下組成的組：H、C(O)R5、SO2R5、C1-C6烷基；
R5是C1-C6烷基、包括三氟甲基的滷代烷基、芳基或雜芳基；
R6是CO2H、CH3、CO2R2、CH2OR2、CONR2R3或四唑-5-基；
R7選自由以下組成的組：H、CF3、OCH3；並且
R8選自由以下組成的組：H和OCH3。
本發明的另一實施方案包括具有以下結構的化合物：
或其藥學上可接受的鹽或非對映異構體或對映異構體，其中：
虛線是單鍵或雙鍵；
Y是H或CH3；
n選自由以下組成的組：0、1、2、3或4；
R2選自由以下組成的組：H、C1-C6烷基、羥基烷基、苯基或聯苯基；
R3選自由以下組成的組：H、C(O)R5、SO2R5、C1-C6烷基；
R5是C1-C6烷基、包括三氟甲基的滷代烷基、芳基或雜芳基；
R6是CO2H、CH3、CO2R2、CH2OR2、CONR2R3或四唑-5-基；
R7選自由以下組成的組：H、CF3、OCH3；並且
R8選自由以下組成的組：H和OCH3。
本發明的一些化合物是非對映異構體，然而具有非常不同的活性，參見表1中的實施例9和10和12和13。
本發明的一些示例性實施方案包括在以下實施方案中：
實施方案1：一種選自包含以下結構的組的化合物：
或其藥學上可接受的鹽或非對映異構體或對映異構體，其中：
n是0、1、2、3或4；
m是0或1；
虛線表示單鍵或雙鍵；
X是環烷環或環烯環上零個、一個或兩個取代基，所述取代基選自由以下組成的組：H、低級烷基、羥基烷基、芳基、滷素、環烯、OR、CF3、C(O)R、COCF3、SO2N(R)2、SO2NH2、NO2和CN；
A選自由以下組成的組：CH＝CH、CH2CH2、C(O)NH、C(O)NCH3、NHC(O)、CH2O、CH2N(H)、CH2S、OCH2、N(H)CH2和SCH2；
B選自由以下組成的組：亞芳基、亞雜芳基、CH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、OCH2、OCH2CH2和CH2OCH2；
E選自由以下組成的組：CO2R2、CH2OR2、CONR2R3或四唑-5-基；
Ar選自由以下組成的組：未取代或單取代、二取代或三取代的芳基和雜芳基，所述取代基選自由以下組成的組：低級烷基、羥基烷基、芳基、滷素、OR3、CF3、C(O)R、COCF3、SO2N(R)2、SO2NH2、NO2和CN；
R是C1-C6烷基；
R2選自由以下組成的組：H、C1-C6烷基、羥基烷基、苯基或聯苯基；
R3選自由以下組成的組：H、C(O)R5、SO2R5、C1-C6烷基；並且
R5是C1-C6烷基、包括三氟甲基的滷代烷基、芳基或雜芳基。
實施方案2：如實施方案1所述的化合物，其中A是C(O)NH，m是1，B是亞芳基，並且E選自由以下組成的組：CO2R2、CH2OR2、CONR2R3和四唑-5-基。
實施方案3：如實施方案2所述的化合物，其中B是亞芳基，並且E是CO2H，n是0，並且Ar是芳基。
實施方案4：如實施方案3所述的化合物，其中芳基是苯基，並且被OCH3二取代，並且n是0或1。
實施方案5：如實施方案3所述的化合物，其中n是0或1，並且Ar選自由以下組成的組：
實施方案6：如實施方案5所述的化合物，其中Ar是
實施方案7：如實施方案1所述的化合物，其中n是1，並且所述虛線表示雙鍵，並且Ar是
實施方案8：如實施方案1所述的化合物，其中n是1，並且所述虛線表示單鍵，並且Ar是
實施方案9：如實施方案1所述的化合物，其中n是2，並且所述虛線表示雙鍵，並且Ar是
實施方案10：如實施方案1所述的化合物，其中n是2，並且所述虛線表示單鍵，並且Ar是
實施方案11：如實施方案1所述的化合物，其包含以下結構：
或其藥學上可接受的鹽或非對映異構體或對映異構體，其中：
所述虛線是單鍵或雙鍵；
Y是H或CH3；
X是所述環烷環或環烯環上零個(意味著不存在)、一個或兩個取代基，所述取代基選自由以下組成的組：H、C1-C6烷基、羥基烷基、芳基、滷素、環烯、OR、CF3、C(O)R、COCF3、SO2N(R)2、SO2NH2、NO2和CN；
n選自由以下組成的組：0、1、2、3或4；
R是C1-C6烷基；
R2選自由以下組成的組：H、C1-C6烷基、羥基烷基、苯基或聯苯基；
R3選自由以下組成的組：H、C(O)R5、SO2R5、C1-C6烷基；
R5是C1-C6烷基、包括三氟甲基的滷代烷基、芳基或雜芳基；
R6是CO2H、CH3、CO2R2、CH2OR2、CONR2R3或四唑-5-基；
R7選自由以下組成的組：H、CF3、OCH3；並且
R8選自由以下組成的組：H和OCH3。
實施方案12：如實施方案11所述的化合物，其中R6是CO2H，並且n選自由以下組成的組：0、1和2。
實施方案13：如實施方案11所述的化合物，其中n選自由以下組成的組：0、1和2，並且所述虛線表示雙鍵。
實施方案14：如實施方案13所述的化合物，其中R7和R8是OCH3。
實施方案15：如實施方案13所述的化合物，其中R7是CF3，並且R8是H。
實施方案16：如實施方案11所述的化合物，其中n選自由以下組成的組：1和2。
實施方案17：如實施方案11所述的化合物，其中所述虛線表示單鍵。
實施方案18：如實施方案11所述的化合物，其中n選自由以下組成的組：3和4。
實施方案19：如實施方案11所述的化合物，其中R7和R8是OCH3。
實施方案20：如實施方案1所述的化合物，其選自由以下組成的組：
及其藥學上可接受的鹽、非對映異構體和對映異構體。
實施方案21：如實施方案1所述的化合物，其包含以下結構：
或其藥學上可接受的鹽或非對映異構體或對映異構體，其中：
所述虛線表示單鍵或雙鍵；
Y是H或CH3；
R6是CO2H；
n是0、1、2、3或4；
R7選自由以下組成的組：H、OCH3和CF3；
R8選自由以下組成的組：H和OCH3。
實施方案22：如實施方案11和21所述的化合物，其中n是1、2或3，R6是CO2H，Y是H，並且所述虛線表示單鍵。
實施方案23：如實施方案11和22所述的化合物，其中R7和R8是OCH3。
實施方案24：如實施方案11和22所述的化合物，其中R7是CF3，並且R8是H。
實施方案25：如實施方案11和21所述的化合物，其中n是1，R6是CO2H，Y是H，並且所述虛線表示雙鍵。
實施方案26：如實施方案11和25所述的化合物，其中R7和R8是OCH3。
實施方案27：如實施方案11和22所述的化合物，其中Y是H，R7是CF3，並且R8是H。
實施方案28：如實施方案21所述的化合物，其中Y是CH3，R6是CO2H，R7是CF3，並且R8是H。
實施方案29：如實施方案11和21所述的化合物，其中n是4，Y是H，所述虛線表示雙鍵，並且R7和R8是OCH3。
實施方案30：如實施方案1、11、20和21所述的化合物的用途，其用於治療低骨質量，特別是骨質疏鬆、虛弱、骨質疏鬆性骨折、骨缺損、兒童期特發性骨損失、牙槽骨損失、下頜骨損失、骨折、截骨、與牙周炎相關的骨損失、或假體向內生長，誘導骨形成，防止炎症性腸病，促進朗格漢斯細胞遷移和成熟，並且介導關節炎症。
實施方案31：如實施方案1、11、20和21所述的化合物的用途，其用於預防和/或治療自體免疫病症，諸如肌萎縮性側索硬化、多發性硬化症、炎症性腸病、舍格倫氏症候群、關節炎、類風溼性關節炎、全身性紅斑狼瘡、移植後移植物排斥、哮喘、骨形成異常、神經細胞死亡、肺病、肝病、急性肝炎、腎炎、腎機能不全、高血壓、心肌缺血、全身性炎症症候群、由燒傷誘發的疼痛、敗血症、噬血細胞症候群、巨噬細胞活化症候群、斯蒂爾氏病、川崎病、灼傷、全身性肉芽腫、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病、透析時高細胞因子血症以及多器官衰竭和休克、食道潰瘍、酒精性胃病、十二指腸潰瘍、非類固醇消炎藥物誘發的胃腸病和腸缺血。
實施方案32：如實施方案1、11、20和21所述的化合物的用途，其用於抑制先天免疫，並且下調CD4+T細胞增殖和活化，並且下調T細胞或B細胞應答。
實施方案33：如實施方案1、11、20和21所述的化合物的用途，其用於治療急性肝炎、哮喘、支氣管炎、灼傷、慢性阻塞性呼吸道疾病、克羅恩氏病、消化性潰瘍、青光眼(和與眼內壓升高相關的其它疾病)、噬血細胞症候群(hemophagous syndrome)、肝病、透析時高細胞因子血症、高血壓、免疫疾病(自體免疫疾病、器官移植等)、炎症(諸如類風溼性關節炎)、川崎病、肝損傷、巨噬細胞活化症候群、心肌缺血、腎炎、神經細胞死亡、骨質疏鬆和與骨病症相關的疾病、早產、肺氣腫、肺纖維化、肺損傷、腎衰竭、敗血症、性功能障礙、休克、睡眠障礙、斯蒂爾病、口腔炎、全身性肉芽腫、全身性炎症症候群、血栓形成和中風以及潰瘍性結腸炎。
實施方案34：如實施方案1、11、20和21所述的化合物，其適用作EP4激動劑和/或拮抗劑。
實施方案35：如實施方案1、11、20和21所述的化合物，其用於治療與EP4受體的活性相關的病理性疾患。
實施方案36：一種治療皮膚瑕疵的方法，其包括向有需要的受試者施用治療有效量的選自實施方案1、11、20和21的化合物。
實施方案37：如實施方案36所述的方法，其中所述皮膚瑕疵是皮肉傷、疤痕或皺紋。
實施方案38：如實施方案37所述的方法，其中所述皮膚瑕疵是疤痕。
實施方案39：如實施方案36所述的方法，其中所述施用使疤痕形成最小化。
實施方案40：如實施方案36所述的方法，其中所述施用防止疤痕形成。
實施方案41：如實施方案38所述的方法，其中所述施用降低選自由以下組成的組的疤痕類型的形成：肥厚性疤痕、凹狀疤痕、妊娠紋及其組合。
實施方案42：如實施方案37所述的方法，其中所述皮膚瑕疵是皮肉傷。
實施方案43：如實施方案42所述的方法，其中所述皮肉傷的原因選自由以下組成的組：切口、撕裂、熱灼傷、化學灼傷、擦傷、穿刺傷和/或其組合。
實施方案44：如實施方案1、11、20和21所述的化合物的用途，其用於製造用以預防和/或治療以下疾病的藥劑：自體免疫病症，諸如肌萎縮性側索硬化、多發性硬化症、炎症性腸病、舍格倫氏症候群、關節炎、類風溼性關節炎、全身性紅斑狼瘡、移植後移植物排斥、哮喘、骨形成異常、神經細胞死亡、肺病、肝病、急性肝炎、腎炎、腎機能不全、高血壓、心肌缺血、全身性炎症症候群、由燒傷誘發的疼痛、敗血症、噬血細胞症候群、巨噬細胞活化症候群、斯蒂爾氏病、川崎病、灼傷、全身性肉芽腫、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病、透析時高細胞因子血症以及多器官衰竭和休克、食道潰瘍、酒精性胃病、十二指腸潰瘍、非類固醇消炎藥物誘發的胃腸病和腸缺血。
實施方案45：如實施方案1、11、20和21所述的化合物的用途，其用於製造用以抑制先天免疫，並且下調CD4+T細胞增殖和活化，並且下調T細胞或B細胞應答的藥劑。
實施方案46：如實施方案1、11、20和21所述的化合物的用途，其用於製造用以治療以下疾病的藥劑：急性肝炎、哮喘、支氣管炎、灼傷、慢性阻塞性呼吸道疾病、克羅恩氏病、消化性潰瘍、青光眼(和與眼內壓升高相關的其它疾病)、噬血細胞症候群、肝病、透析時高細胞因子血症、高血壓、免疫疾病(自體免疫疾病、器官移植等)、炎症(諸如類風溼性關節炎)、川崎病、肝損傷、巨噬細胞活化症候群、心肌缺血、腎炎、神經細胞死亡、骨質疏鬆和與骨病症相關的疾病、早產、肺氣腫、肺纖維化、肺損傷、腎衰竭、敗血症、性功能障礙、休克、睡眠障礙、斯蒂爾病、口腔炎、全身性肉芽腫、全身性炎症症候群、血栓形成和中風以及潰瘍性結腸炎。
實施方案47：一種藥物組合物，其包含如實施方案1所述的化合物和藥學上可接受的組分。
實施方案48：一種治療青光眼的方法，所述方法包括向有需要的個體施用有效量的如實施方案1所述的化合物。
詳細描述
應了解上文一般性描述與下文詳細描述兩者均僅為示例性和說明性的，並且不限制所要求保護的本發明。除非另外明確陳述，否則如本文所用，單數的使用包括複數。除非另外陳述，否則如本文所用，「或」意指「和/或」。此外，術語「包括(including)」以及其它形式(諸如「包括(includes)」和「包括(included)」)的使用不是限制性的。
如本文所用，「烷烴」是指僅由氫和碳組成的完全飽和且僅含有單鍵的化合物。
如本文所用，「烷基」是指具有1至約100個碳原子的直鏈或支鏈烴基。無論何時它出現在本文，諸如「1至100」或「C1-C100」的數值範圍都是指給定範圍內的各整數；例如「C1-C100烷基」意指烷基可包含僅1個碳原子、2個碳原子、3個碳原子等，直至包括100個碳原子，但術語「烷基」也包括其中不指定碳原子的數值範圍的情況。舉例來說，術語「烷基」可指在C1-C100之間的子範圍(例如C1-C6)。「取代的烷基」是指攜帶取代基的烷基部分，所述取代基包括烷基、烯基、炔基、羥基、氧代基、烷氧基、巰基、環烷基、取代的環烷基、雜環、取代的雜環、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、芳基氧基、取代的芳基氧基、滷素、滷代烷基、氰基、硝基、硝酮、氨基、低級烷基氨基、低級烷基二氨基、醯胺基、疊氮基、-C(O)H、-C(O)R9、-CH2OR9、-C(O)-、-S-、-S(O)2、-OC(O)-O-，其中R9是H或低級烷基；醯基、氧基醯基、羧基、氨基甲酸酯基、磺醯基(sulfonyl)、磺醯胺、磺醯基(sulfuryl)等。如本文所用，「低級烷基」是指具有1至約6個碳原子的烷基部分。
如本文所用，「烯基」是指具有至少一個碳-碳雙鍵，並且具有在約2個直至約100個的範圍內的碳原子的直鏈或支鏈烴基，並且「取代的烯基」是指進一步攜帶一個或多個如上闡述的取代基的烯基。如本文所用，「低級烯基」是指具有2至約6個碳原子的烯基部分。
如本文所用，「炔基」是指具有至少一個碳-碳三鍵，並且具有在約2個直至約100個的範圍內的碳原子的直鏈或支鏈烴基，並且「取代的炔基」是指進一步攜帶一個或多個如上闡述的取代基的炔基。如本文所用，「低級炔基」是指具有2至約6個碳原子的炔基部分。
如本文所用，「環烷基」是指通常含有在約3個直至約8個的範圍內的碳原子的環狀(即含有環)烷基部分，並且「取代的環烷基」是指進一步攜帶一個或多個如上闡述的取代基的環烷基。
如本文所用，「芳基」是指具有在5個直至14個(例如苯基)的範圍內的碳原子的芳族基團，並且「取代的芳基」是指進一步攜帶一個或多個如上闡述的取代基的芳基。
如本文所用，「亞芳基」和「亞雜芳基」是指連接分子的兩個其它部分的芳基環或環系統或雜芳基環或環系統，即兩個部分在兩個不同的環位置鍵合於環或環系統。亞芳基和亞雜芳基可為取代或未取代的。未取代的亞芳基和亞雜芳基不具有除由它所連接的分子的兩個部分以外的取代基。取代的亞芳基和亞雜芳基具有除由它所連接的分子的兩個部分以外的取代基。
化合物的「有效量」是足以促進對疾病的一種或多種症狀的治療、預防(例如預防)或減輕的量。當關於疾病治療敘述時，「有效量」也可被稱為「治療有效量」。「減輕」一種或多種症狀(以及這個短語的語法等效形式)意指降低所述症狀的嚴重性或頻繁性，或消除所述症狀。藥物的「預防有效量」是藥物的在向受試者施用時將具有預期的預防作用，例如預防或延遲疾病、病症或疾患發作(或復發)，或降低疾病、病症或疾患或其症狀發作(或復發)的可能性的量。完全預防作用未必會通過施用一次劑量發生，而是可能只有在施用一系列劑量之後發生。因此，可以一次或多次施用來施用預防有效量。
如本文所用，「雜芳基」是指含有一個或多個雜原子(例如N、O、S等)作為環結構的一部分，並且在環結構中具有在5個直至14個的範圍內的總原子(即碳原子和雜原子)的芳族部分。「取代的雜芳基」是指進一步攜帶一個或多個如上闡述的取代基的雜芳基。
如本文所用，「雜環」是指非芳族環狀(即含有環)基團，其含有一個或多個雜原子(例如N、O、S等)作為環結構的一部分，並且具有在3個直至14個的範圍內的碳原子，並且「取代的雜環」是指進一步攜帶一個或多個如上闡述的取代基的雜環基團。
如本文所用，「滷素」或「滷化物」是指氟化物、氯化物、溴化物或碘化物。「氟化物、氯化物、溴化物或碘化物」也可被稱為「氟代」、「氯代」、「溴代」或「碘代」。
本領域技術人員將顯而易知的是本發明的一些化合物可含有一個或多個不對稱中心，以致化合物可以對映異構形式以及以非對映異構形式存在。除非另外明確指示，否則本發明的範圍包括所有對映異構體、非對映異構體和外消旋混合物。本發明的一些化合物可與藥學上可接受的酸或鹼形成鹽，並且本文所述的化合物的所述藥學上可接受的鹽也在本發明的範圍內。
如本文所用，「非對映異構體」是其中不對稱中心不同，但其不是對映異構體的立體異構體。
特定來說，技術人員將認識到即使分子的特定立體異構體(例如對映異構體或非對映異構體)的絕對立體化學未知，也可通過使用其它技術(例如偏振測定法、核磁共振波譜法、色譜法和可為技術人員所確認的其它技術)來區分那個特定立體異構體與其它立體異構體。
特定來說，當各立體異構體的絕對立體化學未知時，一種區分立體異構體的示例性方法是色譜法，諸如高壓液相色譜法(HPLC)或薄層色譜法(TLC)。特定來說，兩種或更多種立體異構體(諸如非對映異構體)可根據它們的保留時間和Rf值來分離和表徵，所述保留時間和Rf值將被預期可通過使用相同色譜條件(例如流速、柱材料、TLC固定相、溶劑系統/梯度概況和可為技術人員所確認的其它色譜條件)來重現。特定來說，技術人員將認識到即使當一種或多種立體異構體的精確相對保留時間和/或Rf值未重現(例如由於色譜參數和/或色譜設備的略微變化)時，具有較短保留時間的立體異構體可被稱為「較快洗脫」，而具有拖延保留時間的立體異構體可被稱為「較慢洗脫」，並且類似地，具有較小Rf值的立體異構體可被稱為具有「低Rf」，而具有較大Rf值的立體異構體可被稱為具有「高Rf」。
技術人員將認識到一旦兩種或更多種立體異構體通過諸如色譜法(例如HPLC和/或TLC)的技術來區分，立體異構體的絕對立體化學即可通過可為技術人員所確認的技術或技術組合(例如x射線晶體學、振動圓二色性、核磁共振、全合成和可為技術人員所確認的其它技術)來確定。
「藥學上可接受的鹽」是保留母體化合物的活性，並且對它所施用的受試者，以及在它相較於母體化合物被施用所處的情形下不賦予任何額外有害或不利作用的任何鹽。藥學上可接受的鹽也指由於施用酸、另一鹽或轉化成酸或鹽的前藥而可在體內形成的任何鹽。
酸性官能團的藥學上可接受的鹽可由有機或無機鹼獲得。鹽可包含單價或多價離子。受到特別關注的是無機離子，鋰、鈉、鉀、鈣和鎂。有機鹽可用胺，特別是銨鹽，諸如單烷基胺、二烷基胺和三烷基胺或乙醇胺製備。鹽也可用咖啡因(caffeine)、緩血酸胺(tromethamine)和類似分子形成。鹽酸或某一其它藥學上可接受的酸可與包括諸如胺或吡啶環的鹼性基團的化合物形成鹽。術語「藥學上可接受的鹽」也意圖包括活性化合物的鹽，所述活性化合物取決於本文所述的化合物上發現的具體取代基部分用相對無毒的酸或鹼製備。當本發明化合物含有相對酸性官能團時，可通過純淨地或在合適的惰性溶劑中使所述化合物的中性形式與足量的期望鹼接觸來獲得鹼加成鹽。藥學上可接受的鹼加成鹽的實例包括鈉、鉀、鈣、銨、有機氨基或鎂鹽或類似鹽。當本發明化合物含有相對鹼性官能團時，可通過純淨地或在合適的惰性溶劑中使所述化合物的中性形式與足量的期望酸接觸來獲得酸加成鹽。藥學上可接受的酸加成鹽的實例包括由無機酸，如鹽酸、氫溴酸、硝酸、碳酸、一氫碳酸、磷酸、一氫磷酸、二氫磷酸、硫酸、一氫硫酸、氫碘酸或亞磷酸等獲得的那些，以及由相對無毒有機酸，如乙酸、丙酸、異丁酸、順丁烯二酸、丙二酸、苯甲酸、丁二酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、杏仁酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸、對甲苯基磺酸、檸檬酸、酒石酸、甲烷磺酸等獲得的鹽。也包括諸如精氨酸等的胺基酸的鹽以及如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等的有機酸的鹽(參見例如Berge等，″Pharmaceutical Salts″，Journal of Pharmaceutical Science，1977，66：1-19)，所述文獻以引用的方式併入。)本發明的某些特定化合物可含有允許化合物轉化成鹼加成鹽或酸加成鹽的鹼性官能團與酸性官能團兩者。
「前藥」是在施用之後轉化成治療活性化合物的化合物，並且所述術語應在本文中如同本領域中通常所理解的那般廣泛加以解釋。在不意圖限制本發明的範圍下，可通過水解酯基團或某一其它生物不穩定基團來發生轉化，或意指例如通過在向受試者(例如哺乳動物受試者)施用前藥時能夠釋放活性成分的共價鍵合載體來轉化或代謝成活性化合物的化合物。通常而非必定，前藥是非活性的，或活性小於它所轉化成的治療活性化合物。
術語「治療(treating/treatment)」是指在治療或改善損傷、病變或疾患方面的任何成功跡象，包括任何客觀或主觀參數，諸如減輕；緩解；減弱症狀或使得損傷、病變或疾患更可為患者耐受；減緩退化或衰退速率；使得退化終點的致虛弱性較小；改善患者的身體或精神健康。對症狀的治療或改善可基於客觀或主觀參數；包括身體檢查的結果。
本發明也提供用於創傷癒合和減輕疤痕的化合物和方法。本發明的化合物和方法包括至少一種EP4激動劑或拮抗劑。可通過本發明的化合物和方法來治療的創傷和或疤痕可由諸如手術、外傷、疾病、機械損傷、灼傷、輻射、中毒等的事件引起。如本文所用，術語「皮膚瑕疵」包括任何身體皮膚區域上的皮肉傷、疤痕或皺紋。
「皮肉傷」可為其中皮膚外表面的結構完整性受損害的任何區域。皮肉傷可歸因於切口、撕裂、擦傷、熱灼傷、化學灼傷、輻射或皮膚穿刺。創傷可為淺表性的，或延伸至更深層真皮、皮下、深筋膜、肌肉、骨或其它內臟器官。
「疤痕」是在損傷或疾病之後替換正常皮膚(或其它組織)的纖維組織(纖維化)的區域。疤痕類型包括肥厚性疤痕、凹狀疤痕和妊娠紋。當身體過度產生膠原蛋白(其導致疤痕升高超過周圍皮膚)時，出現肥厚性疤痕。肥厚性疤痕的一個實例是疤痕疙瘩。當皮膚中的下伏支撐結構喪失時，萎縮性或凹狀疤痕具有凹陷外觀和結果。當皮膚被快速拉伸(即由於顯著體重增加或生長突增)時，或當在癒合過程期間皮膚處於拉力下(通常接近關節)時，出現妊娠紋(條紋)。如本文所用，術語「疤痕」涵蓋皮膚中歸因於任何原因的任何類型的疤痕，如將為技術人員在閱讀本公開後所了解。
如本文所用，術語「皺紋」是皮膚中可由慣常面部表情、歸因於衰老的膠原蛋白和/或彈性喪失、日光損害、吸菸、含水量不足和各種其它因素引起的褶皺、凸紋、皺痕、凹痕、陷坑、凹坑或凹陷區域。皺紋可在深皺痕至細線的範圍內。本文涵蓋出現在任何身體部位上的皺紋，特別是在受試者的頭部或頸部上的皺紋。可根據本公開治療的皺紋包括但不限於額頭凹痕、魚尾紋、鼻唇溝、眼睛以下或眉毛之間的一個或多個線條及其組合。
當施用化合物以治療創傷時，相較於不進行施用的創傷，化合物促進正常癒合。也就是說，治療的創傷的尺寸(長度、深度、高度和/或寬度)、性狀、顏色和/或結構更接近地類似於正常非受傷組織。就此而言，用公開的化合物治療創傷可防止由創傷癒合所致的疤痕形成，使其最小化或改進其外觀。此外，當施用公開的化合物以治療皺紋時，如果所述皺紋的外觀或突出度得以明顯或臨床減弱，那麼所述皺紋得以治療。也就是說，相較於在治療之前的皺紋，長度和/或深度被降低。或者，治療可包括防止皺紋。就此而言，可向通常顯現皺紋的皮膚區域(諸如前額、唇、眼瞼、鼻唇溝、眼睛以下或眉毛之間的皮膚)施加公開的化合物以防止皺紋顯現。
可施用本發明化合物以防止不與創傷相關的疤痕形成，諸如妊娠紋或由粉刺、水痘、麻疹或其它疾疾患態所致的疤痕。在某些實施方案中，向皮膚擴張區域施用公開的化合物以防止形成所述疤痕。在這些實施方案中，可向面部、腹部、胸部、手臂、腿部、臀部、背部的任何區域或皮膚易顯現疤痕的任何其它區域施用化合物。
可在皮膚瑕疵顯現之前、同時和/或之後施用化合物。舉例來說，可在切口之前，在手術程序期間，和/或手術後任何時間施用公開的化合物，接著在程序之後當癒合過程發生時進行另外施用。在另一實施例中，可在妊娠期間施用化合物以防止妊娠紋。或者，可在瑕疵顯現之後施用化合物。
實施例
以下實施例僅意圖說明本發明，並且決不應解釋為限制本發明。
合成程序
以下闡述的方案1概述實施例1和2中所述的本發明化合物的合成途徑：
方案1
以下闡述的方案2概述實施例3-6以及8-35中所述的化合物的合成途徑：
方案2
以下方案(方案3)闡述實施例7中所述的本發明化合物的合成途徑：
方案3
以下闡述的方案4概述實施例36-39中所述的化合物的合成途徑：
方案4
實施例1
4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)：
步驟1. 2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊-1-烯甲酸乙酯
添加乙酸鈀(3.3mg，0.015mmol)和SPhos(11.8mg，0.029mmol)至2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環戊-1-烯甲酸乙酯(Combiblocks，Inc.，411mg，1.43mmol)於THF(1.43mL)中的溶液。反應混合物用氮氣吹掃，並且逐滴添加3，5-二甲氧基苯甲基氯化鋅的溶液(Aldrich，3.4mL 0.5M THF溶液，1.7mmol)。在室溫下攪拌過夜之後，反應混合物用飽和NH4Cl水溶液(25mL)猝滅並用EtOAc(3x75mL)萃取。將合併的萃取物乾燥(Na2SO4)，過濾並濃縮。在Teledyne-Isco Combiflash機器(40g金柱，己烷→50％EtOAc/己烷，梯度)上純化所得粗製殘餘物以得到353mg(85％)2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊-1-烯甲酸乙酯。
步驟2. 2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲酸乙酯
添加鈀/炭(10wt％，5mg)至2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊-1-烯甲酸乙酯(100mg，0.34mmol)於甲醇(3.4mL)中的溶液。通過抽空以及用氫氣再填充(3x)來建立氫氣氣氛。將反應混合物放置在40℃浴中，並且在氫氣囊下攪拌過夜。接著冷卻混合物並經硅藻土過濾，用過量甲醇洗滌。在真空中濃縮濾液以得到100mg(定量)2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲酸乙酯。
步驟3. 2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲酸
在閃爍小瓶中添加氫氧化鋰水溶液(1.7mL 1.0M溶液，1.7mmol)至2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲酸乙酯(100mg，0.34mmoL)於THF(3.4mL)中的溶液。在60℃下加熱小瓶3天，接著冷卻至室溫。在氮氣流下去除有機溶劑，接著殘餘物用水(5mL)稀釋，用1N HCl(2mL)酸化並用EtOAc(3x20mL)萃取。將萃取物乾燥(Na2SO4)，過濾並濃縮以得到98mg(定量)2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲酸。
步驟4. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
依序添加三乙胺(28μL，0.20mmol)、DMAP(56mg，0.45mmol)、4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(41mg，0.20mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N』-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(50mg，0.26mmol)至2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲酸(52mg，0.20mmol)於CH2Cl2(2.0mL)中的溶液。使非均質混合物在室溫下攪拌過夜，在所述時間期間，反應物變為均質。反應溶液用飽和NH4Cl水溶液(10mL)處理並用EtOAc(3x20mL)萃取。將合併的萃取物乾燥(Na2SO4)，過濾並濃縮。在Teledyne-Isco Combiflash機器(4g金柱，己烷→EtOAc，梯度)上純化所得粗製殘餘物以得到13mg(16％)4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體)和3.6mg(4％)4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體)。
步驟5. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
在1打蘭(dram)小瓶中添加氫氧化鋰水溶液(0.15mL1.0M溶液，0.15mmol)至4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體，13mg，0.032mmol)於THF(0.3mL)中的溶液。將小瓶在50℃下加熱過夜，接著冷卻至室溫。在氮氣流下去除有機溶劑，接著殘餘物用水(0.5mL)稀釋，用1N HCl(0.5mL)酸化並用EtOAc(3x2mL)萃取。將萃取物乾燥(Na2SO4)，過濾並濃縮以得到11mg(88％)標題化合物。
實施例2
4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自低Rf酯非對映異構體，參見實施例1)：
根據實施例1，步驟5的程序，使4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體，3.6mg，0.009mmol)轉化成3mg(86％)標題化合物。
實施例3
4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸：
步驟1. 2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊-1-烯甲酸
添加氫氧化鋰水溶液(4.1mL 1.0M溶液，4.1mmol)至2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊-1-烯甲酸乙酯(68.7mg，0.237mmol)於THF(4.1mL)中的溶液。在60℃下加熱小瓶24小時，之後TLC分析顯示幾乎沒有發生(如果有的話)反應。添加第二份氫氧化鋰(351mg，8.20mmol)，並且在60℃下再攪拌混合物18小時。接著冷卻混合物至室溫，用1N HCl酸化並用CH2Cl2(3x)萃取。將萃取物乾燥(MgSO4)，過濾並濃縮。在Teledyne-Isco Combiflash機器(4g金柱，5％EtOAc/己烷→60％EtOAc/己烷，梯度)上純化所得粗製殘餘物以得到22.5mg(36％)2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊-1-烯甲酸。
步驟2. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
添加TBTU(六氟硼酸O-苯並三唑-1-基-N，N，N』，N』-四甲基脲鎓)(28.0mg，0.0863mmol)、4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(18.1mg，0.0870mmol)和二異丙基乙胺(45μL，0.26mmol)至2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊-1-烯甲酸(22.5mg，0.858mmol)於DMF(0.43mmol)中的溶液。在40℃下攪拌18小時之後，反應混合物用EtOAc稀釋，並且用1N HCl(2x)、1N NaOH(2x)和鹽水洗滌。將有機相干燥(MgSO4)，過濾並在真空中濃縮以得到35mg(99％)呈白色固體的4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟3. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
添加水(363μL)和氫氧化鋰水溶液(0.56mL 1.0M溶液，0.56mL)至4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(11.0mg，0.0269mmol)於THF(0.75mL)中的溶液。在30℃下攪拌18小時之後，冷卻混合物，用1N HCl酸化並用CH2Cl2(3x)萃取。將合併的萃取物乾燥(MgSO4)，過濾並濃縮。在Teledyne-Isco Combiflash機器(4g金柱，30％EtOAc/己烷→60％EtOAc/己烷(兩種溶劑均含有0.5％AcOH)，梯度)上純化所得粗製殘餘物以得到5.9mg(55％)標題化合物。
實施例4
4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸：
步驟1. 2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲酸乙酯
添加乙酸鈀(3.1mg，0.014mmol)和SPhos(10.9mg，0.0258mmol)至2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環戊-1-烯甲酸乙酯(Combiblocks，Inc.，380mg，1.25mmol)於THF(1.3mL)中的溶液。反應混合物用氮氣吹掃10分鐘，並且逐滴添加3-三氟甲基苯甲基氯化鋅的溶液(Aldrich，3.1mL 0.5M THF溶液，1.6mmol)。在室溫下攪拌過夜之後，反應混合物用飽和NH4Cl水溶液猝滅並用EtOAc(3x)萃取。將合併的萃取物乾燥(MgSO4)，過濾並濃縮。在Teledyne-Isco Combiflash機器(40g金柱，己烷→15％EtOAc/己烷，梯度)上純化所得粗製殘餘物以得到342mg(92％)2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲酸乙酯。
步驟2. 2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲酸
添加氫氧化鋰水溶液(6.5mL 3.0M溶液，20mmol)至2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲酸乙酯(111mg，0.373mmol)於1，4-二噁烷(6.5mL)中的溶液。在70℃下加熱反應混合物18小時，接著冷卻至室溫。反應混合物用1N HCl酸化並用CH2Cl2(3x)萃取。將萃取物乾燥(MgSO4)，過濾並在真空中濃縮。在Teledyne-Isco Combiflash機器(12g金柱，5％EtOAc/己烷→40％EtOAc/己烷，梯度)上純化所得粗製殘餘物以得到83.1mg(83％)2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲酸。
步驟3. 4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例3，步驟2的程序，使2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲酸(81.7mg，0.302mmol)和4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(63.1mg，0.304mmol)轉化成126mg(定量)4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟4. 4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(10.4mg，0.0249mmol)轉化成6.8mg(68％)標題化合物。
實施例5
4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體，參見實施例4)：
步驟1. 4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
添加鈀/炭(10wt％，8.7mg)至4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(47.9mg，0.115mmol)於乙醇(1.7mL)中的溶液。通過抽空以及用氫氣再填充(3x)來建立氫氣氣氛。將反應混合物放置在40℃浴中，並且在氫氣囊下攪拌過夜。接著冷卻混合物並通過硅藻土過濾，用過量乙醇洗滌，並且在真空中濃縮濾液。在Teledyne-Isco Combiflash機器(4g金柱，20％EtOAc/己烷→50％EtOAc/己烷，梯度)上純化所得粗製殘餘物以得到30.5mg(63％)4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體)和13.8mg(29％)4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體)。
步驟2. 4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體，17.2mg，0.0410mmol)轉化成8.2mg(49％)標題化合物。
實施例6
4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自低Rf酯非對映異構體，參見實施例5)：
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體，5.9mg，0.014mmol)轉化成2.6mg(46％)標題化合物。
實施例7
4-((N-甲基-2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸：
步驟1. 4-((N-甲基-2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
添加二異丙基醯胺鋰的溶液(0.09mL2.0M THF/庚烷/乙苯溶液，0.2mmol)至4-((2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(參見實施例4，64.5mg，0.155mmol)於THF(1.0mL)中的-78℃溶液。在-78℃下20分鐘之後，添加碘代甲烷(0.10mL 2.0M叔丁基醚溶液，0.20mmol)。使混合物升溫至室溫並攪拌18小時。反應用飽和NH4Cl水溶液猝滅並用CH2Cl2(3x)萃取。將合併的萃取物乾燥(MgSO4)，過濾並濃縮。在Teledyne-Isco Combiflash機器(12g金柱，20％EtOAc/己烷→50％EtOAc/己烷，梯度)上純化所得粗製殘餘物以得到46.6mg(70％)4-((N-甲基-2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯，其以3∶2比率的醯胺旋轉異構體形式呈現。
步驟2. 4-((N-甲基-2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((N-甲基-2-(3-(三氟甲基)苯甲基)環戊-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(10.0mg，0.0232mmol)轉化成4.8mg(50％)標題化合物。
實施例8
4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸：
步驟1. 2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環己-1-烯甲酸乙酯
添加氫化鈉(60wt％於油中，228mg，5.70mmol)至2-氧代環己烷甲酸乙酯(888mg，4.96mmol)於THF(25mL)中的0℃溶液。在0℃下40分鐘之後，添加N-苯基-雙(三氟甲烷磺醯亞胺)(2.14g，5.93mmol)，並且使溶液升溫至室溫並攪拌過夜。反應混合物用飽和NaHCO3水溶液猝滅並用CH2Cl2(3x)萃取。將合併的萃取物乾燥(MgSO4)，過濾並濃縮。在Teledyne-Isco Combiflash機器(120g金柱，己烷→25％EtOAc/己烷，梯度)上純化所得粗製殘餘物以得到879mg(59％)2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環己-1-烯甲酸乙酯。
步驟2. 2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯
添加乙酸鈀(2.8mg，0.012mmol)和SPhos(10.1mg，0.0239mmol)至2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環己-1-烯甲酸乙酯(293mg，0.967mmol)於THF(1.0mL)中的溶液。反應混合物用氮氣吹掃10分鐘，並且逐滴添加3，5-二甲氧基苯甲基氯化鋅的溶液(Aldrich，2.3mL 0.5M THF溶液，1.2mmol)。在室溫下攪拌過夜之後，反應混合物用飽和NH4Cl水溶液猝滅並用EtOAc(3x)萃取。將合併的萃取物乾燥(MgSO4)，過濾並濃縮。在Teledyne-Isco Combiflash機器(24g金柱，己烷→25％EtOAc/己烷，梯度)上純化所得粗製殘餘物以得到194mg(66％)2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯。
步驟3. 2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸
根據實施例4，步驟2的程序，使2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯(189mg，0.619mmol)轉化成122mg(72％)2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸。
步驟4. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例3，步驟2的程序，使2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸(120mg，0.435mmol)和4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(90.6mg，0.436mmol)轉化成188mg(定量)4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟5. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(11.4mg，0.0269mmol)轉化成5.0mg(45％)標題化合物。
實施例9
4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)：
步驟1. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例5，步驟1的程序，使4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(42.9mg，0.101mmol)轉化成25.0 mg(58％)4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體)和14.0mg(33％)4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體)。
步驟2. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體，24.3mg，0.0571mmol)轉化成14.8mg(63％)標題化合物。
立體化學指定
在ROESY NMR實驗中檢查實施例9，步驟1中分離的兩種非對映異構體[4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體)和4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體)]以確定它們的相對立體化學。基於觀察到的增強，確定高Rf非對映異構體具有附接於環己烷核心的基團的順式排列，而低Rf非對映異構體具有附接於環己烷核心的基團的反式排列(參見以下圖1)。預期這個指定適用於本文所述的所有非對映異構體組，然而，技術人員可通過使用本領域中已知的常規技術(例如ROESY NMR)來確定相對和/或絕對立體化學。
實施例10
4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自低Rf酯非對映異構體，參見實施例9)：
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體，13.7mg，0.0322mmol)轉化成5.8mg(44％)標題化合物。
實施例11
4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸：
步驟1. 2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環庚-1-烯甲酸甲酯
根據實施例8，步驟1的程序，使2-氧代環庚烷甲酸甲酯(797mg，4.64mmol)在Teledyne-Isco Combiflash機器(80g金柱，己烷→25％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成621mg(44％)2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環庚-1-烯甲酸甲酯。
步驟2. 2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚-1-烯甲酸甲酯
根據實施例8，步驟2的程序，使2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環庚-1-烯甲酸甲酯(256mg，0.846mmol)轉化成167mg(65％)2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚-1-烯甲酸甲酯。
步驟3. 2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚-1-烯甲酸
根據實施例4，步驟2的程序，使2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚-1-烯甲酸甲酯(167mg，0.549mmol)轉化成137mg(86％)2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚-1-烯甲酸。
步驟4. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例3，步驟2的程序，使2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚-1-烯甲酸(124mg，0.427mmol)和4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(89.2mg，0.429mmol)轉化成189mg(定量)4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟5. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(8.6mg，0.020mmol)轉化成2.3mg(28％)標題化合物。
實施例12
4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體，參見實施例11)：
步驟1. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例5，步驟1的程序，使4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(41.6mg，0.0951mmol)轉化成25.0mg(62％)4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體)和9.6mg(23％)4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體)。
步驟2. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體，23.8mg，0.0541mmol)轉化成15.3mg(67％)標題化合物。
實施例13
4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自低Rf酯非對映異構體，參見實施例12)：
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環庚烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體，9.5mg，0.022mmol)轉化成3.3mg(36％)標題化合物。
實施例14
4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸：
步驟1. 2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯
根據實施例8，步驟2的程序，使2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環己-1-烯甲酸乙酯(193mg，0.64mmol)和2，3-二甲氧基苯甲基氯化鋅(Rieke Metals，1.5mL 0.5M THF溶液，0.75mmol)在Teledyne-IscoCombiflash機器(12g金柱，己烷→25％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成123mg(63％)2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯。
步驟2. 2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸
根據實施例4，步驟2的程序，使2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯(120mg，0.395mmol)轉化成66.6mg(61％)2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸。
步驟3. 4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例3，步驟2的程序，使2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸(64.8mg，0.234mmol)和4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(49mg，0.235mmol)轉化成103mg(定量)4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟4. 4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(12.0mg，0.0283mmol)轉化成5.4mg(47％)標題化合物。
實施例15
4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)：
步驟1. 4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例5，步驟1的程序，使4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(38.8mg，0.0916mmol)轉化成20.1mg(52％)4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體)和15.0mg(39％)4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體)。
步驟2. 4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體，20.1mg，0.0472mmol)轉化成11.2mg(58％)標題化合物。
實施例16
4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自低Rf酯非對映異構體，參見實施例14)：
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(2，3-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體，15.0mg，0.0353mmol)轉化成6.4mg(44％)標題化合物。
實施例17
4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸：
步驟1. 2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯
根據實施例8，步驟2的程序，使2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環己-1-烯甲酸乙酯(193mg，0.637mmol)和2，5-二甲氧基苯甲基氯化鋅(Rieke Metals，1.5mL0.5M THF溶液，0.75mmol)在Teledyne-IscoCombiflash機器(12g金柱，己烷→25％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成142mg(73％)2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯。
步驟2. 2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸
根據實施例4，步驟2的程序，使2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯(137mg，0.450mmol)轉化成73.5mg(59％)2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸。
步驟3. 4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例3，步驟2的程序，使2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸(71.9mg，0.260mmol)和4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(54.0mg，O.260mmol)轉化成110mg(定量)4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟4. 4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(10.3mg，0.0243mmol)轉化成5.8mg(58％)標題化合物。
實施例18
4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)：
步驟1. 4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例5，步驟1的程序，使4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(40.3mg，0.0952mmol)轉化成21.0mg(52％)4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體)和13.8mg(34％)4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體)。
步驟2. 4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體，20.0mg，0.0470mmol)轉化成6.7mg(35％)標題化合物。
實施例19
4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自低Rf酯非對映異構體，參見實施例18)：
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(2，5-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體，13.8mg，0.0324mmol)轉化成5.4mg(41％)標題化合物。
實施例20
4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環辛-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸：
步驟1. 2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環辛-1-烯甲酸乙酯
根據實施例8，步驟1的程序，使2-氧代環辛烷甲酸乙酯(Aldrich，829mg，4.06mmol)轉化成497mg(37％)2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環辛-1-烯甲酸乙酯。
步驟2. 2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環辛-1-烯甲酸乙酯
根據實施例8，步驟2的程序，使2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環己-1-烯甲酸乙酯(224mg，0.679mmol)和3，5-二甲氧基苯甲基氯化鋅(Aldrich，1.6mL 0.5M THF溶液，0.80mmol)轉化成98.4mg(44％)2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環辛-1-烯甲酸乙酯。
步驟3. 2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環辛-1-烯甲酸
根據實施例4，步驟2的程序，在80℃攪拌下使2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環辛-1-烯甲酸乙酯(94.8mg，0.285mmol)轉化成20.7mg(24％)2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環辛-1-烯甲酸，以及60.0mg(63％)起始酯。
步驟4. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環辛-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例3，步驟2的程序，使2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環辛-1-烯甲酸(62.3mg，0.205mmol)和4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(42.7mg，0.205mmol)轉化成85.8mg(93％)4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環辛-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟5. 4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環辛-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3，5-二甲氧基苯甲基)環辛-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(11.1mg，0.0246mmol)轉化成5.7mg(53％)標題化合物。
實施例21
4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
步驟1. 2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯
根據實施例8，步驟2的程序，使2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環己-1-烯甲酸乙酯(198mg，0.654mmol)和3，4-二甲氧基苯甲基氯化鋅(Rieke Metals，1.6mL 0.5M THF溶液，0.80mmol)在Teledyne-Isco Combiflash機器(12g金柱，己烷→20％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成122mg(61％)2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯。
步驟2. 2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸
根據實施例4，步驟2的程序，使2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯(120mg，0.393mmol)轉化成92mg(85％)2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸。
步驟3. 4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例3，步驟2的程序，使2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸(92mg，0.33mmol)和4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(69mg，0.33mmol)轉化成131mg(93％)4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟4. 4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(11.2mg，0.0264mmol)轉化成4.3mg(40％)標題化合物。
實施例22
4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
步驟1. 4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例5，步驟1的程序，使4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(40mg，0.095mmol)轉化成27.5mg(68％)4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體)和10.9mg(27％)4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體)。
步驟2. 4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體，27.5mg，0.0646mmol)轉化成16.1mg(61％)標題化合物。
實施例23
4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自低Rf酯非對映異構體，參見實施例22)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3，4-二甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體，10.4mg，0.0244mmol)轉化成4.1mg(41％)標題化合物。
實施例24
4-((2-(2-氯苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
步驟1. 2-(2-氯苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯
根據實施例8，步驟2的程序，使2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環己-1-烯甲酸乙酯(300mg，0.993mmol)和2-氯苯甲基氯化鋅(II)(Aldrich，2.4mL0.5MTHF溶液，1.2mmol)在Teledyne-Isco Combiflash機器(24g金柱，己烷→15％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成144mg(52％)2-(2-氯苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯。
步驟2. 2-(2-氯苯甲基)環己-1-烯甲酸
根據實施例4，步驟2的程序，使2-(2-氯苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯(55mg，0.197mmol)在Teledyne-Isco Combiflash機器(4g金柱，己烷→35％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成42.4mg(86％)2-(2-氯苯甲基)環己-1-烯甲酸。
步驟3. 4-((2-(2-氯苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例3，步驟2的程序，使2-(2-氯苯甲基)環己-1-烯甲酸(41mg，0.16mmol)和4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(34mg，0.16mmol)轉化成64mg(99％)4-((2-(2-氯苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟4. 4-((2-(2-氯苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(2-氯苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(9.4mg，0.0236mmol)轉化成4.0mg(44％)標題化合物。
實施例25
4-((2-苯甲基環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
步驟1. 4-((2-苯甲基環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例5，步驟1的程序，使4-((2-(2-氯苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(47mg，0.12mmol)轉化成26.6mg(62％)4-((2-苯甲基環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體)和9.3mg(22％)4-((2-苯甲基環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體)。未分離出含有起始氯取代基的產物。
步驟2. 4-((2-苯甲基環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-苯甲基環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體，26.6mg，0.0728mmol)轉化成18.7mg(73％)標題化合物。
實施例26
4-((2-苯甲基環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自低Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-苯甲基環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體，9.3mg，0.0254mmol)轉化成4.5mg(50％)標題化合物。
實施例27
4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
步驟1. 2-(3-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯
根據實施例8，步驟2的程序，使2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環己-1-烯甲酸乙酯(190mg，0.628mmol)和3-甲氧基苯甲基氯化鋅(II)(Rieke Metals，1.5mL 0.5M THF溶液，0.75mmol)在Teledyne-Isco Combiflash機器(12g金柱，己烷→15％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成152mg被三氟甲磺酸酯原料汙染的2-(3-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯。在考慮到基於1H-NMR分析的雜質的情況下，所需產物的估計產量是約115mg(約67％)。
步驟2. 2-(3-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸
根據實施例4，步驟2的程序，使2-(3-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯(152mg來自步驟1的不純物質，約0.42mmol)在Teledyne-Isco Combiflash機器(12g金柱，己烷→35％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成86.4mg(約84％)2-(3-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸。
步驟3. 4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例3，步驟2的程序，使2-(3-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸(83mg，0.34mmol)和4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(70mg，0.34mmol)轉化成136mg(定量)4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟4. 4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(8.3mg，0.021mmol)轉化成2.9mg(36％)標題化合物。
實施例28
4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
步驟1. 4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例5，步驟1的程序，使4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(37mg，0.094mmol)轉化成15mg(40％)4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體)和7.2mg(19％)4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體)。
步驟2. 4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體，15mg，0.038mmol)轉化成8.2mg(57％)標題化合物。
實施例29
4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自低Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(3-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體，7.2mg，0.018mmol)轉化成2.9mg(42％)標題化合物。
實施例30
4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
步驟1. 2-(2-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯
根據實施例8，步驟2的程序，使2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環己-1-烯甲酸乙酯(190mg，0.628mmol)和2-甲氧基苯甲基氯化鋅(II)(Rieke Metals，1.5mL 0.5M THF溶液，0.75mmol)在Teledyne-Isco Combiflash機器(12g金柱，己烷→15％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成160mg被三氟甲磺酸酯原料汙染的2-(2-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯。在考慮到基於1H-NMR分析的雜質的情況下，所需產物的估計產量是約119mg(約69％)。
步驟2. 2-(2-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸
根據實施例4，步驟2的程序，使2-(2-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯(160mg來自步驟1的不純物質，約0.42mmol)在Teledyne-Isco Combiflash機器(12g金柱，己烷→35％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成84mg(約81％)2-(2-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸。
步驟3. 4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例3，步驟2的程序，使2-(2-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸(80mg，0.33mmol)和4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(68mg，0.33mmol)轉化成121mg(94％)4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟4. 4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(10.3mg，0.0262mmol)轉化成4.5mg(45％)標題化合物。
實施例31
4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
步驟1. 4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例5，步驟1的程序，使4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(40mg，0.10mmol)轉化成18.8mg(47％)4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體)和13.5mg(34％)4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體)。
步驟2. 4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體，18.8mg，0.0475mmol)轉化成8.9mg(49％)標題化合物。
實施例32
4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自低Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(2-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體，13.5mg，0.0341mmol)轉化成7.2mg(55％)標題化合物。
實施例33
4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
步驟1. 2-(4-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯
根據實施例8，步驟2的程序，使2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)環己-1-烯甲酸乙酯(199mg，0.659mmol)和4-甲氧基苯甲基氯化鋅(II)(Rieke Metals，1.6mL 0.5MTHF溶液，0.80mmol)在Teledyne-Isco Combiflash機器(12g金柱，己烷→15％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成156mg被三氟甲磺酸酯原料汙染的2-(4-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯。在考慮到基於1H-NMR分析的雜質的情況下，所需產物的估計產量是約135mg(約75％)。
步驟2. 2-(4-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸
根據實施例4，步驟2的程序，使2-(4-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸乙酯(156mg來自步驟1的不純物質，約0.49mmol)在Teledyne-Isco Combiflash機器(12g金柱，己烷→35％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成98mg(約81％)2-(4-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸。
步驟3. 4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例3，步驟2的程序，使2-(4-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲酸(96.3mg，0.39mmol)和4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(81.3mg，0.39mmol)轉化成153mg(99％)4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟4. 4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(10.6mg，0.0269mmol)轉化成5.6mg(55％)標題化合物。
實施例34
4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
步驟1. 4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例5，步驟1的程序，使4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己-1-烯甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(40mg，0.10mmol)轉化成26.1mg(65％)4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體)和10.1mg(25％)4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體)。
步驟2. 4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體，25.7mg，0.065mmol)轉化成15.9mg(64％)標題化合物。
實施例35
4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自低Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體，9.8mg，0.0248mmol)轉化成3.2mg(34％)標題化合物。
實施例36
4-((3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸
步驟1. 3-氧代雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲酯
添加二異丙基醯胺鋰的溶液(2.3mL2.0M THF溶液，4.6mmol)至降樟腦(Aldrich，459mg，4.08mmol)於THF(23.5mL)中的-78℃溶液。在-78℃下15分鐘之後，添加氰基甲酸甲酯(421mg，4.90mmol)於THF(1mL+1mL衝洗)中的溶液。使混合物升溫至室溫並攪拌18小時。反應用飽和NH4Cl水溶液猝滅並用CH2Cl2(3x)萃取。將合併的萃取物乾燥(MgSO4)，過濾並濃縮。在Teledyne-Isco Combiflash機器(40g金柱，10％EtOAc/己烷→30％EtOAc/己烷，梯度)上純化所得粗製殘餘物以得到572mg(83％)3-氧代雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲酯。
步驟2. 3-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲酸甲酯
根據實施例8，步驟1的程序，使3-氧代雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲酯(446mg，2.65mmol)轉化成316mg(40％)3-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲酸甲酯。
步驟3. 3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲酸甲酯
根據實施例8，步驟2的程序，使3-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲酸甲酯(160mg，0.533mmol)和3，5-二甲氧基苯甲基氯化鋅(II)(Aldrich，1.3mL 0.5M THF溶液，0.65mmol)在室溫下攪拌3天之後、在Teledyne-Isco Combiflash機器(12g金柱，己烷→15％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成99mg(61％)3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲酸甲酯。
步驟4. 3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲酸
根據實施例4，步驟2的程序，使3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲酸甲酯(98mg，0.32mmol)在Teledyne-Isco Combiflash機器(12g金柱，己烷→35％EtOAc/己烷，梯度)上純化之後轉化成31.4mg(34％)3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲酸和60.5mg(65％)(E)-3-(3，5-二甲氧基苯亞甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸(呈2種立體異構體的混合物形式)。
步驟5. 4-((3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例3，步驟2的程序，使3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]-2-烯-2-甲酸(31.4mg，0.109mmol)和4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(22.8mg，0.11mmol)轉化成47mg(定量)4-((3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟6. 4-((3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(9.2mg，0.021mmol)轉化成4.0mg(45％)標題化合物。
實施例37
4-(((1S，2R，4R，E)-3-(3，5-二甲氧基苯亞甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸(外消旋)
步驟1.(E)-4-((3-(3，5-二甲氧基苯亞甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例3，步驟2的程序，使(E)-3-(3，5-二甲氧基苯亞甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸(2種立體異構體的混合物，60.5mg，0.210mmol)和4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(43.6mg，0.210mmol)轉化成43.4mg(48％)外消旋4-(((1S，2R，4R，E)-3-(3，5-二甲氧基苯亞甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯和23.3mg(26％)外消旋4-(((1S，2S，4R，E)-3-(3，5-二甲氧基苯亞甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯。
步驟2. 4-(((1S，2R，4R，E)-3-(3，5-二甲氧基苯亞甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸(外消旋)
根據實施例3，步驟3的程序，使外消旋4-(((1S，2R，4R，E)-3-(3，5-二甲氧基苯亞甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(8.4mg，0.019mmol)轉化成3.1mg(39％)標題化合物。使用相同條件，外消旋4-(((1S，2S，4R，E)-3-(3，5-二甲氧基苯亞甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(來自先前步驟的另一非對映異構體，6.5mg，0.014mmol)得到1.2mg(19％)相同標題產物。
實施例38
4-((3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
步驟1. 4-((3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯
根據實施例5，步驟1的程序，使4-((3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚-2-烯-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(40mg，0.092mmol)轉化成32mg(80％)4-((3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體，推測是1種外消旋順式異構體)和3.8mg(10％)4-((3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體，3種異構體的混合物，推測是另一外消旋順式異構體和2種反式異構體)。
步驟2. 4-((2-(4-甲氧基苯甲基)環己烷甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自高Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(高Rf非對映異構體，10.4mg，0.0238mmol)轉化成7.1mg(70％)標題化合物。
實施例39
4-((3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸(來自低Rf酯非對映異構體)
根據實施例3，步驟3的程序，使4-((3-(3，5-二甲氧基苯甲基)雙環[2.2.1]庚烷-2-甲醯胺基)甲基)苯甲酸甲酯(低Rf非對映異構體，3種異構體的混合物，3.8mg，0.0087mmol)轉化成1.4mg(38％)標題化合物，其仍然呈3種異構體的混合物形式。
生物數據
結合數據
由對本發明化合物操作結合和活性研究獲得的數據如美國專利號7,427,685中所述來實現，所述美國專利的內容以引用的方式併入本文。
Ki結合數據
在總體積300μl中含有漢克平衡鹽溶液(Hank′s balanced salt solution)、20mM Hepes(pH7.3)、膜(約60μg蛋白質)或2×105個細胞(來自穩定表達人EP2受體的HEK293細胞)、[3H]PGE2(10nM)和各種濃度的測試化合物的培養基中進行競爭結合實驗。在23℃下孵育反應混合物60分鐘，並且在真空下經Whatman GF IB過濾器過濾。用5ml含有50mM Tris/HCl的冰冷緩衝液(PH7.3)洗滌過濾器三次。在過量未標記的PGE2(10μM)存在下估計非特異性結合。使用非線性回歸分析，將結合數據擬合至可用於單一類別結合位點的結合模型。使用等式Ki＝(IC50/(1+[L]/KD)將由此獲得的IC50值換算成Ki，其中[L]表示PGE2濃度(10nM)，並且KD是[3H]PGE2在人EP2受體(40nM)下的解離常數。
放射性配體結合
穩定表達EP1、EP2、EP4和FP受體的細胞
將穩定表達人或貓FP受體或EP1、EP2或EP4受體的HEK-293細胞用TME緩衝液洗滌，從燒瓶的底部刮落，並且使用Brinkman PT 10/35 polytron均質化30秒。添加TME緩衝液以達到離心管中最終40ml的體積(TME的組成是100mM TRIS鹼、20mM MgCl2、2M EDTA；添加ION HCl以達到7.4的pH)。
使用Beckman Ti-60轉子，在4℃、19000rpm下離心細胞勻漿20分鐘。將所得沉澱再混懸於TME緩衝液中以得到最終1mg/ml的蛋白質濃度，如通過Biorad測定所測定。在100ul體積中持續60分鐘進行相對於[3H-]17-苯基PGF2α(5nM)的放射性配體結合競爭測定。通過添加質膜級分來開始結合反應。通過添加4ml冰冷TRIS-HCl緩衝液來終止反應，並且使用Brandel細胞收集器經玻璃纖維GF/B過濾器快速過濾。用冰冷緩衝液洗滌過濾器3次，並且烘乾1小時。
[3H-]PGE2(比活性180Ci mmol)用作EP受體的放射性配體。[3H]17-苯基PGF2α用於FP受體結合研究。在至少三個單獨實驗中一式兩份進行採用EP1、EP2、EP4和FP受體的結合研究。使用200μl測定體積。孵育在25℃下持續60分鐘，並且通過添加4ml冰冷50mM TRIS-HCl來終止，隨後在細胞收集器(Brandel)中經Whatman GF/B過濾器快速過濾，並且再進行3次4ml洗滌。使用最終濃度為5nM的[3H]-PGE2或5nM的[3H]17-苯基PGF2α進行競爭研究，並且根據研究的受體亞型，用10-5M未標記的PGE2或17-苯基PGF2α測定非特異性結合。
用於FLIPRTM研究的方法
(a)細胞培養
在100mm培養皿中於高量葡萄糖DMEM培養基中培養穩定表達一種類型或亞型的重組人前列腺素受體(表達的前列腺素受體：hDP/Gqs5；hEP1；hEP2/Gqs5；hEP3A/Gqi5；hEP4/Gqs5；hFP；hIP；hTP)的HEK-293(EBNA)細胞，所述培養基含有10％胎牛血清、2mM I-穀氨醯胺、250μg/ml遺傳黴素(G418)和200μg/ml潮黴素B作為選擇標記、以及100單位/ml青黴素G、100μg/ml鏈黴素和0.25μg/ml兩性黴素B。
(b)在FLIPRTM上進行的鈣信號研究
將細胞以每孔5×104個細胞的密度接種在多聚-D-賴氨酸包衣的黑壁透明底96孔板(Becton-Dickinson)中，並且使其在孵育器中於37℃下附著過夜。接著使用Denley Cellwash板洗滌器(Labsystems)，用HBSS-HEPES緩衝液(無碳酸氫鹽和酚紅的漢克平衡鹽溶液、20mM HEPES，pH 7.4)洗滌細胞兩次。在使用最終濃度2μM的鈣敏感性染料Fluo-4AM於黑暗中進行染料上樣45分鐘之後，用HBSS-HEPES緩衝液洗滌各板四次以去除過量染料，在各孔中保留100μL。使各板再平衡至37℃，持續數分鐘。
用氬雷射器在488nm下激發細胞，並且通過510-570nm帶寬發射濾光片(FLIPRTM，Molecular Devices，Sunnyvale，CA)測量發射。以50μL體積添加藥物溶液至各孔中以產生所需的最終濃度。記錄各孔的峰值螢光強度增加。在各板上，4個孔各自用作陰性(HBSS-HEPES緩衝液)和陽性對照(標準激動劑：視受體而定，BW245C(hDP)；PGE2(hEP1；hEP2/Gqs5；hEP3A/Gqi5；hEP4/Gqs5)；PGF2α(hFP)；卡巴環素(carbacyclin)(hIP)；U-46619(hTP))。接著相對於對照來表示各個含有藥物的孔中的峰值螢光變化。
以高通量(HTS)或濃度-響應(CoRe)形式測試化合物。在HTS形式中，在10-5M的濃度下一式兩份檢查每板44種化合物。為產生濃度-響應曲線，在10-5與10-11之間的濃度範圍內一式兩份測試每板4種化合物。將雙份值平均。在HTS或CoRe形式中，使用來自不同代的細胞在至少3個單獨板上測試各化合物以產生n≥3。
cAMP測定
使用Biomek工作站製備384孔藥物板來一式三份以16個連續稀釋液形式含有6種測試化合物、PGE2和cAMP。將表達靶標PG受體亞型(EP2或EP4)的HEK-EBNA細胞以104個細胞/5μL的密度混懸於刺激緩衝液(HBSS、0.1％BSA、0.5mM IBMX和5mM HEPES，pH7.4)中。通過在孔中混合5μL藥物稀釋液與5μLHEK-EBNA細胞來引發反應，在室溫下進行30分鐘，並且隨後添加5μL含抗cAMP接受體珠粒的具有吐溫-20(Tween-20)的對照緩衝液(25mM NaCl、0.03％吐溫-20、5mM HEPES，pH7.4)。在室溫下於黑暗中30分鐘之後，使混合物與15μL含生物素化cAMP/抗生蛋白鏈菌素供體珠粒的裂解/檢測緩衝液(0.1％BSA、0.3％吐溫-20和5mM HEPES，pH7.4)一起在室溫下孵育45分鐘。使用Fusion-alpha HT微板讀取器讀取螢光變化。
以下在表1中闡述的結果證明本文公開的化合物是選擇性前列腺素EP4激動劑和拮抗劑，並且因此可用於治療與EP4受體相關的病理性疾患。在表1中，「NA」指示無活性。
製劑和組合物
本領域技術人員將易於了解，對於施用或製造藥劑，可使本文公開的化合物與本身在本領域中是已知的藥學上可接受的賦形劑摻混。具體來說，如果藥物待全身施用，那麼它可被調製成粉劑、丸劑、片劑等，或調製成溶液、乳劑、混懸劑、氣霧劑、糖漿劑或酏劑，其適於口服或胃腸外施用或吸入。
對於固體劑型或藥劑，無毒固體載體包括但不限於藥物等級的甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、聚亞烷基二醇、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖和碳酸鎂。固體劑型可未被包衣，或它們可通過已知技術包衣以延遲在胃腸道中的崩解和吸收，並且由此在較長的時間內提供持續作用。舉例來說，可採用延時物質，諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它們也可通過美國專利號4,256,108；4,166,452；和4,265,874中所述的技術包衣以形成用於控制釋放的滲透治療片劑，所述美國專利以引用的方式整體併入本文。液體藥學上可施用的劑型可例如包括一種或多種目前適用的化合物和任選藥物佐劑於載體(諸如像水、鹽水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇等)中以由此形成溶液或混懸液的溶液或混懸液。必要時，待施用的藥物組合物也可含有少量無毒輔助物質，諸如溼潤劑或乳化劑、pH緩衝劑等。所述輔助試劑的典型實例是乙酸鈉、脫水山梨醇單月桂酸酯、三乙醇胺、乙酸鈉、油酸三乙醇胺等。製備所述劑型的實際方法為本領域技術人員所知或將為其顯而易知；例如參見Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，第16版，1980。待施用的製劑的組合物在任何情況下都以有效提供所需治療作用的量含有一定數量的一種或多種目前適用的化合物。
胃腸外施用的特徵通常在於皮下、肌肉內或靜脈內注射。可注射劑可以常規形式製備成液體溶液或混懸液，適於在注射之前於液體中溶解或混懸的固體形式，或乳液。適合的賦形劑是例如水、鹽水、右旋糖、甘油、乙醇等。此外，必要時，待施用的可注射藥物組合物也可含有少量無毒輔助物質，諸如溼潤劑或乳化劑、pH緩衝劑等。
當然，施用的一種或多種化合物的量取決於一種或多種所需的治療作用、所治療的特定哺乳動物、哺乳動物的疾患的嚴重性和性質、施用方式、一種或多種所用特定化合物的效能和藥效學、以及處方醫師的判斷。化合物的治療有效劑量可在約0.5或約1至約100mg/kg/天的範圍內。
在一些實施方案中，藥物組合物中的活性化合物的量是0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、3.0％、4.0％和5.0％w/w。
在一些實施方案中，在約1x10-7至50％(w/w)、約0.001至50％(w/w)、約0.01至50％(w/w)、約0.1至50％(w/w)、或約1至50％(w/w)的濃度下提供藥物組合物中的活性化合物的有效量，例如治療有效量。在一些實施方案中，藥物組合物中的活性化合物的治療有效量是0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％以及1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、3.0％、4.0％和5.0％w/w。
配製眼科可接受的液體以使它可經局部向眼部施用。應儘可能地使舒適性最大化，但有時配製考慮事項(例如藥物穩定性)可能迫使舒適性達不到最優。在不能使舒適性最大化的情況下，應配製液體以使液體對於局部眼科使用患者是可耐受的。另外，眼科可接受的液體應被包裝供單次使用，或含有防腐劑以防止歷經多次使用時汙染。
對於眼科施加，常使用生理鹽水溶液作為主要媒介物來製備溶液或藥劑。可用適當緩衝體系使眼科溶液維持在舒適的pH下。製劑也可含有常規藥學上可接受的防腐劑、穩定劑和表面活性劑。
可用於本發明的藥物組合物中的防腐劑包括但不限於苯扎氯銨、氯丁醇、硫柳汞、乙酸苯汞和硝酸苯汞。適用的表面活性劑是例如吐溫80。同樣，各種適用的媒介物可用於本發明的眼科製劑中。這些媒介物包括但不限於聚乙烯醇、聚維酮、羥丙基甲基纖維素、泊洛沙姆(poloxamer)、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素和純化水。
需要或方便時可添加張力調節劑。它們包括但不限於鹽(特別是氯化鈉、氯化鉀)、甘露糖醇和甘油、或任何其它適合的眼科可接受的張力調節劑。
可使用用於調整pH的各種緩衝劑和手段，只要所得製劑是眼科可接受的即可。因此，緩衝劑包括乙酸鹽緩衝劑、檸檬酸鹽緩衝劑、磷酸鹽緩衝劑和硼酸鹽緩衝劑。需要時，酸或鹼可用於調節這些製劑的pH。
類似地，用於本發明中的眼科可接受的抗氧化劑包括但不限於焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、乙醯半胱氨酸、丁基羥基苯甲醚和丁基羥基甲苯。
可包括在眼科製劑中的其它賦形劑組分是螯合劑。適用的螯合劑是依地酸二鈉(edetate disodium)，但其它螯合劑也可替代它或與它聯合使用。
各成分通常按以下量加以使用：
對於局部使用，採用含有本文公開的化合物的乳膏劑、軟膏劑、凝膠劑、溶液或混懸液等。局部製劑可通常包含藥物載體、共溶劑、乳化劑、滲透促進劑、防腐劑體系和潤膚劑。
組合物可在一周1天與7天之間施用，持續實現所需結果所必需的一段時間，其可為數天至數月。視所需的作用而定，可一天一次或數次(2、3、4次或更多次)施用組合物。在某些實施方案中，可每1、2、3、4、5、6或7天施用組合物。在另一實施方案中，可每1、2、3或4周一次或多次施用組合物。施用可以每月一次或兩月一次為基礎。此外，可持續1、2、3、6、9或12個月或更久施用組合物。在某些實施方案中，可在進行性基礎上施用組合物以維持所需結果。
公開的化合物可作為組合物的一部分施用。如本文所用，「製劑」和「組合物」可互換使用，並且是指提供在一起以達成給定目的的成分的組合。所述術語為本領域普通技術人員所熟知。
如本文所用，「載體」、「惰性載體」和「可接受的載體」可互換使用，並且是指可與目前公開的化合物組合以提供所需組合物的載體。本領域普通技術人員將認識到許多熟知用於製備特定藥物和/或化妝品組合物的載體。合乎需要的是，載體適於向角質表面或身體其它區域施加。在施加後，可接受的載體大致上不與皮膚和其它角質表面發生不良反應。舉例來說，載體可採用以下形式：脂肪或非脂肪乳膏劑、乳狀混懸劑或油包乳或水包油類型、洗劑、凝膠劑或膠狀物、膠體或非膠體水性或油性溶液、糊劑、氣霧劑、可溶性片劑或貼片。根據一個實施方案，組合物包括皮膚病學上可相容的媒介物或載體。可用於製備組合物的媒介物可包括例如水溶液(諸如像生理鹽水)、油溶液或軟膏劑。此外，媒介物可含有皮膚病學上可相容的防腐劑，諸如像苯扎氯銨；表面活性劑，像例如聚山梨醇酯80；脂質體或聚合物，例如甲基纖維素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和透明質酸；這些可用於增加粘度。
可包括在本發明組合物中的額外藥劑的實例是止癢劑、消脂劑、抗疤痕形成劑和消炎劑、麻醉劑、抗刺激劑、血管收縮劑、血管舒張劑以及用以防止/阻止出血，並且改進/去除色素沉著的藥劑、保溼劑、剝落劑、緊緻劑、抗粉刺劑。止癢劑可包括甲基磺醯基甲烷、碳酸氫鈉、爐甘石(calamine)、尿囊素(allantoin)、高嶺土、胡椒薄荷、茶樹油及其組合。消脂劑可包括毛喉素(forskolin)；黃嘌呤(xanthine)化合物，諸如但不限於咖啡因、茶鹼(theophylline)、可可鹼(theobromine)和氨茶鹼(aminophylline)；及其組合。麻醉劑可包括利多卡因(lidocaine)、苯佐卡因(benzocaine)、氨苯丁酯(butamben)、地布卡因(dibucaine)、奧布卡因(oxybuprocaine)、普莫卡因(pramoxine)、丙對卡因(proparacaine)、丙美卡因(proxymetacaine)、四卡因(tetracaine)及其組合。抗疤痕形成劑可包括IFN-γ、氟尿嘧啶(fluorouracil)、聚乳酸乙醇酸、甲基化聚乙二醇、聚乳酸、聚乙二醇及其組合。消炎劑可包括地塞米松(dexamethasone)、潑尼松龍(prednisolone)、皮質酮(corticosterone)、布地奈德(budesonide)、雌激素(estrogen)、柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)、美沙拉嗪(mesalamine)及其衍生物和組合。另外，可包括諸如腎上腺素(epinephrine)、胸苷(thymidine)、胞苷(cytidine)、尿苷(uridine)、安替比林(antiypyrin)、氨基己酸、氨甲環酸、桉樹腦(eucalyptol)、尿囊素、甘油和亞硒酸鈉的活性劑。製劑可進一步包含降解抑制劑。降解抑制劑包括但不限於糖胺聚糖(例如肝素(heparin)、硫酸肝素、硫酸皮膚素(dermatan sulfate)、硫酸軟骨素(chrondroitin sulfate)、o-硫酸化HA、亞麻苦苷(lnamarin)和扁桃苷(amygdalin))、抗氧化劑(例如抗壞血酸、褪黑素(melatonin)、維生素C、維生素E)、蛋白質(例如血清透明質酸酶抑制劑)和脂肪酸(例如飽和C10至C22脂肪酸)。在某些實施方案中，額外活性劑是抗氧化劑。在某些實施方案中，抗氧化劑包括維生素C和/或維生素E，諸如d-α-生育酚聚乙二醇1000丁二酸酯(TPGS)。
公開的組合物非常適合於局部、皮下、真皮內、真皮下、皮下和經皮施用。局部施用涉及在皮膚瑕疵部位處使用向皮膚表面施加的組合物以發揮局部作用。因此，所述局部組合物包括其中組合物是通過與待治療的皮膚表面直接接觸來在外部施加的那些藥物或化妝品形式，所述皮膚表面諸如面部、頸部、手臂、腿部和/或軀幹。用於這個目的的常規藥物或化妝品形式包括軟膏劑、擦劑、乳膏劑、洗髮劑、洗劑、糊劑、膠狀物、噴霧劑、氣霧劑等，並且視待治療的瑕疵和皮膚區域而定，可進一步直接施加或於貼片或浸漬敷料中施加。術語「軟膏劑」包括具有油性、水溶性和乳液類型基質(例如礦脂(petrolatum)、羊毛脂(lanolin)、聚乙二醇以及這些的混合物)的製劑(包括乳膏劑)。
組合物也適於中胚層療法應用。中胚層療法是一種涉及表皮內、真皮內和/或皮下注射組合物的非手術美容治療技術。組合物以多個小滴形式向表皮、真皮-表皮接合處和/或真皮中施用。
本發明的活性化合物的實際劑量取決於特定化合物和待治療的疾患；對適當劑量的選擇完全在熟練技術人員的知識範圍內。
本文公開的化合物也可用於與可用於治療青光眼或其它疾患的其它藥物組合。
對於治療青光眼，涵蓋用以下類別的藥物進行的聯合治療：
β-阻斷劑(或β-腎上腺素能拮抗劑)，包括卡替洛爾(carteolol)、左布諾洛爾(levobunolol)、美替帕拉洛爾(metiparanolol)、噻嗎洛爾半水合物(timolol hemihydrate)、順丁烯二酸噻嗎洛爾、β1-選擇性拮抗劑(諸如倍他索洛爾(betaxolol))等或其藥學上可接受的鹽或前藥；
腎上腺素能激動劑，包括非選擇性腎上腺素能激動劑，諸如硼酸腎上腺素(epinephrine borate)、鹽酸腎上腺素和地匹福林(dipivefrin)等或其藥學上可接受的鹽或前藥；和
α2選擇性腎上腺素能激動劑，諸如安普尼定(apraclonidine)、溴莫尼定(brimonidine)等或其藥學上可接受的鹽或前藥；
碳酸酐酶抑制劑，包括乙醯唑胺(acetazolamide)、二氯非那胺(dichlorphenamide)、甲氮醯胺(methazolamide)、布林佐胺(brinzolamide)、多佐胺(dorzolamide)等或其藥學上可接受的鹽或前藥；
膽鹼能激動劑，包括直接作用性膽鹼能激動劑，諸如碳醯膽鹼(carbachol)、鹽酸毛果芸香鹼(pilocarpine hydrochloride)、硝酸毛果雲香鹼、毛果芸香鹼等或其藥學上可接受的鹽或前藥；
膽鹼酯酶抑制劑，諸如地美卡林(demecarium)、二乙氧磷醯硫膽鹼(echothiophate)、毒扁豆鹼(physostigmine)等或其藥學上可接受的鹽或前藥；
穀氨酸拮抗劑和其它神經保護劑，諸如Ca2+通道阻斷劑，諸如美金剛胺(memantine)、金剛烷胺(amantadine)、金剛烷乙胺(rimantadine)、硝基甘油(nitroglycerin)、去甲右美沙芬(dextrophan)、右美沙芬(dextromethorphan)、CGS-19755、二氫吡啶、維拉帕米(verapamil)、依莫帕米(emopamil)、苯並硫氮雜卓(benzothiazepine)、苄普地爾(bepridil)、二苯基丁基哌啶、二苯基哌嗪、HOE 166和相關藥物、氟司必林(fluspirilene)、依利波地爾(eliprodil)、艾芬地爾(ifenprodil)、CP-101，606、替巴洛新(tibalosine)、2309BT和840S、氟桂利嗪(flunarizine)、尼卡地平(nicardipine)、硝苯地平(nifedimpine)、尼莫地平(nimodipine)、巴尼地平(barnidipine)、維拉帕米、利多氟嗪(lidoflazine)、乳酸普尼拉明(prenylamine lactate)、阿米洛利(amiloride)等或其藥學上可接受的鹽或前藥；
前列腺醯胺，諸如比馬前列素(bimatoprost)或其藥學上可接受的鹽或前藥；和
前列腺素，包括曲伏前列素(travoprost)、UFO-21、氯前列醇(chloprostenol)、氟前列醇(fluprostenol)、13，14-二氫-氯前列醇、異丙基烏諾前列酮(isopropyl unoprostone)、拉坦前列素(latanoprost)等。
大麻素(Cannabinoid)，包括CB1激動劑，諸如WIN-55212-2和CP-55940等或其藥學上可接受的鹽或前藥。
對於治療影響眼部的疾病，包括青光眼，可經局部、眼周、眼內或通過本領域中已知的任何其它有效手段來施用這些化合物。
與EP4受體相關的病理性疾患包括但不限於急性肝炎、哮喘、支氣管炎、灼傷、慢性阻塞性呼吸道疾病、克羅恩氏病、消化性潰瘍、青光眼(和與眼內壓升高相關的其它疾病)、噬血細胞症候群、肝病、透析時高細胞因子血症、高血壓、免疫疾病(自體免疫疾病、器官移植等)、炎症(諸如類風溼性關節炎)、川崎病、肝損傷、巨噬細胞活化症候群、心肌缺血、腎炎、神經細胞死亡、骨質疏鬆和與骨病症相關的疾病、早產、肺氣腫、肺纖維化、肺損傷、腎衰竭、敗血症、性功能障礙、休克、睡眠障礙、斯蒂爾病、口腔炎、全身性肉芽腫、全身性炎症症候群、血栓形成和中風以及潰瘍性結腸炎。
在整個本說明書中，對出版物，諸如美國和外國專利申請、期刊文章、書籍章節和其它出版物進行參照。除非另外指示，否則所有所述出版物都出於所有目的以引用的方式整體明確併入，包括與相應參考文獻一起出版的補充性/支持性信息章節。
先前描述詳述可用於實施本發明的特定方法和組合物，並且表示所涵蓋的最佳模式。它不應被解釋為將總體範圍限制於此；相反，本發明的範圍將僅由隨附權利要求的法定解釋來決定。