包含支鏈麥芽糊精的用於腸道的抗炎和/或鎮痛組合物的製作方法

2023-04-23 18:18:41 1

專利名稱：：包含支鏈麥芽糊精的用於腸道的抗炎和/或鎮痛組合物的製作方法
技術領域：
：本發明涉及用於腸道的富含纖維的抗炎和/或鎮痛組合物，特徵在於其包含支鏈麥芽糊精。
背景技術：
：慢性炎性腸疾病(或IBDs)特別地包括兩種不同的病症潰瘍性結腸炎(UC:)和Crohn's病。這兩種不同且相關的疾病的特徵在於腸或多或少的瀰漫性炎性病變，特別地應歸於腸免疫系統機能亢進的狀況，其原因未知。它們的表現基本上在消化系統中，伴有腹瀉、腹痛、體重減輕和組織炎症。IBDs的頻率已經在過去幾十年中不斷增加。這點部分地解釋為取得了技術進步，使疾病更易於被診斷出，但特別地似乎飲食習慣的改變與這些疾病的演變有關，如食品變態反應、肥胖症及其它"文明疾病"。一段時間以來，對適宜的飲食與更常規的治療用藥的組合存在相當大的興趣。更特別地，益生元和益生菌被研究成為受這些病變影響的個體的飲食學部分，使有可能改善他們的生活品質和對這些病症的預防方面起重要的作用。更特別地，認識到將適當的纖維引入飲食中對健康具有有益的作用，該纖維在結腸炎症中產生保護效應。通常將該纖維分成兩類可溶性纖維和不溶性纖維。可溶性纖維，比如不能被人類的酶消化的果膠和菊糖，由腸內菌群發酵。這種發酵在結腸釋放短鏈脂肪酸，其作用為降低了其中的pH，因此，限制了病原菌的生長。不溶性纖維比如纖維素、抗性澱粉、玉米纖維(消耗性穀物)或大豆纖維在胃腸道有主要的機械作用。其僅被腸內菌群輕微發酵，並通過壓載效應(ballasteffect)有助於減少腸內轉運時間。由傾向於證實飲食在預防結腸炎症中的重要性的大量研究得出複合糖(多糖、澱粉)和良好的結腸生理之間存在關係。特別地，不被小腸消化的抗性澱粉對結腸的健康具有極大的價值。然而，仍有大量工作有待完成以便改良食物的抗性澱粉組成而不改變其感官特性。從1997年以來，Kanauchi等人己經描述了基於麥芽的食品對實驗動物中誘導的結腸炎或腹瀉的作用(inBiosci.Biotech.Biochem.1997,61，449-454andinJ.Gasteroenterol.1998，33,179-188)。然而，在過去幾年中，這些病理學的專家已寧願轉向"結腸食品"，更特別是益生元。這些益生元被定義為細菌的肥料，其對寄居結腸的細菌的健康有益。益生元為存在於許多可食用植物和許多食品中的功能性成分。通常歸類為益生元的化合物為果糖寡聚糖和反式半乳糖寡聚糖，以及乳果糖、異麥芽糖寡聚糖、提取自大豆的低聚糖、木糖寡聚糖等。它們的功能性作用的靶點為結腸菌群，所述菌群發酵它們，並且對於所述菌群，它們起特定的選擇性底物、胃腸生理學、特別是由大腸、免疫系統進行的功能、無機物的生物利用度及脂類代謝的作用。在其生長由益生元促進的有益的結腸菌群中，特別提及雙歧桿菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌具有通過生成乳酸使介質的pH降低的優點，該pH的降低防止了致病菌群比如變形菌或腸道細菌的生長，所述致病菌群為病症比如Crohn's病或某些形式的潰瘍性結腸炎的病因。特別地，雙歧桿菌的特徵為它們產生葡糖苷酶類型的酶活性，其促進釋放具有抗誘變和抗氧化效應的類黃酮。炎性疾病及其相應的治療為活性研究的主題。已經研究了誘導結腸炎的試驗模型，比如在實驗室大鼠或小鼠中通過給藥包含變應原(三硝基苯磺酸酯或TNBS)的乙醇溶液誘導結腸炎。乙醇有可能破壞腸黏膜形成的屏障，從而促進TNBS穿透進入腸壁，該TNBS引起急性(通常是透壁)壞死，大概是由於氧化損傷。由於在給藥IBDS的情況下由該模型引起的炎症對藥物敏感，預期該模型可用於研究結腸的局部過敏，並且其特別適合。憑藉該動物模型已經提議和測定了幾種腸用抗炎組合物。果糖寡聚糖(FOSs)為短鏈果糖單元的聚合物，其在人類小腸內不水解，但被結腸的常居菌群降解。FOSs主要導致人類和動物中腸的內源性乳酸桿菌和雙歧桿菌生長。而且，FOS發酵引起結腸的pH降低，導致揮發性脂肪酸和乳酸鹽的生成，和其次增加丁酸鹽的生成。在AmericanSocietyforNutritionalSciences,第133巻，21-27頁公開的綜述中，C.Cherbut等人描述了FOSs在實驗室大鼠中由TNBS誘導的腸炎中的預防作用。FOSs的保護效應為通過監測結腸損傷的肉眼可見的得分(目視搜索由TNBS引起的壞死和潰瘍)和測定髓過氧化物酶活性(多形核白細胞嗜中性(顆)粒的特定的酶，腸炎的標誌物)來估量。因此，本文中顯示了FOSs顯著地降低腸炎，使有可能限制腸損傷(壞死和潰瘍)、降低髓過氧化物酶活性以及降低TNBS引起的體重減輕。而且，C.Cherbut等人也證實FOSs實際上具有益生作用，即能夠刺激結腸中有益菌的腸內生長，本發明示例性的有益菌如乳酸菌和丁酸菌，其導致結腸pH降低。FOSs的保護機制不能被清楚地解釋。在專利申請US2004/0219157中已經提出FOSs刺激非特異性免疫學參數的動態平衡和刺激淋巴細胞亞群的生長。也認為生長受FOSs刺激的乳酸菌為病原菌的拮抗劑，它們通過生成抗微生物物質和通過降低結腸的pH阻斷所述病原菌生成。乳酸菌也可以粘附到腸壁，從而防止這些相同的病原菌定居。而且，FOSs也通過誘導乳酸和丁酸生成對結腸pH的降低起作用。然而，腸內酸中毒效應並非只具有優點。在國際專利申請WO04/026316中，實際上描述了特別由乳酸菌生長引起的酸中毒最終引起結腸黏膜糜爛，增加了潰瘍性結腸炎的危險。而且，乳酸在結腸中的累積也可以導致在血液中的過量釋放，從而引起代謝性酸中毒。菊糖和FOSS都具有在結腸中發酵太快的缺點，因此，可導致對結腸保護效應有害的微生物群失衡。為了抗衡該有害作用，在所述的專利申請WO04/026316中，提議將FOSs與一種以在結腸中緩慢發酵為特徵的多糖組合，本發明中多糖的實例如聚葡萄糖。聚葡萄糖為在山梨醇和適當的酸性催化劑(比如擰檬酸)的存在下和在高溫下通過葡萄糖的任意聚合合成的。聚葡萄糖作為膨脹劑和作為低熱值成分被廣泛地用在營養品中。聚葡萄糖在小腸中既不能被消化也不能被吸收，相當多的部分發現於糞便中。專利申請WO04/026316特別地教導使用聚葡萄糖預防由結腸的微生物群引起的失衡誘導的酸中毒效應，特別是由益生劑比如菊糖和FOSs誘導的那些。因此，認為聚葡萄糖促進特定的菌群消耗乳酸，抗衡FOSs誘導的其過量生成。
發明內容根據本申請公司的知識從所有上述的得出，不存在單一的多糖組合物，其能滿足腸用有效保護性組合物的所有要求。因此，本發明的目的是克服現有技術的缺點。因此，本申請公司發現加入支鏈麥芽糊精有利地使有可能符合至今已據說不可調和的所有目標，其通過以許多調查研究為代價設想和開發了一種用於結腸的新的富含纖維的抗炎和/或鎮痛組合物，其滿足所有上述標準，即對結腸黏膜的有保護效應、中等降低結腸的pH、且有利於產生丙酸菌和丁酸菌，及以較少程度產生乳酸菌。因此，本發明的一個目的是支鏈麥芽糊精，其具有15%至35%的1—6糖苷鍵，還原糖含量小於20%，多分子性指數小於5，數均分子量Mn至多等於4500g/mo1，用於治療人體或動物體的方法。為了本發明的目的，術語"支鏈麥芽糊精"是指在申請公司所擁有的專利EP1.006.128中描述的麥芽糊精。在專利EP1.006.128中描述的所有的支鏈麥芽糊精組合物適於製備根據本發明的腸用抗炎和/或鎮痛組合物。根據一個優選的變型，所述支鏈麥芽糊精的還原糖含量為2%至5%，數均分子量Mn為2000至3000g/mo1。根據AOAC方法No.2001-03(2001)測定，以乾物質計，支鏈麥芽糊精的總纖維含量大於或等於50%。本發明的一個目的是用於治療人體或動物體的富含纖維的組合物，特徵在於其包含作為活性成分的支鏈麥芽糊精。本發明的腸用富含纖維的抗炎和/或鎮痛組合物包括以乾重計0.5%至20%，優選5%至10%的所述支鏈麥芽糊精，以便構成纖維的充足供應和對結腸的保護效應。本發明的腸用抗炎和/或鎮痛組合物中支鏈麥芽糊精的重量低於0.5%時，則供應的纖維不足以具有可檢測效應。這些支鏈麥芽糊精具有難消化的特徵，其導致它們在被預防的小腸中同化。他們提供了對代謝和腸平衡有益的難消化的纖維源。實際上，它們的高含量的l-6糖苷鍵賦予它們益生性質，其為完全特異性的實際上發生的是丁酸產生(butyrogenic)菌、乳酸菌或丙酸菌代謝這些高支鏈化合物。這些支鏈麥芽糊精也促進雙歧桿菌的生成，其對不想要的細菌有害，從而促進(x-和(3-糖苷酶活性的表達。本發明的腸用抗炎和/或鎮痛組合物使有可能以2至10倍，優選3至8倍刺激盲腸內含物和糞便中a-和P-糖苷酶的酶活性，如將在下文中舉例說明的。這導致其對消費者的健康完全有益的性質。而且，結腸中的微生物對本發明的抗炎和/或鎮痛組合物的支鏈麥芽糊精的消耗將導致盲腸、腸和糞便內含物的pH降低0.5至1個單位，從而反映出所述微生物均衡生長。使用本發明的抗炎和/或鎮痛組合物也使有可能增加盲腸中揮發性有機酸的產生，其中有機酸選自乙酸、丁酸和丙酸，優選丙酸和丁酸。對結腸黏膜的保護效應特別地在給藥TNBS後的動物中證實，且由顯著的結果反映，如將在下文中舉例說明的。向動物繼續正常飼喂，其明顯地被保護而對抗由TNBS誘導的壞死性炎症，如由在腸上皮中測定的髓過氧化物酶(或MPO)活性降低證實。實際上，該MPO活性反映了嗜中性粒細胞浸潤進入吞噬體和細胞間隙，並使有可能定量與其直接相關的炎性過程。因此，本發明的腸用抗炎和/或鎮痛組合物可使腸上皮的髓過氧化物酶活性從5%降低至40%,優選從7%降低至35%。該作用明顯地反映出所述組合物抗腸炎的保護效應，使有可能設想製備腸用抗炎和/或鎮痛組合物，其改善人類和動物患者的健康。而且，發現本發明的支鏈麥芽糊精不會產生滲透性腹瀉，即使以大劑量使用時。當消耗低分子量的發酵性碳水化合物，例如乳果糖和果糖寡聚糖時，觀察到滲透性腹瀉現象。該現象表現為大便含水量增加和糞便內含物滲透壓增加，有可能該含水量增加達到出現腹瀉的程度。出人意外的和意想不到的，本發明的支鏈麥芽糊精不會引起該現象，儘管它們為發酵性的。在飲食中，本發明的腸用抗炎和/或鎮痛組合物可以為即可使用的形式，或者飲料形式，比如果汁、湯或酸乳形式或加入早餐穀類食品中。而且，所述的組合物可用於動物，更特別地用於貓、狗、豬、兔或對腸炎敏感的其它家畜、免疫力降低的動物。該組合物也被提議用於補充患有IBDs的個體的飲食、以及用於患有腸易激症候群的個體、和患有旅行者腹瀉和其病因學通常未知的腹痛個體。就藥用而言，本發明的腸用抗炎和鎮痛組合物可以包括支鏈麥芽糊精和至少一種其它活性成分，二者比例取決於所考慮活性成分的性質。其它活性成分優選地為腸用抗炎藥。在治療IBDs中，例如，可提議兩種類型的治療-一種治療，其使用源自水楊酸化合物的藥物，例如柳氮磺吡啶或其衍生物，比如5-氨基水楊酸鹽(5-ASA)，-一種治療，其基於腎上腺皮質激素家族的藥物，比如可的松或潑尼松龍。本發明的一個實施方案涉及如上所述的包含支鏈麥芽糊精的組合物，特徵在於其還包含至少一種選自柳氮磺吡啶和其衍生物或腎上腺皮質激素類的活性成分。根據一個具體的實施方案，本發明涉及如上所述的組合物，其包含支鏈麥芽糊精，還包含選自柳氮磺吡啶和其衍生物的活性成分，特徵在於支鏈麥芽糊精的重量與柳氮磺吡啶或其衍生物之一的重量之比為2至30。本發明的一個具體的實施方案涉及如上所述組合物，其包含支鏈麥芽糊精，還包含選自腎上腺皮質激素類的活性成分，特徵在於支鏈麥芽糊精的重量與腎上腺皮質激素類的重量之比為2至250。典型地，本發明的組合物為液體、粉劑、糖漿、栓劑、片劑或錠劑的形式。本發明的一個實施方案涉及用於治療人體或動物體的試劑盒，其包括a)如上所述的第一組合物，包含支鏈麥芽糊精；和b)第二組合物，包含腸用抗炎藥。本發明的一個實施方案為治療或預防腸炎和/或平息腸痛的方法，其包括給藥至個體足夠的治療量的支鏈麥芽糊精。本發明的一個具體的實施方案為治療或預防腸炎和/或平息腸痛的方法，其包括給藥至個體或動物如上所述的包含支鏈麥芽糊精的組合物。如上所述的包含支鏈麥芽糊精的組合物可有利地與包含腸用抗炎藥的第二組合物聯合給藥至個體或動物。在治療期間，所述兩種組合物可以隨時間同時給藥或順次給藥。給藥第二組合物的方法取決於所使用的腸用抗炎藥。本發明的一個具體的實施方案為治療或預防腸炎和/或平息腸痛的方法，其包括隨時間同時或順次給藥在如上所述的試劑盒中描述的兩種組合本發明的一個實施方案是支鏈麥芽糊精在製備治療或預防腸炎和/或平息腸痛的組合物或試劑盒中的用途。在可以治療或預防的所述疾病和疼痛中，可提及的包括慢性炎症性腸病、腸易激症候群、旅行者腹瀉或腹痛。在慢性炎性腸疾病中，可提及的包括潰瘍性結腸炎和Crohn's病。至於本發明的組合物的鎮痛作用，估計其與PPARy和MOR受體的表達有關。PPARY(或過氧化物酶體增殖物活化受體力屬於核受體家族部分。它們特別地被脂肪酸活化，並參與轉錄應答中代謝和營養信號的轉導。它們在保持腸黏膜的完整性中起主要作用。本領域技術人員已知PPARy主要參與結腸炎症的調節。它們也在結腸癌的情況下表達，並且它們的活化抑制細胞生長和細胞分化。MORs(或阿片樣物質受體)發現於中樞和周圍神經系統中，並可特別地存在於結腸中。MORs的主要功能是鎮痛功能。另一個功能是抑制腸運動。MORs也參與腸炎的調節。如將在下文中舉例說明的，值得注意的是本發明組合物可使過氧化物酶體增殖物活化受體Y(PPAR力的活性增加1.2至3倍，優選1.6至2倍。類似地，本發明組合物可使^阿片樣物質受體(MORs)的數量增加1.2至10倍，優選2.5至7.5倍，更優選4至5倍。最後，所述組合物特別適於應激個體，其中所述應激以腸水平顯示自身。閱讀說明性的和非限定性的下述實施例將更清楚地理解本發明。具體實施方式使用實驗室大鼠來研究給藥TNBS後在它們的食物中的組合物對保護它們的結腸黏膜的效果，所述組合物包含本發明的支鏈麥芽糊精(MDB)或葡萄糖(對照)與不溶性纖維(廢玉米顆粒或纖維素)的組合。混合本發明的不溶性纖維(本發明的實例為廢玉米顆粒)和MDBs以便模擬從根據健康管理局推薦的飲食中的穀類製品中攝入的纖維。而且，根據類胡蘿蔔素和多酚(特別是酚酸和阿魏酸)的富含來選擇廢玉米顆粒。在該實施例中選擇的本發明的支鏈麥芽糊精具有15%至35%的1—6糖苷鍵，還原糖含量為2%至5%，多分子性指數小於5，數均分子量Mn為2000至3000g/mol:tableseeoriginaldocumentpage12根據AOAC方法(No.2001-03)測定，以乾重計，它們也具有90%的總纖維含量。將SpragueDawley來源的64隻OFA大鼠分成8組，每組在它們的食物和飲料中接受其中組成為下述表I所示的特定飲食。葡萄糖和支鏈麥芽糊精在營養攝入的飲料中以5%重量/重量的比例存在。纖維素和廢穀粒在營養攝入的食品中以5%重量/重量的比例存在。表Itableseeoriginaldocumentpage12在隔離一周後(該隔離期間動物接受標準食物和飲用水)，大鼠消耗根據在表1中描述的飲食的食物和飲料20天。然後，將它們禁食24小時。在第21天，通過直腸內注射在表1中規定的產品處理所述動物。5組至8組動物接受直腸內注射500^1的在乙醇中稀釋成40%GayLussac的TNBS，而1組至4組動物接受直腸內注射500^1的9%。的NaCl。以10mg/kg體重每日注射TNBS。已知該劑量產生嚴重的但可逆的炎症反應。在注射後3天內監測動物體重的變化。在第24天，通過C02窒息處死動物。稱重動物，接著在屍體解剖後，取出結腸，排空，然後稱重。隨後用肉眼觀察，並給出Wallace得分。也測定在腸上皮中的髓過氧化物酶(或MPO)活性。該活性反映了嗜中性粒細胞浸潤進入吞噬體和細胞間隙，並使有可能定量與其直接相關的炎性過程。使用如下表II所示的Wallace等級確定Wallace得分。表IItableseeoriginaldocumentpage13至於MPO活性的測定，需要根據下述方案製備結腸。將結腸片段懸浮在6ml十六烷基三甲基溴化銨緩衝液(在50mM磷酸鹽緩衝液中的0.5%的HTAB，pH7.0)中。因此，由此處理得片段用Polytron研磨和均質化10秒。使用來自SonicsandMaterialsInc.,Danbury,Connecticut,USA的VibraCell500watts裝置(轉化器動力500W，在探針上消散的動力為30%-5卩150W/cm2，脈衝器在位置2-即第二種的66°/。)超聲處理每種樣品。超聲處理後，在再次在相同的條件下超聲處理前，接受3次冷凍-融化周期。隨後，在4匸，10000g樣品離心。回收上層清液以便測定MPO。MPO活性的測定是基於過氧化氫-依賴性人造供氫體(guaiacol)的氧化，所述供氫體在其氧化形式變成類橙色。在470nm和在3(TC監測表觀密度給出活性值(表示為吸光單位/分/克結腸)。在下表III和IV中給出了得到的所有結果(值表示為在每組8隻動物上進行的量度結果的平均值士標準偏差)。表iiitableseeoriginaldocumentpage14體重變化顯示在第20天所有的動物具有同樣的體重。在第21天，所有的動物體重減輕，因為它們在直腸內注射前禁食。在第22天，已經用直腸內注射9%。NaCl的所有動物恢復了大量的體重。組8是唯一接受炎症-引發給藥TNBS的組，其體重變化(evolution)從第22天上升。—組5、6和7的動物的體重變化僅僅從第23和24天適當上升。因為組8的動物體重曲線與沒有接受TNBS的動物的相同，這表明這些動物從第21天開始進食。因此，這些動物被保護以對抗TNBS誘導的壞死性炎症。表IVtableseeoriginaldocumentpage15該結果通過測定Wallace得分來證實。實際上，接受本發明組合物與廢穀粒和TNBS的動物的Wallace得分為3.9，與之相比，其它接受TNBS的組得到的平均得分為5.8、5.9和6.5。3.9的平均得分顯示出組8動物的炎症水平明顯較低。首先，結腸重量測定的結果顯示出接受TNBS注射的動物的結腸比沒有用TNBS處理的動物的結腸更重。這一現象特別地是由於侵入發炎結腸黏膜的水腫。與沒有接受TNBS的組的動物結腸的平均重量相比，組8的動物結腸的平均重量保持很高，但是其仍然是所有用TNBS處理的那些組動物中最低的重量。至於MPO活性的測量，其對沒有用TNBS處理的組的動物來說顯然是低的，其再一次表明與用TNBS處理的其它組動物相比，組8顯示出最小的MPO活性。因此，組8的動物明顯地被保護以對抗TNBS誘導的壞死性炎症。實施例2使用實驗室大鼠來研究本發明的支鏈麥芽糊精(與實施例1的那些相同)和葡萄糖(對照)對在雄性Wistar大鼠中給藥TNBS誘導的結腸刺激的作用，和對在有害光刺激迴避調節測定中它們的認知行為的作用。該測定使用對亮光環境反感的大鼠。原理為經歷該環境的動物為在調節測定的情況下學習更慢的動物。首先，大鼠在操作調節的情況下學習控制其有害光環境動物學習壓下活動杆(LA)以便獲得30秒的黑暗期作為正增強。所述裝置也包括另外的杆，當其開動時，不可能獲得光非活動杆(LI)。活動杆和非活動杆被壓下的次數使有可能評價大鼠控制活動的水平。通過比較在"光"期兩個杆(LA對LI)中的每個被壓下的次數來評價學習的獲得(辨別兩個杆)。將48隻雄性Wistar/AFSPF大鼠分成4組，其在它們的營養攝入中接受如下表V所示構成的飲食。tableseeoriginaldocumentpage16在隔離期後(該隔離期動物接受標準攝食和飲用水的)，所述動物消耗用5%本發明的支鏈麥芽糊精或用5%的葡萄糖補充的食物15天。在第15天，動物被禁食48小時。在第17天，麻醉大鼠，4組(組2至組4)中的兩組接受以3mg/kg體重的比率的結腸內給藥500(^1的20%GayLussac的TNBS-乙醇(即每隻大鼠1mg—該劑量被認為會誘導與微弱腸刺激有關的疼痛)。從第17至第23天，動物繼續接受用MDBs或用葡萄糖補充的飲食。在第22天，進行認知測定有害光刺激迴避試驗(ALSAT)。下表VI和VII給出了將ALSAT測定應用到各組動物的結果。表VII給出了在該測定過程中壓下的總數。表VItableseeoriginaldocumentpage17表VII給出了壓LA和LI的次數。儘管結果不是明顯不同，表VII顯示出在其飲食中接受本發明的MDB的大鼠壓杆更頻繁，更特別是組4相對於組2:表VIItableseeoriginaldocumentpage17根據表VIII，僅接受本發明的MDB和有或沒有TNBS的動物能夠區分開LA和LI,更明顯地壓LA，因此，證實了所述產品對抗由TNBS誘導的疼痛的積極作用。在第23天，處死動物；取出結腸，根據下表VIII給出的得分等級檢查。表VIII結腸得分顯微鏡觀察0沒有損傷。1局部充血，沒有潰瘍2潰瘍形成，沒有明顯的炎症3潰瘍和炎症4幾個部位的潰瘍和炎症；漬瘍尺寸〈lcm5多個部位的潰瘍和炎症；潰瘍尺寸^lcm將從組4中取出的結腸固定在Carson's液體固定劑中，用顯微鏡觀察。下表IX給出了所述各組結腸的得分。表IXtableseeoriginaldocumentpage18統計分析(ANOVA)顯示出組3的結腸得分明顯低於組1大鼠的結腸得分，並傾向於明顯低於組2大鼠的結腸。組4的大鼠的結腸得分也明顯低於組1的大鼠的結腸得分，傾向於明顯低於組2的。下表X給出了在Carson，s液體固定劑中固定的結腸上進行的顯微鏡檢查的結果(肉眼觀察的得分)，表示為腸病的平均度(炎症和壞死/潰瘍形成)。表Xtableseeoriginaldocumentpage18形成率程度2.82.82.21.9與接受葡萄糖的動物相比(對照動物)，當動物接受本發明的MDB時，表IX的肉眼觀察的得分較低。該觀測值與顯微鏡觀察較好地相關，因為對組4給予1.9的得分，而對組2給予2.8。因此，可以得出所有的動物顯示出炎症，但嚴重程度不同。當動物接受本發明的MDB時，腸病不太嚴重，從而證實了之前說明的肉眼觀察的結果。這些結果與學習測定結果有關，證實顯示出學習較好的動物被保護對抗TNBS誘導的疼痛，證實了本發明組合物的鎮痛性質。實施例3通過測定血觸珠蛋白研究本發明的支鏈麥芽糊精(實施例1的那些)對抗小豬腸炎的保護效應。觸珠蛋白為一種由肝臟合成的血漿糖蛋白(a2-球蛋白)，能結合血紅蛋白。通過使用本領域技術人員可使用的診斷試劑盒的免疫學方法測定觸珠蛋白的含量。血觸珠蛋白含量在在炎性綜合症中增加，與病因無關。其動力學緩慢，因此，如果其水平高，這反映出炎症已經存在一段時間的事實。相反，其水平在血液中降低反映出對炎症的保護效應。在研究開始時，在一組128隻稱重7.2±1.04kg的斷奶小豬中進行試驗，將該組分成4批，每批32隻動物，每批的活重和性別相同(16隻閹割的雄性和16隻雌性)。如下進行試驗處理(總共77天的時間)第1批用常規飲食飼餵對照動物，第2批動物接受佔食物重量2%比例的本發明MDB，第3批醫學處理動物，在測定期間(14天)用包含比例分別為1000和400mg/kg的兩種抗生素(金黴素和螺旋黴素)的食物飼喂，然後在試驗的剩餘時期(15-77天)用常規飲食再次飼喂。第4批醫學處理動物，在試驗期間(14天)用包含比例分別為1000和400mg/kg的兩種抗生素(金黴素和螺旋黴素)的食物詞喂，然後在試驗的剩餘時期(15-17天)接受比例為食物重量2°/。的本發明MDB。在試驗結束時，從每亞組的6隻小豬採集血樣，測定其中的觸珠蛋白含量(用血液的mg/ml表示)。下表XI給出了得到的結果。表XItableseeoriginaldocumentpage20結果表明用本發明的腸用富含纖維的抗炎和鎮痛組合物飼餵的動物(第2批)的血液觸珠蛋白含量顯著地比接受常規飲食的動物的低，因而，其反映出血液炎症水平和全身性炎症水平比對照組低。在第4批中，結果低於對照組，即使其不重要。然而，這一降低支持了預期的效果，即，抗炎狀況較低。實施例4在實驗室大鼠中研究本發明的支鏈麥芽糊精(實施例1相同的那些)對腸發酵的作用。將40隻SpragueDawley來源的OFA大鼠分成4組，其在其攝食中接受下述飲食，下表XII給出了所述飲食的詳細成分。組4接受用果糖寡聚糖補充的攝食(Raftilose⑧P95，由Orafti公司銷售)。表XIItableseeoriginaldocumentpage20一周的隔離期後(在該隔離期內動物接受標準攝食和飲用水)，大鼠消耗所述食物36天。在第0天，動物被禁食24小時。隨意飲水。在第1天，收集糞便。給予動物在表XII中描述的飲食。在第28天，動物被禁食24小時。隨意飲水。在第29天，再次收集糞便。在第36天，處死動物。進行器官的一般肉眼觀察。結紮並取出盲腸。稱重充滿的盲腸、盲腸的內含物和空盲腸。測定糞便和盲腸內含物的pH和固體。也評價糞便的酶活性((x-糖苷酶和(3-糖苷酶)。研究揮發性脂肪酸在盲腸內含物(乙酸、丙酸、丁酸)中的分布。下表XIII給出了有關充滿的盲腸重量、空盲腸重量和盲腸內含物pH的數據(表示為每批10隻動物的平均值士標準偏差)。表XIIItableseeoriginaldocumentpage21表xm顯示了與接受標準攝食或包含10%葡萄糖的食物的動物相比，接受10%的本發明MDB或10%RaftiloseP95的動物的充滿的盲腸和空盲腸的重量明顯地較高。與對照批相比，接受10%的MDB的動物的充滿的盲腸的重量增加46%，接受10%的RaftiloseP95的動物增加53%。對於空盲腸的重量部分，接受MDB的批次改變30%，接受RaftiloseP95的批改變50%。這些結果表明MDB和RaftiloseP95增加了盲腸的重量，因此，增加了盲腸的細菌量以及盲腸黏膜的重量，從而導致了針對炎症的物理保護。該表也顯示出對於接受MDB的批次的盲腸內含物的pH有明顯地降低，從而反映出實質上的盲腸發酵活性。這一pH的降低反映出酸性分子增加，有利於鹼性分子減少，所述鹼性分子實質上具有更大的攻擊性。對於所述部分，RaftiloseP95沒有顯示出這些性質，因為盲腸內含物的pH沒有顯著地降低。表XIV給出了有關盲腸內含物的揮發性脂肪酸分布的數據。表XIVtableseeoriginaldocumentpage22該表顯示出用10%的MDB補充的攝食使盲腸內含物的丙酸明顯地增對於接受RaftiloseP95的批，也獲得該結果，但是以較不明顯的方式。對於盲腸內含物中乙酸的量沒有出現顯著性差異。表XV給出了有關糞便pH的數據。表XVtableseeoriginaldocumentpage22這些結果使不可能在接受MDB的動物中觀察到糞便pH的明顯降低，儘管觀察到盲腸pH降低。另一方面，接受Raftilose⑧P95的動物的糞便pH降低了。表XVI和XVII分別給出了在第0天和第29天測定的糞便的酶活性。表XVItableseeoriginaldocumentpage23在第0天，在各批之間當然沒有觀察到顯著性差異。表xvntableseeoriginaldocumentpage23在第29天，通過給藥10%的MDB極大地增加了糖苷酶活性。這也是接受10%的RaftiloseP95動物的情形，但是以較不明顯的方式。實際上，與對照批相比，在接受MDB的批中，觀察到a-糖苷酶和卩-糖苷酶分別增加310%和298%，而對於RaftiloseP95批，觀察到其分別僅增加172%和63%。糞便中糖苷酶活性的增加導致結腸消化殘存的多糖。因此，該高糖苷酶活性可以導致某些多酚(在修復結腸炎中的重要參與者)的生物利用度降低以及氧化應激減低。實施例5在實驗室大鼠中研究本發明的支鏈麥芽糊精(與實施例1的那些相同)對丁酸生成的作用。將18隻Fischer實驗室大鼠分成3組，其在它們的攝食中接受下表XVIII給出的飲食。組3接受用果糖寡聚糖補充的攝食(Actilight⑧，由Beghin-Mdji公司銷售)。表XVIIItableseeoriginaldocumentpage24隔離一周後(在該隔離期內動物接受標準攝食和飲用水)，大鼠消耗在表XVIII中說明的食物14天。在第14天，處死動物。進行器官的一般肉眼觀察。結紮並取出盲腸。研究揮發性脂肪酸在盲腸內含物中的分布。下表XIX給出了獲得的丁酸的結果。表XIXtableseeoriginaldocumentpage24對於接受MDB的動物，盲腸丁酸的含量增加，因此，將其按動物中產生丁酸的糖(butyrogenicglucidic)基質來分類。丁酸是細胞生長和分化的一個重要因素，從而證實了MDB抗結腸炎症的保護作用。實施例6在實驗室小鼠中研究本發明的支鏈麥芽糊精(與實施例1的那些相同)和葡萄糖(對照)對參與腸炎和鎮痛的各種細胞受體生成的作用。將20隻7周齡Balb/c小鼠分成2組。一組接受由10%的葡萄糖的飲用水溶液組成的飲料，另一組接受10%的MDB的飲用水溶液。動物接受該飲料的非限制供應和標準小鼠食物29天。在第29天，處死小鼠，取出結腸並分析下述標誌物-過氧化物酶體增殖物-活化的受體(PPARys)-p阿片樣物質受體(MOR).為了評價本發明的支鏈麥芽糊精在炎症的生理調節中的作用，使用由ClontechLaboratoriesInc.公司銷售的NucleoSpinRNAII試劑盒來分離取出的結腸的總RNA。使用反轉錄酶將總RNA反轉錄成cDNA。擴增反轉錄反應，用使用引物的實時PCR(AppliedBiosystems)定量PPARy和MOR。結果用每個體內(3-肌動蛋白控制的mRNA分子的mRNA分子數表示。下表XX給出了測定大鼠結腸黏膜中PPARy和MOR後獲得的結果的平均值。表XXtableseeoriginaldocumentpage25將10。/。的本發明的MDB引入食物中29天觀察到這兩個因素相當大的增加-PPARy增力口1.72倍，-MOR增力口4.43倍。用10%的MDB處理的批的結果比用10%的葡萄糖的對照批獲得的結果顯示出明顯較大的量(對PPARY，p<0.03，對MOR，p<0.04)。因此，本發明的MDB有助於特別地通過保持腸黏膜的完整調節可能的炎症。實際上，PPARY分子數的增加顯示出當動物消耗MDB時結腸具有較好的抗炎狀況。對於該部分，MOR疼痛受體數的增加與內臟對疼痛敏感性的降低同義。這些結果全部與實施例2的結果一致，其中MDB的鎮痛作用己經被在動物認知行為上的作用證實。權利要求1.支鏈麥芽糊精，其具有15％至35％的1→6糖苷鍵，還原糖含量小於20％，多分子性指數小於5，以及數均分子量Mn至多等於4500g/mol，所述支鏈麥芽糊精用於人體或動物體的治療方法中。2.如權利要求1所述的支鏈麥芽糊精，特徵在於所述的支鏈麥芽糊精的還原糖含量為2%至5%，數均分子量Mn為2000至3000g/mo1，所述支鏈麥芽糊精用於人體或動物體的治療方法中。3.如權利要求1和2中任一項所述的支鏈麥芽糊精，特徵在於根據AOAC方法No.2001-03測定，以乾物質計，所述的支鏈麥芽糊精的總纖維含量大於50%，所述支鏈麥芽糊精用於人體或動物體的治療方法中。4.用於治療人體或動物體的富含纖維的組合物，特徵在於其包括作為活性成分的如權利要求1至3中任一項所述的支鏈麥芽糊精。5.如權利要求4所述的組合物，特徵在於其包含以乾重計0.5%至20%,優選5%至10%的所述的支鏈麥芽糊精。6.如權利要求4和5中任一項所述的組合物，特徵在於其為飲料、湯或酸乳形式或加入到早餐穀類食品中。7.如權利要求4或5中任一項所述的組合物，特徵在於其還包含至少一種選自柳氮磺吡啶和其衍生物及腎上腺皮質激素類的活性成分。8.如權利要求4至5中任一項所述的組合物，還包含選自柳氮磺吡啶和其衍生物的活性成分，特徵在於支鏈麥芽糊精的重量與柳氮磺吡啶或其衍生物之一的重量之比為2至30。9.如權利要求4和5中任一項所述的組合物，還包含選自腎上腺皮質激素類的活性成分，特徵在於支鏈麥芽糊精的重量與腎上腺皮質激素類的重量之比為2至250。10.如權利要求7至9中任一項所述的組合物，特徵在於其為液體、粉劑、糖漿、栓劑、片劑或錠劑的形式。11.用於治療人體或動物體的試劑盒，其包括a)如權利要求4至10中任一項所述的第一組合物；和b)第二組合物，包含腸用抗炎藥。12.如在權利要求1至3中任一項所述的支鏈麥芽糊精的用途，用於製備治療或預防腸炎和/或平息腸痛的組合物或試劑盒。13.如權利要求12所述的用途，用於製備治療或預防慢性炎症性腸病、腸易激症候群、旅行性腹瀉或腹痛的組合物或試劑盒。14.如權利要求13所述的用途，特徵在於所述慢性炎症性腸病選自潰瘍性結腸炎和Crohn's病。全文摘要本發明涉及用於腸道的富含纖維的抗炎和/或鎮痛組合物，特徵在於其包含支鏈麥芽糊精，所述支鏈麥芽糊精具有15％至35％的1→6糖苷鍵，還原糖含量小於20％，多分子性指數小於5，數均分子量Mn至多等於4500g/mol。文檔編號A61K31/718GK101163488SQ200680012961公開日2008年4月16日申請日期2006年4月4日優先權日2005年4月18日發明者拉埃蒂蒂阿·德勒莫,達尼埃爾·韋爾斯,馬裡-埃萊娜·薩尼茨申請人:羅蓋特公司