一種治療泌尿系統結石的植物藥及其製備方法和質量控制方法

2023-05-23 15:45:26

專利名稱：一種治療泌尿系統結石的植物藥及其製備方法和質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種治療泌尿系統結石的植物藥，尤其涉及一種以茅莓根為藥藥材製備而成的治療泌尿系統結石的單味植物藥、其製備方法和該藥藥材和乙醇提取物的質量控制方法。
背景技術：
泌尿系統結石是一種危害人類健康的主要疾病之一，迄今為止，在整個非手術治療中中醫藥治療仍佔主要地位。泌尿系統結石在國內外的人群中，其發病率較高，一般在3-8％左右，我國南方有的地區最高達可達11-15％。目前還沒有非常理想的排石藥，許多患者應用機器碎石後，其碎塊也不易排淨體外，碎石後仍需要服用排石藥物協助排石，現臨床上急需效果好、毒性低的排石藥。
目前國內雖然有多種排石藥物，其中主要是顆粒劑，但多為大組方藥，即由多味或幾十幾味中藥組成，藥物成分複雜，這些藥物不僅存在療效不夠確切、久服有較多的毒副作用等缺陷，而且由於藥物成分比較複雜，其質量控制標準也難以建立；而至今未見有較好的單味中藥或植物藥用於治療泌尿繫結石的藥物上市的報導。

發明內容
本發明首先所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種新的療效確切的治療泌尿系統結石的單味植物藥。
本發明人經過大量的試驗最終發現，從茅莓，尤其是從茅莓根中用20-90％乙醇提取的活性成分具有利尿通石之功效，對於泌尿系統的結石等症具有確切的療效。
茅莓(Rubus parvifolius L.)為薔薇科植物，別名天青地白草、三月泡。生於山坡、路旁、荒地和草叢中，全國各地都有分布。性平，味甘、酸。具有散瘀、止痛、解毒、殺蟲之功效，主要用於治療吐血、跌打損傷、產後腹痛、痢疾、痔瘡等症，未有用於治療泌尿繫結石的報導。動物試驗表明，茅莓根20-90％乙醇提取物對大鼠乙二醇性腎結石有治療作用，對植入到大鼠膀胱內的人泌尿系統結石具有排石和減解結石作用，還有利尿作用，並能增加兔輸尿管活動、擴大管腔、緩解輸尿管的痙攣等作用，均利於結石的排出。
本發明所要解決的另一個技術問題是提供一種從茅莓中提取活性成分的方法。
本發明所要解決的另一個技術問題是通過以下技術途徑來實現的將茅莓(Rubus parvifolius L.)根用20-90％乙醇(優選用65％乙醇提取)提取，製備成乙醇提取物浸膏或乾燥粉。
優選的，所述乙醇提取物浸膏或乾燥粉的製備工藝如下(1)將茅莓根淨洗後加0.5-2倍體積20-90％酒精浸泡3-8小時；(2)加3-8倍體積20-90％酒精回餾提取3-6次，每次1-2小時；過濾，收集濾液，回收乙醇，濾液濃縮、乾燥，即得浸膏粉或乾燥粉；更優選的，所述乙醇提取物浸膏或乾燥粉的製備工藝如下(1)將茅莓根淨洗後加1倍體積20-90％酒精浸泡5小時；(2)加5倍體積20-90％乙醇回餾提取4次，每次1.5小時；過濾，收集濾液，回收乙醇，濾液濃縮至相對密度為1.2以上；噴霧乾燥，即得浸膏或乾燥粉。
最優選的，所述乙醇提取物浸膏或乾燥粉的製備工藝如下1)取茅莓根，粉碎成粗顆粒，加1倍體積20-90％酒精浸泡5小時，再加5倍量20-90％乙醇提取回餾(80℃)，每次1.5小時，第一次提取後，補充1.5倍20-90％乙醇再回餾，連續4次，收集所有的提取液；2)提取液粗濾後，用板框式壓濾機精濾(內墊300目濾布)；3)精濾液濃縮至相對密度為1.2以上；噴霧乾燥，即得浸膏乾燥粉。
將上述方法製備得到的乙醇提取物浸膏或乾燥粉加入製備不同劑型時所需的各種常規輔料或藥用載體，例如崩解劑、潤滑劑、黏合劑等，以常規的中藥製劑方法製備成任何一種常用的口服製劑，例如可以是顆粒劑、丸劑(含小丸劑)、片劑(含泡騰片)、膠囊劑、散劑或口服液等。
採用上述方法製備得到的20-90％乙醇提取物浸膏乾燥粉為茅莓藥材重量的6.68％-13.26％；其中，採用65％乙醇提取獲得乙醇提取物浸膏乾燥粉為茅莓藥材重量的10.25％％-13.26％。
本發明還進行了茅莓根20-90％乙醇提取物和茅莓藥材質量檢測方法和質量控制標準的研究。
對茅莓根藥學實驗表明，茅莓根20-90％乙醇提取物中的總皂苷、黃酮苷、鞣質含量較高，特別是65％左右乙醇的提取物中，上述三個部位群加在一起，達到50％以上。
本發明分別測定茅莓根藥材或20-90％乙醇提取物中的總皂苷、黃酮苷和鞣質的總含量及其代表成分(如皂苷的代表成分為熊果酸或鉤子皂苷R1，黃酮苷的代表成分為槲皮素、鞣質的代表成分為表兒茶素或沒食子酸)作為質量控制指標。
試驗結果表明本發明20-90％乙醇提取物浸膏乾燥粉中皂苷的總含量為10.15-15.50wt％，其中，皂苷的代表成分熊果酸的含量為1.15-2.66wt‰或懸鉤子皂苷R1的含量為0.38-2.24wt％；所述的20-90％乙醇提取物浸膏乾燥粉中黃酮苷的總含量為25.25-38.50wt％，黃酮苷的代表成分槲皮素的含量為0.25-0.55wt％；所述的20-90％乙醇提取物浸膏乾燥粉中鞣質的總含量為8.50-13.50wt％；鞣質的代表成分表兒茶素的含量為1.60-2.95wt％或沒食子酸的含量為3.15-6.05wt％。
茅莓藥材中皂苷的總含量為0.80-1.5wt％、黃酮苷的總含量為2.35-4.50wt％、鞣質的總含量為0.75-1.45wt％；其中，皂苷的代表成分熊果酸的含量為0.10-0.25wt‰或懸鉤子皂苷R1的含量為為0.08-0.21wt％，黃酮苷的代表成分槲皮素的含量為0.025-0.042wt％，鞣質的代表成分表兒茶素的含量為0.21-0.32wt％或沒食子酸的含量為0.26-0.55wt％。
本發明中的有關茅莓根乙醇提取物含量測定的方法及數據也可用於複方茅莓根製劑中有關茅莓根乙醇提取物部分的測定方法及質量控制指標。
以下通過實施例來進一步描述本發明，應該理解的是，這些實施例僅用於例證目的，絕不限制本發明的範圍。
具體實施例方式
實施例1本發明顆粒劑的製備取茅莓根10千克、加65％乙醇15000ml加溫回餾3-4小時，收集浸液，重複加65％乙醇回餾4次，浸液混合，回收乙醇，濃縮成浸膏，整粒，製成顆粒劑。每袋含生藥8克，病人每天服2次，每次2袋。
實施例2本發明口服液的製備取茅莓根10千克，加45％乙醇15000ml加溫回餾3-4小時，收集浸液，重複加45％乙醇浸泡4次，浸液混合，回收乙醇，浸液混合濃縮，按常規製成口服液，分瓶裝，每瓶100ml，含生藥15克，病人每天早晚各服100ml。
實施例3本發明膠囊劑的製備取茅莓根10千克，用清水衝洗2次，加70％乙醇15000ml加溫回餾3-4小時，收集浸液，重複加70％乙醇回餾3次。浸液混合，回收乙醇，濃縮成浸膏，制粒20目，裝膠囊，按常規製成膠囊劑。每粒膠囊0.4克，為生藥3克，病人每天2次，每次4-6粒。
實施例4本發明丸劑的製備取茅莓的根10千克，用清水衝洗2次，加20％乙醇15000ml，加溫回餾3小時，收集浸液，重複加20％乙醇浸泡4次。浸液混合，回收乙醇，濃縮成浸膏，20目整粒，按常規製成丸劑。每丸10克，含生藥8-10克，病人每天2次，每次2丸。小丸粒劑每丸1克，含生藥1.2克，病人每天服2次，每次10-15丸。
實施例5本發明片劑的製備取茅莓根10千克，用清水衝洗2次，加50％乙醇15000ml浸泡5小時，收集浸液，重複加50％乙醇浸泡4次。收集浸液，回收乙醇，濃縮成浸膏，整粒20目，製成片劑。每片0.4克為含生藥4克，病人每天服2次，每次4-6片。
實施例6本發明泡騰片的製備取茅莓根10千克、用清水衝洗2次，加30％乙醇15000ml浸泡5小時，收集浸液，重複加30％乙醇回餾3次。浸液混合，回收乙醇，濃縮成浸膏，加檸檬酸0.1千克，碳酸氫鈉0.1千克，混勻，整粒，製成泡騰片劑，每片0.6克為含生藥4克，病人每天服2次，每次4-6片。
試驗例1茅莓根乙醇提取物質量檢測方法和質量控制標準的研究1、茅莓根乙醇提取物部位群的含量測定根據本發明人對茅莓根初步藥學實驗表明，茅莓根20-90％乙醇提取物中的總皂苷、黃酮苷、鞣質含量較高，特別是65％左右乙醇的提取物中，上述三個部位群加在一起，達到50％以上。所以重點研究和測定提取物中皂苷、黃酮苷、鞣質的總含量，以及三個部位群的代表物質的含量測定。
2、茅莓根20-90％乙醇提取物總皂苷及代表物含量測定2.1總皂苷含量測定(紫外)在含量檢測中由於目前國內尚無茅莓皂苷類成分的對照品，選用結構與茅莓皂苷類成分相近的齊墩果酸作為對照品。黃酮、鞣質、同樣選用經典方法檢測含量。原理高氯酸-香草醛主要是使皂苷中羧基脫水，增加雙鍵結構，再經雙鍵位移，雙分子縮合等反應生成共軛雙鍵系統，又在酸作用下形成陽碳離子鹽而顯色。其吸收度與含量在一定範圍內成正比。
2.1.1對照品溶液的製備精密稱取齊墩果酸對照品12.0mg，用甲醇溶解，並定容於50ml量瓶中，搖勻，即得。
2.1.2標準曲線的繪製精密吸取對照品溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5ml分別置具塞試管中，揮幹，加入新制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，於60℃水浴加熱15min，冰水浴冷卻2～3min，加醋酸乙酯5.0ml搖勻，隨行試劑做空白，照紫外-可見分光光度法(藥典附錄VA)，在560nm波長處測定吸收度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪製標準曲線。結果見表1表1

2.1.3茅莓根乙醇提取物中總皂苷含量檢測精密稱取茅莓根乙醇提取物0.1g，加40ml蒸餾水，混勻，冰箱放置24h後，抽濾得，精密吸取10ml放置於分液漏鬥中，用水飽和正丁醇萃取3次，每次10ml，合併萃取液，水浴揮幹，甲醇定容至10ml量瓶中，備用。取供試品儲備液0.2ml置於具塞試管中，揮幹，按上述方法檢測。
結果表明茅莓根20-90％乙醇提取物中的總皂苷含量在10.15-15.50％之間。
2.2熊果酸的含量測定2.2.1熊果酸配樣2.2.1.1對照品取熊果酸對照品10.1mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解並定容至刻度。濃度為0.202mg/ml。
2.2.1.2樣品取茅莓藥材10.0g，加70％乙醇溶液150ml，水浴回流3小時，放冷，過濾，轉移到250ml容量瓶中，加70％乙醇至刻度。取50ml上述溶液，加2ml濃鹽酸，加熱回流1小時，放冷，用氨水調PH＝4.0-5.0，轉移到蒸發皿中，蒸至溶液無醇味，用乙醚萃取3次，每次30ml，蒸乾乙醚，用甲醇溶解，轉移到10ml容量瓶中，加甲醇至刻度。即樣品的濃度為0.20g生藥/ml。
2.2.1.3色譜條件以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，4.6mm×25cm，5μm；流動相甲醇∶水(85∶15)；流速1.0ml/min；檢測波長215nm；柱溫室溫；柱效理論板數按熊果酸峰計算應不低於5000。
2.2.2熊果酸的含量測定2.2.2.1線性範圍熊果酸在0.05～0.6mg/ml範圍內成線性。
2.2.2.2計算公式熊果酸含量(‰)＝A樣×C對(mg/ml)2.2.2.3試驗結果結果表明茅莓根20-90％乙醇提取物熊果酸含量為1.15-2.66‰。
2.3懸鉤子皂苷R1的含量測定2.3.1色譜條件色譜柱Prontosil Eurobond C18(250mm4.0mm，5μm)；流動相乙腈-甲醇-0.4％醋酸銨溶液(209∶95∶96)；流速1.0ml/min；檢測波長210nm；溫柱室溫；進樣量20μl。
2.3.2溶液的製備對照品溶液的製備 精密稱取懸鉤子皂苷R1(結構式見下述)對照品適量，以甲醇溶解製成各對照品濃度為1.0mg/ml的混合對照溶液。
懸鉤子皂苷R1結構式 注23為COOH；供試品溶液的製備 精密稱取茅莓總皂苷提取物適量，以甲醇溶解製成4.0mg/ml的溶液，微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。
2.3.3方法學考察2.3.4標準曲線繪製精密吸取混合對照品溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml置於2ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣20μl，按上述色譜條件，測定其峰面積值，並以進樣量為X(μg)為橫坐標，峰面積值為Y(μV.S)為縱坐標，繪製標準曲線。
2.3.5進樣精密度試驗精密吸取上述混合對照品溶液20μl，結果標明茅莓根20-90％乙醇提取物懸鉤子皂苷R1為0.68-2.24％。
3、茅莓根20-90％乙醇提取物中總黃酮及代表物含量的測定3.1總黃酮含量測定原理黃酮類化合物分子結構中凡在C3C5位有羥基或者能構成鄰苯二羥基時，都能夠與鋁鹽形成有顏色的配位化合物，其吸收度與含量在一定範圍內成正比。
3.1.1對照品溶液的製備精密稱取蘆丁對照品50.0mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解並定容，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
3.1.2標準曲線的繪製精密吸取對照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml分別置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1.0ml，混勻，放置6min，10％硝酸鋁溶液1.0ml，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15min，以隨行試劑做空白，照紫外-可見分光光度法(藥典附錄VA)，在500nm波長處測定吸收度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪製標準曲線。結果見表2表2

3.1.3樣品含量測定精密稱取茅莓根乙醇提取物1.0g，加乙醚脫脂至無色，將樣品涼幹，加甲醇90ml加熱回流至提取液無色，轉移至100ml量瓶中，用甲醇少量洗滌容器，洗液併入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取10ml置100ml量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得。精密吸取供試品溶液3.0ml分別置25ml量瓶中，各加水3.0ml，加5％亞硝酸鈉溶液1.0ml，混勻，放置6min，按上述方法檢測總黃酮含量。
結果表明茅莓根20-90％乙醇提取物中的總黃酮含量在25.25-38.50％之間。
3.2槲皮素的含量測定照高效液相色譜法(藥典附錄VI D)測定色譜條件與系統適用性實驗以十八烷機矽烷鍵合矽膠為填充劑，以甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)為流動相；檢測波長為360nm。理論板數按槲皮素峰計算應不低於2500。
對照品溶液的製備精密稱取經五氧化二磷乾燥過夜的槲皮素對照品適量，加甲醇製成每1ml含340μg的溶液，即得。
供試品溶液的製備取本品粉末約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷回流提取2小時，棄去溶劑，藥渣揮幹，加甲醇提取4小時，提取液蒸乾，殘加甲醇-25％鹽酸溶液(4∶1)混合液25ml，加熱回流30分鐘，放冷，轉移至50ml量瓶中，並加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
結果表明茅莓根20-90％乙醇提取物中的槲皮素含量在0.25-0.55％之間。
4、茅莓根20-90％乙醇提取物鞣質及代表物的含量測定4.1鞣質的含量測定原理用紫外檢測方法，利用鞣質在鹼性溶液中將磷鉬酸還原，產生深藍色，其吸收度與含量在一定範圍內成正比。
4.1.1對照品溶液的製備精密稱取沒食子酸對照品約12mg，用水溶解，並定容於250ml棕色量瓶中，搖勻，即得。
4.1.2標準曲線的繪製精密吸取對照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml分別置25ml棕色量瓶中，各加入磷鉬鎢酸試液1.0ml，再分別加水至13ml，用29％碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30min，搖勻，隨行試劑做空白，照紫外-可見分光光度法(附錄VA)，在760nm波長處測定吸收度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪製標準曲線。
結果見表3表3

4.1.3供試品溶液的製備精密稱取茅莓根乙醇提取物0.15g，置250ml棕色量瓶中，加水150ml，放置過夜，超聲處理10min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置(使固型物沉澱)，濾過，棄去初濾液50ml，精密量取續濾液20ml，置100ml棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。
4.1.4樣品含量測定總酚測定 精密量取供試品溶液2.0ml，置25ml棕色量瓶中，照標準曲線的製備項下的方法，自「加入磷鉬鎢酸試液1.0ml」起，加水10ml，依法測定吸光度，從標準曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量，計算，即得。
不被吸附的多酚測定 精密量取供試品溶液25ml，加入已經盛有乾酪素0.6g的100ml具塞錐型瓶中，密塞，在30℃水浴中保溫1h，時時振搖，取出，放涼，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液2.0ml，置25ml棕色量瓶中，照標準曲線的製備項下的方法，自「加入磷鉬鎢酸試液1.0ml」起，加水10ml，依法測定吸光度，從標準曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量，計算，即得。
按下列式計算鞣質的含量鞣質含量＝總酚量-不被吸附的多酚量。
結果表明茅莓根20-90％乙醇提取物中的鞣質含量為8.50-13.50％。
4.2表兒茶素的含量測定4.2.1色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；體積比為110∶8∶2的0.04mol/L枸櫞酸溶液-N，N-二甲基甲醯胺-四氫呋喃為流動相；檢測波長為280nm；流速1.0ml/min；靈敏度0.02AUFS；柱溫35℃；理論板數按表兒茶素峰計算不低於4500；4.2.2對照品溶液的製備將甲醇與水按1∶1的體積比配成混合溶液，精密稱取表兒茶素對照品，以上述混合溶液為溶劑，將表兒茶素配製成1ml溶液含表兒茶素約10.5μg；4.2.3供試品溶液的製備取本品粉末約0.025g，精密稱定，置50ml量瓶中，加等體積的甲醇與水配成的混合溶液40ml，超聲處理25分鐘，並補加甲醇與水的混合溶液至50ml，搖勻，用0.45μm微孔濾)濾過，即得4.2.4測定結果分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀測定，測得表兒茶素的含量為1.60-2.95％。
4.3沒食子酸的含量測定4.3.1色譜條件與系統適用性實驗以十八烷機矽烷鍵合矽膠為填充劑，以甲醇-0.1％磷酸溶液(15∶85)為流動相；檢測波長為273nm。理論板數按沒食子酸峰計算應不低於3000。
4.3.2對照品溶液的製備精密稱取沒食子酸對照品適量，加50％甲醇製成每1ml含40μg的溶液，即得。
4.3.3供試品溶液的製備取本品粉末(過四號篩)約0.5g，精密稱定，精密加入4mol/l鹽酸溶液50ml，水浴中加熱水解3.5小時，放冷，濾過。精密量取續濾液1ml，置100ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得。
4.3.4測定結果分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定結果茅莓20-90％乙醇提取物中沒食子酸含量為3.15％-6.05％。
上面主要介紹茅莓根乙醇提取物中幾種主要部位群(總皂苷、黃酮苷、鞣質)和代表物質的測定方法和含量，測定茅莓根藥材上述成分的測定方法與乙醇提取物的方法基本相同和相似。採用與測定茅莓根乙醇提取物幾種主要部位群(總皂苷、黃酮苷、鞣質)和代表物質的相同的測定方法，根據實驗結果，茅莓根藥材皂苷的總含量為0.80-1.5％，黃酮苷的總含量為2.35-4.50％和鞣質的總含量為0.75-1.45％；皂苷的代表成分熊果酸的含量為0.10-0.25‰，黃酮苷的代表成分槲皮素的含量為0.025-0.042％，鞣質的代表成分表兒茶素的含量為0.21-0.32％或沒食子酸的含量為0.26％-0.55％。
說明有關茅莓根乙醇提取物含量測定的方法及數據也可用於複方茅莓根製劑中有關茅莓根乙醇提取物部分的測定方法及質量控制指標。
試驗例2本發明藥物對大鼠乙二醇性腎結石的治療作用試驗用含2％乙二醇加1％氯化銨的特殊飼料餵養大鼠4周，每組10隻動物，然後用茅莓根乙醇提取物(本發明實施例所製備)治療，口服250mg/kg，一日一次，連續4周。結果顯示大鼠乙二醇性腎結石經茅莓根乙醇提取物治療後，腎結石明顯降低。水煎和不同濃度乙醇的(20％，65％，90％)茅莓根提取物組對腎結石的治療，分別為40％，50％，70％和60％，比蒸餾水對照組(20％)明顯提高，表明茅莓根乙醇提取物對乙二醇性形成的腎結石有較好的效果，其中茅莓根65％乙醇提取物組治療效果最佳(70％)。陽性對照藥雙香排石顆粒尿石劑的效果為40％。
試驗例3本發明藥物對大鼠膀胱內植入人的尿路結石的治療作用本實驗是將人尿路排出的草酸鈣結石植入到大鼠膀胱內，每組10隻。然後每天給茅莓根乙醇提取物治療，口服250mg/kg，一日一次，連續4周。四周後處死動物，取膀胱內結石稱重，與植入前比較，目地是觀察藥物對結石的溶作用。結果表明蒸餾水對照組10隻動物，有效率為10％，水煎和不同濃度乙醇的(20％，65％，90％)茅莓根提取物組對腎結石的治療，有效率分別為30％，50％，80％和60％，比蒸餾水對照組(10％)明顯較高。表明茅莓根乙醇提取物對大鼠膀胱內植入人的尿路結石的治療作用有較好的效果，其中65％乙醇茅莓根提取物組治療效果最佳(80％)。陽性對照藥雙香排石顆粒尿石劑的效果為50％。
試驗例4本發明藥物對大鼠具有明顯的利尿作用一般排石藥均具有利尿作用，便於結石排出。茅莓根在每組10隻正常大鼠利尿試驗中也可觀察到，水煎和不同濃度乙醇的(20％，65％，90％)茅莓根提取物組在給藥後(口服250mg/kg，)，8小時內排尿量明顯高正常對熙組(比正常動物高1.3-2.5倍)，其中茅莓根65％乙醇提取物組利尿作用最為明顯。陽性對照藥雙香排石顆粒尿石劑對正常大鼠也有利尿作用(比正常動物高1.4倍)。
試驗例5本發明藥物對麻醉家兔輸尿管電位活動及尿量的影響觀察麻醉家兔輸尿管電位活動試驗，每組10隻動物。水煎和不同濃度乙醇(20％，65％，90％)的茅莓根提取物組(250mg/kg)治療後1小時，輸尿管動作電位頻率開始增加，藥後2h達高峰，與生理鹽水對照組比較，均有一定的效果。特別是茅莓根65％乙醇的提取物組，藥前動作電位頻率為15，藥後1-2小時為20-22，差異性非常顯著(P＜0.01)，其電位幅度也較高。另外，實驗注意到茅莓根乙醇提取物組還有擴大管腔，緩解輸尿管的痙攣等作用。陽性藥雙香排石顆粒尿石劑，口服250mg/kg，也有明顯增加麻醉家兔輸尿管電位活動頻率的作用，但比茅莓根65％乙醇提取物組低。
試驗例6本發明藥物治療泌尿系統結石的臨床療效觀察試驗用茅莓根20-90％乙醇提取物製成泡顆粒劑、膠囊劑和片劑治療46例腎結石病人，其中顆粒劑16例、膠囊15例劑和片劑15例，現把初步結果小結如下。
1.一般資料1.1病例選擇46例中，有發作性腎絞痛史者41例，有血尿史者10例。無症狀、體檢中發現腎結石者5例。46例均經雙腎B超確診。
1.2性別及年齡男26例，女20例。20-30歲，13例，30-40歲，8例，40-50歲，7例，50-60歲，11例，60歲以上7例。
1.3腎結石情況(1)單側腎結石29例，左腎16例、右腎各13例，(2)雙側腎結石17例。(3)46例中，腎結石總數78塊，其中左腎36塊，右腎42塊。(4)結石直徑0.2-1.6cm。
2.治療方法茅莓根顆粒劑20克(含20-25克生藥)，一天2次，口服。連續2-4周為一個療程。
3.治療結果3.1療效標準按要求服藥2-4周，複查腎B超。
(1)治癒結石完全消失。(2)顯效結石縮小50％以上(含50％)。(3)有效結石有縮小30％以上。(4)無效結石大小、數量無變化。
3.2臨床結果46例臨床療效如下痊癒29例，佔63.30％；顯效9例，佔19.56％；有效6例，佔13.04％；無效2例，佔4.35％；總有效率為95.65％，治癒率為63.30％。
在服藥期間未發現無該藥有明顯副作用，是較為理想的治療泌尿繫結石藥物，僅有少數病人在服藥時有胃腸不適感，但不影響治療。
典型病例1武XX，男性，22歲，因雙腰部疼痛而就診，經雙腎B超確診為雙側腎結石，有0.2-0.8cm結石5塊。服用茅莓根泡顆粒劑治療一周，症狀和體徵消失，B超檢查陰性，確定為臨床痊癒。
典型病例2安XX，女，45歲，因雙腰部疼痛而就診，經雙腎B超確診為雙側腎結石，有0.6-1.2cm結石3塊。服用茅莓根口服液，治療二周，症狀和體徵消失，B超檢查陰性，確定為臨床痊癒。
權利要求
1.茅莓(Rubus parvifolius L.)根在製備治療泌尿系統結石藥物中的應用。
2.根據權利要求1的應用，其特徵在於將茅莓(Rubus parvifolius L.)根用20-90％乙醇提取，製備成乙醇提取物浸膏乾燥粉；將提取物浸膏乾燥粉用藥學常規方法製備成口服製劑。
3.根據權利要求2的應用，其特徵在於將茅莓(Rubus parvifolius L.)根用65％乙醇提取，製備成提取物浸膏乾燥粉。
4.根據權利要求2的應用，其特徵在於所述乙醇提取物浸膏乾燥粉的製備工藝如下(1)將茅莓根淨洗後加0.5-2倍體積20-90％乙醇浸泡3-8小時；(2)加3-8倍體積20-90％酒精回餾提取3-6次，每次1-2小時；過濾，收集濾液；回收乙醇，濾液濃縮、乾燥，即得浸膏或乾燥粉。
5.根據權利要求4的應用，其特徵在於所述乙醇提取物浸膏乾燥粉的製備工藝如下(1)將茅莓根淨洗後加1倍體積20-90％乙醇浸泡5小時；(2)加5倍體積20-90％酒精回餾提取4次，每次1.5小時；過濾，收集濾液；濾液濃縮至相對密度為1.2以上；噴霧乾燥，即得浸膏或乾燥粉。
6.根據權利要求2的應用，其特徵在於所述乙醇提取物浸膏乾燥粉為茅莓藥材重量的6.68％-13.26％。
7.根據權利要求2的應用，其特徵在於所述的口服製劑是顆粒劑、膠囊劑、片劑、丸劑或口服液；其中所述的片劑含泡騰片；所述的丸劑含小丸粒劑。
8.根據權利要求2的應用，其特徵在於所述的乙醇提取物浸膏乾燥粉中皂苷的總含量為10.15-15.50wt％，其中，皂苷的代表成分熊果酸的含量為1.15-2.66wt‰、懸鉤子皂苷R1的含量為0.38-2.24wt％；所述的乙醇提取物浸膏乾燥粉中黃酮苷的總含量為25.25-38.50wt％，黃酮苷的代表成分槲皮素的含量為0.25-0.55wt％；所述的乙醇提取物浸膏乾燥粉中鞣質的總含量為8.50-13.50wt％；鞣質的代表成分表兒茶素的含量為1.60-2.95wt％、沒食子酸的含量為3.15-6.05wt％。
9.根據權利要求1的應用，其特徵在於所述的茅莓藥材中皂苷的總含量為0.80-1.5wt％、黃酮苷的總含量為2.35-4.50wt％、鞣質的總含量為0.75-1.45wt％；其中，皂苷的代表成分熊果酸的含量為0.10-0.25wt‰、懸鉤子皂苷R1的含量為0.08-0.21wt％，黃酮苷的代表成分槲皮素的含量為0.025-0.042wt％，鞣質的代表成分表兒茶素的含量為0.21-0.32wt％、沒食子酸的含量為0.26-0.55wt％。
全文摘要
本發明涉及一種治療泌尿系統結石的單味植物藥茅莓(Rubus parvifolius L.)根，其製備方法以及20－90％乙醇提取物和茅莓根藥材的質量控制方法。本發明分別測定茅莓根藥材和20－90％乙醇提取物中的總皂苷、黃酮苷和鞣質的總含量及其代表成分並將其作為質量控制指標，該指標也可用於複方茅莓根乙醇提取物有關茅莓根部分含量的質量控制指標。藥效學實驗證實，本發明藥物具有較好的排石和溶石作用。臨床療效觀察試驗證實，本發明藥物對泌尿系統結石療效顯著，臨床應用安全、無毒副作用。
文檔編號A61P13/00GK1895391SQ20061009864
公開日2007年1月17日 申請日期2006年7月10日 優先權日2005年7月12日
發明者黃家章, 黃萌, 趙良, 何曉娟, 黃聲德 申請人:北京亞科希藥物研究所