天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑及其用途的製作方法

2023-04-29 20:37:01

專利名稱：天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑及其用途的製作方法
技術領域：
本發明屬於藥物化學領域，並且涉及可以抑制介導細胞凋亡和炎症的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(caspase)的化合物及其藥物組合物。本發明還涉及製備所述化合物方法和使用本發明的化合物和藥物組合物治療與天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶活性有關之疾病的方法。
背景技術：
細胞凋亡或程序性細胞死亡是生物體排除不需要的細胞的重要機制。已證實細胞凋亡的失調(可以是過度的細胞凋亡或無法發生細胞凋亡)與一系列疾病例如癌症、急性炎症和自身免疫性疾病、局部缺血性疾病和某些神經變性疾病有關(參見Science，1998，281，1283-1312(1998)；Ellis等，Ann.Rev.Cell.Biol.，1991，7，663(1991))。
天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶是一族半胱氨酸蛋白酶，它是細胞凋亡和細胞分解的信號傳導途徑的重要遞質(Thornberry，Chem.Biol.，1998，5，R97-R103(1998))。這些信號傳導途徑隨著細胞類型和刺激而改變，但所有的細胞凋亡途徑似乎均集中於一種共同的導致重要蛋白發生蛋白分解的效應物途徑。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶涉及信號傳導途徑的效應期及其引發時的上遊。涉及引發事件的上遊天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶被激活並隨後激活涉及細胞凋亡晚期的其它天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶。
天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1是第一個被證實的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶，它也被稱為白介素轉化酶或「ICE」。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1通過將前體白介素-1β(「pIL-1β」)在Asp-116和Ala-117之間特異性地裂解將pIL-1β轉化成致炎活性形式。除天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1之外，還有11種其它已知的人類天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶，所有這些酶均可以在天冬氨醯殘基處進行特異性地裂解。還發現它們必需要求在裂解部位的N-末端一側有至少4個胺基酸殘基。
依據其優選的或主要識別的胺基酸序列可將天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶分為3組。已證實包含天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶1、4、5和13的一組天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶優選裂解部位N-末端側4位上的疏水性芳香族胺基酸。包含天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶2、3和7的另一組可以識別裂解部位N-末端側1位和4位上的天冬氨醯殘基，並優選Asp-Glu-X-Asp序列。包含天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶6、8、9和10的第三組可以容許主要識別序列中的多種胺基酸，但似乎優選帶有支鏈脂肪族側鏈的殘基例如4位上的纈氨酸和亮氨酸。
還根據所了解的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶的功能對其進行了分組。第一亞族由天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1(ICE)、4、5和13組成。已證實這些天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶與致炎細胞因子的加工有關，因此在炎症中起重要作用。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1是這一類型的酶中研究的最多的酶，它可以通過蛋白分解作用激活IL-1β前體。因此該酶在炎症反應中起重要作用。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1還與幹擾素-γ誘導因子(IGIF)的加工有關，該因子可以刺激幹擾素γ的生產，而幹擾素γ是調節抗原呈遞、T細胞激活和細胞粘著的重要的免疫調節劑。
其餘的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶構成了第二和第三亞族。這些酶在導致細胞凋亡的細胞內信號傳導途徑中是非常重要的。一個亞族由涉及細胞凋亡途徑中的起始事件(包括從漿膜傳導信號)的酶組成。該亞族的成員包括天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-2、8、9和10。另一個亞族由效應物天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3、6和7組成，它與導致細胞通過細胞凋亡發生系統性破壞和死亡的最終的下遊裂解事件有關。涉及上遊信號傳導的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶可以激活下遊的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶，後者可以阻斷DNA修復機制、斷裂DNA、分解細胞骨架並最終使細胞碎裂。
對於天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶主要識別的四種胺基酸序列的了解已被用於設計天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑。已製備出了結構為CH3CO-[P4]-[P3]-[P2]-CH(R)CH2CO2H的可逆的四肽抑制劑，其中P2至P4表示最佳的胺基酸識別序列，R是可與天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶的半胱氨酸巰基結合的醛、腈或酮。Rano和Thornberry，Chem.Biol.4，149-155(1997)；Mjalli，等，Bioorg.Med.Chem.Lett.3，2689-2692(1993)；Nicholson等，Nature 376，37-43(1995)。還製備出了基於類似的四肽識別序列的不可逆抑制劑，其中R是醯氧基甲基酮-COCH2OCOR′，R′的例子是選擇性取代的苯基(例如2，6-二氯苯甲醯氧基)以及其中R是COCH2X，其中的X是離去基(例如F或Cl)。Thornberry等，Biochemistry 33，3934(1994)；Dolle等，J Med.Chem.37，563-564(1994)。
已經用肽類的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑證實了天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑用於治療與細胞凋亡增加有關的各種哺乳動物疾病狀態的用途。例如，在齧齒動物模型中，已證實天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑可以減少梗塞面積並抑制心肌梗塞後心肌細胞的細胞凋亡，減輕由中風引起的損傷程度和神經病學缺陷，減少創傷性腦損傷中的創傷後細胞凋亡和神經病學缺陷，可有效地治療暴發性肝破壞以及改善內毒素性休克後的存活率。Yaoita等，Circulation，97，276(1998)；Endres等，J Cerebral Blood Flowand Metabolism，18，238，(1998)；Cheng等，J.Clin.Invest.，101，1992(1998)；Yakovlev等，J Neuroscience，17，7415(1997)；Rodriquez等，J.Exp.Med.，184，2067(1996)；Grobmyer等，Mol.Med.，5，585(1999)。
總的來說，以上描述的肽類抑制劑對於某些天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶是非常有效的。但是，該效力並不總能反映在細胞凋亡的細胞模型上。此外，肽抑制劑通常具有不很理想的藥理學性質，例如口服吸收差、穩定性差以及代謝迅速等。Plattner和Norbeck，DrugDiscovery Technologies，Clark和Moos編(Ellis Horwood，Chich酯，England，1990)。
在認識到了需要改善肽類天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑的藥理學性質後，出現了肽模擬抑制劑。其中，將其中的P3胺基酸用3-氨基吡啶-2-酮和5-氨基嘧啶-4-酮衍生物代替的抑制劑受到了大量的關注(US專利5,756,466(Bemis等)；Dolle等J.Med.Chem.39，2438，(1996)；Golec等Bioorg.Med.Chem.Lett.7，2181，(1997)；Semple等，Biorg.Med.Chem.Lett.7，1337，(1997))，導致產生了如下通式的化合物 其中R1-R4以及X是各種基團。
由於肽類抑制劑所固有的問題，一直需要有效、穩定並且能穿透膜的小分子、非肽類的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑以在體內提供對細胞凋亡的有效的抑制作用。該化合物在治療與天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶有關的上述疾病中極為有用。WO 01/42216公開了天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑和其用途。本發明在WO01/42216的公開內容基礎上提供選擇。

發明內容
本發明提供式I的化合物 其中X是CH或N；Y是滷素，三氟苯氧基，或四氟苯氧基；R2是C1-6直鏈或支鏈烷基；R1是氫，滷素，OCF3，CN，或CF3；R4是氫，滷素，OCF3，SR，CN，CF3，Ar，或T-Ar；其中T是O或S；R是C1-6直鏈或支鏈烷基；Ar是任選被1-3個選自滷素、CH3、CF3、CN、OMe、OCF3、和NR5R6的基團取代的苯環；R5和R6各自獨立地為H或C1-6烷基，或者R5和R6合起來形成任選含最多3個選自O、S、NH、和N(C1-6烷基)的雜原子的5-7元環；條件是，當Y是滷素時，R3和R4兩者不同時為氫。
本發明也提供藥物組合物和使用這種組合物治療天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶介導的疾病的方法。
發明詳述本發明提供式I的化合物
其中X是CH或N；Y是滷素，三氟苯氧基，或四氟苯氧基；R2是C1-6直鏈或支鏈烷基；R3是氫，滷素，OCF3，CN，或CF3；R4是氫，滷素，OCF3，SR，CN，CF3，Ar，或T-Ar；其中T是O或S；R是C1-6直鏈或支鏈烷基；Ar是任選被1-3個選自滷素、CH3、CF3、CN、OMe、OCF3、和NR5R6的基團取代的苯環；R5和R6各自獨立地為H或C1-6直鏈或支鏈烷基，或者R5和R6合起來形成任選含最多3個選自O、S、NH、和N(C1-6直鏈或支鏈烷基)的雜原子的5-7元環；條件是，當Y是滷素時，R3和R4兩者不同時為氫。
在式I的另一個實施方案中，R4是氫，滷素，OCF3，CN，CF3，或T-Ar；其中T、Ar、和其他可變量定義如上。
本發明的化合物代表在國際PCT出版物WO01/42216範圍內的選擇，在此引入其全部公開內容。具體地說，本發明的化合物具有出乎意外和令人驚訝的抑制細胞凋亡和/或抑制活化細胞釋放I1-1β的能力。
根據一個優選實施方案，式I中R2是乙基，正丙基，或異丙基。
根據更優選的實施方案，式I中R2是乙基。
根據更加優選的實施方案，式I中R2是(S)-乙基。
根據一個優選實施方案，式I中R3是氫。
根據一個優選實施方案，式I中Y是F，三氟苯氧基，或四氟苯氧基。
根據另一個優選實施方案，本發明提供式IA的化合物 其中R2是乙基，正丙基，或異丙基；R3和R4彼此獨立地是氫，滷素，OCF3，CN，CF3，或Ar，條件是R3和R4兩者不同時為氫；Ar是任選被1-3個選自滷素、CH3、CF3、CN、OMe、OCF3、和NR5R6的基團取代的苯環；R5和R6各自獨立地為H或C1-6直鏈或支鏈烷基，或者R5和R6合起來形成任選含最多3個選自O、S、NH、和N(C1-6直鏈或支鏈烷基)的雜原子的5-7元環。
根據式IA的另一個實施方案，R3和R4彼此獨立地是氫，滷素，OCF3，CN，或CF3，條件是R3和R4兩者不同時為氫；R2的定義如上對於式IA的定義。
根據一個優選實施方案，式IA的化合物中R2是乙基。
根據更加優選的實施方案，式IA中R2是(S)-乙基。
根據另一個優選實施方案，式IA的化合物中R2是異丙基。
根據一個優選實施方案，式IA的化合物中R3是氫。
根據一個優選實施方案，式IA的化合物中R4是F，Cl，CN，Ar，或CF3。
根據更優選的實施方案，式IA的化合物中R4是Cl。
根據另一個更優選的實施方案，式IA的化合物中R4是CF3。
根據另一個優選實施方案，式IA的化合物中R3是氫，R4是F，Cl，CN，Ar，或CF3。
根據另一個優選實施方案，式IA的化合物中R3是氫，R4是Cl。
根據另一個優選實施方案，式IA的化合物中R3是氫，R4是CF3。
根據另一個優選實施方案，式IA的化合物中R3是氫，R4是Ar。
根據另一個優選實施方案，本發明提供式IB的化合物 其中X是CH或N；R2是乙基，正丙基，或異丙基；R3和R4彼此獨立地是氫，滷素，OCF3，CN，或CF3；Ar2是三氟苯基或四氟苯基。
根據一個優選實施方案，式IB的化合物中Ar2是2，3，5，6-四氟苯基。
根據一個優選實施方案，式IB的化合物中R2是乙基。
根據更加優選的實施方案，式IB中R2是(S)-乙基。
根據一個優選實施方案，式IB的化合物中X是CH。
根據一個優選實施方案，式IB的化合物中R3是氫。
根據一個優選實施方案，式IB的化合物中R4是F，Cl，或CF3。
根據更優選的實施方案，式IB的化合物中R4是Cl。
根據更優選的實施方案，式IB的化合物中R4是CF3。
根據一個優選實施方案，式IB的化合物中R3是氫，R4是F，Cl，或CF3。
根據另一個優選實施方案，式IB的化合物中Ar2是2，3，5，6-四氟苯基，R3是氫，R4是Cl。
根據另一個優選實施方案，本發明提供式IC的化合物 其中R2是乙基，正丙基，或異丙基；R3是氫，滷素，OCF3，CN，或CF3；R4是滷素，OCF3，CN，CF3，SR，或T-Ar；T是O或S；R是C1-6直鏈或支鏈烷基；Ar是任選被1-3個選自滷素、CH3、CF3、CN、OMe、OCF3、和NR5R6的基團取代的苯環；R5和R6各自獨立地為H或C1-6直鏈或支鏈烷基，或者R5和R6合起來形成任選含最多3個選自O、S、NH、和N(C1-6直鏈或支鏈烷基)的雜原子的5-7元環。
根據式IC化合物的一個優選實施方案，R4是T-Ar。
根據一個優選實施方案，式IC的化合物中R2是乙基。
根據更加優選的實施方案，式IC中R2是(S)-乙基。
根據一個優選實施方案，式IC的化合物中R3是氫。
根據一個優選實施方案，式IC的化合物中R4是F，Cl，CN，或CF3。
根據更優選的實施方案，式IC的化合物中R4是Cl。
根據一個優選實施方案，式IC的化合物中T是O。
根據一個優選實施方案，如果存在於式IC的化合物中的話，Ar任選被CF3或滷素取代(優選，滷素是氯或氟)。
這裡使用的″C1-6″表示存在1、2、3、4、5、或6個碳原子(或任選取代其的雜原子)。
根據更優選的實施方案，本發明提供選自下表1的式I化合物表1



根據另一個實施方案，本發明提供藥物組合物，其包括a)如上定義的式I的化合物，或其藥學上可接受的鹽；和b)藥學上可接受的載體，助劑或賦形劑。
根據一個優選實施方案，本發明的藥物組合物包括
a)式IA、式IB、或式IC的化合物；和b)藥學上可接受的載體，助劑或賦形劑。
根據更優選的實施方案，本發明的藥物組合物包括選自上表1的化合物。
本發明的化合物可以以開鏈形式1或者環化半縮酮形式2的形式存在於溶液中。在這裡，每一種異構形式的代表均意味著包括另一種異構形式。
1型 2型對本領域技術人員來說將顯而易見的是，本發明的某些化合物可以以互變異構形式或水合形式存在，化合物的所有這些形式均在本發明的範圍之內。
除非另有說明，在此描述的結構也意味著包括所述結構的所有立體化學形式；即，對於各個不對稱中心來說的R和S構型。因此，本發明化合物的單一立體化學異構體以及對映異構和非對映混合物均在本發明的範圍之內。除非另有說明，在此描述的結構也意味著包括只在一個或多個同位素富集的原子存在下時有差別的化合物。例如，除了把氫置換為氘或氚或者把碳置換為13C-或14C-富集的碳以外，具有本發明結構的化合物均在本發明的範圍之內。
一般說來，本發明的化合物可以通過本領域技術人員已知的用於類似化合物的方法製備。本發明化合物的合成路線在WO01/42216中進行過一般性的描述。為了舉例說明，提供用於合成本發明化合物的以下流程I-IV。
流程圖I 試劑(a)EDC/DMAP/HOBt/THF；(b)Dess-Martin過碘烷；(c)TFA/DCM在以上流程I中，使用以下縮寫EDC是1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺；HOBt是1-羥基苯並三唑；THF是四氫呋喃；TFA是三氟乙酸；DCM是二氯甲烷；DMAP是4-二甲基氨基吡啶。酸A與氨基醇B偶合形成醯胺C。化合物C中的羥基被氧化得到酮，隨後叔丁基酯發生酸水解，形成游離酸I』。
在其中CH2Y是CH2F的氟甲基酮的情況下，氨基醇B可以根據Revesz等人的方法得到Revesz等人，Tetrahedron Lett.，35，9693(1994)。在其中CH2Y中的Y是2，3，5，6-四氟苯氧基、2，4，6-三氟苯氧基、或2，3，6-三氟苯氧基的氟取代的苯氧基酮的情況下，氨基醇B可以用類似於Semple等人所述的方法得到，Semple等人，Bioorganic andMedicinal Chemistry Letters，7，1337(1997)(流程II)。
流程圖II 試劑(a)KF/DMF/Ar2OH；(b)NaBH4/THF；(c)H2/Pd/C/MeOH在以上流程II中，使用以下縮寫KF是氟化鉀；DMF是N，N-二甲基甲醯胺；Ar2OH或者是2，3，5，6-四氟苯酚、2，4，6-三氟苯酚或者是2，3，6-三氟苯酚；THF是四氫呋喃；MeOH是甲醇。
市售的溴酮D與適當取代的氟苯酚和氟化鉀反應，得到苯氧基酮E。然後，用硼氫化鈉將該酮還原，得到醇F，該醇通過鈀/碳催化劑加氫，得到氨基醇B′(Ar2＝氟取代的苯基)。
流程圖III
試劑(a)加熱；(b)濃HCl/IPA；(c)TFA/DCM在以上流程III中，使用以下縮寫IPA是異丙醇；TFA是三氟乙酸，DCM是二氯甲烷。
可以用流程圖III所示的合成步驟製備手性形式的異喹啉-1-酮酸衍生物(式I中，X＝C)。原料異香豆素G是通過類似於Narasimhan等人和Margaretha等人的方法製備的Narasimhan等人，Synthesis，797(1975)和Margaretha等人，Tetrahedron，56，6763(2000)，除非另有說明。異香豆素G首先與市售的(S)-2-氨基丁酸叔丁基酯一起加熱。所得的化合物再與濃鹽酸在異丙醇中反應，得到異喹啉-1-酮叔丁基酯，對其用三氟乙酸脫保護得到酸H。該酸之後與氨基醇B偶合(流程I)。
流程圖IV
試劑(a)LiOH/THF/H2O；(b)(S)-2-氨基丁酸叔丁基酯/EDC/HOBt/DMAP/THF；(c)SnCl2/MeOH；(d)原甲酸三甲酯/AcOH/回流；(e)TFA/DCM；(f)R4-TH/K2CO3/DMF在以上流程IV中，使用以下縮寫AcOH是乙酸，R4-TH可以是2-氯苯酚，3-氯苯酚，3-氟苯酚，或2，4-二氯苯酚，或苯硫酚或3-氟苯硫酚。(4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)酸衍生物A(X＝N)的手性形式是使用類似於Makino等人的方法製備的，Makino等人，Synlett，11，1670(2000)。可商購的5-氯-2-硝基苯甲酸甲酯J用氫氧化鋰水解成酸，所得的酸再與可商購的(S)-2-氨基丁酸叔丁基酯偶合，形成醯胺K。使用氯化錫(II)還原硝基，隨後用原甲酸三甲酯進行酸催化的環縮合，得到喹唑啉，用三氟乙酸對其脫保護，形成4-氧代-4H-喹唑啉-3-基酸L。然後，將該酸與氨基醇B偶合(流程圖I)。或者，5-氯-2-硝基苯甲酸甲酯J可以與適當取代的酚或苯硫酚通過在DMF中與碳酸鉀一起加熱而反應，得到相應的6-苯氧基(Y＝O)或6-苯基硫烷基(Y＝S)衍生物。對其用氫氧化鋰進行處理，得到酸M，對該酸可以進行進一步的處理(流程圖IV，步驟b-e)，得到4-氧代-4H-喹唑啉-3-基酸N，此酸然後如先前所述與氨基醇B偶合。也可以以類似的方式對2-硝基苯甲酸進行處理，得到未取代的4-氧代-4H-喹唑啉-3-基酸。
因此，本發明的一個方面，涉及製備式I化合物的一般方法，其包括以下步驟使式II的酸或酸衍生物
與式B的氨基醇反應，形成式III的化合物， 和將中間體III轉化為化合物I，其中R7是適當的保護基，Y，X，R2，R3，和R4如本發明任一實施方案中所述。適當的保護基對有經驗的專業人員來說是公知的(如參見，″Protective Groups in OrganicSynthesis″，第三版，Greene，T.W.和Wuts，P.G.，編，John Wiley Sons，NewYork1999，其全部內容在此引入作為參考)。優選R7是C1-6直鏈或支鏈烷基。更優選，R7是叔丁基。
式II的化合物和式B的化合物可以在用於使氨基化合物和酸化合物偶合的任何條件下反應。這種條件對有經驗的專業人員來說是眾所周知的。優選的偶合條件參見本發明的流程圖和實施例。
式III的化合物可以在用於將羥基轉化為羰基和將受保護的酸轉化為游離酸的任何條件下轉化為式I的化合物。這種條件對有經驗的專業人員來說是眾所周知的。優選用於由羥基製備羰基的條件是本發明流程圖和實施例中描述的氧化條件。當R7是叔丁基時，用於把受保護的酸脫保護的優選條件是本發明中流程圖和實施例中描述的水解條件。
該方法尤其可用於製備本發明的手性化合物，其中帶有R2取代基的碳富立體化學。如下文舉例說明(例如參見，實施例1-22)的那樣，可以以手性的形式獲得式II的中間體酸或酸衍生物。在本發明中，例如，其中X是氮的喹唑啉-4-酮(例如參見，實施例5-8，12-18，20，和22)和其中X是CH的異喹啉-1-酮(參見例如，實施例1-4，9-11，19，和21)。II和B偶合形成III的反應可以根據任何適當的方法進行。將III轉化為I可以如本發明中所述或者根據本領域技術人員熟知的其他方法進行。
某些式II的手性中間體可用於製備本發明化合物的過程中。優選的中間體由化合物IIA表示 其中X、R2、R3、和R4如本發明任何實施方案中所述。
根據對於式II和IIA化合物的更優選的實施方案，R2是乙基或異丙基。
對本發明的化合物，可以測定其抑制細胞凋亡的能力、IL-1β的釋放或直接測定其天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶活性。用於每一活性的試驗在本領域中都是已知的，具體內容參見實施例23-25。
如果在這些組合物中使用本發明化合物的可藥用鹽，這些鹽優選是從無機或有機酸和鹼衍生的鹽。所述的酸鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽(digluconate)、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、撲酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一酸鹽。鹼鹽包括銨鹽、鹼金屬鹽例如鈉和鉀鹽、鹼土金屬鹽例如鈣和鎂鹽，與有機鹼的鹽例如二環己基胺鹽、N-甲基-D-葡糖胺鹽以及與胺基酸例如精氨酸、賴氨酸等形成的鹽。
此外，鹼性的含氮基團可以用一些試劑季銨化，如低級烷基滷化物例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯例如硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊酯；長鏈滷化物例如癸基、十二烷基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基滷化物例如苄基和苯乙基溴化物等。由此製得可溶解或分散於水或油中的產物。
本發明的組合物和方法中所用的化合物還可以通過增加適宜的功能基來進行修飾，以提高其選擇性的生物學活性。這些修飾是本領域已知的，包括增加向指定的生物學系統(例如血液、淋巴系統、中樞神經系統)中的生物學滲透性、增加口服生物利用度、增加溶解度從而能夠通過注射給藥、改變代謝以及改變排洩速率。
可用於這些組合物的可藥用載體包括但不僅限於，離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白例如人血清白蛋白、緩衝物質例如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質例如硫酸鉀、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠態二氧化矽、三矽酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素類物質、聚乙二醇、羧基甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛蠟。
根據一個優選的實施方案，本發明的組合物被配製成用於向哺乳動物、優選人類給藥。
本發明的這些藥物組合物可以口服、胃腸外、通過吸入噴霧、局部、直腸、經鼻、頰部、陰道或通過植入的儲庫給藥。本文所用的術語「胃腸外」包括皮下、靜脈內、肌肉內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、肝內和顱內注射或輸注技術。優選將組合物口服或靜脈內給藥。
本發明組合物的無菌可注射形式可以是含水或油性的混懸液。這些混懸液可以按照本領域已知的技術用適宜的分散劑或溼潤劑以及助懸劑配製。無菌可注射製劑還可以是在無毒的胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或混懸液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的賦形劑和溶劑是水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，通常用無菌的不揮髮油作為溶劑或懸浮介質。為此，可以使用任何溫和的不揮髮油，包括合成的單或二甘油酯。脂肪酸例如油酸及其甘油酯衍生物可用於製備可注射製劑，也可使用天然的可藥用油例如橄欖油或蓖麻油、特別是其聚氧乙基化的形式。這些油溶液或混懸液還含有長鏈的醇稀釋劑或賦形劑，例如羧基甲基纖維素或常用於配製可藥用劑型、包括乳液和混懸液的類似分散劑。其它常用的表面活性劑例如Tweens、Spans和其它常用於生產可藥用固體、液體或其它劑型的乳化劑或生物利用度促進劑也可用於製備製劑的目的。
本發明的藥物組合物可以以任何可口服的劑型口服給藥，包括但不僅限於膠囊、片劑、含水混懸液或溶液。對於口服使用的片劑，常用的載體包括乳糖和玉米澱粉。潤滑劑例如硬脂酸鎂也經常使用。對於膠囊形式的口服給藥，可以使用的稀釋劑包括乳糖和乾燥的玉米澱粉。當需要用含水混懸液進行口服給藥時，可將活性成分與乳化劑或助懸劑混合。如需要，還可加入某些甜味劑、矯味劑或著色劑。
或者，可將本發明的藥物組合物以栓劑的形式用於直腸給藥。所述栓劑可以通過將藥物與適宜的非刺激性的賦形劑混合物進行製備，所述賦形劑在室溫下是固體但在直腸溫度下是液體，因此可以在直腸中熔化而釋放出藥物。這些材料包括可可脂、蜂蠟和聚乙二醇。
本發明的藥物組合物還可以局部給藥，特別是當治療靶點包括易於通過局部塗抹而達到的區域或器官時，包括眼、皮膚或腸道下部的疾病。適用於這些區域和器官的局部製劑很容易製備。
對於腸道下部的局部應用可以通過直腸栓劑(見上)或適宜的灌腸製劑的形式進行。也可以使用局部經皮貼劑。
對於局部應用，可將藥物組合物配製成含有懸浮或溶解在一種或多種載體中的活性成分的適宜軟膏。用於本發明化合物局部給藥的載體包括但不僅限於，礦物油、液體礦脂、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化用蠟和水。或者，可將藥物組合物配製成含有懸浮或溶解在一種或多種可藥用載體中的活性成分的適宜的洗劑或霜劑。適宜的載體包括但不僅限於，礦物油、脫水山梨醇一硬脂酸酯、聚山梨酯60、鯨蠟基酯蠟、鯨蠟硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。
對於眼部應用，可將藥物組合物配製成在等滲的、調節過pH值的鹽水中的微粉化的混懸液形式，或者，優選是在等滲的、調節過pH值的鹽水中的溶液形式，其中可以不含或含有防腐劑例如氯苄烷銨。或者，對於眼部應用，可將藥物組合物配製成軟膏例如凡士林的形式。
本發明的藥物組合物還可以通過鼻氣霧劑或吸入劑給藥。這些組合物可以按照藥物製劑領域公知的技術製備，並可用苄醇或其它適宜的防腐劑、用於提高生物利用度的吸收促進劑、氟化碳和/或其它常規的增溶劑或分散劑製備成在鹽水中的溶液的形式。
上述組合物特別適用於涉及如下疾病的治療應用IL-1介導的疾病、細胞凋亡介導的疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、破壞性骨疾病、增殖性疾病、傳染性疾病、變性疾病、與細胞死亡有關的疾病、過度飲酒、病毒介導的疾病、視網膜疾病、眼色素層炎、炎性腹膜炎、骨關節炎、胰腺炎、哮喘、成人呼吸窘迫症候群、腎小球性腎炎、類風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、硬皮病、慢性甲狀腺炎、格累夫斯氏病、自身免疫性胃炎、糖尿病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性中性白細胞減少症、血小板減少症、慢性活動性肝炎、重症肌無力、炎性腸疾病、節段性迴腸炎、牛皮癬、特應性皮炎、疤痕形成、移植物對抗宿主的疾病、器官移植排斥反應、燒傷後的器官細胞凋亡、骨質疏鬆、白血病和相關疾病、骨髓發育不良症候群、多發性骨髓瘤-相關性骨疾病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、轉移性黑瘤、卡波濟氏肉瘤、多發性骨髓瘤、出血性休克、膿毒病、膿毒性休克、燒傷、志賀氏菌病、早老性痴呆、帕金森氏症、杭廷頓氏舞蹈症、甘迺迪氏疾病、朊病毒疾病、腦局部缺血、癲癇、心肌缺血、急性和慢性心臟病、心肌梗塞、充血性心衰、動脈粥樣硬化、冠狀動脈旁路移植術、脊柱肌肉萎縮、肌萎縮性側索硬化、多發性硬化、HIV-相關性腦炎、衰老、脫髮、中風引起的神經病性損傷、潰瘍性結腸炎、創傷性腦損傷、脊髓損傷、B型肝炎、C型肝炎、庚型肝炎、黃熱病、登革熱或日本腦炎、各種形式的肝臟疾病、腎臟疾病、多囊性腎疾病、與幽門螺旋桿菌有關的胃和十二指腸潰瘍、HIV感染、結核病和腦膜炎。所述化合物和組合物還可用於治療與冠狀動脈旁路移植術有關的併發症。上述組合物中的化合物含量應足以在通過實施例中所描述的任何試驗測量時產生可觀察到的疾病嚴重程度或天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶活性的下降和/或細胞凋亡的減少。
根據另一個實施方案，本發明的組合物還可以含有其它治療劑。所述治療劑包括但不僅限於，溶解血栓的藥物例如組織纖溶酶原激活物和鏈激酶。當使用第二種藥物時，可將第二種藥物以獨立的劑量形式給藥，或作為與本發明化合物或組合物的單一劑量形式的一部分給藥。所述化合物與另外的藥劑兩者的劑量濃度都應當是單一療法中通用給藥量的10-100％，更優選約10-80％。
還應當理解，對於任何特定患者的具體劑量和治療方案取決於各種因素，包括所用的具體化合物的活性、年齡、體重、一般健康情況、性別、飲食、給藥時間、排洩速率、藥物聯用、以及主治醫師的判斷和所治療的具體疾病的嚴重程度。活性成分的量還取決於組合物中的具體化合物和其它治療劑(如果存在的話)。
在某些實施方案中，本發明的化合物可以經口或腸道外給藥，為了達到所需的治療效果，劑量為每天約0.01毫克/千克-約50毫克/千克患者體重，優選約1毫克/千克-約25毫克/千克患者體重，每天給藥一次或多次。
在一個優選的實施方案中，本發明提供了對患有上述疾病之一的哺乳動物進行治療的方法，該方法包括向所述哺乳動物施用上述可藥用組合物的步驟。在該實施方案中，如果還向患者施用其它治療劑或天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑，可將其與本發明的化合物一起以單一的劑型給藥，或者將其作為獨立的劑型給藥。當以獨立的劑型給藥時，可將其它天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑或藥物在施用合有本發明化合物的可藥用組合物之前、同時或之後給藥。
本發明的化合物或其藥學上可接受的組合物也可以引入到用於塗漬可植入的醫療器械，如假肢、人工瓣膜、脈管移植物、斯坦特固定模和導管的組合物中。因此，本發明在另一方面，包括用於塗漬可植入的器械的組合物，其包括以上概述的在這裡所列大類與亞類中的本發明化合物，和適合於塗漬所述可植入器械的載體。再一方面，本發明包括塗有一種組合物的可植入器械，所述組合物包括以上概述的在這裡所列大類與亞類中的本發明化合物，和適合於塗漬所述可植入器械的載體。
本發明的另一方面，涉及在生物樣品或患者中抑制天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶活性的方法，該方法包括給予患者式I的化合物或含有所述化合物的組合物，或者將所述生物樣品與式I的化合物或含有所述化合物的組合物接觸。這裡使用的術語″生物樣品″，包括但不限於細胞培養物或者其提取物；得自哺乳動物的活組織檢查物質或其提取物；以及血液，唾液，尿，糞便，精液，淚，或其他的體液或其提取物。
在生物樣品中抑制天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶活性可用於許多本領域技術人員公知的目的。這種目的的實施例包括但是不局限於，輸血，器官移植，生物標本儲存，和生物檢定。
本發明的化合物可用於保藏細胞，如可能需要器官移植的細胞的方法中，或者用於保藏血液製品。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑的類似的用途參見(Schierle等人，Nature Medicine，5，97(1999))。所述方法涉及用含有天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑的溶液處理要進行保藏的細胞或者組織。所需天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑的量將取決於抑制劑對於所給細胞類型的有效性和從apoptotic細胞死亡起保藏細胞所需的持續時間。
具體實施例方式
為了更全面地理解本發明，描述了如下製備和試驗實施例。這些實施例的目的僅僅是為了說明，並不以任何方式對本發明的範圍構成限定。
實施例1(S)-3-[2-(7-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-氧代戊酸 方法A5-氯-2-(2-甲氧基乙烯基)-苯甲酸 向冷卻的(0℃)甲氧基甲基三苯基膦氯化物(39g)在乙醚(200ml)和叔丁醇(50ml)混合物中形成的漿液中分步加入叔丁醇鉀(12.8g)。所得混合物在0℃下攪拌1小時，然後在15分鐘內滴加2-甲醯基-5-氯苯甲酸(根據J.Org.Chem.，61，3402(1996))製備)(10g)的乙醚(50ml)溶液。所得混合物在0℃下攪拌1小時，然後升溫到室溫並另外攪拌90分鐘。混合物用水(200ml)稀釋，除去有機相。水相用1M HCl酸化到pH值＝1，並用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。合併的萃取液用鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)，過濾和濃縮。殘餘物通過急驟層析純化(50％的乙酸乙酯/己烷)，得到副標題化合物，黃色固體(9.13g，80％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.70-3.81(3H，s)，6.20(0.3H，d，cis烯)，6.30(0.3H，d，cis烯)，6.80(0.7H，d，trans烯)，7.01(0.7H，d，trans烯)7.30-8.15(3H，mppm.
方法B7-氯-異苯並吡喃-1-酮 在0℃下將濃硫酸(15ml)加入到5-氯-2-(2-甲氧基乙烯基)-苯甲酸(4.43g)中。混合物攪拌2小時，然後用冰/水稀釋。產物用乙酸乙酯(3×15ml)萃取，合併的萃取液用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌。溶液經乾燥(硫酸鎂)，過濾和濃縮。殘餘物通過急驟層析純化(0-5％的乙酸乙酯/己烷)，得到副標題化合物，白色固體(3.04g，81％)。
mp109.8-110.9℃.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.51(1H，d)，7.28-7.32(1H，m)，7.41(1H，d)，7.64-7.70(1H，m)，8.28(1H，m)ppm.
方法C(S)-2-[3-(1-叔丁氧基羰基-丙基氨基)-7-氯-1-氧代-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基]-丁酸叔丁基酯 將7-氯-異苯並吡喃-1-酮(10g)和(S)-2-氨基丁酸叔丁基酯(22g)的混合物在85℃加熱24小時。然後，將混合物冷卻並通過急驟層析純化(5-25％的乙酸乙酯/己烷)，得到副標題化合物，黃色油狀物(17.1g，64％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.68-1.32(6H，m)，1.50(21H，m)，1.92(1H，m)，2.15(1H，m)，2.82-3.40(3H，m)，4.41(1H，m)，4.68(1H，m)，7.11(1H，m)，7.35-7.52(1H，m)，8.05(1H，m)ppm.
方法D(S)-2-(7-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁酸叔丁基酯 在0℃下，向攪拌的2-[3-(1-叔丁氧基羰基-丙基氨基)-7-氯-1-氧代-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基]-丁酸叔丁基酯(8.58g)的異丙醇(180ml)溶液中加入濃鹽酸(20ml)。使得所得混合物升溫至室溫，並攪拌18小時。然後將混合物用乙酸乙酯(500ml)和水(150ml)稀釋。分離有機相併先用水、然後用鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)，過濾和濃縮。得到副標題產物，黃色固體(5.57g，97％)。
m.p.111.3-111.8℃；[α]25D-52.3°(c＝1，CHCl3)；IR(固體)1731.4，1649.5，1593.2，1229.6，1152.8，901.9cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.95(3H，t)，1.48(9H，s)，1.95(1H，m)，2.30(1H，m)，5.55(1H，m)，6.40(1H，m)，7.15(1H，m)，7.49(1H，m)，7.61(1H，m)，8.40(1H，m)ppm；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ10.9，24，8，28.1，59.2，82，8，105.7，127.3，127.8，128.1，129.5，133.1，133.2，135.4，161.8，170.2；MS ES(+)322.4(M+H).
方法E(S)-2-(7-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁酸 將(S)-2-(7-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁酸叔丁基酯(322mg)的二氯甲烷(14ml)溶液冷卻到0℃。加入三氟乙酸(3.5ml)，並使所得混合物升溫至室溫，攪拌2小時。然後將混合物減壓濃縮，殘餘物再溶於二氯甲烷中。這一過程重複若干次以除去過量的三氟乙酸。所得固體在乙醚中成漿，過濾並用更多的乙醚洗滌。然後將固體真空乾燥至恆重。得到副標題產物同，白色固體(236mg，89％)m.p.
159.6-160.1℃；[α]24D-47.0°(c＝1.01，CHCl3)；IR(固體)1731.4，1639.3，1577.8，1209.1，1168.1cm-1；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ0.82(3H，t)，2.00-2.25(2H，m)，5.20(1H，m)，6.70(1H，d)，7.49(1H，d)，7.70-7.81(2H，m)，8.18(1H，s)ppm；13C NMR(100MHz，d6-DMSO)δ10.8，22.7，60.8，104.9，126.5，126.6，128.8，131.6，132.5，133.1，135.8，160.5，171.7；MS ES(+)266.27(M+H).
方法F(S)-3-[2-(7-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-羥基戊酸叔丁基酯
將攪拌的(S)-2-(7-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁酸(15g)，3-氨基-5-氟-4-羥基戊酸叔丁基酯(如Tetrahedron Lett.，35，9693(1994)中所述製備)(12.9g)，HOBt(8.4g)，DMAP(7.2g)和THF(450ml)的混合物冷卻到0℃，然後加入EDC(11.9g)。使得混合物在16小時內升溫至室溫，然後減壓濃縮。殘餘物通過急驟層析純化(30-60％醋酸乙酯/己烷)，得到副標題化合物，白色泡沫狀物(24.6g，96％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.92(3H，m)，1.13-1.50(9H，m)，1.95(1H，m)，2.25(1H，m)，2.45-2.78(2H，m)，3.68-4.60(5H，m)，5.50(1H，m)，6.60(1H，m)，7.21-7.60(4H，m)，8.20-8.31(1H，m)ppm；19F NMR(376MHz，CDCl3)(質子去偶的)δ-229.6，-229.7，-230.5，-230.6.
方法G(S)-3-[2-(7-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-氧代戊酸叔丁基酯 在0℃下，對攪拌的3-[2-(7-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-羥基戊酸叔丁基酯(47.8g)的無水DCM(1.2升)溶液用1，1，1-三乙醯氧基-1，1-二氫-1，2-benziodoxo1-3(1H)-酮(53.5g))進行處理。所得混合物在0℃保存2小時，用乙酸乙酯稀釋，然後傾入到1∶1的飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和硫代硫酸鈉水溶液混合物中。除去有機層，水層再用乙酸乙酯萃取。合併的有機萃取液經乾燥(硫酸鎂)，過濾和濃縮。殘餘物通過急驟層析純化(20-40％的乙酸乙酯/己烷)，得到副標題化合物，白色固體(41.9g，88％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.00(3H，t)，1.29(5H，s)，1.41(4H，s)，2.01(1H，m)，2.29(1H，m)，2.61-3.05(2H，m)，4.77(3H，m)，5.50(1H，m)，6.60(1H，m)，7.20-7.34(2H，m)，7.51(1H，m)，7.62(1H，m)，8.41(1H，m)ppm；19FNMR(376MHz，CDCl3)(質子去偶的)δ-231.89，-232.30.
(S)-3-[2-(7-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-氧代戊酸 使用類似於方法E中所述的方法製備，產物經分離為白色固體(98％)。
IR(固體)1782.7，1741.7，1644.4，1593.2，1536.8，1209.1，1168.1，1055.5，840.4cm-1；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ0.82(3H，m)，1.81-2.25(2H，m)，2.25-3.11(2H，m)，4.15-5.60(4H，m)，6.70(1H，m)，7.55(1H，m)，7.78(2H，m)，8.15(1H，s)，8.35-9.00(1H，brm)ppm；13C NMR(100MHz，d6-DMSO)δ10.6，23.0，24.0，24.6，32.9，34.6，34.7，47.7，52.2，52.3，58.2，58.23，58.7，59.1，83.4，83.5，85.2，85.3，103.9，104.5，104.7，104.8，126.5，126.6，128.8，131.3，131.4，131.，133.1，135.7，135.73，160.8，170.2，170.3，170.4，172.0，173.1，202.6，202.7；19F NMR(376MHz，d6-DMSO)(質子去偶的)δ-226.70，-226.75，-227.51，-230.5，-231.16，-232.61，-232.67，-233.37；MS ES(-)395.33(M-H).
實施例2(S)-3-[2-(7-三氟甲基-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-氧代戊酸 這是使用類似於方法A-G中所述的方法製備的(2-甲醯基-5-三氟甲基苯甲酸是使用類似於J.Org.Chem.，61，3402(1996)中所述的方法製備的)。產物經分離，為白色固體(93％，最後一步)。
IR(固體)1782.6，1746.8，1644.4，1629.0，1603.4，1321.8，1275.7，1168.1，1127.2，927.5cm-1；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ0.82(3H，m)，1.85-2.21(2H，m)，2.35-3.21(2H，m)，4.20-5.75(4H，m)，6.80(1H，m)，7.68(1H，m)，7.92(1H，m)，8.04(1H，m)，8.49(1H，s)，8.56-8.95(1H，brm)ppm；19F NMR(376MHz，d6-DMSO)(質子去偶的)δ-61.32，-61.38，-226.70，-226.76，-230.47，-231.06，-232.61，-232.67；MS ES(-)429.30(M-H).
實施例3(S)-3-[2-(6-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-氧代戊酸
方法H4-氯-N-甲基-苯甲醯胺 向0℃的4-氯苯甲醯氯(4.50g)的二氯甲烷(10ml)溶液中逐滴加入8M的甲胺乙醇溶液。該溶液攪拌16小時後蒸乾。殘餘物用飽和碳酸氫鈉溶液(10ml)稀釋，用乙酸乙酯萃取3次(3×20ml)，有機層用鹽水(10ml)洗滌，乾燥(MgSO4)並真空濃縮，得到副標題化合物，白色固體(4.33g，97％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.00(3H，s)，7.40(1H，br)7.40(1H，d)，7.70(1H，d)ppm.
方法I2-甲醯基-4-氯-N-甲基苯甲醯胺 向4-氯-N-甲基-苯甲醯胺(3.1g)的THF(30ml)溶液中加入正丁基鋰(30.1ml的2.5M己烷溶液)，並將溶液回流45分鐘。然後把溶液冷卻到0℃，在2分鐘內滴加N-甲基甲醯苯胺(9.27ml)。然後將溶液回流2小時，冷卻到環境溫度，加入水(80ml)並用2M HCl將溶液酸化到pH值＝1。將溶液用乙酸乙酯萃取3次(3×50ml)，用鹽水(20ml)洗滌，乾燥(MgSO4)並真空濃縮。所得棕色油在二氧化矽上通過急驟層析純化，得到副標題產物，淺黃色固體(2.13g，59％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.90(3H，s)，4.25(1H，d，J)5.60(1H，d，J)，7.35(2H，s)，7.60(1H，s)ppm.
方法J2-甲醯基-4-氯苯酸 將2-甲醯基-4-氯-N-甲基苯甲醯胺(3.19g)和10M鹽酸(30ml)的混合物回流加熱18小時。將混合物冷卻並用飽和碳酸氫鈉溶液鹼化。之後將溶液用乙酸乙酯洗滌，然後用2M鹽酸酸化。產物用乙酸乙酯萃取，合併的萃取經硫酸鎂乾燥。然後將溶液過濾和濃縮。得到2-甲醯基-4-氯苯酸，黃色固體(2.22g，75％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.65(0.5H，brs)，7.50(2H，m)，7.65(1H，m)，7.85(0.5H，brm)，8.05(1H，m)ppm.
(S)-3-[2-(6-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-氧代戊酸 這是使用類似於方法A-G中所述的方法，從2-甲醯基-4-氯苯酸(如方法H-J所述製備)製備的。通過製備HPLC分離標題化合物，得到白色固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.97(3H，m)，1.90-2.31(2H，m)，2.65-3.30(2H，m)，4.20-5.75(4H，m)，6.65(1H，m)，7.40-7.60(3H，m)，8.29(1H，m)，9.20(1H，br)ppm；19F NMR(376MHz，CDCl3)(質子去偶的)δ-229.80，-232.07，-232.43，-232.58，-232.78；MS ES(-)395.26(M-H).
實施例4(S)-3-[2-(6-三氟甲基-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-氧代戊酸 這是使用類似於A-G中所述的方法，從2-甲醯基-4-三氟甲基苯甲酸(使用類似於H-J所述的方法，從4-三氟甲基苯甲酸製備)製備的。分離出標題化合物，為白色固體(95％，最後一步)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.99(3H，m)，1.90-2.30(2H，m)，2.60-3.50(2H，m)，4.20-5.75(4H，m)，6.80(1H，m)，7.50-7.90(3H，m)，7.92(1H，m)，8.40-8.60(1H，m)ppm；19F NMR(376MHz，d6-DMSO)(質子去偶的)δ-63.60，-63.61，-63.65，-231.67，-231.80，-232.06，-232.18；MS ES(+)431.26(M+H).
實施例5(S，S)-3-[2-(6-氯-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁醯氨基]-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸
方法K(S)-2-(5-氯-2-硝基苯甲醯基氨基)-丁酸叔丁基酯 在0℃下，向攪拌的5-氯-2-硝基苯甲酸(4.68g)的無水四氫呋喃(100ml)溶液中加入(S)-2-氨基丁酸叔丁基酯鹽酸鹽(5g)，HOBt(3.45g)，DMAP(2.98g)，隨後加入EDC(4.88g)和二異丙基乙胺(3.30g)。反應混合物攪拌10分鐘，然後升溫到室溫並攪拌16小時，之後減壓濃縮。所得殘餘物在EtOAc(100ml)和飽和碳酸氫鈉溶液(100ml)之間分配，分離出有機層，進一步用1M的鹽酸和飽和鹽水溶液洗滌，乾燥(MgSO4)，過濾和濃縮，得到副標題化合物，淺黃色油狀物(6.82g，產率68％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05(1H，d)，7.55(2H，m)，6.4(1H，m)4.7(1H，m)，2.1(1H，m)，1.95(1H，m)，1.5(9H，s)，1.0(3H，t)ppm.
方法L(S)-2-(2-氨基-5-氯-苯甲醯基氨基)-丁酸叔丁基酯
在環境溫度下，向攪拌的(S)-2-(5-氯-2-硝基苯甲醯基氨基)-丁酸叔丁基酯(5.72g)的乙醇(250ml)溶液中加入氯化錫(II)二水合物(18.8g)。混合物在環境溫度下攪拌16小時。體積在減壓下降低到大約50ml，然後將反應混合物用1M NaOH稀釋，直到形成的沉澱再溶解(400ml)。然後用乙醚萃取水溶液(3×100ml)。合併有機萃取液，用鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)，並濃縮，得到副標題化合物，黃色固體(4.60g，產率88％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.4(1H，s)，7.2(1H，d)，6.6(2H，m)，5.5(2H，m)，4.6(1H，m)，2.0(1H，m)，1.85(1H，m)，1.5(9H，s)，0.95(3H，t)ppm.
方法M(S)-2-(6-氯-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁酸叔丁基酯 將2-(2-氨基-5-氯苯甲醯基氨基)-丁酸叔丁基酯(2.82g)溶於原甲酸三甲酯(50ml)中。加入乙酸(10ml)，並將反應混合物回流48小時。之後，除去溶劑，殘餘物在乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉溶液之間分配。水層進一步用乙酸乙酯萃取，合併的有機萃取液用鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)，並減壓濃縮，得到黃色油狀物。這通過急驟層析純化(20％的EtOAc石油醚)，得到副標題化合物，油狀物(1.23g，產率42％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.25(1H，s)，8.05(1H，s)，7.7(2H，m)，5.3(1H，m)，2.3(1H，m)，2.0(1H，m)，1.5(9H，s)，1.0(3H，t)ppm.
2-(6-氯-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁酸 這是使用類似於方法E中所述的方法製備的。得到的副標題化合物為淺白色固體。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.3(1H，s)，8.15(1H，s)，7.8(1H，d)，7.7(1H，d)，5.2(1H，m)，2.4(1H，m)，2.2(1H，m)，0.95(3H，t)ppm.
方法N(S)-3-苄氧基羰基氨基-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟-苯氧基)-戊酸叔丁基酯 在室溫和氮氣氣氛下，把氟化鉀(2.8克)分步加入到攪拌的(S)-3-苄氧基羰基氨基-5-溴-4-氧代戊酸叔丁基酯(18.6g)和2，3，5，6-四氟苯酚(9.3g)的無水DMF(250mL)溶液中。然後將混合物攪拌18小時，隨後用乙酸乙酯和水猝滅。除去有機層，用碳酸氫鈉溶液洗滌，乾燥(硫酸鎂)和濃縮，得到副標題產物，灰白色固體(21.1g，96％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.43(9H，s)，2.76(1H，dd)，3.06(1H，dd)，4.67-4.71(1H，m)，5.12(1h，d)，5.22(1H，d)，5.86(1H，d)，7.35-7.38(5H，m)ppm；19F NMR(376MHz，CDCl3)(質子去偶的)δ-139.98，-140.00，-140.04，-140.06，-157.05，-157.07，-157.11，-157.13；MS ES(+)486.23(M+H).
方法O(3S)-3-苄氧基羰基氨基-4-羥基-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)-戊酸叔丁基酯 在-20℃和氮氣保護下，將NaBH4(1.65g)分步加入到攪拌的3-苄氧基羰基氨基-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)-戊酸叔丁基酯(21.1g)的無水THF(220mL)溶液中。在此溫度下攪拌3小時後，通過加入飽和氯化銨溶液猝滅反應，並用DCM稀釋。除去有機層，水層再用DCM萃取。合併的有機萃取液用鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)，並濃縮。殘餘物通過柱層析純化(10％-20％乙酸乙酯/己烷)。得到副標題化合物，白色固體(14.6g，73％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.45(9H，s)，2.61-2.77(2H，m)，3.16-3.36(1H，2xbrd d)，4.12-4.22(2H，m)，4.30-4.33(1H，m)，5.44-5.69(1H，2xd)，6.78-6.86(1H，m)，7.35-7.36(5H，m)ppm；19F NMR(346MHz，CDCl3)(質子去偶的)δ-139.87，-139.89，-139.93，-139.95，-139.98，-157.02，-157.05，-157.06，-157.08，-157.09，-157.10，-157.12；ES(+)488.27(M+H).
方法P(3S)-3-氨基-4-羥基-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)-戊酸叔丁基酯 將10％的Pd/碳(2.92g)分步加入到已經在氮氣下脫氣(5次)的3-苄氧基羰基氨基-4-羥基-5-2，3，5，6-四氟苯氧基)-戊酸叔丁基酯(14.6g)的無水MeOH(350mL)溶液中。反應在氮氣和氫氣下進一步脫氣(3次和5次)，並在室溫下攪拌20分鐘。過濾除去鈀催化劑，濾液濃縮得到副標題化合物，白色固體(9.5g，90％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.49(9H，s)，2.35-2.43(1H，m)，5.67-5.64(1H，m)，3.37-3.43(1H，m)，3.77-3.87(1H，m)，4.28-4.63(2H，m)，6.77-6.86(1H，m)ppm；19F NMR(346MHz，CDCl3)(質子去偶的)δ-139.95，-139.97，-140.00，-140.03，-140.05，-140.08，-140.11，-140.13，-157.15，-157.18，-157.21，-157.23，-157.27，-157.29.
(S，S)-3-[2-(6-氯-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁醯氨基]-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸 該化合物是使用類似於方法F、G和E中所述的方法製備的。得到的標題化合物為白色固體(TFA鹽)(94％，最後一步)。
IR(固體)3298.7，1741.4，1691.4，1660.3，1601.1，1517.4，1490.8，1320.6，1244.7，1174.5，1104.4，939.2，836.5，715.5，666.8 and 656.0cm-1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.05(1H，m)，8.4(1H，s)，8.05-7.5(4H，m)，5.45-5.15(3H，m)，4.6(1H，m)，2.25-2.0(2H，m) and 0.9-0.75(3H，m)ppm；19F NMR(376MHz，DMSO-d6)(質子去偶的)δ-140.57，-140.59，-140.63，-140.65，-141.02，-141.04，-141.08，-141.10，-156.75，-156.77，-156.81，-156.83，-156.94，-156.96，-157.00，-157.02；MS ES(+)544.2(M+H).
實施例6(S，S)-4-氧代-3-[2-(4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁醯氨基]-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸 該化合物是使用類似於方法F、G和E中所述的方法，用2-(4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁酸(使用類似於方法-K-M和E中描述的方法從2-硝基苯甲酸合成)和(3S)-3-氨基-4-羥基-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)-戊酸叔丁基酯(如方法N-P所述製備)製備的。得到的標題化合物為白色固體(TFA鹽)(85％，最後一步)。
IR(固體)1792.8，1726.3，1669.9，1521.4，1485.6，1183.5，1142.5，1091.3and 932.5cm-1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.0-8.65(1H，m)，8.35(1H，s)，8.1(1H，m)，7.8(1H，m)，7.65(1H，m)，7.55(2H，m)，5.4-4.3(4H，m)，2.8-2.5(2H，m)，2.2-2.0(2H，m)and 0.9-0.7(3H，m)ppm；19F NMR(376MHz，DMSO-d6)(質子去偶的)δ-140.57，-140.60，-140.63，-140.66，-141.03，-141.05，-141.09，-141.11，-156.77，-156.80，-156.83，-156.86，-156.94，-156.97，-157.00，-157.03；MS ES(+)510.26(M+H).
實施例7(S，S)-4-氧代-3-[2-(4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁醯氨基]-5-(2，4，6-三氟苯氧基)戊酸 該化合物是使用類似於方法F、G和E中所述的方法，用2-(4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁酸(使用類似於方法K-M和E中描述的方法從2-硝基苯甲酸合成)和(3S)-3-氨基-4-羥基-5-(2，4，6-三氟苯氧基)-戊酸叔丁基酯(如方法N-P所述從2，4，6-三氟苯酚製備)製備的。得到的標題化合物為白色固體(TFA鹽)(71％，最後一步)。
IR(固體)3308.9，3075.4，2928.4，1803.1，1726.9，1672.7，1612.1，1510.0，1478.7，1452.8，1407.6，1231.3，1199.3，1121.0，1040.4，997.6，933.1，839.7，772.9，720.3和698.4cm-1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ0.84-0.86(3H，m)，2.04-2.95(4H，)，4.05-5.48(5H，6)，7.13-7.21(2H，m)，7.54-7.57(1H，m)，7.69-7.72(1H，m)，7.84-7.88(1H，m)，8.07-8.13(1H，m)，8.38(1H，s)，8.60-8.97(1H，2xdd)ppm；19F NMR(376MHz，DMSO-d6)(質子去偶的)δ-115.4，-115.6，-124.9，-125.0，-125.6；MS ES(+)492.3(M+H).
實施例8(S，S)-4-氧代-3-[2-(4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁醯氨基]-5-(2，5，6-三氟苯氧基)戊酸 該化合物是使用類似於方法F、G和E中所述的方法，用2-(4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁酸(使用類似於方法-K-M和E中描述的方法從2-硝基苯甲酸合成)和(3S)-3-氨基-4-羥基-5-(2，3，6-三氟苯氧基)-戊酸叔丁基酯(如方法N-P所述從2，3，6-三氟苯酚製備)製備的。得到的標題化合物為白色固體(TFA鹽)(87％，最後一步)。
IR(固體)3308.9，3075.4，2928.4，1803.1，1726.9，1672.7，1612.1，1510.0，1478.7，1452.8，1407.6，1231.3，1199.3，1121.0，1040.4，997.6，933.1，839.7，772.9，720.3和698.4cm-1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ0.84-0.86(3H，m，)，2.04-2.95(4H，3m)，4.05-5.48(5H，6xm)，7.13-7.21(2H，m，)，7.54-7.57(1H，m)，7.69-7.72(1H，m)，7.84-7.88(1H，m)，8.07-8.13(1H，m)，8.38(1H，s)，8.60-8.97(1H，2)ppm；19F NMR(376MHz，DMSO)(質子去偶的)δ-115.4，-115.6，-124.9，-125.0，-125.6；MS ES(+)492.3(M+H).
實施例9(S，S)-3-[2-(1-氧代-1H-喹唑啉-2-基)-丁醯氨基]-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸 該化合物是使用類似於方法F、G和E中描述的方法，用(S)-2-(1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁酸(使用類似於方法A-E所述的方法從2-甲醯基苯甲酸製備)和(3S)-3-氨基-4-羥基-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)-戊酸叔丁基酯(如方法N-P所述製備)製備的。標題化合物通過製備HPLC分離。
IR(固體)2960.2，1780.1，1746.2，1646.6，1619.0，1589.1，1517.4，1490.3，1427.8，1260.3，1206.2，1176.3，1098.9，938.4，788.1，748.3，714.2，692.5，665.3和655.8cm-1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ0.78-0.83(3H，m)，1.89-1.96(1H，m)，2.08-2.13(1H，m)，2.50-2.78(2H，m)，4.35-5.45(4H，3xm)，6.64-6.69(1H，m)，7.74-7.73(5H，m)，8.18-8.20(1H，m)，8.81 8.90(1H，d)ppm；19F NMR(376MHz，DMSO)(質子去偶的)δ-141.01，-141.03，-141.07，-141.09，-156.80，-156.82，-156.86，-156.88；MSES(+)509.2(M+H).
實施例10(S，S)-3-[2-(7-氯-1-氧代-1H-喹唑啉-2-基)-丁醯氨基]-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸 該化合物是使用類似於方法F、G和E中描述的方法，用(S)-2-(7-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁酸(如方法A-E所述製備)和(3S)-3-氨基-4-羥基-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)-戊酸叔丁基酯(如方法N-P所述製備)製備的。分離出的產物為白色固體(94％，最後一步)。
IR(固體)1639.3，1618.8，1593.2，1516.4，1485.6，1219.4，1168.1，1106.7，932.6，830.2cm-1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ0.80(3H，t)，1.94-2.12(2H，m)，2.55-2.61(1H，m)，2.74-2.80(1H，m)，4.58-4.63(1H，m)，5.12-5.76(3H，m)，6.70(1H，d)，7.51-7.78(4H，m)，8.11-8.12(1H，m)，8.60-8.95(1H，2xd)ppm；13C NMR(100MHz，d6-DMSO)δ23.8，24.5，32.9，34.6，47.8，52.8，55.2，58.2，58.9，74.4，75.6，100.1，100.3，100.5，101.0，101.2，104.6，126.5，136.6，131.3，131.4，133.0，135.6，135.6，139.0，139.1，141.4，141.6，144.6，144.8，144.9，147.1，147.1，160.7，170.4，172.0，173.0，202.2；19F NMR(376MHz，d6-DMSO)(質子去偶的)δ-140.57，-140.60，-140.64，-140.66，-141.00，-141.03，-141.06，-141.09.-156.78，-156.80，-156.84，-156.86，-156.96，-156.98，-157.02，-157.04；MS ES(+)543.20(M+H).
實施例11(S，S)-3-[2-(6，7-二氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸 方法Q5，6-二氯-3H-異苯並呋喃-1-酮 在0℃和氮氣保護下，在1小時內，將NaBH4(5.2g)一點點加入到攪拌的4，5-二氯鄰苯二甲酸酐(20g)的無水DMF(100ml)溶液中。反應升溫到室溫，進一步反應2小時，然後傾入到冰/1M的HCl中。生成的白色沉澱(4，5-二氯-2-羥甲基苯甲酸)通過過濾收集，並真空乾燥。將沉澱懸浮在含有催化量對甲苯磺酸的甲苯(200mL)中，並在Dean-Stark條件下(沉澱在加熱時溶解)回流加熱18小時。將反應冷卻到室溫，通過過濾收集生成的白色沉澱，得到副標題化合物，白色固體(14.0g，75％)。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ5.40(2H，s)，8.05(1H，s)，8.15(1H，s)ppm.
方法R3-溴-5，6-二氯-3H-異苯並呋喃-1-酮
將5，6-二氯-3H-異苯並呋喃-1-酮(1.45g)，N-溴代丁二醯胺(1.27g)和催化量的過氧化苯甲醯的氯仿(30mL)懸浮液回流加熱1小時。冷卻後，反應混合物用水、鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)，過濾和濃縮，得到副標題化合物，白色固體(1.82g，91％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.36(1H，s)，7.77(1H，s)，8.03(1H，s)ppm.
方法S4，5-二氯-2-甲醯基苯甲酸 將3-溴-5，6-二氯-3H-異苯並呋喃-1-酮(2.0g)在5％的HCl水溶液(10mL)和80％的二氧六環水溶液(25mL)中形成的懸浮液回流加熱2小時。除去溶劑，所得殘餘物再溶於乙酸乙酯中，乾燥(硫酸鎂)和濃縮。生成的黃色固體用DCM/己烷重結晶，得到副標題化合物，白色固體(1.13g，73％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.66(0.84H，s)，7.95(0.16H，s)，8.05(0.84H)，8.12(0.16H，s)，8.14(0.84H，s)，8.41(0.84H，)，10.41(0.16H，s)，11.07(0.16H，brd s)ppm.
(S，S)-3-[2-(6，7-二氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸
該化合物是使用類似於方法F、G和E中描述的方法，用(S)-2-(6，7-二氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁酸(使用類似於方法A-E中描述的方法，從4，5-二氯-2-甲醯基苯甲酸合成[如方法Q-S所述製備])和(3S)-3-氨基-4-羥基-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)-戊酸叔丁基酯(如方法N-P所述製備)製備的。分離出的標題化合物為白色固體(94％，最後一步)。IR(固體)1784.5，1734.7，1650.1，1610.2，1585.4，1515.7，1490.8，1426.0，1216.9，1172.1，1092.5，933.1cm-1；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ0.80(3H，t)，1.90-1.98(1H，m)，2.04-2.12(1H，m)，2.55-2.79(2H，m)，4.56-4.71(1H，m)，5.08-5.41(3H，m)，6.67(1H，d)，7.56-7.59(2H，m)，8.07(1H，brd s)，8.25(1H，d)，8.85-8.95(1H，2xd)，12.73(1H，brd s)ppm；19F NMR(376MHz，d6-DMSO)(質子去偶的)δ-140.93，-140.95，-140.99，-141.01，-141.04，-141.07，-141.10，-156.76，-156.79，-156.82，-156.85，-156.89，-156.91；MS ES(+)577.14(M+H).
實施例123-[(2S)-2-[6-(2-氯苯氧基)-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-氧代戊酸
方法T2-硝基-5-(2-氯苯氧基)苯甲酸甲酯 向攪拌的5-氯-2-硝基苯甲酸甲酯(1g，4.6mmol)的二甲基甲醯胺(15ml)溶液中加入碳酸鉀(0.96g)和2-氯酚(0.66g)。反應混合物在90℃下攪拌16小時。之後，將反應混合物傾入到乙酸乙酯(50ml)中並用水(50ml)、鹽水(50ml)洗滌，乾燥(MgSO4)，和蒸發。殘餘物通過急驟層析純化(1∶9的乙酸乙酯∶石油醚)，得到副標題化合物，黃色油狀物(1.22g，產率85％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05(1H，m)，7.6-7.0(6H，m)，3.95(3H，s)ppm.
方法U2-硝基-5-(2-氯苯氧基)苯甲酸
向攪拌的2-硝基-5-(2-氯苯氧基)苯甲酸甲酯(1.22g)的THF(8ml)溶液中加入在水(2ml)中的氫氧化鋰(0.333g)。反應混合物在環境溫度下攪拌16小時。之後，將反應混合物用1M HCl水溶液酸化。水層用乙酸乙酯萃取(2×50ml)。合併有機層，用飽和鹽水溶液洗滌，並乾燥(MgSO4)。真空除去溶劑，得到副標題化合物，米色固體(0.63g，產率54％)。
1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.05-7.0(7H，m)ppm.
3-[(2S)-2-[6-(2-氯苯氧基)-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-氧代戊酸 該化合物是使用類似於方法F、G和E中描述的方法，從2-(6-[2-氯苯氧基]-4-氧代-4H-異喹啉-3-基)-丁酸(如方法T-U，K-M和E所述，從5-氯-2-硝基苯甲酸甲酯和2-氯酚合成)製備的。得到的標題化合物為白色固體(82％，最後一步)。 IR(固體)1783.38，1721.55，1664.48，1550.32，1498.00，1474.22，1264.94，1193.60，1136.52，1055.66cm-1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ0.81(3H，m)，1.95-2.26(2H，m)，2.50-2.96(2H，m)，4.20-4.70(1.5H，m)，5.04-5.46(2.5H，m)，7.26-7.39(3H，m)，7.45(1H，m)，7.57-7.70(2H，m)，7.78(1H，m)，8.35(1H，m)，8.63-8.98(1H，brm)ppm；19F NMR(376MHz，DMSO-d6)(質子去偶的)δ-226.73，-226.78，-230.43，-230.90，-232.64，-232.55；MS ES(+)490.40(M+H).
實施例133-[(2S)-2-[6-(3-氯苯氧基)-4-氧代-4 H-喹唑啉-3-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-氧代戊酸 該化合物是使用類似於方法F、G和E中描述的方法，從2-(6-[3-氯苯氧基]-4-氧代-4H-異喹啉-3-基)-丁酸(如方法T-U，K-M和E所述，從5-氯-2-硝基苯甲酸甲酯和3-氯酚合成)製備的。得到的標題化合物為白色固體(85％，最後一步)。
IR(固體)1716.79，1673.99，1583.62，1469.46，1279.21，1198.35，1136.52cm-1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)50.75-0.9(3H，m)，1.95-2.2(2H，m)，2.5-2.9(2H，m)，4.2-4.7(2H，m)，5.05-5.45(2H，m)，7.1(1H，m)，7.25(1H，m)，7.3(1H，m)，7.45(1H，m)，7.55(1H，m)，7.6(1H，m)，7.8(1H，m)，8.35(1H，m)，和8.65-9.0(1H，m)ppm；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ202.6，202.5，173.1，172.0，172.0，170.0，169.8，169.8，160.2，160.1，158.8，157.4，155.3，144.1，134.5，132.1，130.1，126.6，124.6，122.6，122.5，119.7，118.2，113.7，85.3，85.2，83.5，83.4，82.9，58.2，57.8，57.5，53.0，52.3，52.2，47.8，34.6，33.0，24.4，23.8和10.66；19F NMR(376MHz，DMSO-d6)(p(質子去偶的)δ-226.72，-226.78，-230.90和-232.65；MSES(+)490.25(M+H).
實施例145-氟-3-{(2S)-2-[6-(3-氟苯氧基)-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基]-丁醯氨基}-4-氧代戊酸 該化合物是使用類似於方法F、G和E中描述的方法，從2-[6-(3-氟苯氧基)-4-氧代-4H-異喹啉-3-基]-丁酸(如方法T-U，K-M和E所述，從5-氯-2-硝基苯甲酸甲酯和3-氯酚合成)製備的。得到的產物為白色固體(95％，最後一步)。
IR(固體)1598.20，1274.17，1178.86，1159.80，1116.92和954.90cm-1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ0.8-0.95(3H，m)，1.95-2.2(2H，m)，2.55-2.95(2H，m)，4.2-4.7(2H，m)，5.05-5.5(2H，m)，6.95(1H，m)，7.05(1H，m)，7.45(1H，m)，7.55(1H，m)，7.6(1H，m)，7.8(1H，m)，8.4(1H，m)，和8.65-9.0(1H，m)ppm；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ172.0，169.9，169.8，164.5，162.1，160.2，155.3，144.1，132.0，131.9，130.0，126.9，122.6，115.5，113.7，111.5，111.3，107.4，107.1，85.3，58.2，57.8，52.4，52.2，34.6，23.8，和10.7；19F NMR(376MHz，DMSO-d6)(質子去偶的)δ-110.84，-226.73，-226.79，-230.41，-230.91，-232.64和-232.66；MS ES(+)474.29(M+H).
實施例153-{(2S)-2-[6-(2，4-二氯苯氧基)-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基]-丁醯氨基)-5-氟-4-氧代戊酸
該化合物是使用類似於方法F、G和E中描述的方法，從2-[6-(2，4-二氯苯氧基)-4-氧代-4H-異喹啉-3-基]-丁酸(使用類似於方法U，K-M和E所述的方法，從2-硝基-5-(2，4-二氯苯氧基)苯甲酸甲酯合成)製備的。得到的產物為白色固體(TFA鹽)(96％，最後一步)。
IR(固體)1778.63，1716.79，1669.23，1493.25，1469.46，1264.94，1198.35，1150.79，1098.47和1055.66cm-1；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)0.60-1.05(3H，m)，1.94-2.26(2H，m)，2.26-2.95(2H，m)，4.15-4.75(2H，m)，4.76-5.95(2H，m)，7.25-7.45(2H，m)，7.50(1H，m)，7.65(1H，m)，7，80(1H，m)，7.87(1H，m)，8.36(1H，s)，8.60-9.01(1H，brm)ppm；19F NMR(376MHz，DMSO-d6)(質子去偶的)δ-226.72，-226.77，-230.41，-230.88，-232.65；MS ES(+)524.34(M+H).
實施例165-氟-4-氧代-3-[(2S)-2-(4-氧代-6-苯基硫烷基-4H-喹唑啉-3-基)-丁醯氨基]-戊酸
該化合物是使用類似於方法F、G和E中描述的方法，從(S)-2-(4-氧代-6-苯基硫烷基-4H-喹唑啉-3-基)-丁酸(使用類似於T-U，K-M和E中所述的方法，從5-氯-2硝基苯甲酸甲酯和苯硫酚合成)製備的。得到的產物為白色固體(TFA鹽)(81％，最後一步)。IR(固體)1791.61，1720.53，1668.40，1602.06，1545.20，1474.12，1194.53，1142.41和1057.11cm-1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.6-8.6(1H，m)，8.3(1H，s)，7.85(1H，s)，7.75-7.6(2H，m)，7.45-7.35(5H，m)，5.4-5.0(2H，m)，4.6-4.15(2H，m)，2.85-2.35(2H，m)，2.2-1.95(2H，m)和0.85-0.7(3H，m)ppm；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ202.6，202.5，173.1，172.0，172.0，169.9，169.8，160.0，146.5，136.1，135.4，133.6，133.3，130.3，128.8，128.7，126.7，126.6，122.2，122.2，104.0，85.3，85.2，83.5，83.4，58.3，57.9，57.4，52.3，52.2，47.8，34.6，33.0，24.4，23.9，23.8 and 10.6；19F NMR(376MHz，DMSO-d6)(質子去偶的)δ-226.72，-226.78，-230.41，-231.92，-232.65和-232.68；MS ES(+)472.27(M+H).
實施例175-氟-3{3(2S)-2[6-(3-氟-苯基硫烷基)-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基]-丁醯氨基}-4-氧代戊酸 該化合物用類似於方法F、G和E中描述的方法，從(S)-2[6-(3-氟-苯基硫烷基)-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基]-丁酸(使用類似於方法T-U、K-M和E所述的方法，從5-氯-2-硝基苯甲酸甲酯和3-氟苯硫酚合成)製備的。得到的產物為白色固體(TFA鹽)(95％，最後一步)。
IR(固體)1779.2，1722.0，1660.1，1602.9，1574.3，1474.3，1178.8 and 1059.7cm-1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ0.80(3H，m)，1.92-2.25(2H，m)，2.41-2.92(2H，m)，4.20-4.85(1.5H，m)，5.01-5.50(2.5H，m)，7.12-7.27(3H，m)，7.40-7.50(1H，m)，7.70-7.86(2H，m)，8.03(1H，m)，8.43(1H，m)，8.65-9.02(1H，brm)ppm；19F NMR(376MHz，DMSO-d6)(質子去偶的)δ-111.83，-226.73，-226.79，-230.40，-230.91，-232.65，-232.67；MS ES(+)490.35(M+H).
實施例18(S)-3-[2-(7-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-3-甲基丁醯氨基]-5-氟-4-氧代戊酸 這是使用類似於方法A-G中所述的方法製備的(在方法C中使用S-纈氨酸叔丁基酯)。產物經分離，為白色固體(91％，最後一步)。
IR(固體)1777.5，1644.4，1608.5，1588.1，1541.9，1198.9，1168.1，1045.2，830.2cm-1；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ0.70(3H，m)，0.89-1.14(3H，m)，2.31(1H，m)，2.45-2.98(2H，m)，4.05-4.75(1.6H，m)，4.97-5.40(2.4H，m)，6.70(1H，m)，7.60-7.95(3H，m)，8.18(1H，m)，8.75-9.21(1H，m)ppm；19F NMR(376MHz，d6-DMSO)(質子去偶的)δ-226.28，-226.71，-230.58，-230.64，-231.75，-232.32；MS ES(+)411.36(M+H).
實施例19(S，S)-3-[2-(7-三氟甲基-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸(插入P67式) 該化合物是使用類似於方法F、G和E中描述的方法，用(S)-2-(7-三氟甲基-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁酸(如方法A-E所述製備)和(3S)-3-氨基-4-羥基-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)-戊酸叔丁基酯(如方法N-P所述製備)製備的。分離出的產物為白色固體(90％，最後一步)。
IR(固體)1791.6，1649.5，1516.8，1493.1，1322.5cm-1；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ0.85(3H，t)，1.90-2.20(2H，2xm)，2.50-2.90(2H，2xm)，4.70(1H，m)，5.25(2H，dd)，5.45(1H，m)，6.80(1H，d)，7.65(1H，m)，7.70(1H，d)，7.95(1H，d)，8.05(1H，d)，8.45(1H，s)，9.00(1H，d)ppm；19F NMR(376MHz，d6-DMSO)(質子去偶的)δ-56.60，-70.15，-136.38，-152.08.
實施例20(S，S)-3-[2-(7-三氟甲基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁醯氨基]-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸
方法V(S)-2-(2-苄氨基-5-三氟甲基-苯甲醯基苄氨基)-丁酸叔丁基酯 向(S)-2-(2-氯-5-三氟甲基-苯甲醯基氨基)-丁酸叔丁基酯(根據類似於方法F所述的方法，由2-氯-5-三氟甲基苯甲酸和(S)-2-氨基丁酸叔丁基酯製備)(3g)和苄胺(1.1ml)的N-甲基吡咯烷(40ml)溶液中加入碳酸鉀(1.6g)，銅(30mg)和溴化銅(I)(15mg)。混合物在160℃加熱3小時，然後冷卻到室溫，並用飽和氯化銨溶液稀釋。混合物用乙酸乙酯萃取，將有機溶液乾燥(硫酸鎂)，過濾和濃縮。殘餘物在矽膠上通過用15％的乙酸乙酯/己烷洗脫而純化。得到副標題產物，白色固體(950mg，27％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.04(3H，t)，1.50(9H，s)，2.86(1H，m)，2.02(1H，m)，4.50(2H，d)，4.65(1H，m)，6.69(2H，m)，7.21-7.70(7H，m)，8.42(1H，m)ppm；MS ES(-)435.32(M-H).
(S)-2-(6-三氟甲基--4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁酸 該化合物是使用類似於方法P、M和E中所述的方法，從(S)-2-(2-苄氨基-5-三氟甲基-苯甲醯基氨基)-丁酸叔丁基酯製備的。副標題化合物為白色固體。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ0.88(3H，t)，2.22(2H，m)，5.15(1H，m)，7.95(1H，m)，8.20(1H，m)，8.40(1H，s)，8.60(1H，s)ppm；MS ES(+)301.15(M+H).
(S，S)-3-[2-(7-三氟甲基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁醯氨基]-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸 該化合物是使用類似於方法F、G和E所述的方法，從2-(6-三氟甲基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-丁酸和(3S)-3-氨基-4-羥基-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)-戊酸叔丁基酯(如方法N-P所述製備)製備的。得到的標題化合物為白色固體(TFA鹽)(90％，最後一步)。
IR(固體)1690，1518，1490，1317，1254，1170，1128cm-1；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ0.8-0.9(3H，m)，2.05-2.2(2H，m)，2.57-2.80(2H，m)，4.55-4.62(2H，m)，5.20-5.35(3H，m)，7.50-7.62(1H，m)，7.95(1H，d)，8.20(1H，d)，8.38(1H，m)，8.52(1H，s)，9.04(1H，d)ppm；MS ES(+)578.2(M+H).
實施例21(S)-3-[2-(7-苯基-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-氧代戊酸
方法W(S)-2-(7-苯基-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁酸 向(S)-2-(7-氯-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁酸(如方法A-E所述製備)(200mg)和苯基硼酸(276mg)的THF(2ml)溶液中加入乙酸鈀(II)(1.7mg)、2-(二叔丁基膦)聯苯(4.5mg)和氟化鉀(262mg)。所得混合物回流加熱18小時，然後冷卻並用1M HCl(5ml)和乙酸乙酯(15ml)稀釋。分離有機相，水溶液用乙酸乙酯萃取(2×15ml)。合併的有機相經乾燥(硫酸鎂)，過濾和濃縮。殘餘物通過矽膠柱純化，然後進一步通過用1％的乙酸/乙酸乙酯洗脫的徑向層析純化。得到副標題產物，棕色固體(153mg，66％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.00(3H，t)，2.15(1H，m)，2.40(1H，m)，5.37(1H，m)，6.70(1H，d)，7.15(1H，d)，7.45(1H，m)，7.55(2H，m)，7.68(1H，m)，7.75(2H，m)，7.99(1H，d)，8.70(1H，s)ppm.
(S)-3-[2-(7-苯基-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁醯氨基]-5-氟-4-氧代戊酸
該化合物是使用類似於方法F、G和E中所述的方法，從(S)-2-(7-苯基-1-氧代-1H-異喹啉-2-基)-丁酸製備的。得到的標題化合物為白色固體(58％，最後一步)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.95-8.5(1H，m)，8.45(1H，s)，8.05(1H，m)，7.8-7.7(2H，m)，7.65-7.35(4H，m)，6.7-6.65(1H，m)，5.6-5.0(2.4H，m)，4.7-4.291.6H，m)，2.9-2.3(H，m)，2.15-1.85(2H，m)，0.8-0.7(3H，m)ppm；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ202.8，202.6，173.2.172.0，170.6，170.5，161.7，139.7，138.7，138.7，136.1，136.1，131.0，130.9，130.8，127.3，125.8，125.8，125.7，125.1，105.1，105.0，104.8，85.3，85.2，83.5，83.4，58.9，58.5，58.0，52.3，52.2，47.6，34.7，34.6，33.0，32.9，24.6，24.1，23.9；19F NMR(376MHz，d6-DMSO)(質子去偶的)δ-226.68，-226.72，-230.50，-231.17，-232.60，-232.66；MS ES(+)439.0(M+H).
實施例225-氟-4-氧代-3-[(2S)-2-(4-氧代-6-丙基硫烷基-4H-喹唑啉-3-基)-丁醯氨基]-戊酸
(S)-2-(4-氧代-6-丙基硫烷基-4H-喹唑啉-3-基)-丁酸叔丁基酯 該化合物是用類似於方法T-U和K-M中所述的方法，從5-氯-2-硝基苯甲酸甲酯和丙硫醇製備的。副標題化合物為固體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.00(3H，t)，1.10(3H，t)，1.51(9H，s)，1.75(2H，m)，2.01(1H，m)，2，31(1H，m)，3.03(2H，m)，5.30(1H，m)，7.60-7.70(2H，m)，8.05(1H，s)，8.13(1H，s)ppm；MS ES(+)363.29(M+H).
5-氟-4-氧代-3-[(2S)-2-(4-氧代-6-丙基硫烷基-4H-喹唑啉-3-基)-丁醯氨基]-戊酸 該化合物是用類似於方法F中所述的方法，從(S)-2-(4-氧代-6-丙基硫烷基-4H-喹唑啉-3-基)-丁酸(用TFA/DCM由叔丁基酯合成)製備的。所得的醇用四-正丙基銨過釕酸鹽(VII)/N-甲基嗎啉-N-氧化物(Synthesis，639(1994))氧化，並如方法E中所述脫去叔丁基酯保護基。得到的標題化合物為白色固體(90％，最後一步)(TFA鹽)。
IR(固體)2963.9，1786.2，1739.4，1666.8，1195.2cm-1；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.02(3H，t)，1.08(3H，t)，1.70-1.80(2H，m)，2.02-2.09(1H，m)，2.29-2.36(1H，m)，2.72-2.92(1H，m)，3.00-3.15(1H，m)，3.03(2H，t)，4.50-5.20(3H，m)，5.40-5.60(1H，m)，7.69-7.75(2H，m)，8.06-8.07(1H，m)，8.60-8.64(1H，m)ppm；19F NMR(376MHz，CDCl3)(質子去偶的)-76.23，-231.5；MS ES(+)436.3(M+H).
實施例23酶試驗天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制試驗是基於重組的、純化人類天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1、-3、-7或-8對螢光底物的裂解。該試驗基本上按照與Garcia-Calvo等(J.Biol.Chem.273，32608-32613(1998))所報導的相同的方式用對各種酶特異性的底物進行。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1的底物是乙醯基-Tyr-Val-Ala-Asp-氨基-4-甲基香豆素。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3、-7和8的底物是乙醯基-Asp-Glu-Val-Asp-氨基-4-甲基香豆素，兩者均在Garcia-Calvo等的文章(J.Biol.Chem.273，32608-32613(1998))中有公開。
通過將數據直接帶入Thornberry等所描述的方程式(Biochemistry 33，3943-3939(1994))用非線性最小二乘法分析電腦程式(PRISM 2.0；GraphPad軟體)計算出在特定抑制劑濃度下觀測到的酶失活速率Kobs。為了獲得二級速率常數Kinact，將Kobs值對各自的抑制劑濃度繪圖然後通過線性回歸計算出Kinact。
表2顯示了通過上述方法測定的選定的本發明化合物對天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1、-3、和-8活性的抑制作用。Kinact(M-1S-1)＞500000的化合物列為「A」，Kinact(M-1S-1)在100000-500000之間的化合物列為「B」，Kinact(M-1S-1)＜100000的化合物列為「C」。
表2.天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-1、-3和-8的抑制

實施例24抑制全血分泌IL-1β新近從健康的供體採集全血並在PBS中稀釋到1∶2。向500μl稀釋的血液中加入50ml預先在RPMI介質中稀釋的試驗化合物和10mlLPS(在平底板上的最終濃度為50ng/ml)(LPS，Serotype 0111B4，Sigma L3012)。刺激18小時後，收集上清液並用適當的ELISA試劑盒(RD體系)測定其IL-1β水平。
下表3顯示了通過上述方法測定的選定的本發明化合物對人類全血分泌IL-1β的抑制。IC50＞10μM的化合物列為「A」，IC50在1μM-10μM之間的化合物列為「B」，IC50＜1μM的化合物列為「C」。
表3.對分泌IL-1β的抑制作用


實施例25缺氧引起的大鼠皮層神經元的細胞凋亡通過Rogers等人在Brain Res.Bulletin，44131(1998)中所述方法的改良法，將皮層神經元從威斯塔大鼠胚胎(E17)分離開來。簡要地說，無菌地從15-20個威斯塔大鼠胚胎中分離出大腦皮質。通過將所述大腦皮質切碎並用木瓜蛋白酶將其消化而製備細胞懸液。將細胞用卵類粘蛋白酶抑制劑和DNaseI洗滌，並沉積到Poly-D賴氨酸塗漬的平底盤上，該平底盤處於含有10％的加熱滅活的胎牛血清，L-穀氨酸鹽，青黴素和鏈黴素的高葡萄糖DMEM中。神經元的收率是每個胚胎10×7個，它們中有80-90％適宜用於通過錐蟲藍排除法進行評價。
在缺氧實驗之前，將神經元在完全培養基中培養48小時，溫度為37℃，標準大氣壓。在缺氧實驗時，用貧氧無血清培養液替代正常的細胞介質。將細胞在95％N2/5％CO2的環境中培養不同的持續時間。將化合物溶於二甲亞碸中，使其濃度為100mM，然後在介質中稀釋，並在時間＝0時加入到培養液中。使用檢測DNA斷裂的細胞死亡檢測ELISA試劑盒(Roche)測定細胞凋亡的水平。對平底盤在405nm處讀數。對照物包括在好氣條件下在含血漿的介質(+血漿)中培養的細胞和在好氣條件下在不含血漿的介質(-血漿)中培養的細胞。
表4顯示了選定的本發明的化合物在缺氧引起的大鼠皮層神經元細胞凋亡中的活性結果。IC50＞0.5μM的化合物列為″A″。IC50在0.1μM-0.5μM之間的化合物列為″B″。IC50＜0.1μM的化合物列為″C″。
表4.缺氧引起的細胞凋亡試驗的活性


儘管已經描述了本發明的一些實施方案，顯然，改變這些基本實施例可以得到利用本發明的化合物和方法的其它上述方案。因此，應當認識到本發明的範圍是由權利要求限定，而不是由已經通過實施例代表的特定實施方案限定。
權利要求
1.式I的化合物 其中X是CH或N；Y是滷素，三氟苯氧基，或四氟苯氧基；R2是C1-6直鏈或支鏈烷基；R3是氫，滷素，OCF3，CN，或CF3；而R4是氫，滷素，OCF3，SR，CN，CF3，Ar，或T-Ar；其中T是O或S；R是C1-6直鏈或支鏈烷基；Ar是任選被1-3個選自滷素、CH3、CF3、CN、OMe、OCF3、和NR5R6的基團取代的苯環；而R5和R6各自獨立地為H或C1-6直鏈或支鏈烷基，或者R5和R6合起來形成任選含最多3個選自O、S、NH、和N(C1-6直鏈或支鏈烷基)的雜原子的5-7元環；條件是，當Y是滷素時，R3和R4兩者不同時為氫。
2.根據權利要求1的化合物，其中R2是乙基，正丙基，或異丙基。
3.根據權利要求1或2的化合物，其中Y是F，三氟苯氧基，或四氟苯氧基。
4.根據權利要求1的化合物，其具有下式IA的結構 其中R2是乙基，正丙基，或異丙基；而R3和R4彼此獨立地是氫，滷素，OCF3，CN，CF3，或Ar，條件是R3和R4兩者不同時為氫。
5.根據權利要求4的化合物，其中R2是乙基。
6.根據權利要求4或5的化合物，其中R3是氫。
7.根據權利要求4-6任一項的化合物，其中R3是氫，R4是F，Cl，CN，Ar，或CF3。
8.根據權利要求4-7任一項的化合物，其中R4是Cl或CF3。
9.根據權利要求1的化合物，其具有式IB的結構 其中X是CH或N；R2是乙基，正丙基，或異丙基；R3和R4彼此獨立地是氫，滷素，OCF3，CN，或CF3；而Ar2是三氟苯基或四氟苯基。
10.根據權利要求9的化合物，其中Ar2是2，3，5，6-四氟苯基。
11.根據權利要求9或10的化合物，其中R2是乙基。
12.根據權利要求9-11任一項的化合物，其中X是CH。
13.根據權利要求9-12任一項的化合物，其中R3是氫，R4是F，Cl，或CF3。
14.根據權利要求12或13的化合物，其中R4是Cl或CF3。
15.根據權利要求1的化合物，其具有式IC的結構 其中R2是乙基，正丙基，或異丙基；R3是氫，滷素，OCF3，CN，或CF3；R4是滷素，OCF3，CN，CF3，SR，或T-Ar；T是O或S；R是C1-6直鏈或支鏈烷基；Ar是任選被1-3個選自滷素、CH3、CF3、CN、OMe、OCF3、和NR5R6的基團取代的苯環；而R5和R6各自獨立地為H或C1-6直鏈或支鏈烷基，或者R5和R6合起來形成任選含最多3個選自O、S、NH、和N(C1-6直鏈或支鏈烷基)的雜原子的5-7元環。
16.根據權利要求15的化合物，其中R2是乙基。
17.根據權利要求15或16的化合物，其中R3是氫。
18.根據權利要求15-17任一項的化合物，其中T是0。
19.根據權利要求15-18任一項的化合物，其中R4是T-Ar。
20.根據權利要求1的化合物，其選自 和
21.一種藥物組合物，其包括a)權利要求1-20任一項的化合物；和b)藥學上可接受的載體，助劑或賦形劑。
22.在患者中治療疾病的方法，其中所述疾病選自IL-1介導的疾病、細胞凋亡介導的疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、破壞性骨疾病、增殖性疾病、傳染性疾病、變性疾病、與細胞死亡有關的疾病、過度飲酒、病毒介導的疾病、視網膜疾病、眼色素層炎、炎性腹膜炎、骨關節炎、胰腺炎、哮喘、成人呼吸窘迫症候群、腎小球性腎炎、類風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、硬皮病、慢性甲狀腺炎、格累夫斯氏病、自身免疫性胃炎、糖尿病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性中性白細胞減少症、血小板減少症、慢性活動性肝炎、重症肌無力、炎性腸疾病、節段性迴腸炎、牛皮癬、特應性皮炎、疤痕形成、移植物對抗宿主的疾病、器官移植排斥反應、燒傷後的器官細胞凋亡、骨質疏鬆、白血病和相關疾病、骨髓發育不良症候群、多發性骨髓瘤-相關性骨疾病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、轉移性黑瘤、卡波濟氏肉瘤、多發性骨髓瘤、出血性休克、膿毒病、膿毒性休克、燒傷、志賀氏菌病、早老性痴呆、帕金森氏症、杭廷頓氏舞蹈症、甘迺迪氏疾病、朊病毒疾病、腦局部缺血、癲癇、心肌缺血、急性和慢性心臟病、心肌梗塞、充血性心衰、動脈粥樣硬化、冠狀動脈旁路移植術、脊柱肌肉萎縮、肌萎縮性側索硬化、多發性硬化、HIV-相關性腦炎、衰老、脫髮、中風引起的神經病性損傷、潰瘍性結腸炎、創傷性腦損傷、脊髓損傷、B型肝炎、C型肝炎、庚型肝炎、黃熱病、登革熱或日本腦炎、各種形式的肝臟疾病、腎臟疾病、多囊性腎疾病、與幽門螺旋桿菌有關的胃和十二指腸潰瘍、HIV感染、結核病、腦膜炎、器官衰竭、治療與冠狀動脈旁路移植術有關的併發症，以及免疫治療各種形式的癌症；所述方法包括給予所述患者根據權利要求21的藥物組合物。
23.根據權利要求22的方法，其中所述疾病是細胞凋亡介導的疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、破壞性骨疾病、增殖性疾病、傳染性疾病、變性疾病、與細胞死亡有關的疾病、過度飲酒、病毒介導的疾病、炎性腹膜炎、骨關節炎、腎小球性腎炎、類風溼性關節炎、糖尿病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性中性白細胞減少症、血小板減少症、慢性活動性肝炎、疤痕形成、移植物對抗宿主的疾病、器官移植排斥反應、燒傷後的器官細胞凋亡、骨質疏鬆、白血病和相關疾病、骨髓發育不良症候群、轉移性黑瘤、出血性休克、膿毒病、膿毒性休克、燒傷、志賀氏菌病、早老性痴呆、帕金森氏症、杭廷頓氏舞蹈症、甘迺迪氏疾病、朊病毒疾病、腦局部缺血、癲癇、心肌缺血、急性和慢性心臟病、心肌梗塞、充血性心衰、動脈粥樣硬化、冠狀動脈旁路移植術、脊柱肌肉萎縮、肌萎縮性側索硬化、多發性硬化、HIV-相關性腦炎、衰老、脫髮、中風引起的神經病性損傷、創傷性腦損傷、脊髓損傷、B型肝炎、C型肝炎、庚型肝炎、各種形式的肝臟疾病、腎臟疾病、多囊性腎疾病、與幽門螺旋桿菌有關的胃和十二指腸潰瘍、HIV感染、結核病、腦膜炎、治療與冠狀動脈旁路移植術有關的併發症，以及免疫治療各種形式的癌症。
24.根據權利要求23的方法，其中所述疾病是與冠狀動脈旁路移植術有關的併發症。
25.在患者中抑制天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶介導的功能的方法，該方法包括向所述患者施用權利要求21的藥物組合物的步驟。
26.在患者中減少IGIF或IFN-γ產生的方法，該方法包括向所述患者施用權利要求21所述的藥物組合物的步驟。
27.保藏細胞的方法，所述方法包括將細胞浸泡在根據權利要求1-20任一項的化合物或其可藥用衍生物的溶液中的步驟。
28.根據權利要求27的方法，其中所述細胞處於a)用於移植的器官中；或b)血液產品中。
29.使用免疫療法治療癌症的方法，其中所述免疫療法包括將權利要求1-20任一項的化合物作為其組成部分。
30.根據權利要求22-29任一項的方法，其中所述組合物、溶液或免疫療法包括另外的治療劑。
31.製備式I化合物的方法， 所述方法包括以下步驟使式II的酸或酸衍生物 與式B的氨基醇反應，形成式III的化合物， 和將中間體III轉化為化合物I，其中X是CH或N；Y是滷素，三氟苯氧基，或四氟苯氧基；R2是C1-6直鏈或支鏈烷基；R3是氫，滷素，OCF3，CN，或CF3；而R4是氫，滷素，OCF3，SR，CN，CF3，Ar，或T-Ar；其中T是O或S；R是C1-6直鏈或支鏈烷基；Ar是任選被1-3個選自滷素、CH3、CF3、CN、OMe、OCF3、和NR5R6的基團取代的苯環；R5和R6各自獨立地為H或C1-6直鏈或支鏈烷基，或者R5和R6合起來形成任選含最多3個選自O、S、NH、和N(C1-6直鏈或支鏈烷基)的雜原子的5-7元環；而R7是適當的保護基，條件是，當Y是滷素時，R3和R4兩者不同時為氫。
32.式IIA的化合物 其中X是CH或N；R2是C1-6直鏈或支鏈烷基；而R3是氫，滷素，OCF3，CN，或CF3；R4是氫，滷素，OCF3，SR，CN，CF3，Ar，或T-Ar；其中T是O或S；R是C1-6直鏈或支鏈烷基；Ar是任選被1-3個選自滷素、CH3、CF3、CN、OMe、OCF3、和NR5R6的基團取代的苯環；而R5和R6各自獨立地為H或C1-6直鏈或支鏈烷基，或者R5和R6合起來形成任選含最多3個選自O、S、NH、和N(C1-6直鏈或支鏈烷基)的雜原子的5-7元環。
33.根據權利要求32的化合物，其中R2是乙基或異丙基。
全文摘要
本發明涉及可用作天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑的式(I)化合物。本發明也提供包括所述化合物的藥學上可接受的組合物，製備該化合物的方法，和在治療各種疾病、狀況、或病症中使用該化合物和組合物的方法。
文檔編號A61P25/16GK1675184SQ03818793
公開日2005年9月28日 申請日期2003年6月27日 優先權日2002年6月28日
發明者R·尼格特爾, M·莫特默爾, J·斯塔德利, D·米倫 申請人:沃泰克斯藥物股份有限公司